Metodología actividad antioxidante

METODOLOGÍA

- Capacidad capturadora de radicales libres.

La capacidad antioxidante de los extractos obtenidos en este trabajo se evaluó por el

método del DPPH (Difenil-picril-hidracilo). El DPPH es un radical libre de color violeta,
que se obtiene disolviendo el reactivo en un medio orgánico. En su forma de radical
libre, el DPPH absorbe a una longitud de onda de 517nm. Cuando una disolución de
DPPH entra en contacto con una sustancia que puede donar una átomo de hidrógeno
o con otra especie radical (R.) se produce la forma reducida DPPH-H ó -R con la
consecuente pérdida del color y por lo tanto la pérdida de la absorbancia. El grado de
decoloración de la disolución de este radical es una medida de la capacidad de
capturar radicales libre de la sustancia ensayada (Muñoz Juárez & Gutiérrez, 2009).

Para esta prueba se empleó un espectrofotómetro UV- Visible Beckman DU 520

(Figura 11) y se realizó el siguiente procedimiento:

1. Se prepararon soluciones metanólicas de los extractos y los compuestos puros

aislados a distintas concentraciones.

2. En cubetas plásticas para espectrometría, se colocó 1,5 mL de la solución a

testear y 1,5 mL de solución metanólica de DPPH (0,01 mM).

3. Se preparo el blanco colocando 3 mL de MeOH para fijar la línea de base en el

espectrofotómetro.

4. Se preparó la solución control, midiendo su absorbancia (1,5 mL de solución

metanólica de DPPH y 1,5 mL de MeOH).

5. Se midió la absorbancia de cada una de las soluciones preparadas a una λ=

517 nm pasados los 30 minutos.

6. Cada prueba se realizó por triplicado.

7. El porcentaje de actividad antioxidante se determinó utilizando la siguiente

fórmula:

%AAO= [(Ac-Am)/Ac] x 100

Am= Absorbancia de la muestra y Ac= absorbancia del control

Con los datos obtenidos se procedió a realizar un análisis de regresión no lineal para
determinar el IC50 (Concentración Inhibitoria media), es decir, la concentración de
muestra antioxidante necesaria para disminuir la concentración inicial de DPPH* al
50%. Este análisis se llevo a cabo utilizando el programa InfoStat.