Practica 1.

Fundamento físico, manejo y cuidados del

microscopio. Aplicaciones del microscopio.

Objetivo:
Que el alumno identifique cada uno de los componentes del
microscopio y sepa qué función desempeña cada uno, que logre paso
a paso un enfoque correcto y que aprenda a detectar los errores de
manejo para corregirlos; además aprenderá a tener los cuidados
correspondientes al microscopio.

Introducción:
El microscopio es el aparato más importante e indispensable en un
laboratorio de Biología, su función es permitir observar la imagen
considerablemente aumentada de un objeto u organismo que a
simple vista pasa desapercibido. La palabra microscopio proviene de
dos raíces griegas: micros; que quiere decir pequeño y scopein; que
significa observar. En la actualidad existe toda una ciencia dedicada a
estudiar las características de estos aparatos que cada vez son mas
precisos y espectaculares, nos referimos a la creación de la
microscopia; esta es cada día mas importante, ya que el conocer las
características de un microscopio nos permite sacar el mayor
provecho de él, dándole una mayor aplicación.
Existen dos tipos básicos de microscopio: el simple y el compuesto.
El microscopio simple está formado por tan solo una lente
convergente a la que también se la llama “lupa”, la cual nos
proporciona una imagen virtual y aumentada.
El microscopio compuesto está constituido por do sistemas de lentes:
1.-El sistema que está constituido por los objetivos, que son las lentes
que quedan más cerca del objeto de observación.
2.-El sistema constituido por los oculares, que son las lentes que
quedan más cerca del observador.
Cada sistema proporciona un aumento independiente y el producto
de estos aumentos parciales dado por oculares y objetivos, determina
el aumento total del microscopio.
Para manejar con mayor eficiencia un microscopio, es necesario
conocer como está constituido. Las partes que lo constituyen se
agrupan en tres sistemas: mecánico, óptico y de iluminación.
a) El sistema mecánico; está formado por una base, la columna, el tubo
del microscopio, la platina, los tornillos para el enfoque y el revolver.

b) El sistema óptico; está representado por las lentes oculares y las

lentes objetivos.

c) El sistema de iluminación; está representado por la fuente de luz

(foco), el condensador y el diagrama.

Debemos recordar que el objetivo y el ocular del microscopio

funcionan como lentes convergentes biconvexas, por lo que la
imagen final que nos proporciona el microscopio compuesto es vital,
aumentada e invertida.
Toda imagen proporcionada por el sistema óptico de un microscopio,
debe unir tres características; poseer un buen poder de resolución,
de penetración y de definición.
El poder de resolución (P.R.): es la característica del microscopio que
permite ver con claridad las estructuras finas y que se encuentran
muy cercanas entre sí; podemos ver que este poder de resolución es
directamente proporcional a la longitud de onda media de la luz
blanca (550 nm)(1nm= 10-6mm) e inversamente proporcional a la
apertura numérica (A.N.) del objetivo. Esto es:

Donde: P.R. es la distancia mínima entre dos puntos de la muestra

que permite verlos separados;
0.61 es una constante que representa la diferencia mínima en
contraste que es detectable;
λ es la longitud de onda de la luz empleada;
A.N. es la apertura numérica de la lente del objetivo.
Si las estructuras que se desean precisar, están colocadas a una
distancia menor una de otra, necesitaremos un objetivo de mayor
apertura numérica.
La apertura numérica (A.N.): es una medida del ángulo máximo con
que los rayos prominentes del objetivo inciden en la lente del objetivo
del microscopio y de ahí son llevados a los ojos del observador. Ahora
bien, hay dos factores que determinan la apertura numérica: en
ángulo que forman los ángulos que penetran por el objetivo y el
índice de refracción del medio que existía entre el objeto a observar y
el objetivo, dicho de una manera matemática, la apertura numérica
es el producto del seno del semi ángulo de abertura por el índice de
refracción del medio que existe entre el objetivo y el objeto a
observar. Todos los objetivos traen grabada la apertura numérica.
El poder de penetración: es la característica que permite definir
simultáneamente las estructuras existentes a diferentes niveles de la
penetración; esto solo se puede lograr con objetivos de pequeño
aumento, a medida que aumenta el poder del objetivo y la apertura
numérica, es menor el poder de resolución.
El poder de definición: es la característica que permite una imagen
clara, precisa con bordes definidos; para esto, el microscopio debe
presentar lentes bien pulidas, con sus aberraciones cromáticas y de
esfericidad, corregidas.
El índice de refracción: es una medida del la velocidad comparativa
del la luz en un medio. Cuando existe aire entre la lente y el
cubreobjetos, parte de la luz proyectada a través de la muestra es
desviada, por lo que a medida que se usa un objetivo de mayor
aumento, la perdida de resolución tiene un efecto significativo sobre
la calidad de la imagen. El uso de aceite de inmersión entre la
muestra y la lente del objetivo de inmersión, evita el cambio del
índice de refracción, y por lo tanto, mejora la resolución.
Procedimiento:
a) Señale cada componente del microscopio, anote su función y el
sistema en el que pertenece.

b) Observe los grabados en los oculares y objetivos y anote su

significado.

c) Ensaye el enfoque, empezando con el objetivo de menor aumento,

anotando en aumento total que logra la imagen en cada caso.

d) Indique el poder de resolución de cada objetivo.

e) Mida el grosor, largo y ancho del portaobjetos y cubreobjetos.

f) Ensaye la iluminación Kohler.

La finalidad de la iluminación de Kohler es obtener la distribución

homogénea de la iluminación, sobre el espécimen a observar.

Para la iluminación de Kohler necesitamos seguir los siguientes

pasos:

1. Prender la fuente de luz (foco)

2. Enfocar la preparación con el objetivo de menor aumento

(10x)

3. Subir el condensador hasta el tope , con cuidado

4. Cerrar completamente el diafragma de la lámpara

5. Cerrar completamente el diafragma de iris

6. Observar la figura que aparece en el campo (hexágono)

llamada diagrama

7. Bajar el condensador lentamente hasta lograr la máxima

nitidez de los bordes de la figura (hexágono).

Si no está centrado el diafragma en el campo, entonces:

8. Centrar el diafragma en el campo con los tornillos de
centrado que están en le condensador, moviéndolos
simultanea y lentamente, para evitar que el diafragma
salga del campo.

9. Abrir el diafragma de campo luminoso hasta obtener

iluminada un área igual al campo visual.

10.Si el diafragma está centrado en el campo, ningún vértice

debe salir, el espacio entre ellos deben ser iguales.
 11.si no es así cierre un poco el diafragma y repita los pasos 8 ,
9 y 10.

12.Abrir completamente el diafragma de campo luminoso.

13.Abrir lentamente el diafragma de iris, hasta obtener una

iluminación que no lastime los ojos.

14.Ajuste la intensidad de la luz, con el tornillo de control de la

intensidad.

15.Ajuste la altura del condensador, dependiendo del objetivo

a utilizar.

16.Verifique el ajuste observando por el ocular, el campo debe

estar iluminado totalmente y homogéneamente.

Pasos a seguir para enfocar el espécimen o muestra:

1) Con los tornillos macrométricos, bajar con cuidado la platina hasta el
tope.

2) Con el revolver, colocar el objetivo de menor aumento (seco débil) en

dirección del orificio de la platina.

3) Colocar el portaobjetos que contiene la muestra, en la platina,

cerrándolo en el área del orificio de la platina.

4) Asegurar el portaobjetos con las pinzas de la platina.

5) Con los tornillos macrométricos, sin ver por los oculares, subir
lentamente la platina hasta que llegue al tope.

6) Sin ver aun, verificar hacia qué sentido se tienen que mover los
tornillos micrométricos para bajar la platina.

7) Prender la fuente de luz.

8) Con los tornillos macrometricos bajar la platina lentamente, hasta

obtener una imagen del espécimen.

9) Afinar la imagen con los tornillos micrométricos.

10) Ajustar la altura del condensador.

11) Ajustar la cantidad de luz con el diafragma de iris.

12) Ajustar la intensidad de luz con el tornillo de control de la

intensidad.

13) Observar la muestra.

Si se va a observar con otros objetivos:

 14) Con el revolver cambiar primero al objetivo seco fuerte y seguir
los pasos 9-13.

15) Con el revolver cambiar al objetivo de inmersión y seguir los

pasos 9-13.

16) Antes de colocar el objetivo de inmersión en dirección de la

muestra, debe siempre colocarse una gotita de aceite de inmersión.

Cuestionario:
1. ¿Qué es un microscopio?
La palabra microscopio proviene de dos raíces griegas: micros; que
quiere decir “pequeño” y scopein; que significa “observar”. Un
microscopio es un instrumento óptico de suma importancia en un
laboratorio de biología, su función es permitir observar objetos que
son demasiado pequeños para el ojo humano.

2. características del microscopio compuesto

Una de las principales características del microscopio compuesto es
que es más sofisticado, ya que está constituido por dos sistemas de
lentes; el sistema constituido por los objetivos, que son las lentes que
quedan más cerca del objeto de observación; y el sistema constituido
por los oculares, que son las lentes que quedan más cerca del
observador. A diferencia del microscopio simple, él cual solo está
constituido por una sola lente convergente conocida como lupa.

3.- Explique los sistemas en que se divide el microscopio

compuesto.
Los sistemas en que se divide el microscopio con tres y son:
Sistema óptico. Sus estructuras participan en el proceso de
formación de la imagen y son conocidos como lentes ópticos. Existen
dos tipos de lentes: ocular, objetivo. Los oculares y los objetivos
participan directamente en la formación de una imagen de mayor
tamaño que la del objeto observado. Existen además varios lentes
objetivos, cada uno con diferente aumento, que se ubican en una
estructura llamada revólver.
Sistema luminoso o sistema de iluminación. Este sistema se
encuentra ubicado debajo de la platina y su función es la de iluminar,
concentrar, regular y dirigir la luz emitida por un foco a través de la
preparación, por medio de los componentes que integran a dicho
sistema: fuente luminosa, espejo, diafragma, filtros y condensador.
Sistema mecánico. Es la estructura que sostiene las demás partes
del microscopio y le permite moverse. Está formado por el tubo del
ocular, revólver, platina, pinzas, brazo, base, tornillos macrométrico y
micrométrico. El tubo contiene en su extremo superior el ocular, y a
través de él la luz llega hasta el lente objetivo; la platina es donde se
coloca la muestra que se va a observar; y el pie es la estructura sobre
la que se apoya el microscopio. El tornillo macrométrico (permite el
enfoque global de la muestra) y el tornillo micrométrico (enfoca
detalladamente y con precisión cada una de sus partes).

4.- ¿Cuál es la función de cada una de las partes que

constituye al sistema de iluminación?
Este sistema se encuentra ubicado debajo de la platina y su función
es la de iluminar, concentrar, regular y dirigir la luz emitida por un
foco a través de la preparación, por medio de los componentes que
integran a dicho sistema: fuente luminosa, espejo, diafragma, filtros
y condensador,

 Fuente luminosa: Su función consiste en emitir un haz de luz

dirigido hacia el condensador, la luz es proporcionada por un
foco de filamento o por una lámpara de halógeno, en ambos
casos la fuente de luz está localizada en un espejo parabólico,
la luz emitida por el foco puede ajustarse a través de un
regulador de intensidad que permite encender la lámpara y
luego aumentar la intensidad de iluminación desde cero hasta
el punto deseado.

 Espejo: El espejo tiene la función de reflejar los rayos de la

fuente luminosa sobre el objeto. Por un lado su superficie es
plana y cóncavo por el otro.

 Diafragma: Este dispositivo se encuentra dentro del

condensador, se utiliza para reducir o ampliar el ángulo, y, por
 lo tanto la cantidad de luz que entra en el condensador. Existen
dos tipos de diafragma, el de disco y el de iris.

a) El diafragma de disco: Como su nombre lo indica

consiste en un disco montado bajo la platina con orificios
de diferente diámetro, marcados con números.

b) El diafragma de iris: Permite regular por medio de una

palanca la A.N del condensador, a través de diversos
conos de luz de diferentes diámetros, de manera que, al
cerrar el diafragma de iris, queda solo una pequeña
apertura, sobre el centro del condensador, que limitara el
diámetro del cono de luz emergente, esto equivale a
reducir la A.N del condensador, la acción contraria
aumenta la A.N del condensador y por lo tanto el
diámetro del cono de luz.

 Condensador: Su función principal es el de concentrar o

condensar los rayos luminosos en un cono de luz, de tal forma
que la zona observada en la preparación quede completa y
uniformemente iluminada, el diámetro máximo del cono de luz
producido, depende de su A.N y debe coincidir con la A.N del
objetivo que se esté empleando, para cumplir este
requerimiento el condensador cuenta con un sistema que
permite subirlo y bajarlo de manera que la iluminación que
llega a él condensador puede ser controlada de dos maneras:
se puede elevar (iluminación máxima) o disminuir (iluminación
mínima) hasta que logremos centrarla y ajustarla
adecuadamente, de esta manera el cono de luz atraviesa la
zona observada de la muestra, penetra hacia el objetivo y
posteriormente al ocular, proyectando así una imagen
aumentada. Este dispositivo se encuentra ubicado ente el
espejo y la platina.

 Filtros: En algunos microscopios se ajuntan filtros de colores,

principalmente azules para eliminar las longitudes de onda
mayores de 0.55 µm, que dan una coloración amarillenta, el
filtro puede o no utilizarse, dependiendo del tipo de preparación
que se vaya a observar.
5.- ¿Cuál es la función del aceite de inmersión?
La función del aceite es evitar la pérdida de luz por reflexión fuera de
la superficie de la lente objetivo; lo que se pretende es que la luz
llegue concentrada hacia la muestra, esto se debe a que el aceite de
inmersión posee un índice de refracción igual al vidrio, lo que permite
evitar la dispersión de los rayos luminosos y se aumenta
considerablemente la resolución de la imagen, otra función
secundaria del aceite de inmersión es restringir el movimiento de la
muestra.

6. ¿Qué es poder de resolución y cómo se calcula?

Es una característica del microscopio, la cual permite ver con claridad
las estructuras finas y que se encuentran muy cercanas entre sí. Para
calcular el poder de resolución se emplea la siguiente fórmula:

Donde
P.R. es la distancia mínima entre dos puntos de la muestra que
permite verlos separados.
0.61 es una constante que representa la diferencia mínima en
contraste que es detectable
λ es la longitud de onda de la luz empleada
A.N. es la apertura numérica de la lente del objetivo

7. En qué consiste el índice de refracción

El índice de refracción de una sustancia o un medio transparente, es
la relación entre la velocidad de la luz en el vacío y la velocidad de la
luz en la sustancia o el medio transparente. Este número, mayor que
la unidad y sin unidades, es una constante característica de cada
medio y representa el número de veces que es mayor la velocidad de
la luz en el vacío que en ese medio.

8.- Investigar los números y marcas que tiene el microscopio

óptico en los objetivos y oculares.
Objetivos.
Los números que tiene grabados los objetivos corresponden a el
poder de aumento, A.N y la D.T (distancia de trabajo).

1. Poder de Aumento.

• El numero X10 en el objetivo aumenta 10

veces.
• El numero X40 en el objetivo aumenta 40 10X 40X
100X

veces.
• El numero X100 en el objetivo aumenta 100
veces (El objetivo X100 generalmente se encuentra
 marcado con un anillo rojo o negra para indicar que se debe
usar con aceite de inmersión).

2. La apertura numérica A.N.

Esta se encuentra grabada en la manga de la
lente, junto a la indicación del poder de
aumento. 100X/130

•
100X/130
0.30 en el objetivo de 10X
• 0.65 en el objetivo de X40
• 1.30 en el objetivo de X100

3. Distancia de trabajo.
Esta es al distancias que hay entre la lente frontal del objetivo y
el portaobjetos cundo la imagen se encuentra enfocada. A
medida que el poder de aumento del objetivo es mayor
disminuye la distancia de operación.
• Objetivo 10X: la distancia de operación es
de 5 – 6 mm.
40X 100X
• Objetivo 40X: la distancia de operación es 10X

de 0.5 – 1.5 mm.

• Objetivo 100X: la distancia de operación es
de 0.15 – 0.20 mm.

4. Otros números.

• Longitud recomendada en mm para el tubo

del microscopio (entre el objetivo y el
40X/0.65
ocular), es generalmente de 160 mm. 40X/0.65
160/0.17 160/0.17
• El grosor recomendado en mm para el
cubreobjetos utilizado para tapar el
portaobjetos es 0.17

Oculares.
1. Aumento.
El poder de aumento se encuentra marcado
en el ocular.
• Un ocular 4X aumenta 4 veces la imagen
10X
que produce el objetivo.
• Un ocular 6X aumenta 6 veces la imagen que produce el
objetivo.
• Un ocular 10X aumenta 10 veces la imagen que produce el
objetivo.

RESULTADOS:
CONCLUSIÓN: