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UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA BIOLOGICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

PRÁCTICA No. 21 EXAMEN GENERAL DE ORINA

FUNDAMENTO
El riñón excreta productos de desecho sólidos, no volátiles del metabolismo, e interviene
en los equilibrios de agua, electrolitos y ácido-básico. La composición de la orina refleja el
estado del metabolismo del cuerpo.

El estado de nutrición, el estado de los procesos metabólicos y la capacidad del riñón


para manejar selectivamente las sustancias que recibe, son tres factores importantes en
cuanto a la composición de la orina.

MATERIAL
1 Probeta de 50 ml 8 tubos de ensaye

1 densímetro (urinómetro) 4 pipetas graduadas de 5 ml

1 pipeta graduada de 1 ml 2 pipetas graduadas de 2 ml

1 pipeta graduada de 10 ml Baño hirviente

Papel filtro Papel pH

REACTIVOS
- Tiras reactivas para orina

- Acido Sulfosalicílico al 3% en agua

- Amoníaco concentrado

- Azul de metileno al 0.2%


- Azufre en polvo
- Cloruro de calcio al 10%
- Bencidina en polvo
- Acido acético
- Peróxido de hidrógeno
- Reactivo de Benedict ( Se prepara disolviendo en caliente 100 grs de carbonato de
sodio anhidro y 173 grs de citrato de sodio en 600 ml de agua; aparte disolver 17.3
grs de sulfato de cobre cristalizado en unos 150 ml de agua. Mezclar ambas
soluciones agitando y completando el volumen a 1,000 ml con agua destilada ).
- Reactivo de Imbert ( Este se prepara disolviendo 5 grs de nitroprusiato de sodio en
50 ml de agua destilada caliente; se enfría y se le agregan 50 ml de ácido acético
).
- Reactivo de Ehrlich ( Este se prepara con 10 grs de para-di-
metilaminobenzaldehído, 75 ml de ácido clorhídrico concentrado y 75 ml de agua
destilada ).
- Reactivo de Obermayer (Se prepara disolviendo 3 grs de cloruro férrico en 1,000
ml de ácido clorhídrico concentrado ).
- Cloroformo

MATERIAL BIOLÓGICO
- Orina

EQUIPO:

- Centrífuga
- Microscopio
- Refractómetro

TÉCNICA
a).- EXAMEN FISICO

1.- VOLUMEN: Mídase la cantidad de orina emitida en 24 hrs y el de las muestras


especiales o recibidas en el laboratorio.

2.-COLOR: Exprésese el color de la orina, si es normal (amarillo I, II o III ) o si se presenta


una de las coloraciones anormales (anaranjado, rojo, marrón, azul-verdoso)

3.- OLOR: Dígase si es normal (urinoso o sui géneris), aromático (de frutas), amoniacal ó
fétido.

4.- ASPECTO: Especifíquese si la orina es transparente o si es ligera, moderada o


sumamente turbia. Si es turbia determínese la causa y obsérvese si hay filamentos.

5.- DENSIDAD: Póngase orina suficiente en una probeta y mídase la densidad con un
densímetro (urinómetro) asegurándose de que éste no toque las paredes del recipiente.
Se lava el densímetro para cada determinación que se haga.

También puede medirse la densidad utilizando un refractómetro.

b).- EXAMEN QUÍMICO

Este se realiza mediante las tiras reactivas para orina


Sacar una tira del recipiente, sumergirla en la orina, esperar 30 a 60 segundos y hacer la
lectura de acuerdo a la escala que viene en el exterior del recipiente de las tiras reactivas.
Cualquier resultado positivo deberá corroborarse de acuerdo a los siguientes puntos:

1.- GLUCOSA O SUBSTANCIAS REDUCTORAS: En la solución del reactivo de Benedic


el cobre se encuentra en forma del ión complejo citrato cúprico; un monosacárido reducirá
el ión cúprico a ión cuproso, el cuál precipita como óxido de color rojo ladrillo.

En un tubo de ensaye colocar 5 ml del reactivo de Benedic y agregar 10 gotas de orina;


mezclar y poner a baño hirviente durante 3 minutos. Leer inmediatamente después del
calentamiento; en caso positivo aparece un color que puede ser amarillo, verde naranja, o
rojo ladrillo según sea la cantidad de substancias reductoras, las cuales se clasifican por
cruces que van de una a cuatro.

Coloración: Interpretación:
- Azul.......................................... Negativo
- Azul verdoso............................ Huellas ( menos de 100 mg/100 ml )
- Verde....................................... Positivo ( + ) (aprox. 0.5 g/100 ml )
- Pardo verdoso.......................... Positivo ( + + ) ( aprox. 1 g/100 ml )
- Amarillo.................................... Positivo ( + + + ) (aprox. 1.5 g/100 ml )
- Anaranjado o rojo ladrillo .......... Positivo ( + + + + ) (2 o más g/100 ml )

2.- PROTEINAS: El ácido sulfosalicílico provoca desnaturalización de las proteínas, lo que


se manifiesta por la turbidez. Después de centrifugar una porción de orina, se coloca en
un tubo de ensaye 1.5 ml de sobrenadante límpido y se completan a 5 ml con solución
acuosa de ácido sulfosalicílico al 3 %.

Si la reacción es positiva aparece turbidez, la cual se reporta en cruces ( 1 a 4 ) según la


intensidad.

3.- CUERPOS CETONICOS: La acetona y el ácido acetoacético reaccionan con el


nitroprusiato sódico en presencia de un álcali para producir un complejo de color púrpura.

En un tubo de ensaye se colocan 5 ml de orina, se agregan 10 a 20 gotas de reactivo


Imbert, se mezcla y luego por las paredes del tubo inclinado se agrega amoníaco, a
manera de formar dos capas. Si la reacción es positiva aparece un anillo de color violáceo
en la zona de contacto.

4.- BILIRUBINA: El azul de metileno provoca una reducción de los pigmentos biliares
(bilirrubina) que pasan a formar la biliverdina de color verdoso.

En un tubo de ensaye colocar aproximadamente 5 ml de orina, agregar dos gotas de azul


de metileno al 0.2 % y observar si existe reducción, lo que se pone de manifiesto por la
aparición de tonos verdosos según la concentración. Reportar en cruces.

5.- SALES BILIARES: La presencia de los ácidos biliares y sus sales reducen la tensión
superficial de los medios líquidos en que se encuentran disueltos; esta propiedad se
utiliza para estudiar el comportamiento del azufre finamente pulverizado vertido sobre la
superficie de una muestra de orina.

En un tubo de ensaye con cierta cantidad de orina se agrega cuidadosamente una


pequeña cantidad de azufre en polvo sobre la superficie del líquido, se agita suavemente
y se observa si el azufre se deposita en el fondo del tubo lo cual indica que la reacción es
positiva y se clasifica de 1 a 4 cruces.

6.- UROBILINOGENO: El reactivo de Ehrlich (p-dimetilaminobenzaldehído en ácido


clorhídrico concentrado ) reacciona con el urobilinógeno y los otros cromógenos para
formar un aldehído de urobilinógeno de color rojo-cereza.

En un tubo de ensaye se colocan 10 ml de orina y se añade 1 ml de reactivo de Ehrlich.


Si el urobilinógeno se encuentra en proporciones mayores que lo normal, aparece una
coloración rojo cereza, mientras que si la coloración es normal puede aparecer por un
ligero color rosado. Si no aparece coloración alguna se deja reposar el tubo durante 3
minutos y si aún no aparece la coloración debe calentarse el tubo y examinarse de nuevo
antes de asegurar la negatividad de la reacción. Si la orina contiene pigmentos biliares
éstos deben eliminarse añadiendo a 4 partes de orina 1 de solución de cloruro de calcio al
10%, se mezcla bien, se filtra, y se utiliza el filtrado en lugar de la orina.

7.- SANGRE O HEMOGLOBINA: La peroxidasa de la sangre actúa descomponiendo el


peróxido de hidrógeno, y el oxígeno liberado oxida a la bencidina dando un color azul-
verdoso.

En un tubo de ensaye se colocan 2 ml de orina, se agrega una pequeña cantidad de


bencidina en polvo y se acidifica con unas gotas de ácido acético. Se agregan luego 1 a 2
ml de peróxido de hidrógeno. Aparecerá una coloración azul si la reacción es positiva.
Reportar en cruces.

c).- EXAMEN MICROSCOPICO DEL SEDIMENTO

Los sedimentos urinarios deben observarse en muestras recientes por la labilidad de los
elementos celulares. Las orinas deben tener una densidad elevada por cuanto en orinas
muy diluidas se produce la lisis de los elementos celulares.

La obtención del sedimento se consigue centrifugando 10 ml de orina a 1,500 r.p.m.


durante 5 minutos. Transcurrido dicho tiempo decantar el líquido sobrenadante y
suspender el sedimento con el líquido remanente (el que queda adherido a las paredes
del tubo). Colocar la muestra entre porta y cubreobjetos y observar al microscopio con
objetivo seco débil y luego con seco fuerte. Los constituyentes del sedimento urinario
pueden agruparse de la siguiente manera:
Elementos celulares:
a) Células epiteliales: escamosas o pavimentosas, del epitelio tubular renal, del epitelio de
transición
b) Células hemáticas: eritrocitos leucocitos
Cristales:
a) Orinas ácidas: ácido úrico, urato de sodio, uratos amorfos, oxalato de calcio, ácido
hipúrico, sulfato de calcio, cistina, tirosina, leucina, colesterol, bilirrubina
b) Orinas alcalinas: Fosfato triple, fosfatos amorfos, fosfato de calcio, carbonato de calcio,
urato de amonio
Cilindros: Hialinos, granulosos finos, granulosos gruesos, leucocitarios, eritrocitarios, de
células epiteliales, grasos, hemoglobínicos, bacterianos, céreos, de insuficiencia renal.
Cuerpos extraños: Espermatozoides, parásitos, bacterias.
La cantidad de elementos encontrados en el sedimento urinario pueden reportarse en
cruces o bien con los términos de muy escasos, escasos, cantidad moderada,
abundantes, etc.
Los leucocitos, eritrocitos y cilindros se reportan en número de células por campo.

NORMAS

 Se utilizaran las normas de laboratorio clínico NORMA Oficial Mexicana


NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Protección ambiental - Salud ambiental -
Residuos peligrosos biológico-infecciosos - Clasificación y especificaciones
de manejo. http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/087ecolssa.html

Referencias

1. Davidsohn, Henry (Todd-Sanford). Diagnóstico y tratamiento clínicos por el


Laboratorio. Editorial Salvat 2009.
2. Iovine, Selva. El laboratorio en la clínica. Editorial Panamericana. 2006
3. Sonenwith, Jarret (Gradwohd). Métodos y diagnósticos del laboratorio clínico.
Editorial Panamericana. 2008
4. Fuentes, X. Castiñeiras, MJ. Queraltó, JM. Bioquímica Clínica y Patología
Molecular. Editorial Reverté. Barcelona. 1998.
5. González de Buitrago. Bioquímica Clínica. Editorial McGraw-Hill-
Interamericana. Madrid, 2004
6. Balcells, A. La Clínica y el Laboratorio. Editorial Marín. 2009
7. Angel Gilberto y Angel Mauricio. Interpretación Clínica del Laboratorio.
Editorial Médica Panamericana. Séptima edición. 2006
8. Kaplan, Lawrence y Pesce, Amadeo. Química Clínica, Teoría, Análisis y
Correlación. V ediciónEd. Panamericana. 2009
9. American Association for Clinical Chemistry
http://www.aacc.org/
10. Academy Clinical Laboratory
http://depts.washigton.edu/lmaclps/
11. Análisis clínicos y Bioquímica Clínica en Internet
http://www.geocities.com/elmedico/analsis.htm
12. Biblioteca virtual de salud en Cuba
http://bvs.sld.cu/indice.php
13. Clinical Chemistry
http://www.clinchem.org
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA BIOLOGICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

PRÁCTICA No. 22 PRUEBA DE DEPURACION DE CREATININA


FUNDAMENTO

Si las cifras plasmáticas de creatinina se encuentran dentro de los límites


normales, el cálculo de la depuración de creatinina es un método bastante aceptable para
estudiar la filtración glomerular, o sea el volumen de plasma filtrado por los glomérulos
cada minuto.

MATERIAL

6 Tubos de ensayo

1 pipeta graduada de 5 ml

Pipeta automática de 10 µl

Probeta de 500 ml

REACTIVOS

Equipo de reactivos para determinación de creatinina

MATERIAL BIOLÓGICO

Orina de 24 horas

Suero sanguíneo

EQUIPO

Espectrofotómetro

Centrífuga

METODO

1.- Recolectar la orina del paciente durante 24 horas; durante este periodo de
recolección debe tener una alimentación sin carne, té ni café. El paciente debe tomar
agua para asegurar un volumen urinario de 1.0 ml por minuto cuando menos. Se
interrumpe toda terapéutica diurética.
2.- Tomar una muestra de sangre para medición de creatinina, aproximadamente a
la mitad del periodo de recolección de la orina; este punto no es vital.

3.- Se miden la creatinina total de la orina, la creatinina sérica, el volumen urinario


total y la superficie corporal.

4.- Para la medición de creatinina en sangre y en orina seguir las instrucciones del
equipo de reactivos. Deberá efectuarse una dilución 1:100 de la orina para efectuar la
prueba, considerando esta dilución para los cálculos.

CALCULOS:

Si 0 = Creatinina de la orina en mgs/ml

V = Volumen urinario en ml/min

P = Creatinina sérica en mgs/ml

S = superficie corporal en m2

la depuración de creatinina en ml/min se obtiene como:

OV X 1.73

P S

La superficie corporal se calcula con la siguiente fórmula:

S = EO.725 X P0.425 X 71.84

Donde S = Superficie corporal en cm2

E = Estatura en cms

P = Peso en kgs

VALORES DE REFERENCIA

Hombres: 75 a 133 ml/min

Mujeres: 69 a 122 ml/min