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FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

PROCESO PLAN CURRICULAR


FORMATO DE GUÍA DE LABORATORIO
Código: FCQ-P05-F05; Versión: 01; Fecha: 15 de enero de 2017

GUÍAS DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

CARRERA/AS Bioquímica Clínica


UNIDAD DE ORGANIZACIÓN Básica
CURRICULAR
CAMPO DE FORMACIÓN Praxis profesional
ÁREAS / SUBÁREA
ACADÉMICA
NOMBRE DE LA ASIGNATURA Parasitología

Elaborado Revisado Aprobado

Docente de Laboratorio Docente de Teoría Coordinadora del Área


Profesional

Firma Firma Firma


Gabriela Maldonado MSc. Dra. Isabel Fierro Dra. Inés Echeverría
Fecha: Fecha: Fecha:

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INDICE:

INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................... 3
Normas del laboratorio de Parasitología: .............................................................................................. 4
PRÁCTICA Nº 01: Bioseguridad en el laboratorio de Parasitología ..................................................... 5
PRÁCTICA Nº 02: Manejo y uso del Microscopio óptico .................................................................... 8
PRÁCTICA Nº 03: Examen Coprológico I: Análisis Macroscópico ................................................... 12
PRÁCTICA Nº 04: Examen Coprológico II: Análisis Microscópico - Elementos normales de las heces
.......................................................................................................................................................... 17
PRÁCTICA Nº05 Coproparasitario I - Protozoos intestinales: Rizopodarios ...................................... 23
PRÁCTICA Nº06 Examen Coproparasitario II: Protozoos intestinales: Flagelados ............................ 26
PRÁCTICA Nº07 Flebotomía y frotis sanguíneo................................................................................ 31
PRÁCTICA Nº08 Diagnóstico directo de Leishmania spp. y Tripanosoma spp. ................................. 40
PRÁCTICA Nº09 Examen Coproparasitario III: Ciliados intestinales y otros protozoarios de
importancia clínica ............................................................................................................................. 43
.......................................................................................................................................................... 34
PRÁCTICA Nº10 Diagnóstico directo de Plasmodium spp ................................................................ 44
PRÁCTICA Nº 11: Coproparasitario IV. Céstodos y tremátodos intestinales ..................................... 47
PRÁCTICA Nº 12: Coproparasitario V. Nemátodos Intestinales ........................................................ 51
PRÁCTICA Nº 13: Taller práctico y consulta sobre vectores de enfermedades parasitarias ................ 53

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INTRODUCCIÓN

La parasitología, es una asignatura que abarca un conjunto de conocimientos técnicos y científicos


aplicados al conocimiento de los parásitos que viven dentro o fuera del cuerpo del ser humano y, de los
aspectos de relevancia médica que existen en esa relación entre huésped y parásito. Aborda el estudio
de la taxonomía, estructura, metabolismo y comportamiento de los parásitos; sus relaciones y las
alteraciones que producen en el estado de salud del hombre, así como los métodos para su diagnóstico,
prevención y control.

OBJETIVOS:

 Reconocer las características morfológicas y estructurales de los diferentes parásitos que afectan al
ser humano.
 Identificar y diferenciar los grupos de vectores mecánicos y biológicos que transmiten parásitos al
ser humano y asociarlos con los procesos infecciosos producidos.
 Comprender el fundamento de cada una de las técnicas de laboratorio que permitan la detección
oportuna de las formas parasitarias en los diferentes especímenes biológicos.
 Conocer e identificar los estadios morfológicos de los parásitos presentes en las muestras
biológicas para lograr un diagnóstico confiable y oportuno.

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Normas del laboratorio de Parasitología:

 Todos los alumnos deberán asistir con mandil y el cabello recogido (si aplica).
 Todos los estudiantes deben utilizar guantes de látex durante toda la sesión. Recuerde no
manipular celulares ni otros objetos personales mientras utilice los guantes. Es
recomendable que disponga un esfero, lápiz y cuaderno solo para el laboratorio. De
preferencia que los deje en el laboratorio y que los mantenga en una funda si los transporta
en su mochila.
 La entrada al laboratorio quedará restringida exclusivamente a los alumnos inscritos.
 No se debe consumir alimento o bebidas en el laboratorio.
 Las mochilas, maletas, etc. Deberán ser colocadas en un mesón en donde no se va a realizar
el trabajo de laboratorio. Si es posible se deben colocar en casilleros afuera del laboratorio.
 Manipular correctamente el microscopio asignado y las preparaciones de las placas con
parásitos prefijados a observar.
 Revisar los contenidos teóricos antes de la práctica correspondiente.
 Limpiar el lugar de trabajo una vez terminada la práctica. Para ello se nombrará un jefe de
mesa quien será el responsable de que la mesa quede aseada y desinfectada. También
vigilará que todos los integrantes de la mesa se laven las manos con antiséptico antes de
retirarse. Todos los integrantes de la mesa serán responsables del cuidado de los materiales
y equipos y deben reportar cualquier novedad. En caso de algún daño al material o
aparatos, los alumnos integrantes del equipo estarán obligados a reparar dicho daño en
forma que indique el profesor.
 Eliminar correctamente los desechos generados en el laboratorio de acuerdo a la
clasificación de los desechos biológicos según las normas de bioseguridad establecidas.
 Cualquier accidente en el laboratorio o derrame de microorganismos, se deberá comunicar
inmediatamente al profesor, para evitar el riesgo de contaminación con los
microorganismos patógenos o parásitos manejados en las prácticas.
 Siempre dibujar todo lo observado, destacando los conceptos que caracterizan a los
distintos parásitos. Los dibujos se hacen del campo microscópico con el lente objetivo que
mejor represente los conceptos teóricos.
 Realizar preguntas o dudas de la práctica a ejecutarse o en su defecto de conocimientos
teóricos antes, durante o después de la práctica a fin de afianzar los conocimientos antes del
examen de laboratorio.
 La calificación del laboratorio de Parasitología consiste en 6 puntos que se promediaran
considerando los informes, la evaluación y la participación en las actividades de limpieza y
preparación de materiales.

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PRÁCTICA Nº 01: Bioseguridad en el laboratorio de Parasitología

1. Objetivos:
 Reconocer los riesgos y las medidas correctas de bioseguridad a manejarse al interior del
laboratorio de Parasitología.

2. Fundamento y método de la práctica:

Los laboratorios se clasifican como sigue: laboratorio básico – nivel de bioseguridad 1; laboratorio
básico – nivel de bioseguridad 2; laboratorio de contención – nivel de bioseguridad 3, y laboratorio de
contención máxima – nivel de bioseguridad 4.
El pilar de la práctica de la bioseguridad es la evaluación del riesgo. Las designaciones del nivel de
bioseguridad se basan en una combinación de las características de diseño, construcción, medios de
contención, equipo, prácticas y procedimientos de operación necesarios para trabajar con agentes
patógenos de los distintos grupos de riesgo. La asignación de un agente a un nivel de bioseguridad para
el trabajo de laboratorio debe basarse en una evaluación del riesgo. (Ver Tabla 1)

Tabla 1. Relación de los grupos de riesgo con los niveles de bioseguridad, las prácticas y el equipo

Tomado del Manual de Bioseguridad de la OMS,

Existen varios principios que se deben respetar en el laboratorio de Parasitología a fin de que se
reduzca al mínimo el riego generado durante las prácticas del laboratorio. A continuación, se detallan
los aspectos que los estudiantes deben cumplir dentro del laboratorio.

Protección personal
1. Se usarán en todo momento mandil para el trabajo en el laboratorio. Los alumnos deberán
asistir con el cabello recogido (si aplica). Los mandiles no deben utilizarse fuera de las zonas
del laboratorio.

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2. Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que puedan entrañar
contacto directo o accidental con sangre, líquidos corporales y otros materiales potencialmente
infecciosos o animales infectados. Recuerde no manipular celulares ni otros objetos personales
mientras utilice los guantes. Una vez utilizados, los guantes se retirarán de forma aséptica y a
continuación se lavarán las manos. Descarte los guantes en bolsa roja.
3. Es recomendable que disponga un esfero, lápiz y cuaderno solo para el laboratorio. De
preferencia que los deje en el laboratorio y que los mantenga en una funda si los transporta en
su mochila.
4. El personal deberá lavarse las manos después de manipular materiales y animales infecciosos,
así como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio.
5. En las zonas de trabajo estará prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosméticos o manipular
lentes de contacto.
6. La ropa protectora de laboratorio no se guardará en los mismos armarios o taquillas que la ropa
de calle.

Procedimientos
1. La entrada al laboratorio quedará restringida exclusivamente a los alumnos inscritos.
2. El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el
trabajo.
3. Las mochilas, maletas, etc. Deberán ser colocadas en un mesón en donde no se va a realizar el
trabajo de laboratorio. Si es posible se deben colocar en casilleros afuera del laboratorio.
4. Estará estrictamente prohibido pipetear con la boca.
5. Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se
comunicarán al supervisor del laboratorio. Se mantendrá un registro escrito de esos accidentes
e incidentes.
6. Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al mínimo la
formación de aerosoles y gotículas. Por favor preste atención a las indicaciones del docente.
7. Las superficies de trabajo se descontaminarán después de todo derrame de material
potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo. Para ello se nombrará un jefe de
mesa quien será el responsable de que la mesa quede aseada y desinfectada. También vigilará
que todos los integrantes de la mesa se laven las manos con antiséptico antes de retirarse.
Todos los integrantes de la mesa serán responsables del cuidado de los materiales y equipos y
deben reportar cualquier novedad. En caso de algún daño al material o aparatos, los alumnos
integrantes del equipo estarán obligados a reparar dicho daño en forma que indique el profesor.
8. Todos los materiales de vidrio se deben lavar y limpiar adecuadamente para volverlos a
utilizar.

Manipulación de desechos
Eliminar correctamente los desechos generados en el laboratorio de acuerdo a la clasificación de los
desechos biológicos según las normas de bioseguridad establecidas.

Se considera desecho todo aquello que debe descartarse. En los laboratorios, la descontaminación y la
eliminación de desechos son operaciones estrechamente relacionadas. En el trabajo cotidiano, son
pocos los materiales contaminados que es preciso retirar del laboratorio o destruir. La mayor parte de
la cristalería, los instrumentos y la ropa del laboratorio vuelve a utilizarse o se recicla. El principio
básico es que todo el material infeccioso ha de ser descontaminado, esterilizado en autoclave o
incinerado en el laboratorio.
Las principales preguntas que hay que hacerse antes de eliminar cualquier objeto o material de un
laboratorio que trabaja con microorganismos o tejidos animales potencialmente infecciosos son las
siguientes: 1. ¿Se han descontaminado o desinfectado realmente los objetos o el material por un
procedimiento aprobado?
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2. De lo contrario, ¿se han embalado con un método aprobado para ser incinerados inmediatamente in
situ o transferidos a otro laboratorio que tenga capacidad para incinerar?
3. ¿Entraña la eliminación de los objetos o materiales descontaminados algún otro peligro, biológico o
de otra clase, para quienes realizan las operaciones de eliminación inmediata o para quienes puedan
entrar en contacto con los objetos o materiales desechados fuera del recinto del laboratorio?

Desenvolvimiento durante la práctica


1. Manipular correctamente el microscopio asignado y las preparaciones de las placas con parásitos
prefijados a observar.
2. Revisar los contenidos teóricos antes de la práctica correspondiente.
3. Siempre dibujar todo lo observado, destacando los conceptos que caracterizan a los distintos
parásitos. Los dibujos se hacen del campo microscópico con el lente objetivo que mejor
represente los conceptos teóricos.
4. Realizar preguntas o dudas de la práctica a ejecutarse o en su defecto de conocimientos teóricos
antes, durante o después de la práctica a fin de afianzar los conocimientos antes del examen de
laboratorio.
5. La calificación del laboratorio de Parasitología consiste en 6 puntos que se promediaran
considerando los informes, la evaluación y la participación en las actividades de limpieza y
preparación de materiales.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Mantener el orden durante toda la práctica.
 Organizar grupos de trabajo.

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS


- Proyector - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Computadora - Diapositivas - Jabón
- Texto de referencia

4. Procedimiento:
Discutir y socializar el fundamento de la práctica.

5. Resultados:
Elaborar mapas conceptuales y diagramas de flujo del material entregado y socializado durante la
práctica.
Resolver el crucigrama propuesto relacionado con las normas de bioseguridad en el laboratorio.

1. Discusiones y Conclusiones:
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.
 Mencionar características relevantes de la práctica realizada.

2. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 OMS, MANUAL DE BIOSEGURIDADEN EL LABORATORIO, Tercera Edición, Ginebra
2005.

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PRÁCTICA Nº 02: Manejo y uso del Microscopio óptico

1. Objetivos:
 Familiarizarse con el manejo y los cuidados que requiere los microscopios del laboratorio.
 Entender y practicar el proceso de enfoque en el microscopio óptico.

2. Fundamento y método de la práctica:


Antes de iniciar las actividades prácticas de cualquier trabajo al microscopio, los estudiantes deben
familiarizarse con sus diferentes partes y un enfoque adecuado.

Partes del microscopio:

Figura 1: Esquema de un microscopio óptico y las partes más importantes.


(Tomado de: Reference Manual, Serie One-Ten Microstar, AO Scientific Instruments, Division of
Warner-Lambert Technologies, Inc, Bufalo, New York, USA)

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Enfoque adecuado
Para visualizar las diferentes estructuras en el microscopio se requiere seguir unos pocos pasos para
lograr un enfoque interpupilar e iluminación adecuado. Antes de empezar a enfocar correctamente,
siéntese en forma confortable frente a su microscopio. Retire el protector plástico, dóblelo y guárdelo.
Si el microscopio tiene polvo, limpie su exterior con una toalla de papel o un pedazo de gasa, sin tocar
las lentes.

a) Enfoque Interpupilar
Necesita ajustar los oculares a su distancia interpupilar, para ver por los dos oculares un solo campo
luminoso. El espacio entre los ojos es variable para cada persona por lo debe ajustar la distancia
interpupilar correcta cada vez que utilice el microscopio.

b) Iluminación
Una buena iluminación es aquella que ofrece el mejor contraste. Para lograr una adecuada iluminación
debe ajustar la luz utilizando el diafragma y condensador del microscopio.

c) Enfoque de la placa
Para evitar que los lentes se ensucien o que la placas se rompan es necesario seguir algunas
consideraciones para enfocar las preparaciones.

Cuidados del microscopio


 Procure dejar su microscopio en un mismo sitio. En general, debe evitarse en lo más posible el
transporte diario o constante de cualquier aparato. Si requiere transportar el microscopio por
favor con una mano tome el microscopio por la base y con la otra mano sujete el microscopio
por el brazo.
 Cuando no esté en uso, mantenga el microscopio cubierto y protegido del polvo.
 No toque el instrumento con manos sucias o grasosas.
 Economice la vida de la lámpara, asegurándose de ejecutar la iluminación correcta tal como se
le ha enseñado. Si el diafragma del condensador está cerrado, ya podrá darle toda la intensidad
a la lámpara, gastándola innecesariamente, que no logrará mejor iluminación. Si no hace
contraste, tampoco verá nada.
 No permita que líquidos, ácidos o aceites ensucien el microscopio.
 Nunca utilice lentes de mayor aumento sin cubrir la preparación con un cubre objetos.
 Nunca deje el objetivo de inmersión lleno de aceite. Use papel de lente o papel absorbente, con
movimientos suaves y absorba el aceite luego de usarlo.
 Si falta uno o varios objetivos, tape inmediatamente el agujero con un tapón de rosca especial
para ello o con esparadrapo si no hay otra cosa.
 Muchos recomiendan xilol para limpiar las lentes mal cuidadas, con aceite o sucio resecado
sobre ellas. Es preferible, sin embargo, usar un poco de éter en vez de xilol para evitar despegar
las lentes ya que el xilol es disolvente de pegamento. Utilice un aplicador con algodón en la
punta humedecido en éter. Páselo por las lentes grasosas y limpie inmediatamente con papel de
lentes limpio. Nunca utilice alcohol antiséptico para limpiar los lentes.
 Después de realizar las observaciones, retire las placas portaobjetos y limpie con un algodón
empapado de alcohol la superficie de la platina y los lentes macrométricos y micrométricos.
NO LIMPIAR LOS LENTES. Si los lentes se ensucian por favor indique al docente a cargo.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Mantener el orden durante toda la práctica.
 Organizar grupos de trabajo.

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3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES
-Microscopios - Guía de Laboratorio
- Placas

3.3. Procedimiento

A. Enfoque interpupilar
1. Encienda el microscopio a una intensidad confortable. Ahora mire por los oculares. Verá un
campo luminoso con el ojo izquierdo y otro con el ojo derecho.
2. Para lograr la distancia interpupilar correcta continúe viendo el campo a través de un ocular
mientras acerca o separa los oculares, ya sea usando la rosca entre ambos o tomando los
oculares con ambas manos y presionando para juntarlos o separarlos.
3. Proceda con la visualización hasta que la imagen del ojo izquierdo y la imagen del ojo derecho
se fusionan o juntan y se ve un solo campo luminoso con ambos ojos.

B. Ajuste de iluminación
1. Encienda el microscopio. Abra a su máxima apertura el diafragma de apertura y el del
condensador.
2. Coloque una preparación en la platina o deje la que ya tenía. Ajuste la luz a una intensidad
confortable y enfoque.
3. Viendo por los oculares, disminuya la abertura del diafragma de apertura hasta una pequeña
luz. Si esta luz se ve a los lados, arriba o abajo, como lo muestra la Figura 2A, quiere decir que
el condensador no está centrado. Usando ambos tornillos del condensador, deles vuelta
despacio y alternativamente, hasta colocar la luz en el centro del campo como se observa en la
Figura 2B.
4. Abra ahora despacio el diafragma de apertura hasta que apenas desaparezca del campo visual.
5. Para ajustar el diafragma del condensador y obtener una imagen con buen contraste, cierre
apenas el diafragma del condensador observando su preparación que no tenga difracción y que
todos los elementos muestren contraste. Ya puede trabajar con su microscopio, alineado y
debidamente iluminado.

FIGURA 2. A: condensador fuera de centro. B= condensador centrado.


(Tomado de: Smith R. Microscopy and Photomicrography, pg. 14. Appleton-Century-Crofts / New
York 1982).

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C. Enfoque de las preparaciones
1. Una vez que ha ajustado el enfoque interpupilar y la iluminación coloque en posición central el
lente de menor aumento. 4X o 10X.
2. Coloque la placa portaobjetos en la platina.
3. Mueva el tornillo macrométrico de modo que la platina se mueva en dirección ascendente,
mientras al mismo tiempo observe a través de los lentes oculares hasta que se obtenga una
imagen nítida de la preparación.
4. A continuación, mueva el revólver y coloque el lente de aumento requerido según la
preparación. 40X o 100X. Observación con el lente de 100X requiere el uso de aceite de
inmersión.
5. Finalmente mueva únicamente el lente micrométrico para lograr el enfoque y contraste
requeridos. Recorrer la placa portaobjeto en una sola dirección de arriba hacia abajo y de
derecha a izquierda.

4. Resultados
Realizar un gráfico de un microscopio y rotular las partes. Indicar en un cuadro que elementos
pertenecen al sistema óptico y cuales al mecánico.

5. Conclusiones y discusiones:
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.
 Mencionar la importancia del manejo correcto del microscopio.

3. Cuestionario:
1. Utilidad del aceite de inmersión
2. Elabore un esquema del funcionamiento del microscopio óptico. Explique qué tipo de imagen
observa usted en el ocular.
3. Explique que es la apertura numérica.

4. Bibliografía:
 GIRARD, Rina, MANUAL DE PARASITOLOGÍA, Métodos para Laboratorios de
Atención Primaria de Salud. 2da. Edición, 2003
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.

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PRÁCTICA Nº 03: Examen Coprológico I: Análisis Macroscópico

1. Objetivos:
 Conocer el proceso y los parámetros para realizar el examen macroscópico de una muestra de
heces.

2. Fundamento y método de la práctica:


La digestión es el conjunto de fenómenos mecánicos y bioquímicos que transforman los constituyentes
orgánicos más o menos complejos de los alimentos en sustancias simples directamente asimilables.
Los alimentos son triturados en la boca sufriendo una división física. Luego comienza una
disgregación química mediante fermentos digestivos y elementos bacterianos, hasta conseguir las
biomoléculas que pueden ser absorbidas por la mucosa intestinal. Los residuos no aprovechables de la
digestión (10 - 20% de grasa.,2 - 3% de proteínas.,10 - 20% de sustanciasinorgánicas,30% de restos no
digeribles, componentes sólidos del jugo digestivo como pigmentosbiliares y detritus celulares).
conjuntamente con agua (75%) y una proporción de la microflora normal (30%) son expulsados fuera
del organismo.

El examen coprológico es un tipo de examen directo que se utiliza en el laboratorio para diagnóstico
médico: es el estudio de las heces fecales y revela la digestión de un individuo normal en un momento
determinado de la fisiología intestinal. Este estudio tiene su máxima indicación en las diarreas
crónicas, y comprende la observación macroscópica y microscópica de las heces, así como su análisis
químico, bacteriológico y parasitológico.
Su utilidad clínica consiste en los siguientes aspectos.

1. Evaluación del funcionalismo digestivo.


2. Diagnóstico de infecciones intestinales causadas por virus, bacterias y hongos.
3. Identificación de infecciones causadas por parásitos intestinales.

El examen coprológico o estudio de las materias fecales es el método más simple para la identificación
de protozoarios intestinales. Existen también otros procedimientos complementarios que pueden
efectuarse, de acuerdo a las necesidades.
El examen coprológico consiste en una serie de determinaciones macroscópicas, microscópicas y
químicas. A continuación, se detallan los parámetros que se valoran en el análisis macroscópico:

a) Olor: Viene dado por el indol, escatol, mercaptano y sulfuros, en general del producto del
metabolismo bacteriano.

b) Color: Normalmente y con dieta mixta, la deposición es de color pardo o café más o menos oscuro
en el adulto, en niños debido a la dieta Láctea es amarillenta, con dieta carnea se hace café oscuro.
Una alimentación rica en verduras, tiñe las heces de color verdoso, mientras que si preponderan
papas o pan las heces se aclaran a café amarillento.
El color marrón de las heces es el resultado de la oxidación intestinal del estercobilinógeno a
estercobilina, la bilirrubina conjugada formada por la degradación de la hemoglobina pasa a través
del conducto biliar al intestino delgado, donde las bacterias intestinales la convierten a
urobilinógeno y estercobilinógeno. Por tanto, las heces que aparecen pálidas pueden significar una
obstrucción del conducto biliar o pueden asociarse a la utilización de sulfato de bario.
El color anormal tiene significado patológico, por ejemplo: negro en melenas, blanco en acolia.
(Ver Anexo 1)

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c) Consistencia: Normalmente y con dieta mixta, la deposición debe ser sólida y formada, es decir
cilíndrica y consistente para mantener esta forma después de ser excretada. La consistencia puede
ser acuosa ó líquida, blanda, pastosa y puede estar semi-formada, formada y dura. (Ver Anexo 2)

d) Elementos sobreañadidos: Entre estos podemos encontrar restos alimenticios por una deficiente
masticación, presencia de parásitos y otros determinados por compromiso de la mucosa intestinal
como: moco, pus, sangre, grasa.

 Sangre: Su presencia es anormal debida a una acción traumática por algún agente infeccioso.
Se puede encontrar fresca dándole una coloración rojo brillante cuando los daños son en el
colon o bien encontrarse metabolizada, proporcionándole a las heces un color rojo oscuro o
negrusco cuando los daños son a nivel de intestino delgado.

 Moco: Su aparición en las deposiciones suele ser reconocible macroscópicamente. Si se


encuentra finamente dividido y mezclado en las heces, dándole un color brillante, entonces
procede del intestino delgado a diferencia del moco en copos visibles tiene un origen más bajo
y sobre todo el que se observa en tira tiene un origen en el colon distal. Su presencia en las
heces es propia de los estados inflamatorios (enteritis y colitis), pero también se presenta en los
estados espásticos, aún sin inflamación.

 Pus: Se presenta en pequeñas cantidades en la enteritis y colitis de cualquier etiología. Pero la


presencia brusca de pus abundante es indicio de la evacuación a la luz intestinal de un absceso
próximo (perirrectales, prostáticos, piosálpinx, etc.). No se encuentra en heces normales. Es
importante su determinación ya que aparece en la colitis ulcerosa, disentería bacilar y pacientes
con abscesos o fístulas anales.

e) pH: El pH normal fluctúa entre 7-7,5 es decir ligeramente alcalino. Está determinado por la relación
entre los ácidos producidos por la flora de fermentación y el amoniaco producido por la flora de
putrefacción.

Además de los aspectos detallados se pueden realizar determinaciones químicas en las muestras de
heces. Estas pruebas son útiles para determinar el funcionamiento del aparato digestivo y la absorción
de los alimentos. Estas pruebas son: Sangre oculta en heces, Sudan III y determinación de azúcares
reductores. La descripción de estas técnicas está desarrollada dentro del programa de Parasitología
Clínica.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Mantener el orden durante toda la práctica.
 Obtener muestras frescas de heces en recipientes adecuados.
 Desechar correctamente los desechos generados (todo material que haya tenido contacto
con la muestra de heces en la funda roja, palillos e hisopos en el contenedor de
cortopunzantes).

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS


-Microscopios - Guía de Laboratorio - Solución fisiológica
- Muestras de heces - Lugol
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- Placas portaobjetos y - Alcohol antiséptico
cubreobjetos
- Lápiz dermográfico
- Papel indicador de pH
- Tubos de vidrio
- Gradillas
- Palillos
- Hisopos

3.3. Procedimiento
1. Abrir una caja de muestra de heces.
2. Observar los aspectos del análisis macroscópico: color, consistencia, aspecto, presencia o no de
moco, restos alimenticios, vermes, sangre.
3. Determinar el pH de la muestra. Tomar una pequeña cantidad de muestra de heces con un
palillo de madera y poner en contacto con el papel indicador de pH. Si la muestra tiene
consistencia dura se puede realizar una suspensión de la muestra de heces con solución
fisiológica en un tubo de vidrio.
4. Eliminar correctamente los restos, desechos y muestras biológicas poniendo en práctica las
normas de bioseguridad ene le laboratorio.

4. Resultados
Con las observaciones realizadas, llene el Anexo 3 Formato para reporte de Coprológico que se indica
al final de esta práctica.

5. Conclusiones y discusiones:
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.
 Discutir si los valores obtenidos durante el examen macroscópico de cada una de las muestras
analizadas se encuentran dentro de la normalidad. Si los resultados no se encuentran dentro de la
normalidad, mencionar posibles causas para dichas anomalías.

6. Bibliografía:
 GIRARD, Rina, MANUAL DE PARASITOLOGÍA, Métodos para Laboratorios de
Atención Primaria de Salud. 2da. Edición, 2003
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 4ta Edición.
 Análisis de orina y de líquidos corporales. Susan King Strasinger y Schaub Di Lorenzo, 5ª
edición, Buenos Aires: Médica Panamericana.

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7. Anexos

 Anexo 1: Coloración de las heces:

 Anexo 2: Consistencia de las heces

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 Anexo 3: Formato para reporte de Coprológico

Análisis Macroscópico

Muestra pH Aspecto Color Consistencia Elementos sobreañadidos


Moco Sangre Restos Parásitos
alimenticios

Análisis Microscópico

Elemento Cuantificación

Elemento Cuantificación

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PRÁCTICA Nº 04: Examen Coprológico II: Análisis Microscópico - Elementos normales de las
heces

1. Objetivos:
 Conocer el proceso de análisis microscópico de una muestra de heces
 Familiarizarse con los distintos elementos normales, no patológicos y no parasitarios de una
muestra de heces observada al microscopio.

2. Fundamento y método de la práctica:


El examen coprológico consiste en una serie de determinaciones macroscópicas, microscópicas y
químicas. El estudio microscópico de muestras fecales permite obtener datos con los cuales valorar el
funcionamiento digestivo, infecciones intestinales causadas por bacterias, virus, hongos y parásitos,
además de infecciones por parásitos causadas en órganos anexos.
En el examen microscópico es importante reconocer las estructuras parasitarias y diferenciarlas de los
elementos normales y de posibles artefactos que se presentan durante la observación.
A continuación, se detallan los elementos normales presentes en las heces.

a) Restos Alimenticios: Considerando que la digestión es el conjunto de fenómenos mecánicos y


bioquímicos que transforman los constituyentes orgánicos más o menos complejos de los alimentos
en sustancias simples directamente asimilables. Después de que los alimentos son triturados en la
boca y disgregados químicamente mediante fermentos digestivos y elementos bacterianos, los
nutrientes son absorbidos por la mucosa intestinal y los residuos no aprovechables de la digestión
son expulsados fuera del organismo. En el examen microscópico de una muestra de heces podemos
encontrar:
o Almidones: Son frecuentes y se observan como gránulos de forma y tamaño irregulares. Son
fácilmente identificados, porque en las preparaciones con lugol toman color rojo o azul violeta,
según el grado de digestión que hayan sufrido. Se puede encontrar dos tipos que son el digerido
y el no digerido. Una gran cantidad de almidón suele indicar mal funcionamiento del páncreas.
o Fibras vegetales: Se caracterizan por ser de doble pared, contienen clorofila y poseen un canal
central muy marcado. Pueden ser de forma irregular como restos vegetales y membranas o de
forma regular como resortes, pelos y anillos vegetales
o Fibras animales: se observan como corpúsculos rectangulares cortos o alargados, de color
amarillo o anaranjado. Estas fibras no digeridas se presentan bajo dos formas según su grado de
digestión. Las de fibras bien digeridas se observan como fragmentos cortos, con ángulos
redondeados y de coloración amarillenta. Las de menor grado de digestión se presentan como
rectángulos alargados con ángulos bien delineados, presentando una doble estriación muy
característica.
o Grasas: La presencia de un exceso de grasa - esteatorrea- en las deposiciones obedece a uno o
varios de los siguientes mecanismos: tránsito acelerado, déficit enzimático de su digestión,
déficit de absorción o hipersecreción endógena. Unas veces predomina la grasa neutra, sin
desdoblar, y en otros casos los ácidos grasos y jabones. Se identifican por su forma de gotas de
diferente tamaño, transparentes o amarillas. Son de tres tipos:
Ácidos grasos, se observan como agujas. Su presencia es sinónimo de malabsorción, enfermedad
del intestino delgado, fístula gastrocólica, tránsito intestinal acelerado.
Grasas neutras, Su presencia indica insuficiencia pancreática, pancreatitis crónica, obstrucciones
del conducto de Wirsung, tumor en páncreas, obstrucciones del conducto biliar. También se
eleva en aplicación de supositorios, ingestión de aceite de castor, ingestión de mayonesa
dietética, dieta con fibra abundante.
Jabones (grasas desdobladas) Se presentan en enfermedad celíaca.

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b) Flora bacteriana: Se la observa, como bastoncillos, pequeños con movimiento llamados
pululación bacteriana. Se puede diferenciar la presencia de estructuras cocoides y bacilares. Con el
lugol se puede dividir en flora yodófila y no yodófila dependiendo si con el lugol se tornan de color
azulado y no azulado respectivamente.
c) Levaduras. Miden de 2 a 4 u, de forma ovalada, están presentes normalmente, pero se presenta
aumentada especialmente, cuando hay alteración de la flora bacteriana, como cuando se administran
antibióticos. Solo cuando se asocia a la presencia de pseudomicelios se debe reportar como hongos.

d) Cristales: Presentan el mismo aspecto que en el sedimento urinario. Los principales cristales y su
posible significado clínico son los siguientes.
Cristales de Oxalato de Calcio: Tienen forma cuadrangular o tetragonal. Se asemejan a un sobre.
Normal y aumentada su presencia puede indicar insuficiencia gástrica.
Cristales de fosfato: Forma irregular se asemejan a una escoba.
Cristales de Colesterol: Cálculos biliares.
Cristales de Hamatoidina: Agujas amarillas, se presentan en grupos, aparecen después de
hemorragias.
Cristales de Charcot Leyden: Miden de 10 u a 30 u y tienen forma romboidal, alargada, con
extremos puntiagudos. Están presentes en amibiasis, diarreas por Isospora belli, son cristales
octaédricos alargados similares las agujas de las brújulas. Son producidos por la degradación de
eosinófilos.

e) Leucocitos: Estas células en materia fecal, generalmente se encuentran asociadas a moco y se


observan en diferentes enfermedades intestinales. Si hay gran cantidad indica un proceso infeccioso.
Si se observan más de 10 leucocitos por campo, se hace el recuento diferencial.

f) Eritrocitos: Su hallazgo indica lesión en la parte baja del aparato digestivo. La presencia de
eritrocitos en el examen de heces, significa que hay sangrando en alguna parte del tracto
gastrointestinal, esto puede ser desde una colitis amebiana hasta un sangrado intestinal superior
como ocurre en una ulcera péptica o una gastritis erosiva, o inferior como puede ocurrir en una
enfermedad diverticular o en una enfermedad inflamatoria del intestino como lacolitis ulcerativa o
la enfermedad de Crohn.

g) Células de descamación: Se pueden ver al examen coprológico. Son células provenientes de la


descamación normal del intestino delgado. Tienen forma poliédrica. En exceso pueden indicar
excesiva irritabilidad.

h) Artefactos: Como gotas de agua, burbujas de aire, rayaduras de la placa, pelusas.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Obtener muestras frescas de heces en recipientes adecuados.
 Desechar correctamente los desechos generados (todo material que haya tenido contacto
con la muestra de heces en la funda roja, palillos e hisopos en el contenedor de
cortopunzantes).

3.2. Equipos, materiales y reactivos


EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS
- Microscopio óptico - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Proyector - Diapositivas - Solución fisiológica
- Computadora - Muestra de heces - Solución de Lugol
- Palillos de madera
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- Placas porta y cubre
objetos
- Papel indicador de pH
- Papel filtro
- Lápiz de cera

3.3. Procedimiento
a) Abrir una caja de muestra de heces.
b) Realizar el análisis macroscópico como se indicó en la Práctica Nº 3. (Observar el color,
consistencia, aspecto, presencia de otros elementos).
c) Determinar el pH de la muestra. Tomar una pequeña cantidad de muestra de heces con un
palillo de madera y poner en contacto con el papel indicador de pH. (Si la muestra es dura
se puede realizar una suspensión en solución salina)
d) Marcar con el lápiz de cera o marcador la placa portaojetos con la identificación del
paciente. Colocar una gota de solución salina y lugol en una placa portaobjetos. (ver Anexo
2 para preparación de reactivos)
e) Tomar con un palillo de madera una pequeña cantidad de muestra de heces y suspender la
muestra tomada con el palillo en la gota de solución salina y posteriormente a la gota de
solución de lugol. (ver Anexo 1)
f) Colocar una placa cubreobjetos sobre la gota de solución salina y otro sobre la solución la
de lugol. Bajarlo con cuidado a fin de que no se formen burbujas entre la placa cubre y
porta objetos. (ver Anexo 1)
g) Realizar el enfoque interocular y de iluminación. Colocar la placa preparada sobre la platina
del microscopio y enfocar como se indicó en la Práctica 2. (Observar con el lente de menor
aumento 4x o 10x y después con el lente de 40x).
h) Recorrer la placa portaobjeto en una sola dirección de arriba hacia abajo y de derecha a
izquierda con el lente de 40x. (Ver anexo 1)

4. Resultados:
a) Registrar las observaciones del análisis coprológico. Utilizar Formato de Análisis
Macroscópico y Microscópico indicado en Práctica Nº3.

b) Registrar la presencia de los diferentes elementos presentes en las heces, incluyendo parásitos.
Utilizar una escala de valoración semicuantitativa por cruces de la siguiente manera:

+ escasos
++ moderado
+++ abundante

En caso de observar células estas se deben reportar según el número aproximado por campo de
observación. (eg. Eritrocitos 5-10/campo)

5. Discusión de Resultados:
 Discutir si los valores obtenidos durante el examen macroscópico y microscópico de cada una
de las muestras analizadas se encuentran dentro de la normalidad o no.
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Conclusiones:
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.
 Mencionar características relevantes de la práctica realizada.

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7. Cuestionario
a) Definir los siguientes términos: creatorrea, amilorrea, esteatorrea.
b) Complete la siguiente tabla.

Elementos en Normales Patológicos Significación


heces clínica

8. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Saredi Nelida, Manual Práctico de Parasitología, 1era edición.
 Ballcells. La clínica y el Laboratorio. 22va edición.
 Wallach. Interpretación clínica de pruebas diagnósticas. 9na edición.
 Análisis de orina y de líquidos corporales. Susan King Strasinger y Schaub Di Lorenzo, 5ª
edición, Buenos Aires: Médica Panamericana.

9. Anexos:

 Anexo 1: Preparación de placas de heces

Tomado de David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.

 Anexo 2: Preparación de reactivos para examen coprológico

a) Solución salina fisiológica


- Cloruro de sodio 8.5 g
- Agua destilada 1000 mL

Mezclar y guardar en frasco rotulado y tapado. Para usar dispensar en frascos goteros
rotulados.

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b) Solución de Lugol. Solución madre


- lodo en cristales 2.5 g
- loduro de potasio 5.0 g
- Agua destilada 50.0 mL

Mezclar en un matraz hasta disolución completa de los cristales. Guardar en frasco


oscuro rotulado «Solución madre de Lugol». Para utilizar, diluir 0.5 mL de esta
solución madre.

 Anexo 3 Elementos normales y artefactos presentes en la observación microscópica de heces.

ELEMENTO GRAFICO ELEMENTO GRAFICO


Almidones

Células que contienen Gránulos de almidón bien Células que contienen


gránulos de almidón (Lugol) digeridos gránulos de almidón (Lugol)

Fibras
animales

Fibra muscular no digerida Fibra muscular bien digerida


Fibras
vegetales

Pelo vegetal Grano de polen

Fibra de celulosa Grano de polen Célula vegetal

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Grasas

Masas amorfas de grasa neutra


Grasa

Cristales

Charcot-Leyden

Fosfato triple de amonio y


Oxalato de calcio magnesio

Células Células epiteliales

Eritrocitos Leucocitos

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PRÁCTICA Nº05 Coproparasitario I - Protozoos intestinales: Rizopodarios

1. Objetivos:
 Conocer las distintas formas parasitarias de amebas patógenas y no patógenas que pueden
presentarse en una muestra de heces observada al microscopio.

2. Fundamento y método de la práctica:


Los rizopodarios son protistas unicelulares del género Amoeba. Son protozoos caracterizados por su
forma cambiante, puesto que carece de pared celular, y por su movimiento ameboide a base de
seudópodos, que también usa para capturar alimentos a través del proceso llamado fagocitosis.

Podemos clasificar a las amebas en patógenas y no patógenas:


 Patógenas: Entamoeba histolityca, Dientamoeba fragilis, Entamoeba polecki, Entamoeba
mosbkovskii
 No pátogenas: Entamoeba dispar, Entamoeba coli, Iodameba butschllii, Endolimax nana

Presenta dos formas o fases de desarrollo bien establecidas: el trofozoito y el quiste, que constituyen,
respectivamente, la forma invasiva e infectante.
La forma de transmisión consiste en un ciclo fecal oral, transmitidos a través de manos, alimentos,
aguas, artrópodos (moscas) contaminados con quistes, que en el intestino del huésped definitivo o
vertebrado se transforman en trofozoitos que son la forma de reproducción del parásito, que
posteriormente dará lugar a la producción de quistes con lo que el ciclo se cerrará.
El hábitat de Entamoeba histolytica/dispar es el intestino grueso donde sólo la especie E. histolytica y,
en particular, las cepas invasoras dañan el tejido y ocasionan enfermedades intestinales o
extraintestinales.
La sintomatología que la amebiasis presenta se refiere a dolor abdominal, náusea, pujo, tenesmo,
flatulencia, mientras que los signos son diarrea sanguinolenta, vómito, úlceras de colon.
El mejor método diagnóstico, consiste en la visualización directa del parásito en las heces fecales. En
las materias fecales diarreicas o disentéricas se observan trofozoitos móviles, mientras que los quistes
se encuentran en las materias fecales semiformadas y formadas. Se debe tomar en cuenta que la
excreción de estos parásitos es intermitente, y que, por lo tanto, deben examinarse varias muestras de
heces para establecer el diagnóstico.
Otro aspecto del diagnóstico incluye la detección de anticuerpos, que es útil y está indicada en el
diagnóstico de amebiosis extraintestinal causada por Entamoeba histolytica/dispar.
A diferencia de la detección de anticuerpos, la determinación de antígenos del parásito circulantes en
suero, orina o heces puede constituir un marcador más adecuado de la presencia de una infección
activa y puede indicar también la carga de parásitos. De igual forma, las demostraciones de antígenos
específicos del parasito en líquidos de la lesión, como el material de un absceso amebiano, pueden
permitir elaborar un diagnóstico definitivo del microorganismo etiológico. Existen pruebas
inmunocromatográficas para la detección de E. histolytica, Entamoeba dispar.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Obtener muestras frescas de heces en recipientes adecuados.
 Desechar correctamente los desechos generados (todo material que haya tenido contacto
con la muestra de heces en la funda roja, palillos e hisopos en el contenedor de
cortopunzantes).

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3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS


- Microscopio óptico - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Proyector - Diapositivas - Solución fisiológica
- Computadora - Muestra de heces - Solución de Lugol
- Concentrados de heces
- Palillos de madera
- Placas porta y cubre
objetos
- Papel indicador de pH
- Papel filtro
- Lápiz de cera

3.3. Procedimiento
a) Abrir una caja de muestra de heces.
b) Realizar el análisis coprológico de las muestras asignadas

4. Resultados:
a) Registrar las observaciones del análisis coprológico. Dibujar y rotular los elementos
encontrados durante la observación en los campos microscópicos. Dibujar si se encontraron
protozoarios o helmintos intestinales. Utilizar Formato de Análisis Macroscópico y
Microscópico indicado en Práctica Nº3.
b) Realizar el reporte de Coprológico según el formato establecido. Anexo 1

5. Discusión de Resultados y Conclusiones:


 Discutir los resultados de los exámenes coprológicos y la presencia de amebas patógenas y no
patógenas.
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Cuestionario
a) Mencionar patologías o enfermedades producidas por invasiones extraintestinales de amebas. ¿Qué
género o géneros de amebas son asociadas a estas patologías?
b) Realizar un gráfico de los trofozoitos y quistes de las amebas patógenas y no patógenas, considerar
las diferencias de tamaño de las mismas.

7. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Ash, Orihel: Atlas de Parasitologia Humana, 5ta Edición.
 Patrick Murray, Ken Rosenthal, Michael Pfaller: Microbiología Médica, 6ta Edición.
 Koneman: Diagnostico Microbiológico-Texto y Atlas a Color, 7ma Edición

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8. Anexos:

 Formato de reporte de Coprológico

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR


FACULTA DE CIENCIAS QUÍMICAS
BIOQUÍMIA CLÍNICA

LABORATORIO DE PARASITOLOGÍA

1. Discusión de Resultados:
INFORME
 Discutir si los valores obtenidos durante DE RESULTADOS
el examen macroscópico de cada una de las muestras
analizadas se encuentran dentro de la normalidad.
Paciente:
 Si los resultados no se encuentran dentro de la normalidad,Fecha de Recepción:
mencionar posibles causas para
Cod.dichas
Paciente: Fecha de
anomalías. Describir la importancia clínica del examen entrega:
macroscópico de heces
basándose en los distintos parámetros: pH, color, consistencia, aspecto, restos alimenticios,
moco, sangre para relacionar con distintas patologías.
Examen
 DiscutirMacroscópico: Examen Microscópico:
los resultados de los exámenes coprológicos
Color:
2. Conclusiones: Levaduras:
Consistencia: Grasas:
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.
Aspecto:características relevantes de la práctica realizada.
 Mencionar Restos vegetales:
Moco:
 Mencionar la importancia o relevancia clínica del examen Bacterias:
macroscópico de heces.
Sangre.
3. Cuestionario: Almidones:
Restos Alimenticios: Cristales:
Vermes: Eritrocitos:
Leucocitos:

Examen Químico: Examen Parasitológico


pH:
Sangre oculta:
Lactoferrina fecal:
Calprotectina fecal:
Azúcares reductores:
Sudán:

Firma del Responsable

Nombre del responsable

 Formato de reporte de Coprológico

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 Gráficos de amebas patógenas y no patógenas.

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PRÁCTICA Nº06 Examen Coproparasitario II: Protozoos intestinales: Flagelados

1. Objetivos:
 Conocer las distintas formas parasitarias de flagelados patógenos y no patógenos de una
muestra de heces observada al microscopio.

2. Fundamento y método de la práctica:


Las parasitosis intestinales son infestaciones producidas por parásitos cuyo hábitat natural es el aparato
digestivo de las personas y animales. Tienen distribución mundial, aunque están estrechamente ligadas
a la pobreza y a las malas condiciones higiénico-sanitarias, por lo que aparecen más frecuentemente en
países en vías de desarrollo.
a) Giardia intestinalis: es un organismo eucariota pero carece de otros orgánulos que son casi
universales en eucariotas, tales como nucléolos y peroxisomas. Es anaeróbico, carece de
mitocondrias (o cualquiera de los componentes de la fosforilación oxidativa, tiene dos formas
biológicas, la vegetativa o trofozoíto y la quística. G. intestinalis posee 7 genetipos (A-G) sin
embargo solo los de tipo A y B tienen como huésped al humano. Resulta interesante considerar que
además los primates, perros, gatos, ovejas y roedores también portan estos 2 genotipos.
El trofozoíto de G. intestinalis tiene forma piriforme y en la parte anterior posee dos núcleos que se
unen entre sí en el centro, dando la apariencia de anteojos. Mide aproximadamente 15 micras de
longitud por 7 de ancho. Posee una cavidad o ventosa que ocupa la mitad anterior de su cuerpo, la
cual utiliza para fijarse a la mucosa intestinal. Posee en su diámetro longitudinal y en la parte
central, una barra doble o axostilo de cuyo extremo anterior emergen 4 pares de flagelos, uno
anterior, dos laterales y otro posterior. El trofozoíto tiene capacidad de traslación con movimiento
lento, vibratorio y a la vez rotatorio, lo cual permite observar la cavidad correspondiente a la
ventosa o disco suctorio.
El quiste tiene forma ovalada con doble membrana, de 2 a 4 núcleos y algunas de las estructuras
descritas para el trofozoíto, de las cuales es notorio el axostilo. El tamaño promedio es de 10 micras
de longitud
El diagnóstico de giardiasis se establece normalmente por la identificación de los quistes y, en raras
ocasiones, de los trofozoítos en exámenes parasitológicos de muestras fecales.

b) Chilomastix mesnillii: es un protozoo común en el hombre a nivel mundial, aunque con una
frecuencia menor que Entamoeba y Giardia. Pertenece al grupo de protozoos flagelados no
patógenos. Habita en el colon del hombre y de animales como chimpancés, orangutanes, monos y
cerdos sin producir patología. Se replican por fisión binaria. Es considerado como un organismo
comensal.
El trofozoíto es piriforme, con la extremidad posterior aguda y curva. Mide de 10 a 15 micras de
largo por 3 a 10 de ancho. Presenta un surco en forma de espiral a lo largo del cuerpo, que es visible
en preparaciones en fresco, cuando el parásito está móvil. Este movimiento es de traslación y
rotación. En el extremo anterior tiene una depresión equivalente al citostoma o boca. El núcleo está
en el extremo anterior y cerca de él se encuentran los quinetoplastos, de donde emergen 4 flagelos,
uno de ellos más largo. El quiste mide de 6 a 9 micras, su forma es generalmente redondeada o
piriforme, con una pequeña prominencia, por lo cual se ha descrito como en forma de limón. Posee
doble membrana gruesa y un núcleo, además de las estructuras rudimentarias del citoplasma.

c) Trichomonas hominis: No se conocen quistes y las formas trofozoíticas son las infectantes. Mide de
5 a 14 micras, de forma redondeada u oval y presenta, presentan 5 flagelos anteriores, una
membrana ondulante que llega hasta la parte media del cuerpo. Un sexto flagelo bordea la
membrana ondulante y se prolonga por el extremo posterior. En su interior existe un núcleo y un
axostilo. El diagnóstico se hace por identificación de los trofozoítos móviles, con movimiento
vibratorio.
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3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Obtener muestras frescas de heces en recipientes adecuados.
 Desechar correctamente los desechos generados (todo material que haya tenido contacto
con la muestra de heces en la funda roja, palillos e hisopos en el contenedor de
cortopunzantes).

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS


- Microscopio óptico - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Proyector - Diapositivas - Solución fisiológica
- Computadora - Muestra de heces - Solución de Lugol
- Concentrados de heces
- Palillos de madera
- Placas porta y cubre
objetos
- Papel indicador de pH
- Papel filtro
- Lápiz de cera

3.3. Procedimiento
a) Abrir una caja de muestra de heces.
b) Realizar el análisis coprológico de las muestras asignadas.

4. Resultados:
c) Registrar las observaciones del análisis coprológico. Dibujar y rotular los elementos
encontrados durante la observación en los campos microscópicos. Dibujar si se encontraron
protozoarios o helmintos intestinales. Utilizar Formato de Análisis Macroscópico y
Microscópico indicado en Práctica Nº3.
d) Realizar el reporte de Coprológico según el formato establecido. Anexo 1 en la Practica Nº5.

5. Discusión de Resultados y Conclusiones:


 Discutir los resultados de los exámenes coprológicos y la presencia de flagelados, ciliados,
amebas patógenas y no patógenas.
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Cuestionario
Realizar un gráfico de los trofozoitos y quistes de los siguientes protozoos intestinales G. intestinalis,
C. mesnili y Trichomonas hominis. Tomar en cuenta la morfología y tamaño de las mismas.

7. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Ash, Orihel: Atlas de Parasitologia Humana, 5ta Edición.
 Patrick Murray, Ken Rosenthal, Michael Pfaller: Microbiología Médica, 6ta Edición.
 Koneman: Diagnostico Microbiológico-Texto y Atlas a Color, 7ma Edición

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8. Anexos:

 Gráficos de flagelados intestinales.

Trichomonas hominis

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PRÁCTICA Nº07 Examen Coproparasitario III: Ciliados intestinales y otros protozoarios de


importancia clínica

1. Objetivos:
 Conocer las distintas formas parasitarias que se observan al microscopio de los ciliados y
coccidios intestinales.
 Aplicar la técnica de coloración de Ziehl-Nielssen modificada para el diagnóstico de los coccidios
intestinales.

2. Fundamento y método de la práctica:


Balantidium coli: es el protozoo de mayor tamaño que afecta al hombre. El trofozoíto es de forma
ovalada, con una longitud promedio de 50 a 200 micras y 40 a 50 micras de ancho. Está rodeado de
cilias que le permiten desplazamiento rápido. Posee en la parte anterior una boca o citostoma con cilias
largas que le sirve para obtener alimen-to, el cual pasa a vacuolas digestivas. Los resi-duos
alimenticios son eliminados por vacuolas contráctiles a través de una apertura en el extremo posterior,
llamada citopigio. Tiene 2 nú-cleos, uno mayor arriñonado, llamado macro-núcleo; el otro redondo y
pequeño, generalmente cerca de la concavidad del anterior, llamado micronúcleo. El quiste es más
redondeado, con un diámetro de 40 a 60 micras, con doble membrana gruesa, a través de la cual puede
observarse el parásito, a veces con algún movimiento. En el interior resalta el macronúcleo. El quiste
es eliminado al exterior, resiste el medio ambiente y es infectante por vía oral, a diferencia del
trofozoíto que no es infectante por esta vía y se destruye al salir del organismo

Coccidios: Cryptosporidium spp, Isospora spp, y Cyclospora spp son protozoos intracelulares,
principalmente del intestino delgado, que se reproducen por un ciclo asexual dentro de los enterocitos,
y otro sexual que les permite producir ooquistes o esporas, las fórmas infectantes son eliminadas en la
materia fecal. Estos protozoarios han sido descritos como patógenos humanos en los últimos 25 años,
y su importancia se ha aumentado con la aparición del VIH y otras inmunodeficiencias, en cuyo caso
el parasitismo y la sintomatología son más intensos.
Alteran la morfología de las vellosidades intestinales donde producen inflamación. La principal
manifestación clínica es diarrea. Son más frecuentes en zonas tropicales y regiones con mal
saneamiento.
Se trasmiten por vía fecal-oral, de persona a persona, o por agua y alimentos. El diagnóstico se hace
por examen de materias fecales, para lo cual se requiere personal con experiencia y coloraciones
especiales. El método más utilizado es la observación microscópica de los ooquistes de color rojo
cuando son coloreados con tinción ácido resistente en materia fecal. También se diagnostica por PCR o
por detección de antígeno en materia fecal por el método de ELISA.

COLORACIÓN ZIEHL-NEELSEN (MODIFICADO): Se basa en el comportamiento ácido resistente


de la cubierta de los coccidios, los cuales se tiñen de rojo y se destacan sobre un fondo verde o azul,
dependiendo del contraste del colorante usado. Los ooquistes Cryptosporidium spp. y Cyclospora
cayetanensis se tiñen de color rojo. Mientras que en el caso de los ooquistes de Isospora belli
únicamente se tiñe el esporoblasto.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Obtener muestras frescas de heces en recipientes adecuados.
 Desechar correctamente los desechos generados (todo material que haya tenido contacto
con la muestra de heces en la funda roja, palillos e hisopos en el contenedor de
cortopunzantes).

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3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS


- Microscopio óptico - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Proyector - Diapositivas - Solución fisiológica
- Computadora - Muestra de heces - Solución de Lugol
- Concentrados de heces
- Palillos de madera
- Placas porta y cubre
objetos
- Papel indicador de pH
- Papel filtro
- Lápiz de cera

3.3. Procedimiento
 Abrir una caja de muestra de heces.
 Realizar el análisis coprológico de las muestras asignadas. (NOTA: en la práctica clínica si se
observan formas sospechosas durante el examen en fresco se debe realizar la coloración para
confirmar la presencia de ooquistes alcohol ácido resistentes. Alternativamente, si el médico
solicita la investigación de Cryptosporidium spp. Se debe realizar la investigación)

Coloración de Ziehl-Neelsen modificada para Cryptosporidium, Cyclospora e Isospora.


(Método de Kinyoun)
a) Marcar con el lápiz de cera o marcador la placa portaobjetos con la identificación del
paciente.
b) La muestra de materia fecal se extiende en el portaobjetos, en un área de aproximadamente
1 1/2 cm de diámetro.
c) Dejar secar la preparación y fijar por 10 minutos con metanol.
d) La coloración se hace con carbol-fucsina concentrada (fucsina básica: 1 g; etanol: 10 ml y
fenol al 5%: 90 ml), con este colorante se deja 20 minutos, luego lavar 2 minutos con agua
corriente.
e) Se decolora con alcohol ácido, para luego lavar durante 2 minutos con agua corriente.
f) El colorante de contraste es verde de malaquita al 5% (verde malaquita: 5 g y etanol al
10%: 100 ml), dejar 2 minutos. Este colorante puede remplazarse por azul de metileno.
g) Finalmente se lava con agua corriente durante 1 minuto y se deja secar a temperatura
ambiente antes de ver la preparación al microscopio. Realizar el montaje con cytoseal,
bálsamo de Canadá o Permount y colocar una laminilla cubreobjetos (opcional).
h) Los ooquistes se observan teñidos de rojo brillante sobre fondo verde (o azul). Son
redondeados u ovalados de 3 a 5 micras de diámetro. En algunos se logra ver los
corpúsculos internos teñidos más oscuros que corresponden a los esporozoítos.

4. Resultados:
a) Realizar el reporte de Coprológico según el formato establecido. Anexo 1 en la Practica Nº5.
b) Dibujar y rotular los elementos encontrados durante la observación en los campos
microscópicos. Utilizar Formato de Análisis Macroscópico y Microscópico indicado en
Práctica Nº3.

5. Discusión de Resultados y Conclusiones:

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 Discutir los resultados de los exámenes coprológicos y la presencia de ciliados y coccidios
intestinales.
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Cuestionario
 Dibuje el quiste y trofozoito de Balantidium coli. Realice un gráfico esquemático en donde se
visualice el tamaño realtivo de los diferentes quistes delos protozoarios revisados.

 Complete el siguiente cuadro:


Cryptosporidium spp Isospora spp Cyclospora
Localización
Forma infectante
Tamaño
Forma
Morfología
Estructura Alcohol
ácido resistente.
Gráfico

7. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Ash, Orihel: Atlas de Parasitologia Humana, 5ta Edición.
 Patrick Murray, Ken Rosenthal, Michael Pfaller: Microbiología Médica, 6ta Edición.
 Koneman: Diagnostico Microbiológico-Texto y Atlas a Color, 7ma Edición

8. Anexos:

 Gráficos de ciliados intestinales.

Parásito Trofozoito Quiste

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 Gráficos de coccidios intestinales.

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PRÁCTICA Nº08 Flebotomía y frotis sanguíneo

1. Objetivos:
 Realizar la extracción de una muestra sanguínea aplicando las normas de bioseguridad tanto
para el paciente como para el flebotomista.
 Realizar la extensión de un frotis sanguíneo a partir de la muestra sanguínea obtenida
previamente.
 Realizar la tinción con colorante Wright del frotis realizado anteriormente.
 Reconocer los diferentes elementos sanguíneos que se presentan en el frotis.

2. Fundamento y método de la práctica:


Extracción sanguínea: Se refiere a un procedimiento enfermero muy usual para la obtención de
muestras de sangre periférica. El método más utilizado es de venopunción, el sitio de punción se
limpia con un antiséptico y luego se coloca una banda elástica o un brazalete de presión alrededor del
antebrazo con el fin de ejercer presión y restringir el flujo sanguíneo a través de la vena, lo cual hace
que las venas bajo la banda se dilaten, y hace más fácil que la aguja alcance alguno de los vasos
sanguíneos.
Inmediatamente después, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco
hermético o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira la banda para restablecer la circulación
y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de punción para detener
cualquier sangrado.
Frotis sanguíneo: Es un análisis rutinario que acompaña a todo hemograma, ya sea en forma manual o
automatizado. Consiste en una extensión de sangre realizada sobre un portaobjeto y a partir de la cual
se observarán, al microscopio, las características de las células sanguíneas. Este preparado entrega
valiosa información sobre la morfología de los elementos celulares sanguíneos. En la Figura 1 se
puede observar como es un frotis ideal y las formas erróneas. Cambios en la morfología y coloración
de las células sanguíneas pueden ser indicativos en casos como las leucemias, deficiencias de hierro,
trastornos genéticos de la forma de los eritrocitos, posibles deficiencias de vitamina B12, entre otras.

Figura 1. Formas del frotis. Ideal y erróneas

Tinción Wright: Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores.
Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El
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alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste en
una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorción por los diferentes
componentes celulares.
Un frotis teñido de manera óptima (Figura 2) tiene las siguientes características: 1. Los eritrocitos
deben ser de color rosado a salmón. 2. Los núcleos son de color azul oscuro o violeta. 3. Los gránulos
citoplasmáticos de los neutrófilos son de color lavanda a lila. 4. Los gránulos citoplasmáticos de los
basófilos son de color azul oscuro a negro. 5. Los gránulos citoplasmáticos de los eosinófilos son de
color rojos a anaranjados. 6. La zona entre las células debe ser incolora, clara, limpia y sin colorante
precipitado.

Figura 2. Frotis de sangre periférica teñido de manera óptima que demuestra la zona adecuada para
realizar la formula diferencial de leucocitos, la evaluación de la morfología y la estimación de las
plaquetas

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Mantener la calma durante todo el proceso de extracción sanguínea tanto para el flebotomista
como para el paciente.
 Tener mucha precaución durante la eliminación de los desechos generados durante la
práctica.
 Preparar con anticipación los materiales que se requiere: gujas, torniquete, cápsula de
extracción, tubos, jeringuillas, torundas, etc.

3.2. Equipos, materiales y reactivos


- Placas portaobjetos
- Placas cubreobjetos
- Tubo de extracción sanguínea tapa lila (Anticoagulante EDTA)
- Agujas para vacutainer
- Cápsula de extracción para vacutainer
- Jeringuillas de 10 ml
- Torundas de algodón
- Alcohol antiséptico
- Torniquete
- Tira adhesiva sanitaria
- Cubeta para tinción
- Colorante Wright 100 ml
- Agua tamponada con fosfato 100 ml.
- Piceta y agua destilada
- Aceite de inmersión

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3.3. Procedimiento
 Extracción sanguínea:
a) Preséntese con el paciente y hágalo sentir cómodo con el procedimiento.
b) Prepare el material, ponga todo lo necesario en un lugar de fácil acceso, incluyendo los recipientes
para eliminar los desechos.
c) Elegir una vena apropiada para la punción (preferiblemente visible). Con el dedo índice de la mano
izquierda, palpar el brazo hasta encontrar la mejor vena. La zona más adecuada es en el pliegue del
codo.
d) Colocar el torniquete de goma algunos centímetros por encima del lugar de la punción. Pida al
paciente que apriete el puño para evidenciar mejor las venas.
e) Limpiar la zona de punción con alcohol al 70 %(antiséptico) no se debe volver a tocar dicha zona.
f) Colocar la aguja en dirección a la vena e introducirla en un ángulo de 30º.
g) Extraer el émbolo de la jeringuilla con suavidad (o en su defecto colocar el tubo tapa lila en el
dispositivo vacutainer). Tan pronto la aguja entre en la vena aflojar el torniquete. Obtener el volumen
de muestra requerido.
h) Colocar una torunda de algodón sobre el sitio de la punción y presionar con los dedos de la otra
mano mientras se retira la aguja.
i) Si se utilizó jeringa: retirar la aguja de la jeringa y pasar la sangre al tubo correspondiente con o sin
anticoagulante. Vaciar lentamente la sangre por las paredes de los tubos con el objeto de evitar
hemólisis. Si se utilizó dispositivo vacutainer. Homogeneizar los tubos con sangre. En ambos casos
tener precaución durante la eliminación de la aguja. NO TAPAR LAS AGUJAS O JERINGUILLAS:

 Frotis sanguíneo:
a) Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos el cual debe estar muy limpio
(libre de pelusas y grasa).
b) Con un cubreobjetos o portaobjetos limpio (tomarlo lateralmente entre las yemas de los dedos) en
una posición de 45o en relación al portaobjetos con la muestra.
c) Deslizarlo sobre toda la superficie del portaobjetos de manera que se pueda obtener una fina película
de sangre.
d) Dejar secar la lámina, dejarla sobre una rejilla o toalla de papel, con la zona donde está la muestra
mirando hacia arriba.

 Tinción de las placas con colorante Wright:


a) Colocar los portaobjetos en la cubeta de tinción.
b) Cubrirlos con solución Wright recién filtrada. Dejar actuar el colorante 2 a 3 minutos.
c) Con ayuda de una piceta, añadir agua destilada sobre el colorante sin que se derrame. Esto permitirá
que se desdoble el colorante y se realice la tinción diferencial. Dejar actuar por 1 minuto.
d) Lavar suavemente con agua corriente o sumergir la cubeta en un recipiente con agua limpia, hasta
que no quede más colorante.
e) Retirar los portaobjetos, colocarlos en un soporte con la extensión hacia abajo y dejar secar al aire.
f) Observar la preparación al microscopio en el lente de 100x utilizando aceite de inmersión.

4. Resultados:
a) Dibujar y rotular los elementos observados en la observación microscópica. Utilizar el Anexo 1
Formato para reporte de observaciones realizadas al microscopio que se indica al final de esta
práctica.
b) Realizar la fórmula diferencial. Con ayuda de un contador hematológico contar 100 glóbulos
blancos y registrar el número de los diferentes tipos observados lo cual corresponderá al
porcentaje de cada grupo.

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Gráfico Célula Número Porcentaje
Neutrófilo
Eosinófilo
Basófilo
Monocito
Linfocito

5. Discusión de Resultados y Conclusiones:


 Comentar cuales son los errores comunes durante la extracción sanguínea, al momento de
realizar la extensión del frotis sanguíneo y al realizar la tinción del frotis. Mencionar la
importancia de un portaobjetos bien teñido para la interpretación exacta de la morfología
celular. Incluya posibles causas que producen coloraciones defectuosas.
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Carr, Rodak: Atlas de Hematología Clínica 4a Ed. © 2014 - Editorial Médica Panamericana
 Ballcells. La clínica y el Laboratorio. 22va edición.

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 Anexo 1 Formato para reporte de observaciones realizadas al microscopio

Observaciones

Observaciones

Observaciones

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PRÁCTICA Nº09 Diagnóstico directo de Leishmania spp. y Tripanosoma spp.

1. Objetivos:
 Reconocer al microscopio protozoos tisulares del género Leishmania spp. y Tripanosoma spp.
 Familiarizarse con las pruebas diagnósticas de laboratorio para la investigación de Leishmania
spp. y Tripanosoma spp.

2. Fundamento y método de la práctica:

Tripanosomiasis: es una enfermedad conocida también como “enfermedad de Chagas”, se trata de una
enfermedad producida por protozoos flagelados de la familia Trypanosomatidae y transmitida por
artrópodos hematófagos. Los parásitos infectactes salen en las deyecciones del vector y pueden
introducirse al organismo a través del orificio de la picadura, heridas o excoriaciones ele la piel o
atravesando directamente la mucosa ocular, nasal o bucal. Existen unas formas flageladas en la sangre,
conocidas como tripomastigotes sanguíneos y otras sin flagelos dentro de las células de ciertos tejidos,
denominadas Amastigotes. En la figura 1 se presentan los diferentes estadios morfológicos de la
familia Trypasonomatidae.

Figura 2. Familia Trypasonomatidae. Formas que adoptan los parásitos de esta familia según su
morfología, género y sitio de localización

La enfermedad se caracteriza clínicamente por la existencia ele tres fases: aguda, indeterminada o
latente y crónica; esta última puede producir miocarditis severa y menos frecuentemente,
agrandamiento de las vísceras huecas, como colon, esófago, estómago, etc. Para el diagnóstico de
laboratorio es posible detectar los parásitos en la sangre, principalmente en la fase inicial de la
infección, mediante exámenes en fresco, gota gruesa, extendidos coloreados, biopsia, cultivos, PCR y
xenodiagnóstico. En la fase indeterminada la parasitemia es baja y el parásito se encuentra por cultivos
y xenodiagnóstico. Durante la fase crónica los parásitos son muy escasos y son de utilidad las pruebas
serológicas, principalmente ELISA e IFI.

Leishamaniasis: se refiere a un grupo ele enfermedades causadas por protozoos del género
Leisbmania. Los parásitos del género Leishmania son pequeños, de 2µ a 5µ (amastigotes), localizados
dentro de los macrófagos de los huéspedes vertebrados. En los vectores se presentan en forma alargada
y con flagelo (promastigote). Esta es la forma que inocula al vertebrado. Los promastigotes miden
entre 10µ y 15µ de longitud.
Los parásitos del género Leishmania se agrupan en complejos que causan diferentes formas clínicas,
pero morfológicamente son iguales. El complejo L. donovani tiene tropismo por las vísceras; L.
tropica de localización únicamente en piel, en personas del Viejo Mundo; L. mexicana que
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compromete piel en pacientes del Nuevo Mundo y L. braziliensis que afecta piel y mucosas en el
Nuevo Mundo.
El parásito es transmitido por insectos flebótomos pequeños que pican en las horas vespertinas de
zonas silvestres. Estos vectores viven en grietas o fisuras de árboles y cuevas de animales.
La confirmación diagnóstica se hace principalmente por el hallazgo de los amastigotes en el frotis
directo coloreado y tomado del borde de la lesión. También se encuentran los parásitos en biopsia,
cultivos, y por PCR. La intradermorreacción de Montenegro detecta hipersensibilidad tardía e indica
contacto previo con el parásito. En algunos casos las pruebas serológicas con tribuyen al diagnóstico y
seguimiento, aunque son de baja sensibilidad y especificidad.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Realizar el ajuste interocular y de iluminación del microscopio antes de observar las placas
preparadas.
 Manipular con cuidado las placas preparadas, evitar romperlas con los lentes objetivos del
microscopio o durante el proceso de limpieza del aceite de inmersión.
 Organizar grupos de trabajo

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS


- Microscopio óptico - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Proyector - Diapositivas - Aceite de inmmersión
- Computadora - Placas de frotis sanguíneo,
lesiones y cultivos de
Leishmania spp. y
Tripanosoma spp.

3.3. Procedimiento
PARTE 1:
a) Realizar el enfoque interpupilar y el ajuste de iluminación.
b) Colocar la placa preparada sobre la platina del microscopio. Realizar el enfoque como se
explicó en la Practica Nº2.
c) Recorrer la placa portaobjeto en una sola dirección de arriba hacia abajo y de derecha a
izquierda.
d) Dibujar los campos observados al microscopio con el lente de 100x.
e) Rotular los elementos encontrados en dichos campos microscópicos

PARTE 2:
a) Organizar grupos de trabajo para discutir las técnicas que se emplean para el diagnóstico de
Leishmania spp. y Tripanosoma spp.
b) Preparar exposiciones en base a los temas planteados.
c) Presentar las exposiciones y discutir los contenidos durante la práctica.

4. Resultados:
 Dibujar y rotular los elementos observados en la observación microscópica. Utilizar el
Formato para reporte de observaciones realizadas al microscopio que se indica en la
Práctica Nº08.
 Presentar las exposiciones de las técnicas de diagnóstico

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5. Discusión de Resultados y Conclusiones:
 Describir las principales características de los parásitos de Leishmania spp. y Tripanosoma
spp. observados al microscopio. Indicar las diferencias entre las diferentes muestras clínicas
en donde se identifican los microorganismos.
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Cuestionario:
 Dibujar todos los estadios morfológicos de Leishmania spp. y Tripanosoma spp. con sus
elementos rotulados y la localización.
 Completar la siguiente tabla:

TÉCNICA FUNDAMENTO MUESTRAS ELEMENTO O


EMPLEADAS MECANISMO
IDENTIFICADO

7. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición. 2012
 Ballcells. La clínica y el Laboratorio. 22va edición.
 MURRAY, P.R et al. MICROBIOLOGÍA MÉDICA, Elsevier; 7ma Ed., España 2014

8. Anexos:

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PRÁCTICA Nº09 Diagnóstico directo de Plasmodium spp

1. Objetivos:
 Reconocer al microscopio protozoos tisulares del género Plasmodium spp.
 Diferenciar al microscopio las distintas especies de Plamodium spp: P. falciparum, P. vivax, P.
ovale, P. malariae.

2. Fundamento y método de la práctica:


El diagnóstico clínico de parasitosis tisulares como el paludismo, la leishmaniasis, la tripanosomiasis y
la filariasis se basa ampliamente en la recogida de muestras de sangre en momentos apropiados y el
examen microscópico por un experto de extensiones gruesas y finas de sangre adecuadamente
preparadas y tenidas. El tiempo óptimo para la obtención de sangre para el examen parasitológico varía
según el parasito sospechado.
Puesto que los valores de parasitemia pueden ser bajos o fluctuantes, se recomienda obtener muestras
para repetir las extensiones de sangre y examinarlas a las 6, 12 y 24 horas después de la muestra
inicial. Se preparan dos tipos de extensiones de sangre para el diagnóstico de las parasitosis en sangre:
extensiones finas y gruesas. En las extensiones finas, la sangre se extiende sobre el portaobjetos en una
capa fina (unicelular) y los eritrocitos permanecen intactos después de la fijación y la tinción (Ver
Figura 1). En las extensiones gruesas, los eritrocitos se lisan antes de la tinción y únicamente son
visibles los leucocitos, las plaquetas y los parásitos (en caso de estar presentes).(Ver figura 2) Las
extensiones gruesas permiten examinar una mayor cantidad de sangre, lo que aumenta la posibilidad
de detectar infecciones con parasitemias bajas. No obstante, la mayor distorsión de los parásitos
dificulta especialmente la identificación de las especies implicadas mediante estas preparaciones.
La utilización correcta de esta técnica precisa una gran experiencia y destreza. Una vez preparadas, las
extensiones de sangre deben someterse a un procedimiento de tinción. La tinción más fiable de los
parásitos sanguíneos es la tinción de Giemsa tamponada a pH 7,0 a 7,2. La tinción de Giemsa es
particularmente útil para la tinción de protozoos (plasmodios y tripanosomas). Se pueden utilizar otras
coloraciones como Wright. Además, se pueden realizar tinciones con marcadores para
inmunofluorescencia. Se utiliza naranja de acridina (NA) o benzotiocarboxipurina (BCP),

Figura 1. Anillos de P. falciparum en el interior de los hematíes en una extensión fina.

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Figura 2. Paludismo: observación de los parásitos mediante la tinción de una gota gruesa

Se deben identificar las siguientes formas parasitarias en sangre circulante:


 Trofozoitos: Se observan dos partes el citoplasma de color azul, y el núcleo se colorea de rojo.
Generalmente tiene forma de anillo en los parásitos jóvenes mientras que en los parásitos
adultos adopta una forma ameboide.
 Esquizontes: Según el grado de maduración presenta dos o más masas de cromatina que se
encuentran rodeadas de citoplasma. En su etapa final de maduración se puede apreciar un
acúmulo de merozoitos.
 Merozoitos: Se desarrollan a partir del esquizonte maduro cuando se rompe el eritrocito,
posteriormente cada merozoito invade un nuevo eritrocito. Son ovalados miden 1,5 u de
longitud y 1u de diámetro.
 Gametocitos: Pueden encontrarse libre u ocupar casi todo el eritrocito. Formados por
citoplasma y cromatina, el primero de color azul que contiene el pigmento malárico.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Realizar el ajuste interocular y de iluminación del microscopio antes de observar las placas
preparadas.
 Manipular con cuidado las placas preparadas, evitar romperlas con los lentes objetivos del
microscopio o durante el proceso de limpieza del aceite de inmersión.

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS


- Microscopio óptico - Guía de Laboratorio - Alcohol antiséptico
- Proyector - Diapositivas - Aceite de inmmersión
- Computadora - Placas de frotis sanguíneo
y gota gruesa con
Plasmodium spp.

3.3. Procedimiento
a) Realizar el enfoque interpupilar y el ajuste de iluminación.
b) Colocar la placa preparada sobre la platina del microscopio. Realizar el enfoque como se
explicó en la Practica Nº2.
c) Observar con el lente de menor aumento 4x o 10x hasta obtener una imagen clara.

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d) Colocar una gota de aceite de inmersión y enfocar la muestra a observar con el lente de mayor
aumento, es decir con el lente de 100x.
e) Recorrer la placa portaobjeto en una sola dirección de arriba hacia abajo y de derecha a
izquierda.
f) Dibujar los campos observados al microscopio con el lente de 100x.
g) Rotular los elementos encontrados en dichos campos microscópicos

4. Resultados:
Dibujar y rotular los elementos observados en la observación microscópica. Utilizar el Formato
para reporte de observaciones realizadas al microscopio que se indica en la Práctica Nº08.

5. Discusión de Resultados y Conclusiones:


 Describir las principales características de los parásitos de Plasmodium spp observados al
microscopio. Discutir las principales diferencias que se aprecian al microscopio de las
diferentes especies de Plasmodium spp.
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Cuestionario:
a) Realizar una tabla resumida acerca de las principales diferencias morfológicas de P. vivax y P.
falciparum en sangre periférica.
b) Dibujar los principales estadios de P. vivax y P. falciparum durante el ciclo eritrocítico.
c) ¿Cuál de las siguientes técnicas es más eficaz para el diagnóstico de la malaria: gota gruesa o
extendido (frotis de sangre periférica)? Justifique su respuesta (máximo 5 líneas).

7. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Carr, Rodak: Atlas de Hematología Clínica 4a Ed. © 2014 - Editorial Médica Panamericana
 Ballcells. La clínica y el Laboratorio. 22va edición.
 Merino Anna & Gutiérrez Gabriela. (2009). DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DE LAS
INFECCIONES POR PLASMODIUM. EDUCACIÓN CONTINUADA EN EL LABORATORIO
CLÍNICO, 12, 28-35.
 MURRAY, P.R et al. MICROBIOLOGÍA MÉDICA, Elsevier; 7ma Ed., España 2014

8. Anexos

 Gráficos de estadios morfológicos de Plasmodium spp..

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PROCESO PLAN CURRICULAR
FORMATO DE GUÍA DE LABORATORIO
Código: FCQ-P05-F05; Versión: 01; Fecha: 15 de enero de 2017

PRÁCTICA Nº 10: Coproparasitario IV. Céstodos y tremátodos intestinales

1. Objetivos:
 Observar y diferenciar macroscópica y microscópicamente helmintos pertenecientes al género de
los Nematodos.
 Reconocer las características morfológicas de los nematodos intestinales de importancia clínica
para el ser humano.

2. Fundamento y método de la práctica:


Los céstodos son parásitos aplanados, que pertenecen al filo Platyhelminthes. Están compuestos por
un órgano de fijación llamado escólex y un cuerpo o estróbilo constituido por segmentos, llamados
proglótides, que tienen independencia morfológica y fisiológica. El escólex, que es más pequeño que
el resto del cuerpo, es frecuentemente denominado cabeza, pero no desempeña funciones de tal,
solamente es un órgano fijador que posee una prominencia llamada rostelo, ventosas o ganchos, en
cuyo extremo posterior o cuello se forman los proglótides nuevos.

La forma, tamaño y características morfológicas de los proglótides, sirven para diferenciar las distintas
especies. De igual manera, la presencia o no de los ganchos y el número y forma de las ventosas, son
características diferenciales.
Los principales céstodos que afectan al hombre son:
a) Céstodos grandes: Taenia solium, Taenia saginata y Diphyüobothrium latum.
b) Céstodos medianos y pequeños: Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta y Dipylidium
caninum.

c) Larvas de céstodos: El hombre sufre invasión por formas larvarias de algunos céstodos, en cuyo
caso es huésped intermediario.
1. Cisticercosis, por larvas de T. solium.
2. Hidatidosis. por lanas de Echinococcus.
3. Esparganosis, por larvas de diferentes especies de Diphyllobothrium.
4. Cenurosis. por lanas de Taenia serialis (Multiceps multiceps).

Las tremátodos son plathelmintos, la mayoría aplanados en forma de hoja y además son
hermafroditas, de lo cual se exceptúan los esquistosomas. Tienen dos ventosas que sirven para su
fijación por lo cual se les ha denominado también distomas. Los tremátodos tienen ciclos de vida
complejos, con las siguientes etapas: huevo, que embriona en el agua; primera larva ciliada o miracidio
que entra al caracol, primer huésped intermediario; esporoquiste y en algunos tremátodos, redia, que
tiene reproducción asexual dentro del mismo caracol; y finalmente cercaria que salen del caracol e
invade el huésped definitivo. La mayoría de las trematodiasis humanas tienen compromiso sistémico,
afectando diferentes órganos y sistemas. Tenemos las siguientes especies de tremátodos de
importancia clínica:
a) Schístosoma son: S. mansoni, S. haematobium y S. japonícum.
b) Fasciola hepática
c) Paragonimus westermani

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Mantener el orden durante toda la práctica.
 Organizar grupos de trabajo.
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 Manipular con cuidado las placas preparadas y el material disponible en el laboratorio, evitar
romper las placas con los lentes objetivos del microscopio.

3.2. Equipos, materiales y reactivos


EQUIPOS MATERIALES
- Proyector - Guía de Laboratorio
- Computadora - Material disponible:
placas , concentrados,
parásitos adultos

3.3. Procedimiento
Observación de parásitos adultos, placas y material relacionado a la morfología de los céstodos y
tremátodos disponibles en el Laboratorio.
Seguir las indicaciones que le dará en Docente y/o Ayudante responsable.

4. Resultados:
Dibujar todas las formas parasitarias observadas. Dibujar los parásitos adultos. Rotular e identificar
adecuadamente los gráficos.
Dibujar todos los huevos de los céstodos y tremátodos estudiados. Tomar en cuenta las diferencias en
el tamaño.
Utilizar el Formato para reporte de observaciones realizadas al microscopio que se indica en la
Práctica Nº08.

5. Discusión de Resultados y conclusiones:


 Describir las principales características de los cestodos y trematodos observados.
 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Ash, Orihel: Atlas de Parasitologia Humana, 5ta Edición.
 Patrick Murray, Ken Rosenthal, Michael Pfaller: Microbiología Médica, 6ta Edición.
 Koneman: Diagnostico Microbiológico-Texto y Atlas a Color, 7ma Edición.

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7. Anexos:

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PRÁCTICA Nº 12: Coproparasitario V. Nemátodos Intestinales

1. Objetivos:
 Observar y diferenciar macroscópica y microscópicamente helmintos pertenecientes al género
de los Nematodos.
 Reconocer las características morfológicas de los nematodos intestinales de importancia clínica
para el ser humano.

2. Fundamento y método de la práctica:


Los nemátodos, parásitos del hombre, son gusanos alargados de forma cilíndrica, bilateralmente
simétricos y con los extremos de menor diámetro. Poseen sistema digestivo completo, aparato
reproductor muy desarrollado y sexos separados; los órganos internos están contenidos en una cavidad
corporal o pseudocele, delimitada exteriormente por la pared, que comprende cutícula, hipoclermis y
capa muscular.
Se reproducen por medio de huevos que dan origen a larvas. De acuerdo al modo de transmisión de los
nemátodos intestinales, predominan los trasmitidos a través de la tierra, la cual se contamina con
huevos o larvas que salen en las materias fecales; a este grupo de parasitosis se le denomina
geohelmintiasis. Las principales son: ascariasis, tricocefalosis, uncinariasis, estrongiloidiasis y
oxiuriasis. Los agentes etiológicos son: Ascaris lumbricoides, Trichuris trichura (Tricocéfalo),
Uncinarias (Ancylostoma duodenale y Necator americanus), Strongyloides stercoralis y Enterobius
vermicularis, respectivamente.

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Mantener el orden durante toda la práctica.
 Organizar grupos de trabajo.
 Manipular con cuidado las placas preparadas y el material disponible en el laboratorio, evitar
romper las placas con los lentes objetivos del microscopio.

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES
- Proyector - Guía de Laboratorio
- Computadora - Material disponible:
placas, concentrados,
parásitos adultos

3.3. Procedimiento
Observación de parásitos adultos, placas y material relacionado a la morfología de los nematodos
disponibles en el Laboratorio.
Seguir las indicaciones que le dará en Docente y/o Ayudante responsable.

4. Resultados:
Dibujar todas las formas parasitarias observadas. Dibujar los parásitos adultos. Rotular e identificar
adecuadamente los gráficos.
Dibujar todos los huevos de los nematodos estudiados. Tomar en cuenta las diferencias en el tamaño.
Utilizar el Formato para reporte de observaciones realizadas al microscopio que se indica en la
Práctica Nº08.

5. Discusión de Resultados y conclusiones:


 Describir las principales características de los nematodos observados.
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 Elaborar conclusiones en relación a los objetivos planteados.

6. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Ash, Orihel: Atlas de Parasitologia Humana, 5ta Edición.
 Patrick Murray, Ken Rosenthal, Michael Pfaller: Microbiología Médica, 6ta Edición.
 Koneman: Diagnostico Microbiológico-Texto y Atlas a Color, 7ma Edición.

7. Anexos

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PRÁCTICA Nº 13: Taller práctico y consulta sobre vectores de enfermedades parasitarias

1. Objetivos:
 Discutir y analizar artículos relacionados a vectores de enfermedades parasitarias.
 Socializar los resultados generados.

2. Fundamento y método de la práctica:


Un aspecto importante de los vectores en medicina es la transmisión de enfermedades. Existen muchos
microorganismos que pueden ser transmitidos por vectores de hombre a hombre, animal a hombre,
animales entre sí y del ambiente natural a los huéspedes.
Los agentes etiológicos involucrados en este modo de infección pertenecen a todos los grupos
conocidos, desde virus hasta helmintos. Los mecanismos de transmisión son de dos tipos, mecánicos y
biológicos.
La transmisión mecánica consiste en el transporte del agente etiológico, que no sufre transformación
en el vector. Este modo de transmisión puede considerarse accidental, pues ni los vectores son
indispensables para el microorganismo, ni es el único medio de adquirir esas infecciones. Los
principales vectores mecánicos de infecciones humanas son las moscas y las cucarachas. Los
artrópodos actúan transportando agentes etiológicos en la parte externa o a través de saliva, materias
fecales u otras partes de cuerpo. El control se basa en saneamiento ambiental y uso de insecticidas.

La transmisión biológica requiere artrópodos específicos con capacidad de alojar al agente etiológico,
permitir su crecimiento o multiplicación y poseer el mecanismo de transmisión al huésped; en este
caso el artrópodo es indispensable para completar el ciclo biológico de los microorganismos.
Los microorganismos que utilizan a estos artrópodos como forma de pasar de un huésped a otro, deben
tener la capacidad de infectar al vector, desarrollarse en él o replicarse y luego multiplicarse en el
huésped vertebrado. Los mecanismos biológicos de esta transmisión se hacen principalmente cuando
los artrópodos se alimentan de sangre, con la cual ingiere los microorganismos que se multiplican en
los artrópodos y luego lo pasan en nuevas picaduras y en algunos por las deyecciones.
Entre los principales están los mosquitos de los géneros: Anopheles, Aedes y Culex. Los jejenes con los
géneros Phlebotomus, Lutzomyia, Simulium y Culicoides. Las moscas y tábanos con los géneros
Glossina y Cbrysops. Algunos de los llamados chinches no son transmisores, como el género Cimex
(chinche de la cama) y otros sí lo son, como los triatominos (pitos, barbeiros, vinchucas, chopos, etc.).
Los piojos de la cabeza y del cuerpo del género Pediculus, pueden transmitir infecciones bacterianas,
igualmente las pulgas de los géneros Xenopsylla, Pulex y Ctenocephalydes. También lo hacen las
garrapatas y otros ácaros, como Ixodes, Dermacentor, Trombicula, etc,

3. Parte experimental:
3.1. Instrucciones previas
 Mantener el orden durante toda la práctica.
 Organizar grupos de trabajo.

3.2. Equipos, materiales y reactivos

EQUIPOS MATERIALES
- Proyector - Guía de Laboratorio
- Computadora - Documentos de referencia

3.3. Procedimiento
Análisis de documentos
1. A cada grupo de trabajo se le asignará un documento relacionado a vectores de enfermedades
parasitarias.
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2. Cada grupo debe discutir el documento y elaborar un resumen. El tiempo aproximado para esta
actividad consiste en 60 minutos.
3. Los grupos presentarán el resumen del docuemnto propuesto. Cada grupo tiene aproximandamente
de 5 a 8 minutos para presentar el resumen.
4. El profesor y los compañeros deberán formular preguntas en relación al documento presentado. Se
evaluara el desmpeño de los grupos para presentar el resumen y para resolver las pregutas.
5. El profesor realizara preguntas a los estudiantes que no se encuentrarn presentado el resumen.

4. Resultados:
Los grupos presentarán el resumen del documento asignado al finalizar la práctica. Se pueden elaborar
mapas conceptuales, diagramas de flujo, etc. El documento deberá contener los nombres de los
miembors del grupo y puede ser elaborado en hojas de papel bond. Debe ser elaborado a mano.

5. Discusión de Resultados y conclusiones:


 Después de discutir los documentos se procederá a presentar y socializar las conclusiones
generadas del análisis.

6. Bibliografía:
 David Botero, Marcos Restrepo: Parasitosis Humanas, 5ta Edición.
 Ash, Orihel: Atlas de Parasitologia Humana, 5ta Edición.
 Patrick Murray, Ken Rosenthal, Michael Pfaller: Microbiología Médica, 6ta Edición.
 Koneman: Diagnostico Microbiológico-Texto y Atlas a Color, 7ma Edición.

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CONTROL DE CAMBIOS

Revisión Nº Fecha Razón de la modificación


Versión 01 Septiembre 2017 Versión Inicial
Versión 02 Abril 2018 Corrección de errores gramaticales. Se
cambia el orden de la Práctica Nº7 y Práctica
Nº9

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