Guiìa Prueba Cruzada

Universidad Industrial de Santander
Facultad de Salud
Escuela de Microbiologia
Programa de Microbiología y Bioanálisis
Hematología II
Guía de Laboratorio
Cecilia Salamanca Ojeda
Nataly Cruz
Docentes
Martha Lucia Sánchez Jaimes
Ruth Stella Sánchez Florez
PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES
Las pruebas de compatibilidad incluyen verificación de la hemoclasificación del donante, determinación

del ABO/Rh, rastreo para anticuerpos inesperados en el receptor y la prueba cruzada mayor ó prueba de
compatibilidad.
Pruebas para el receptor de la sangre
Las pruebas de compatibilidad deben ser realizadas con muestras de sangre tomadas como máximo 72
horas antes de la transfusión. Las muestras deben ser procesadas los más pronto posible e incluye
rastreo de anticuerpos antes de la transfusión a todo receptor.
La determinación del grupo ABO deberá ser realizada mediante, la prueba directa, en la cual se detectan
antígenos eritrocitarios, utilizando reactivos anti A, y anti B y la prueba inversa en la cual se detectan
anticuerpos, utilizando células A1 y B. Cualquier discrepancia deberá ser resuelta antes de transfundir al
paciente.
El grupo Rh deberá ser determinado utilizando reactivo anti D. Con el objeto de evitar clasificaciones
incorrectas de pacientes Rh negativos ante la presencia de autoanticuerpos o proteínas anormales en el
suero, se requiere utilizar un control apropiado para el reactivo anti D empleado. El rastreo de anticuerpos
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inesperados (Irregulares) debe preceder a toda transfusión de productos globulares.
Prueba cruzada o Prueba de compatibilidad
La prueba cruzada mayor se realiza utilizando células del donante, tomadas de un segmento del tubo de
la bolsa que contiene una unidad de sangre total o de glóbulos rojos, mas suero del receptor; debe
efectuarse previa a la administración.
Selección de sangre para transfusión según sistema ABO
Cuando en el suero del receptor se detectan anticuerpos con significancia clínica, las unidades de sangre
total o de glóbulos rojos que se utilicen para la transfusión deberán no expresar el antígeno
correspondiente y la prueba cruzada debe ser compatible, excepto en circunstancias de urgencia donde
el médico tratante autorice en forma escrita, el despacho de unidades incompatibles.
El plasma fresco congelado deberá ser ABO compatible con los glóbulos rojos del receptor,
especialmente cuando este componente es administrado en neonatos. La realización de la pruebas
cruzadas para despachar unidades de plasma o crioprecipitado no son requeridas.
El plasma de las unidades de plaquetas deberán ser ABO compatibles con los glóbulos rojos del
receptor, especialmente cuando se trate de neonatos.


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Transfusión masiva
Cuando un paciente ha recibido unidades de sangre que se aproximen o sobrepasen la volemia total en
un tiempo de 24 horas, las pruebas de compatibilidad pueden ser abreviadas, a la fase de temperatura
ambiente únicamente, siempre y cuando se obtenga el consentimiento del médico responsable.
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
La prueba cruzada comprueba si el receptor posee aloanticuerpos frente a los antígenos de los
eritrocitos del donante.
PRUEBA CRUZADA MAYOR
Los hematíes y el suero deben de ser incubados el tiempo suficiente para que puedan reaccionar incluso
los Ac muy poco potentes; por lo que es necesario añadir suero de Coombs después de la incubación
para detectar los Ac que recubren a los hematíes pero que no llegan a aglutinarlos. La prueba debe
comprobarse mediante controles.
Para preparar la suspensión de hematíes del donante se utiliza la sangre contenida en los segmentos de
la bolsa (PILOTOS).
Materiales:
♣ Cinco tubos de ensayo largos
♣ Gradillas
♣ Pipetas Pasteur
♣ Solución salina fisiológica
♣ Serófuga o centrifuga
♣ Albumina Bovina al 30%
♣ Baño maría a 37 °C
♣ Suero de Coombs policlonal
♣ Lámpara
♣ Células control de Coombs
♣ Glóbulos rojos lavados de unidad de glóbulos rojos
♣ Glóbulos rojos lavados del paciente


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Procedimiento:
Lavar los glóbulos rojos obtenidos de los pilotos de las unidades y lavar glóbulos rojos del paciente. Resuspenderlos
del 3 – 5%.
Reactivos y Analitos Paciente

Muestra Sangre con EDTA Adicionar al tubo 3 a 5 gotas
Solución salina fisiológica 0.9% Adicionar solucionar hasta las ¾ partes del tubo
centrifugar 3.500 rpm durante 2 minutos.
descartar el sobrenadante
Agregar nuevamente solución salina al 0.9% hasta las ¾ partes del tubo – centrifugar – descartar y repetir el
proceso anterior tres veces
En el último lavado descartar el sobrenadante y adicionar nuevamente solución salina al 0.9% hasta obtener
un color salmón (concentración de 3-5%).
Marcar dos tubos de ensayo con PC (prueba cruzada) y AC (autocontrol), luego agregar:
FASE SALINA
Reactivos y analitos Tubo PC Tubo AC
Suero del paciente 2 gotas 2 gotas
Glóbulos rojos lavados de la unidad 1 gota ----
Glóbulos rojos lavados del paciente ---- 1 gota
Mezclar y centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos, para facilitar la reacción antígeno-anticuerpo.
Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y continuar con la fase albumina
FASE ALBUMINA
Albumina Bovina al 30% 1 gota 1 gota
Mezclar e Incubar a 37 °C por 30 minutos
Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 minutos, para facilitar la reacción antígeno-anticuerpo.


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Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y seguir con la fase de Coombs.
ASE DE COOMBS
Solución salina fisiológica Hasta ¾ partes del tubo Hasta ¾ partes del tubo
Centrifugar la muestra a 3400 rpm durante 2 minutos.
Descartar el sobrenadante.
Hacer el lavado de Coombs (anterior proceso) tres veces más y después de centrifugar por última vez descartar
sobre compresa y agregar:
Suero de Coombs 1 gota 1 gota
Centrifugar la muestra a 2000 RPM durante 2 minutos, para facilitar la reacción antígeno-anticuerpo.
Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y si la muestra es negativa realizar el control
de Coombs.
Control de Coombs: agregar 2 gotas de células control de Coombs y Centrifugar la muestra a 2000
RPM durante 2 minutos
Interpretación.
Prueba positiva:
♠ La aglutinación indica incompatibilidad ya que significa que algún Ac del suero del receptor se ha
unido a los hematíes del donante.
♠ Para diferenciar aloanticuerpos de los autoanticuerpos se debe disponer de un autocontrol, y
cuando éste es negativo se sospecha la existencia de aloanticuerpos en una prueba cruzada
incompatible. Los anticuerpos se deben identificar antes de que el paciente reciba la transfusión.
♠ Si el autocontrol es positivo se sospecha la presencia de autoanticuerpos.
Los aloanticuerpos producen reacciones transfusionales más graves que los autoanticuerpos, además los
anticuerpos se deben identificar antes de que el paciente reciba la transfusión.


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Prueba negativa:
♠ La prueba cruzada es compatible si no hay aglutinación, ya que indica que no existen
aloanticuerpos eritrocitarios en el suero del receptor.
♠ No obstante hay que tener en cuenta que todas las pruebas de la antiglobulina negativas deben
ser comprobadas para asegurar que la técnica se ha realizado correctamente. Para ello, se
añaden hematíes sensibilizados y lavados (GR control) a todos los tubos que contienen resultado
negativo.
♠ Si los resultados son correctos los hematíes control deben ser aglutinados. En cambio si no se
observa aglutinación, la prueba no es válida y debe repetirse.
→ AUTOCONTROL
El autocontrol es una prueba adicional que se realiza paralelamente a las pruebas de compatibilidad y se
usa como control para detectar autoanticuerpos, también puede detectar anormalidades séricas.
PRUEBA CRUZADA EN GEL
Fundamento:
Se utilizan unas cámaras en las que los eritrocitos, al pasar por el medio utilizado, según el tamaño se
separan los aglutinados de los que están sin aglutinar.Procedimiento:
Tanto el gel como las microesferas de vidrio vienen suministrados por la casa comercial en unas cámaras
especiales.


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Los glóbulos rojos lavados y el suero se colocaran en la parte superior de la cámara de la siguiente forma:
Agregar glóbulos rojos lavados de la unidad de sangre y suero o plasma de la muestra (cantidad según casa
comercial)
Incubar y Centrifugar el tiempo que indique la casa comercial y leer.
NOTA IMPORTANTE:
Cuando un paciente se va a transfundir es obligatorio realizarle RAI si se sigue transfundiendo cada

72 horas se realiza el RAI con una nueva muestra.
BIBLIOGRAFIA
1. Ministerio de Salud de la Republica de Colombia. Manual de normas técnicas, administrativas

y de procedimientos en Banco de Sangre. Módulo 1. Santa Fe de Bogotá D.C. 1996
2. ARTICULO: Transfusión sanguínea. J Rejas López, J R González Montaña, A J Alonso Díez.
1997
3. Instructivo de rastreo de anticuerpos irregulares (BMS-I-05). Hospital Universitario de
Santander. 2010
4. Prueba cruzada (en línea) disponible en http://es.scribd.com/doc/1028985/MANUAL-
COMPLETO-DE-INMUNOHEMATOLOGIA. Visitada el 19 de julio de 2012

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Incubar y Centrifugar el tiempo que indique la casa comercial y leer.

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1. Ministerio de Salud de la Republica de Colombia. Manual de normas técnicas, administrativas

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