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DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA DE PEROXIDASA EN RÁBANO E


INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA

Proyecto de laboratorio de bioquímica


OBJETIVO GENERAL

Analizar y evaluar la actividad enzimática de las peroxidasas presentes en el


rábano (Raphanus sativus) con fin de comprender su importancia a nivel
clínico e industrial; además estudiar su capacidad de reemplazar
compuestos químicos y detectar moléculas inorgánicas ayudando a reducir
la contaminación ambiental

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

1. Extraer a partir de rábano (Raphanus sativus) una solución de enzima


peroxidasa con el fin de cuantificar su actividad en diferentes diluciones
2. Conocer y evaluar las capacidades catalíticas de las peroxidasas presentes en el
rabano
3. Evaluar el efecto de la temperatura en la actividad enzimática
4. Analizar los usos clínicos e industriales a partir de la actividad enzimática de las
peroxidasas
MARCO TEÓRICO
El rábano (Raphanus sativus) es una
planta perteneciente a la familia de las
crucíferas las cuales son ampliamente
reconocidas por ser de gran importancia
en la alimentación.
Nutricionalmente el Raphanus sativus
aporta un bajo contenido colorido debido a
su alto contenido de agua y bajos
nutrientes energéticos, su principal
componente son las proteínas y la fibra.
De su contenido vitamínico destaca la
vitamina C y entre los minerales el hierro y
el yodo.
En los rábanos se destaca la presencia de
compuestos de azufre de acción antioxidante, los
cuales son responsables del efecto diurético
De las raíces del (Raphanus sativus) es posibles
extraer las denominadas peroxidasas las cuales
corresponden a un tipo de enzimas .(Gutiérrez, M)
La enzimas son sustancias de
naturaleza proteica que
catalizan reacciones químicas
En estas reacciones, las
moléculas sobre las que actúa la
enzima en el comienzo del
proceso son llamadas sustratos,
y estas los convierten en
diferentes moléculas, los
Tomado de:https://www.caracteristicas.co/enzimas/ productos.(Cano,H.2013)
Peroxidasas

Estas enzimas peroxidasas son de gran uso a nivel clínico e industrial, en ensayos
útiles para la determinación y cuantificación de ácido úrico, colesterol o triglicéridos
.Adicionalmente se utiliza para la detección de enfermedades relacionadas a virus
conocidos como el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) causante del SIDA.
(Rodríguez-López et al., 2002).
Las peroxidasas actúan como oxidorreductasas, que se encuentran distribuidas a lo
largo del reino vegetal, los tejidos animales y microorganismos. Las cuales Catalizan
la oxidación de un amplio número de sustratos orgánicos e inorgánicos, utilizando la
capacidad oxidante del peróxido de hidrógeno.(Gutiérrez, M)
La Comisión Científica de la Unión Europea
ha definido a las peroxidasas como una de
las proteínas con mayor interés
biotecnológico para el siglo XXI, debido a que
pueden llegar a sustituir algunos
catalizadores y reactivos químicos usados en
la industria para la producción de resinas
fenólicas, adhesivos, antioxidantes,
antiestáticos y protectores de radiación
magnética, colorantes alimentarios y
componentes bioactivos de detergentes,
adicionalmente facilitan la remoción de
Estructura tridimensional de la
compuestos inorgánicos.(Rodríguez-López et HRP C (Veitch, 2004).
al., 2002).
Isoenzima más estudiada del
rábano picante
Se debe tener en cuenta factores que afectan la actividad enzimática
de la peroxidasas como lo es el pH en el cual existe un amplio rango
en el que las peroxidasas son activas que esta entre (3-12), sin
embargo el pH óptimo para realizar la función catalítica en el rábano
es 7.0 (Márquez, 1997.), también se debe tener en cuenta la
temperatura ya que después de 10 minutos en calentamiento a 80°C
es completamente inactiva (García et al, 2003).Adicionalmente
existen otros factores que que alteran la actividad enzimática, tales
como las radiaciones electromagnéticas, la humedad, la
concentración de sustrato, la presencia de activadores, los metales
pesados, entre otros.(Gutiérrez, M. 2011)
Para el desarrollo de este proyecto en que se analizará
la actividad enzimática se utilizara una solución
extraída del rábano picante (Raphanus sativus)
reaccionara con soluciones de H2O2 . La enzima
descompondrá el peróxido produciendo O2 libre que
reaccionara con un compuesto (Guayacol) el cual al
oxidarse forma una solución coloreada
(Tetraguayacol).(
METODOLOGÍA
- Sesión 1
Materiales y reactivos

-Mortero - Solución extractora: Buffer


-Gradilla fosfato
-Pipeta pasteur 60 mM, NaCl 0,1 M, pH 7,0
- Buffer fosfato 10 mM pH 6,0
-balón aforado de 25 mL
- Peróxido de hidrógeno al 30%.
-Pipeta aforada de 10 mL - Guayacol
-Pipeteador
-Micropipeta de 0.5-10 µL
-5 tubos de ensayo
-5 Tubos eppendorf
-Varilla de vidrio
-centrífuga
- Sesión 2
Materiales y reactivos
-Pipeta pasteur
- Solución extractora: Buffer
-Gradilla fosfato
-balón aforado de 25 mL 60 mM, NaCl 0,1 M, pH 7,0
-Pipeta aforada de 10 mL - Buffer fosfato 10 mM pH 6,0
-Micropipeta de 0.5-10 µL - Peróxido de hidrógeno al 30%.
-5 tubos de ensayo - Guayacol
-5 Tubos eppendorf
-Varilla de vidrio
-centrífuga -
Pipeteador
sesión 3
Materiales y reactivos
-Pipeta pasteur -
- 3 ml de NaOH 1N
Gradilla - Agua destilada
-balón aforado de 25 mL - Peróxido de hidrógeno al 30%.
-Pipeta aforada de 10 mL - Guayacol
-Micropipeta de 0.5-10 µL -
Micropipeta
-5 tubos de ensayo
-12 Tubos eppendorf
-Varilla de vidrio -
centrífuga -
Pipeteador
REFERENCIAS
1. Rodríguez-López, Tudela-Serrano, J.B. y García Cánovas, F. (2002). Extracto de alcachofa (Cynara
scolymus, L.) y su empleo en la descontaminación de medios contaminados con fenoles, aminas
aromáticas, haluros orgánicos y/o metales pesados. Patente 2 167 277. España.
2. Márquez, M. (1997). Tesis: Purificación de peroxidasas de rábano picante Armoracia rusticana.
Universidad de la Habana. Cuba.
3. García, B., Duarte-Vázquez, MA., Regalado, C. (2003). Propiedades de la enzima indicadora del
escaldado en el procesamiento de alimentos vegetales. Extraído el 17 de febrero, 2018, de
http://www.pncta.com.mx/pages/pncta_investigaciones_03h.asp?page =03e15.
4. Gutiérrez, M. (2011)ESTUDIO DE LA POLIMERIZACIÓN DE FENOLES UTILIZANDO
PEROXIDASAS PRESENTES EN RÁBANO COMÚN (Raphanus sativus var sativus), CON
APLICACIÓN EN LA BIORREMEDIACIÓN DE AGUAS RESIDUALES DE UNA EMPRESA
TEXTILERA Extraído el 17 de febrero, 2018, de
https://repositorio.espe.edu.ec/bitstream/21000/3139/1/T-ESPE-031024.pdf
5. Cano,H, Mendez-Sanchez,S.C y Cruz Laiton,J. (2013)MANUAL PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DE BIOQUÍMICA,Universidad Industrial de Santander .Extraído el 17 de febrero, 2018,de
http://quimica.uis.edu.co/portalantiguo/sites/default/files/paginas/archivos/V00Man10Bioqca_MFOQ-
BQ.01_08072013.pdf