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a) Justificación
En general, se harán investigaciones en busca de solucionar por medio de biosorción y/o biodegradación la
contaminación de aguas causadas por colorantes azoicos, que son productos eliminados por industrias farmacéuticas,
textiles, alimentos, plásticos, entre otras, y son considerados como materiales peligrosos ambientales, por sus
capacidades tóxicas, mutagénicas y carcinógenas. Para esto se hacen estudios y experimentos con hongos, con el fin
de buscar una solución más viable y efectiva.
● En el artículo “Biosorpción and biodegradation of triphenyl dyes by Penicillium simplicissimum…” El objetivo fue
explorar alternativas para lograr un enfoque más respetuoso con el medio ambiente y mucho más eficaz que
los demás tratamientos, usando biosorbentes a base de hongos, principalmente estudiando al hongo
Penicillium simplicissimum.
● En el artículo “Efficient degradation of Azo dyes by newly isolated fungus Trichoderma tomentosum under non-
sterile conditions” El objetivo era buscar hongos con fuertes capacidades de adaptación y de alta eficiencia en
la degradación de colorantes azoicos en aguas residuales.
● En el artículo “Optimization of conditions for decolorization of azo-based textile dye by multiple fungal species”
El objetivo fue aislar e identificar microorganismos que degradan múltiples azo-colorantes y optimizar la
degradación y el proceso de decoloración mediante la alteración de las condiciones de crecimiento que
favorecían la producción de enzimas.
● En el artículo “Revealing interactive toxicity of aromatic amines to azo dye decolorizer Aeromonas hydrophila”
El objetivo fue investigar los efectos tóxicos de las aminas aromáticas en decolorantes por A. hydrophila para
cerciorar un funcionamiento óptimo y evaluar sus posibles riesgos.
2. Identifique las variables de estudio y los métodos de cuantificación de cada una de ellas.
En el artículo “Efficient degradation of Azo dyes by newly isolated fungus Trichoderma tomentosum
under non-sterile conditions”:
● Capacidad del hongo seleccionado para decolorar en condiciones no estériles: Para esto se registraron
los cambios de las longitudes de onda características de la absorbancia máxima. Y se midió la tasa de
decoloración real en el efluente.
● Análisis degradación: Las aguas residuales que contienen modelo Acid Red 3 R se controlaron mediante el
registro de los cambios de absorbancia de sobrenadante de cultivo usando UV – Vis a diferentes tiempos.
● Fitotoxicidad de los productos de degradación: La fitotoxicidad del colorante no tratado y tratado se evaluó
con semillas de plantas de Glycine max y microsperma Adenanthera. 6 días después de la esterilización de
semillas se midió la raíz y longitud de brote. Se calculó el índice de germinación.
En el artículo “Optimization of conditions for decolorization of azo-based textile dye by multiple fungal
species” :
● Identificación de los aislados fúngicos: Todos los hongos aislados se identificaron secuenciando las
regiones de genes ITS1 e ITS4. Los productos de PCR se separaron por electroforesis en geles de agarosa al
1%, y purificados utilizando el reactivo ExoSAP-It - ExoSAP-IT® PCR Cleanup.
● Ensayos para la actividad decoloración colorante azoico: La biomasa se separó por centrifugación a 5000
xg durante 5 min, y la absorbancia del sobrenadante se midió en la λ- max de cada colorante azo . los λ- max
de cada colorante azo se obtuvo de la exploración de un 10 μ g / ml solución usando un espectrofotómetro
Agilent G1120A.
● Análisis estadístico: Se analizaron todos los resultados mediante el uso de ANOVA y análisis de rango
múltiple de Duncan-Wallis en α = 0.05.
En el artículo "Communal microaerophilic–aerobic biodegradation of Amaranth by novel NAR-2 bacterial
consortium":
● El análisis cuantitativo se realizó mediante monitorización de la reacción múltiple (MRM) en base a dos
transiciones de iones precursor-producto.
● Biodegradación de Amaranto por NAR-2 consorcio bacteriano: Las muestras se incubaron a continuación
a 45 C y el muestreo se realizó a intervalo de 10 min. Cada muestra se centrifugó y el sobrenadante se
analizaron a 521 nm para determinar el nivel de decoloración.
● Recuento de viables en placa: Se realizo para determinar el perfil de especies bacterianas predominantes
para NAR-2 consorcio bacteriano, fueron realizadas tanto en la decoloración microaerofılico y biodegradación
aeróbica consecutivo.
● A. hydrophila se utilizo en este experimento como indicador de rendimiento de decoloración en contraste con P.
luteola.
● Preparación de la bacteria: Se precultivó un asa llena de A. hydrophila tomada de una colonia aislada en una
placa LBstreak en caldo Bacto 1 / 5X LB de 50 ml, Miller (por litro; 2,0 g de Bactina triptona, 1,0 g de extracto
de levadura Bacto, 10 g de cloruro de sodio) durante 24h ha 30 ° C, pH 7,0, 125 rpm usando un agitador de
baño con agua. Se inocularon aproximadamente 200 ml de caldo precultivado en 1300 ml de caldo LB fresco
para cultivo aeróbico continuo (1 vvm, 200 rpm, 30 ◦C) a t = -48 h.
● Prueba de CPT: El colorante RR141 se incluyó en las ejecuciones de quimiostato con las aminas aromáticas
para revelar si la toxicidad combinada de RR141 y MAA aún podría revelarse mediante la CPT propuesta.
● Recuentos en placa estándar: se realizo precultivo de A. hydrophila tomada de una colonia aislada en placa
LB-streak. Fue precultivada en 50 ml de caldo LB 1 / 5X, Miller durante 12 ha 30 ° C, pH 7.0, 200 rpm.
Aproximadamente 5% (v / v) de caldo cultivado se inocularon luego en 1 / 5X de medio LB nuevo y se cosechó
un cultivo celular en la fase de crecimiento exponencial medio (aproximadamente 4 h) para una posterior
evaluación de la toxicidad.
● Evaluacion de toxicidad e inhibición: Las soluciones de aminas aromáticas se esterilizaron primero por
filtración (Millpore Millex®-GS unidad de filtro de 0,22 μm) después de la disolución completa. Se adoptó el
análisis probit para revelar las curvas de respuesta a la dosis de varias soluciones de aminas. Se supone que
la gráfica semilogarítmica de la concentración de amina frente a la respuesta provocada revela una relación
lineal.
● Penicillium simplicissimum.
En el artículo “Optimization of conditions for decolorization of azo-based textile dye by multiple fungal
species”:
● A. niger
● A. terreus
● A. oryzaem
● A.flavus
● A. fumigatus
● A. alabamensis
● L. corymbiferastrain
En el artículo “Efficient degradation of Azo dyes by newly isolated fungus Trichoderma tomentosum under
non-sterile conditions”:
● T. tomentosum
● Aeromonas hidrophila
4. De acuerdo con los objetivos del estudio, ¿Cuál variable soportará el objetivo y cuales complementarán y/o
apoyarán los resultados principales?
En el artículo “Efficient degradation of Azo dyes by newly isolated fungus Trichoderma tomentosum under
non-sterile conditions”
● La variable que mejor soporta el objetivo es La capacidad del hongo seleccionado para decolorar en
condiciones no estériles y la soporta el análisis de degradación.
En el artículo “Optimization of conditions for decolorization of azo-based textile dye by multiple fungal
species”
● La variable principal para el objetivo es la identificación de los aislados fúngicos y la soporta los ensayos
para la actividad decoloración colorante azoico.
5. ¿Qué herramientas emplean los autores para presentar sus diferentes variables de estudio?
En el artículo “Efficient degradation of Azo dyes by newly isolated fungus Trichoderma tomentosum under
non-sterile conditions”:
● Se extrajo ADN genómico con un protocolo de perlas de vidrio (Para la identificación del hongo seleccionado).
● Espectrofotómetro UV - Vis para medir las absorbancias máximas.
● Centrífuga, para los sobrenadantes necesarios para la detección de peroxidasas.
● Espectrómetro equipado con una columna capilar BR-1MS. Para el análisis GC-MS.
En el artículo “Optimization of conditions for decolorization of azo-based textile dye by multiple fungal
species”
● Para la identificación de aislados fungicos se hizo una PCR, la cuál se purificó por medio de electroforesis en
geles de agarosa al 1% y reactivoExoSAP-It - ExoSAP-IT® PCR Cleanup Product.
● Espectrometría de masas
● CPT (Técnica de pulso quimiostatico)
● Análisis probit
6. ¿Cuáles fueron los principales resultados del estudio y cómo las demás variables lo soportan y]/o impactan?
En el artículo “Biosorpción and biodegradation of triphenyl dyes by Penicillium simplicissimum…”
● La secuenciación del ADN de la región ITS indicó 99% de homología con los de Penicillium simplicissimum
cepas, dónde se resuelve la variable “Identificación taxonómica”.
● Se llegó a la conclusión a partir de los cambios en los patrones de pico de los espectros de absorción (300 mi
800 nm). Tras el tratamiento con el aislante 10, los picos para CV, MV y CB estaban ausentes en comparación
con patrones de picos en el control. La reducción o desaparición de los picos de absorción indican una posible
aparición de biodegradación, mecanismo más eficaz y deseable que biosorción ya que este último genera
grandes volúmenes de biomasa colorante tratados (lodos). Las variables que ayudaron a determinar esto
fueron “el potencial de biodegradación” y los “ensayos enzimáticos para detectar biodegradación de colorantes
TPM”.
En el artículo “Efficient degradation of Azo dyes by newly isolated fungus Trichoderma tomentosum under
non-sterile conditions”.
● Uno de los resultados más relevantes fue que estos hongos (T. tomentosum) son capaces tanto de absorber,
como degradar los colorantes y además podría decolorar tres tipos de colorantes azoicos y colorantes
mezclados del sector textil, esto gracias al desarrollo de la variable “Capacidad del hongo seleccionado para
decolorar en condiciones no estériles”.
● Se indicó que la fitotoxicidad de productos degradados se redujo drásticamente. Se pudo observar que las
semillas tratadas con productos degradados exhibieron patrón de crecimiento similar al control, mientras que el
crecimiento de los brotes jóvenes de las semillas fue significativamente inhibida por Acid Red 3 R. Por lo tanto,
la toxicidad de los productos de degradación se redujo por tratamiento de T. tomentosum, resultado gracias al
experimento hecho para la variable “Fitotoxicidad de los productos de degradación”.
En el artículo “Optimization of conditions for decolorization of azo-based textile dye by multiple fungal
species”.
● Identificación de los aislados fúngicos y ensayos para la actividad decoloración colorante azoico.
● Los resultados muestran que los hongos aislados pertenecían a cinco especies de Aspergillus: A. niger, A.
terreus, A. oryzae metro, A. Flavus, A. fumigatus, A. alabamensis y un único L. corymbiferastrain. Locuál se hiz
por medio de una secuenciación de genes, relacionado con la variable “Identificación de los aislados fungicos”.
● Se informó que A. niger, A. flavus Avus y Penicillium sp. son degradantes de colorantes azoicos muy activos.
también se informó de que A. niger y A. flavus mostraron los porcentajes de decoloración más altos de rojo
congo (87% y 83%) después de 48 h, respectivamente. A. niger, A. fumigatus y A. flavus mostraron la
capacidad de decoloración de tres colorantes azoicos (rojo congo, azul tripán y rojo de metilo). A. fumigatus
mostró el porcentaje más alto de decoloración de rojo congo después de 21 días de incubación y una cepa de
Aspergillus sp. ha sido reportado como degradador de Coomassie Brilliant Blue colorante rojo congo. Gracias
al desarrollo de la variable “ensayos paara la actividad decoloración colorante azoico.
● La PCR se usó para amplificar los genes parciales de C. freundii A1 y E. cloacae L17 los cuales
mostraron que poseen homología con genes de transaminasas, así, permitiendo demostrar que pueden
funcionar en la desaminación de los productos intermedios de tinte reducidas.
● El análisis por LC-MS / MS permitió investigar los intermedios de tinte formadas después de la decoloración
de amaranto y más biotransformación de intermedios de tinte por NAR-2.
● La adición de C. freundii A1 demostró que la cepa bacteriana probablemente podría dar lugar a una
interacción bacteriana única que equilibra la dinámica de población bacteriana que a su vez mejora la tasa
de decoloración de Amaranto. Esto fue posible al desarrollo de la variable “identificación de consorcios
bacterianos”.
● Estas pruebas indicaron claramente la serie de toxicidad de las aminas aromáticas del modelo de P. luteola en
términos de modelos cinéticos desde una perspectiva toxicológica.
● Indicó claramente las características inhibitorias de los MAA en cultivos portadores de RR141, lo que sugiere la
viabilidad de la técnica CPT para la evaluación de la toxicidad sobre el decolorante A. hydrophila. Esto se debe
al desarrollo de la variable “Prueba CTP”.
● La especie Aeromonas es probablemente más apropiada para ser cultivada en biorreactor de vasos cerrados
debido a su posible patogenicidad.