Laboratorio de Microbiología E.A.P.

Genética y Biotecnología

Práctica N°16: Formación de Placas de Lisis

1. Determinación de lisis bacteriana en medio líquido:

A partir de agua estancada y a través de filtrado se obtuvo una solución donde deberían hallarse
bacteriófagos. Esto se comprueba tras la preparación de 4 diferentes tubos de ensayo con medio
líquido. Se prepara un tubo blanco (solo con medio), otro control positivo (medio solo con
inóculo bacteriano), un control negativo (medio solo con filtrado con bacteriófagos) y el tubo de
prueba (medio con inóculo bacteriano y filtrado con bacteriófagos). La turbidez tras la
incubación de 3 a 4 días a 37°C sería el indicador sobre el crecimiento bacteriano o bien la
infección vírica que reducía el mismo. Se obtuvo:

Imagen 1. Prueba en medio líquido para determinación de la existencia de bacteriófagos. De

izquierda a derecha: tubo blanco, tubo control negativo (contaminado), tubo control positivo y
tubo de prueba.

2. Determinación de lisis bacteriana en medio sólido:

A partir de agua estancada y a través de filtrado se obtuvo una solución donde deberían hallarse
bacteriófagos. Esto se comprueba tras la preparación de placas de Petri donde tras el
crecimiento de 3-4 días a 37°C se identificaría un crecimiento bacteriano con presencia de
placas de lisis (halos). No obstante, lo observado en la práctica si bien evidenció la presencia de
bacteriófagos, no permitió identificar adecuadamente las placas de lisis, esto porque la alta
concentración de bacteriófagos provocó una gran cantidad de placas diminutas que crearon
regiones claras en la placa de Petri y no placas de lisis independientes. Se identificó de cualquier
manera una única placa de lisis independiente.
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Imagen 2. Placa de lisis independiente, pequeña, circular y con interior translúcido.

Imagen 3. Placa de lisis confluente, placa de Petri entregada por el laboratorio como ejemplo.

3. Discusión

Esta práctica tuvo ciertas peculiaridades, se vio crecimiento bacteriano en el tubo de control
negativo, donde se probaba la pureza del filtrado con bacteriófagos. Como se evidenció
crecimiento en este, se debe asumir que hubo contaminación al momento del filtrado. No
obstante, de cualquier manera hubo una turbidez inferior al control positivo y en el tubo de
prueba también se encontró una turbidez inferior al control positivo, por lo que aunque no
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serviría para cuantificar la carga viral, cualitativa se puede afirmar que hubo presencia de
bacteriófagos.
En la segunda parte del experimento, en la experiencia en medio sólido, se obtuvieron grandes
regiones translúcidas en lugar de placas de lisis circulares e independientes. Esto indicaría una
gran concentración de bacteriófagos, perfectamente posible puesto que no se realizó dilución
alguna desde la muestra original por no conocer su naturaleza. Si se pretendiera utilizar la
misma muestra para una nueva prueba, sería pertinente realizar diluciones seriadas.

4. Conclusiones

 Se confirmó cualitativamente la existencia de bacteriófagos en la muestra de agua

estancada obtenida. Esto mediante la turbidez diferencial entre el tubo de prueba y el
control positivo o bien al identificación de calvas de lisis en la placa de Petri.

 Se puede obtener una idea aproximada sobre la concentración de bacteriófagos en la

muestra original evidenciando las placas de lisis formadas. Asimismo de acuerdo a su
apariencia y estructura se puede proponer un tipo específico de bacteriófago.

 Se puede aumentar la concentración de virus recuperando las placas de lisis o el medio

líquido donde hubo crecimiento bacteriano en conjunto con virus y realizar filtrados
posteriores.

5. Cuestionario

¿De qué factores depende el tipo de lisis?

La lisis depende del bacteriófago que la provoque, no solamente la especie, sino la sepa.
Estudios como los de Benzer et al sobre la estructura fina del gen sobre el locus rll mostraba
diferentes tipos de lisis. Otro factor importante es el tipo de bacteria, la cepa en este caso
también importa en gran medida puesto que entre una cepa y otra puede presentarse incluso
resistencia a la lisis. La concentración del virus también es un factor importante, pues como se
identificó en clase, una alta concentración puede ocasionar calvas fusionadas e indisntiguibles,
evidenciándose solo regiones translúcidas.

¿Los bacteriófagos pueden ser usados en biotecnología?

Sí, se utilizan en la actualidad como vectores para la inserción génica, de plásmidos, por lo
general. En el pasado se ha utilizado para estudiar la estructura fina del gen y además para
estudiar la mutación vírica y el fenómeno de complementación (cuando dos mutaciones pueden
regenerar el fenotipo silvestre siempre que pertenezcan a cistrones diferentes).