Potensi biomarker plasma prediktif untuk kanker serviks

oleh proteomik 2D-DIGE dan Ingenuity Pathway Analysis

Abstrak Metode saat ini tersedia untuk skrining dan

mendeteksi karsinoma sel skuamosa serviks (CSCC)
sensitivitas dan spesifisitas yang tidak memadai. Akibatnya, banyak pasien
menderita diagnosis yang keliru dan tidak terjawab. Karena
CSCC biasanya tidak bergejala pada tahap berpotensi kuratif,
identifikasi biomarker merupakan kebutuhan mendesak untuk awal
deteksi CSCC. Proteomik komparatif berdasarkan pada dua dimensi
diferensial elektroforesis dalam gel (2D-DIGE)
dipekerjakan untuk menganalisis protein plasma secara kuantitatif
wanita Uyghur sehat dan dengan karsinoma serviks tahap awal.
Citra 2D-DIGE dianalisis secara statistik menggunakan
Perangkat lunak DeCyder ™ 2D. Analisis statistik proteomik
Data mengungkapkan bahwa 43 titik protein menunjukkan perbedaan yang
signifikan
ekspresi (rasio> 1,5, P <0,01). Identifikasi lebih lanjut
dari bintik-bintik protein ini oleh MALDI-TOF-MS menemukan 16
protein yang berbeda. Analisis bioinformatika dalam kerangka kerja
Analisis Jalur Kecerdasan (IPA @) menunjukkan bahwa 10
protein plasma sebagai kandidat biomarker disaring, terutama
termasuk protein terkait lipid metabolisme (APOA4,
APOA1, APOE), pelengkap (EPPK1, CFHR1), metabolik
enzim (CP, F2, MASP2), glikoprotein (CLU), dan kekebalan tubuh
protein yang berhubungan dengan fungsi (IGK @). Jaringan yang terlibat dalam
lipid
metabolisme, transportasi molekuler, dan biokimia molekul kecil
disfungsional dalam CSCC. Respon fase akut
signaling dan pensinyalan JAK / Stat dan pensinyalan IL-4, dll.,
diidentifikasi sebagai jalur kanonik yang terlalu terwakili
di CSCC. Selanjutnya, ekspresi tiga protein
(APOA1, APOE, CLU) divalidasi menggunakan ELISA dalam plasma
pasien dengan berbagai lesi serviks stadium. Dengan
gabungan pendekatan proteomik dan bioinformatika, studi ini
berhasil mengidentifikasi tanda tangan biomarker untuk serviks
kanker dan mungkin memberikan wawasan baru ke dalam mekanisme
Perkembangan CSCC, berpotensi mengarah pada desain novel
strategi diagnostik dan terapeutik.

Bioinformatika dan analisis eksperimental in vitro mengidentifikasi

potensi terapeutik selektif dari interferon gamma dan apigenin
melawan karsinoma sel skuamosa serviks dan adenokarsinoma
Abstrak : Manajemen klinis dan pengobatan kanker serviks, salah satu yang paling umum
kanker yang didiagnosis dan penyebab utama kematian wanita terkait kanker, tetap sangat besar
tantangan bagi para peneliti dan profesional kesehatan. Kanker serviks dapat dikategorikan
menjadi dua subtipe utama: karsinoma sel skuamosa umum (SCC) dan adenokarsinoma
(AC). Meskipun merupakan subtipe histologis yang relatif langka dari kanker serviks, ada
menjadi peningkatan konstan dalam insiden AC. Karena itu, strategi baru untuk mengobati serviks
kanker sangat dibutuhkan. Dalam penelitian ini, potensi penggunaan terapi berbasis IFNγ
untuk kanker serviks dievaluasi menggunakan pendekatan bioinformatika. Ekspresi gen
profil mengidentifikasi bahwa disregulasi siklus sel adalah ciri utama kanker serviks
termasuk subtipe SCC dan AC, dan dikaitkan dengan hasil klinis yang buruk untuk
pasien kanker serviks. Dalam analisis eksperimental in silico dan in vitro ditunjukkan
bahwa pengobatan IFNγ dapat membalikkan ciri kanker serviks dan menginduksi siklus sel
penangkapan dan apoptosis. Selanjutnya, kami menunjukkan bahwa apigenin dapat meningkatkan
aktivitas antikanker IFNγ dalam garis sel AC serviks HeLa dengan menargetkan cyclin-dependent
kinase 1. Secara bersama-sama, penelitian ini menunjukkan potensi terapeutik selektif
IFNγ sendiri atau dalam kombinasi dengan apigenin untuk mengelola SCC servikal dan AC.

Sampai saat ini, keampuhan IFNγ dan sitokinebased lainnya

terapi antikanker tetap tidak pasti, karena
efek kompleksnya pada sel tumor dan tumor
lingkungan mikro. Penelitian ini berusaha untuk menyelidiki
efek antikanker langsung dari IFNγ pada serviks manusia
kanker; oleh karena itu, kultur sel yang diolah secara in vitro IFNγ
model digunakan. HeLa (adenocarcinoma) dan SiHa
(garis II sel karsinoma sel skuamosa), yang
mewakili dua tipe histologis utama manusia
kanker serviks, dirawat dengan berbagai dosis IFNγ
selama 72 jam, setelah itu viabilitas sel diperiksa oleh
MTT assay (Gambar 1A). IFNγ pada konsentrasi rendah
sebagai 0,1 ~ 1 ng / mL menunjukkan aktivitas antikanker terhadap keduanya
HeLa dan sel-sel SiHa. Selain itu, kami menemukan bahwa sel SiHa memiliki kepekaan lebih tinggi
terhadap IFNγ; Namun, lebih tinggi
konsentrasi (10 ~ 200 ng / mL) dari IFNγ tidak berkurang
viabilitas sel di atas setengahnya. Hasil ini menunjukkan itu
IFNγ adalah agen antikanker potensial untuk kanker serviks
terlepas dari subtipe histologis.

Untuk mengidentifikasi gen atau jalur yang diatur IFNγ,

satu set data microarray (GSE11299 [11]) dari sel HeLa
diobati dengan 100 ng / mL IFNγ selama 6-24 jam diperoleh
dari database Gene Expression Omnibus (GEO) di
Pusat Informasi Bioteknologi Nasional (NCBI)
[12]. Selanjutnya, perubahan gen dalam menanggapi IFNγ
pengobatan dianalisis dan diberi peringkat menggunakan Gene Set
Perangkat lunak Enrichment Analysis (GSEA) [13, 14]. Yang paling
gen teregulasi dan downregulated diilustrasikan
pada peta panas (Gambar 1B, bagian kiri). Untuk menentukan yang mana
jalur biologis diubah oleh IFNγ, 50 teratas
gen diregulasi dan 50 gen teratas diregulasi oleh
IFNγ (Tabel Tambahan 1) dianalisis lebih lanjut
menggunakan perangkat lunak Pengayaan Fungsional (FunRich)
[15]. Kami kemudian mengidentifikasi 5 teratas yang diregulasi dan 5 teratas
jalur downregulated, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1B (kanan
bagian). Setelah analisis data ini, jelas bahwa IFNγ
jalur aktif dikaitkan dengan kekebalan tubuh
tanggapan. Menariknya, jalur IFNγ menghambat tampaknya
terkait dengan regulasi siklus sel dan replikasi DNA,
menunjukkan bahwa IFNγ mungkin menyebabkan ketidakmampuan siklus sel.
Memang, IFNγ telah diidentifikasi sebagai mediator siklus sel
regulasi dalam sel normal dan sel kanker [16-18]. Untuk
mengkonfirmasi efek IFNγ pada siklus sel, IFNγ-diobati
Sel HeLa dan SiHa dianalisis menggunakan flow cytometry.
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1C, IFNγ menginduksi apoptosis di HeLa
sel seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan fraksi subG1.
Selain itu, pengobatan dengan IFNγ selama 24 jam ditunjukkan
menginduksi G0 / G1 penangkapan dalam sel SiHa, diikuti oleh S / G2 / M
penangkapan dan apoptosis setelah 48 dan 72 jam (Tambahan
Gambar 1). Sel apoptosis selanjutnya dikonfirmasi oleh
Annexin V-FITC / 17-AAD pewarnaan ganda. Secara konsisten,
Sel HeLa memiliki porsi apoptosis yang lebih tinggi dibandingkan sel SiHa
(Gambar Tambahan 2). Karena itu, IFNγ bisa menghambat viabilitas sel SCC serviks dan jalur sel AC
oleh
menginduksi penangkapan siklus sel dan apoptosis.