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GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

BIOQUÍMICA

ALBERTO GARCÍA JEREZ


Docente - Director

Bucaramanga
1 Contenido
2 INTRODUCCIÓN ............................................................................................. 6
3 PRE INFORME DE LABORATORIO................................................................ 8
3.1 Portada....................................................................................................... 8
3.2 El Índice General........................................................................................ 8
3.3 Introducción................................................................................................ 8
3.4 Revisión bibliográfica ................................................................................. 8
3.5 Materiales y Métodos ................................................................................. 9
3.6 Plan de Trabajo .......................................................................................... 9
3.7 Nomenclatura............................................................................................. 9
3.8 Referencias ................................................................................................ 9
3.9 Anexo ......................................................................................................... 9
4 INFORME DE LABORATORIO...................................................................... 11
4.1 Portada..................................................................................................... 11
4.2 Resumen.................................................................................................. 11
4.3 El Índice General...................................................................................... 11
4.4 Introducción.............................................................................................. 11
4.5 Revisión bibliográfica ............................................................................... 11
4.6 Materiales y Métodos ............................................................................... 12
4.7 Resultados ............................................................................................... 12
4.8 Discusión.................................................................................................. 12
4.9 Conclusiones............................................................................................ 12
4.10 Recomendaciones ................................................................................ 12
4.11 Revisión bibliográfica ............................................................................ 12
4.12 Referencias........................................................................................... 13
4.13 Anexo.................................................................................................... 13
5 Practica 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO ........................... 14
5.1 NORMAS PERSONALES ........................................................................ 14
5.2 NORMAS PARA LA UTILIZACIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS ......... 15
5.3 NORMAS PARA LA UTILIZACIÓN DE INSTRUMENTACIÓN ................ 16
5.4 NORMAS DE EMERGENCIA .................................................................. 16
5.5 MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS...................................................... 16
6 Practica 2: PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LOS AMINOÁCIDOS. ......... 18
6.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO ........................................................ 21
6.2 REACCIÓN CON LA NINHIDRINA .......................................................... 22
6.3 REACCIÓN DE BIURET .......................................................................... 23
6.4 REACCION XANTOPROTEICA............................................................... 24
6.5 REACCION DE MILLON .......................................................................... 25
6.6 REACCION DE SAKAGUCHI .................................................................. 26
6.7 PREGUNTAS:.......................................................................................... 28
7 Practica 3. BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS .......................................... 30
7.1 PROCEDIMIENTO Y MATERIALES ........................................................ 32
7.2 REACCIÓN DE BIURET .......................................................................... 33
7.3 REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS ....................................... 35
7.4 DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS: MÉTODO
DE BRADFORD................................................................................................. 36
7.5 PREGUNTAS:.......................................................................................... 39
8 Práctica 4: IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS .................................. 41
8.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO. ....................................................... 45
8.2 PRUEBA DE BENEDICT ......................................................................... 46
8.3 REACCIÓN DE FEHLING........................................................................ 47
8.4 REACCIÓN DE MOLISCH ....................................................................... 48
8.5 PRUEBA DE TOLLENS ........................................................................... 49
8.6 REACCIÓN DE LUGOL (YODO) ............................................................. 51
8.7 PREGUNTAS........................................................................................... 51
9 Practica 5. CARACTERÍSTICAS DE LOS ÁCIDOS GRASOS....................... 53
9.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO. ....................................................... 54
9.2 SOLUBILIDAD EN LÍPIDOS .................................................................... 54
SAPONIFICACIÓN ........................................................................................ 55
9.3 REACCIÓN CON EL SUDÁN III .............................................................. 56
9.4 PREGUNTAS:.......................................................................................... 57
10 BIBLIOGRAFÍA............................................................................................ 58
Tablas

Tabla 1 Clasificación de los aminoácidos.............................................................. 18


Tabla 2 Aminoácidos proteicos con nomenclatura clásica sistema de tres letras y
sistema de una sola letra, impuesto en genética molecular. ................................. 19
Tabla 3 Pruebas bioquímicas para identificar aminoácidos................................... 20
Tabla 4 Materiales y reactivos............................................................................... 21
Tabla 5 Procedimiento a realizar para la reacción de ninhidrina. .......................... 22
Tabla 6 Procedimiento a realizar para la reacción de Reacción de Biuret. ........... 23
Tabla 7 Procedimiento a realizar para la reacción Xantoprotéica. ........................ 24
Tabla 8 Procedimiento a realizar para la reacción de millón. ................................ 25
Tabla 9 Procedimiento a realizar para la reacción de Sakaguchi.......................... 26
Tabla 10 Resumen de las reacciones de aminoácidos en las diferentes técnicas. 27
Tabla 11 Descripción de reactivos y métodos. ...................................................... 30
Tabla 12 Materiales y Materiales y reactivos......................................................... 32
Tabla 13 Procedimiento a realizar para la reacción de Biuret. .............................. 34
Tabla 14 Reacción De Aminoácidos Azufrados, Grupos SH................................. 35
Tabla 15 Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0
hasta. .................................................................................................................... 38
Tabla 16 Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0
hasta ..................................................................................................................... 38
Tabla 17 Diferentes ensayos para reconocimiento en carbohidratos. ................... 42
Tabla 18 Materiales y reactivos............................................................................. 45
Tabla 19 Prueba de Benedict (detecta la presencia de azúcares reductores) ...... 46
Tabla 20 Reacción de Fehling (detecta la presencia de azúcares reductores) ..... 47
Tabla 21 Reacción de Molisch. ............................................................................. 48
Tabla 22 Prueba De Tollens.................................................................................. 49
Tabla 23 Reacción de almidones con lugol (yoduro potásico). ............................. 51
Tabla 24 Clasificación de lípidos. .......................................................................... 53
Tabla 25 Materiales y Materiales y reactivos......................................................... 54
Tabla 26 Determinación de solubilidad en lípidos. ................................................ 54
Tabla 27 Ensayo de Saponificación. ..................................................................... 55
Tabla 28 Tinción: Reacción con el Sudán III. ........................................................ 56
Ilustraciones

Ilustración 1 Clasificación de carbohidratos. ......................................................... 42


Ilustración 2 Molécula de glucosa. ........................................................................ 45
2 INTRODUCCIÓN

La guía de prácticas de laboratorio introduce al estudiante en los


procedimientos experimentales más ampliamente usados en bioquímica.
Incluye análisis de macromoléculas como carbohidratos, lípidos, proteínas
y ácidos nucleicos. El estudiante también se familiarizará de las
instalaciones y los equipos usados en las prácticas de bioquímica. Es de
gran importancia la lectura y compresión del documento con anterioridad
a la asistencia de las prácticas, además del desarrollo de las consultas
que permitan entender cada procedimiento.

Los objetivos de las prácticas del curso de bioquímica son:

1. Que el estudiante sea capaz de comprender e integrar los conceptos


teóricos con la actividad práctica incluyendo una adecuada manipulación
de las técnicas de laboratorio, desde la actividad procedimental hasta la
entrega de resultados o informe final.

2. Que el estudiante adquiera una preparación en Bioquímica que le


permita comprender la transversalidad que tiene la actividad práctica,
tanto en otros cursos del programa de estudio como en las actividades
profesionales que él desempeñará, así mismo que le permitan desarrollar
una actitud de pensamiento crítico y de liderazgo en el trabajo que se de
en el grupo.

3. Que el estudiante realice las a actividades las practicas, teniendo en


cuenta las normas de seguridad y las indicaciones que del docente
responsable de la práctica considere.

4. Que el estudiante adquiera los elementos formativos que incluye:


lectura previa de esta guía, planeación de la actividad, asistencia a las
prácticas, resolución de problemas con la metodología empleada,
interpretación de resultados y presentación de resultados en el informe
de laboratorio.
La bioquímica es una rama de la ciencia encargada de descifrar los
mecanismos esenciales de los seres vivos, con una fase teórica y una fase
práctica, la primera se da a través de los distintos referentes bibliográficos
y el segundo se apoya en el desarrollo de la guía de prácticas de
laboratorio del curso de bioquímica.

El desarrollo del trabajo práctico se apoya en una serie de pasos que van
describiendo el progreso de una técnica a través de mediciones, cálculos,
observaciones cualitativas y cuantitativas de los procedimientos
planteados en la guía. La práctica de laboratorio integra, en el estudiante
la habilidad de trabajar en el laboratorio, utilizando las técnicas más
habituales de un laboratorio bioquímico y aprendiendo a interpretar los
resultados experimentales.
3 PRE INFORME DE LABORATORIO

En la redacción de los preinformes se deben conjugar los verbos en tiempo


presente atemporal y en tiempo futuro cuando se indiquen las acciones
que se van a realizar. Esta elaboración es individual.
Ejemplo La centrifuga gira a 1600 revoluciones por minuto.

La estructura de los preinformes es la siguiente:

3.1 Portada
La página de acuerdo a lo establecido por las normas para trabajos
escritos, en el entorno de gestión encuentra un manual de normas APA.
La portada contiene el nombre la universidad, la escuela a que pertenece
el nombre de los integrantes del grupo con los datos necesarios para su
identificación.
3.2 El Índice General
Presenta toda la información del contenido, incluyendo el índice general,
el índice de tablas, el índice de figuras y el índice de anexos
-Índice General
-Índice de Tablas
-Índice de Figuras
-Índice de Anexos
3.3 Introducción
Describirá las prácticas a desarrollar explicado las principales
características de las técnicas, así como, descripción de objetivos
generales y específicos que da lugar al trabajo experimental. Esta es una
sección realizada, redactando las ideas de los autores o sea ustedes.
3.4 Revisión bibliográfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temáticas
propuestas por la guía del componente práctico. Se toman los principales
aspectos teóricos de acuerdo a la metodología que se platea para
desarrollar en la guía. Tenga presenta que hay que dar los créditos
respectivos a los autores consultados y las ideas resultantes son
redactadas por el estudiante.
3.5 Materiales y Métodos
Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las
precauciones a tener, así como describir la información relávate que
permita el buen desarrollo de la práctica.
3.6 Plan de Trabajo

Primero que todo identifique quien es el docente encargado de la práctica,


describa los principales datos personales, así como la identificación de la
fecha lugar de la práctica. Tenga presente las normas de bioseguridad y
como debe asistir al desarrollo del componente práctico (Uso de pantalón
jean, zapato cerrado, bata blanca, guantes etc.). Define aquí que
elementos debe tener en cuenta para el desarrollo de la práctica de
acuerdo a las indicaciones que haga el docente de la práctica y la
descripción que se de en la guía.
3.7 Nomenclatura
La Nomenclatura deberá ser presentada en tablas, que presenten
ordenadamente sustancias químicas o unidades, identificadas con
símbolos, abreviaturas.
3.8 Referencias
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita
la remisión a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus características
editoriales. Por lo general y de acuerdo con la normas para trabajos
escritos, la información básica a ofrecer es Autor(es). /Año de
publicación./Título:/subtítulo./Mención del traductor y/o
editor./Edición./Ciudad y/o país de publicación en caso necesario, /Casa
editora. /Páginas o volúmenes. / (Mención de serie)
Esta información se detalla el final del documento y su descripción es de
acuerdo a las normas para trabajos escritos.
3.9 Anexo
En éstos se deben colocar toda aquella información referente a fichas de
seguridad, reactivos, equipos y otra información que se considere
relévate.
4 INFORME DE LABORATORIO
En la redacción de los informes se deben conjugar los verbos en tiempo
pasado. Esta actividad es grupal.
La estructura de los informes es la siguiente:
4.1 Portada
La página de acuerdo a lo establecido por las normas para trabajos
escritos, en el entorno de gestión se encuentra un manual de normas APA.
La portada contiene el nombre la universidad, la escuela a que pertenece
el nombre de los integrantes del grupo con los datos necesarios para su
identificación
4.2 Resumen
Indicar una breve reseña de lo hecho durante la práctica y los objetivos,
principales resultados y las conclusiones del trabajo realizado.
4.3 El Índice General
El contenido, incluyendo el índice general, el índice de tablas, el índice de
figuras y el índice de anexos
-Índice General
-Índice de Tablas
-Índice de Figuras
-Índice de Anexos
4.4 Introducción
Describirá las prácticas a desarrollar explicado las principales
características de las técnicas, así como, descripción de objetivos
generales y específicos que da lugar al trabajo experimental. Esta es una
sección realizada, redactando las ideas de los autores o sea ustedes.
4.5 Revisión bibliográfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temáticas
propuestas por la guía del componente práctico. Se toma los principales
aspectos teóricos de acuerdo a la metodología que de platea para
desarrollar en la guía. Tenga presenta que hay que dar los créditos
respectivos a los autores consultados y las ideas resultantes son
redactadas por el estudiante.
4.6 Materiales y Métodos
Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las
precauciones a tener, así como describiendo la información relávate que
permita el buen desarrollo de la práctica.
4.7 Resultados
Presentar la información sobre el desarrollo de las prácticas de forma
estructurada, completa y ordenada de la actividad experimental.
Presentando gráficos, tablas, cálculos y demás notas que describa la
ejecución de la práctica.
4.8 Discusión
La discusión contendrá un análisis crítico de los resultados obtenidos de
la actividad práctica y los conceptos teóricos.
4.9 Conclusiones
Derivan de los resultados y la discusión del trabajo.
4.10 Recomendaciones
El trabajo realizado debería mostrar nuevos caminos para otras
experiencias de laboratorio similares. En esta sección se enumerarán
claramente las actividades que podrían realizarse para proyectar la
información obtenida en la investigación.
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita
la remisión a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus características
editoriales. Por lo general y de acuerdo con la normas para trabajos
escritos la información básica a ofrecer es Autor(es)./Año de
publicación./Título:/subtítulo./Mención del traductor y/o
editor./Edición./Ciudad y/o país de publicación en caso necesario,/Casa
editora. /Páginas o volúmenes./ (Mención de serie )
Esta información se detalla el final del documento.
4.11 Revisión bibliográfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temáticas
propuestas por la guía del componente práctico. Se toman los principales
aspectos teóricos de acuerdo a la metodología que se platea para
desarrollar en la guía. Tenga presenta que hay que dar los créditos
respectivos a los autores consultados y las ideas resultantes son
redactadas por el estudiante.
4.12 Referencias
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita
la remisión a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus características
editoriales. Por lo general y de acuerdo con la normas para trabajos
escritos la información básica a ofrecer es Autor(es)./Año de
publicación./Título:/subtítulo./Mención del traductor y/o
editor./Edición./Ciudad y/o país de publicación en caso necesario,/Casa
editora. /Páginas o volúmenes./ (Mención de serie )
Esta información se detalla el final del documento.
4.13 Anexo
En éstos se deben colocar toda aquella información referente a fichas de
seguridad, reactiva y equipos esta otra información que se considere
relévate.
5 Practica 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO

Referente teórico seguridad y normas de laboratorio


Se entiende la práctica de laboratorio, como la estrategia pedagógica que
facilita la consolidación del aprendizaje y el desarrollo de competencias
disciplinares. La práctica de laboratorio puede desarrollarse en una sesión
o en varias sesiones de acuerdo a las indicaciones que se den en la
programación de cada periodo académico.

En el laboratorio se realiza, para el caso del curso de bioquímica, prácticas


experimentales: en donde se aprenden a manipular equipos, reactivos
químicos, conformándose pequeños grupos de trabajo para el desarrollo
de la actividad. Para llevar a cabo las prácticas de laboratorio se requiere
que el estudiante tenga un conocimiento teórico básico sobre el tema y
lea detenidamente la guía de laboratorio.

5.1 NORMAS PERSONALES

La vestimenta deberá ser apropiada y cómoda, que facilite la movilidad


para la actividad que se desarrolla en los laboratorios. Debe cubrir áreas
considerables de la piel con pantalones (jeans), blusas con mangas, la
bata y guantes.

Use calzado cerrado que cubra completamente el pie. El alumno debe


portar en todo momento Bata blanca de Laboratorio.

Nunca ingerir alimentos, beber o masticar chicle dentro del laboratorio,


igualmente evitar tocar partes del rostro y llevar las manos a la boca o
introducir lapiceros u otros en boca nariz y oídos.

Asistir puntualmente en la fecha y hora programada, igualmente al entrar


a las instalaciones del laboratorio se recomienda que se haga cuando esté
presente el docente encargado de la práctica, así como no ausentarse
antes de terminar la práctica.
El área del laboratorio es exclusivamente para realizar el trabajo de la
práctica; cualquier tipo de acción social como cortejar, charlas ajenas a
la práctica e igual que las bromas pueden causar pérdida de tiempo y
posibles incidentes de alta gravedad.

5.2 NORMAS PARA LA UTILIZACIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS

Cuando se tiene que hacer una reacción química se debe escoger el


recipiente adecuado a la cantidad que se va a usar. Los ensayos se hacen
en tubos de ensayo o en placas de gotas, nunca en vasos, matraces, etc.
No usar recipientes alimenticios para contener productos químicos e
igualmente cualquier recipiente que se utilice para la recepción productos
es necesario rotular, brindando la mayor información sobre la sustancia
contenida.
De los materiales de laboratorio No utilice vidrio agrietado, el material de
vidrio en mal estado aumenta el riesgo de accidente. No deben utilizarse
para pipetear jeringuillas provistas de aguja hipodérmica o aspirar con la
boca pipetas de vidrio. Compruebe la temperatura de los materiales antes
de cogerlos directamente con las manos.

Si cuenta con sistemas de extracción y renovación mecánica de aire


activados, manténgalos siempre en funcionamiento. Utilizar las campanas
extractoras siempre que sean posible.
Para detectar el olor de una sustancia, no se debe colocar la cara
directamente sobre el recipiente: utilizando la mano abierta como
pantalla, es posible hacer llega una pequeña cantidad de vapor hasta la
nariz. Los frascos deben cerrarse inmediatamente después de su uso.
Al momento de trabajar con ácido, para diluirlos vierta el ácido sobre el
agua, nunca al contrario.
No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos
utilizados. Nunca debe sacar sustancias químicas del laboratorio sin
autorización.
5.3 NORMAS PARA LA UTILIZACIÓN DE INSTRUMENTACIÓN

Cuando se determinan masas de productos químicos con balanza se


utilizará un recipiente adecuado.
Se debe mantener perfectamente limpio y seco el lugar dónde se
encuentre situado cualquier instrumento con contactos eléctricos. Leer las
instrucciones de uso de los instrumentos.
Debe revisarse el material de vidrio para comprobar posibles fisuras,
especialmente antes de su uso a vacío o presión.

5.4 NORMAS DE EMERGENCIA

En caso de tener que evacuar el laboratorio, cerrar la llave del gas y salir
de forma ordenada siguiendo en todo momento las instrucciones que haya
impartido el Profesor. Localizar al iniciar la sesión de prácticas los
diferentes equipos de emergencia en el correspondiente laboratorio:
Duchas y lavaojos, Botiquín, Absorbente para derrames, Alarma de
emergencia, Salida de emergencia y Recipiente para el vidrio roto.

Al finalizar la práctica, limpia el área de trabajo y entrega los materiales


utilizados limpios y en buenas condiciones. Por último esperar las
indicaciones para retirarse de las instalaciones del laboratorio.

5.5 MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS.

Se hará la discusión sobre las normas de seguridad antes descriptas y las


que encuentran en el Reglamentación y Normas de Bioseguridad en los
Laboratorios de la
UNAD y Otras Disposiciones.

Identifique la señalización que encuentra en el laboratorio, fotografié o


dibuje los pictogramas y describa en el informe de laboratorio que
significan con que elementos de seguridad se cuenta. (Duchas, extintores,
cámaras extractoras, etc.)
Preguntas
a) Escriba el nombre del reactivo y la formula química de los
productos usados en la práctica.
Ejemplo, Nitrato de plata (AgNO3)
c) Escriba una propiedad física de la sustancia.
Ejemplo, Son cristales blancos Densidad: (20/4): 4,352
d) Mencione posibles riesgos que representa la sustancia para
la salud.
En contacto con la piel y ojos puede provocar irritación y quemaduras.
Por ingestión puede causar irritaciones en las mucosas de la boca,
garganta, esófago y tracto intestinal.
e) Indique cual es el equipo o la vestimenta de
seguridad necesaria para manipular la sustancia.
Usar equipo respiratorio adecuado. Utilizar guantes y gafas
apropiadas. Utilizar ropa de trabajo adecuada (bata de laboratorio) y
lavarse las manos y la cara antes y al finalizar el trabajo.
f) Resuma la información obtenida en el área de reactividad
del símbolo de diamante
En cuanto a la salud (rombo azul), el número 2 indica que es un reactivo
peligroso. En cuanto a inflamalidad (rombo rojo), el número 0 indica que
no es inflamable. En cuanto a la reactividad (rombo amarillo), el número
0 indica que es estable. En cuanto a algún riesgo específico (rombo
blanco), no presenta alguno.
6 Practica 2: PROPIEDADES BIOQUÍMICAS DE LOS
AMINOÁCIDOS.

Referente teórico de aminoácidos

Los aminoácidos se denominan así por tener un grupo amino (-NH2) y un


grupo carboxilo (-COOH).
Es posible agrupar los aminoácidos en clases principales basadas en las
propiedades de sus grupos R, en especial de su polaridad, o tendencia a
interaccionar como el agua a pH biológico (cerca del pH 7.0). La polaridad
de los grupos R varía enormemente desde totalmente apolar o hidrofóbico
(insoluble en agua) hasta altamente polar o hidrofílico (soluble en agua).

Tabla 1 Clasificación de los aminoácidos.

Grupos R Propiedades de los aminoácidos

Apolares Los grupos R de esta clase de aminoácidos son apolares e


alifáticos hidrofóbicos.

Las cadenas laterales de la alanina, valina, leucina e


isoleucina tienden a agruparse entre sí en las proteínas,
estabilizando las estructuras proteicas a través de
interacciones hidrofóbicas.

Otros aminoácidos que conforman este grupo son:


glicina, metionina y prolina.

Aromáticos Fenilalanina, Tirosina y Triptófano, con sus cadenas


laterales aromáticas, son relativamente apolares
(hidrofóbicos). Todos ellos pueden participar de
interacciones hidrofóbicas.

Polares sin carga Los grupos R de estos aminoácidos son más solubles en
agua, que los aminoácidos apolares, debido a que
contienen grupos funcionales que forman puentes de
hidrógeno con el agua.

Incluye este grupo la serina, treonina, cisteína,


asparagina y glutamina.
Cargados Estos aminoácidos pueden tener el grupo R cargado
positivamente (básicos) o negativamente (ácidos), siendo
más hidrofílicos que los demás aminoácidos.

Los aminoácidos en los que los grupos R tienen una carga


neta positiva significativa a pH 7.0 Lisina, arginina e
histidina

Con una carga neta negativa a pH 7.0 son: aspartamo y


el glutamato.

La cadena R es de estructura variable y es la responsable de las características particulares de los AA y de su


clasificación, en función de ésta podemos agrupar a los 20 aminoácidos, en diversas categorías así mismo, la
nomenclatura puede hacerse utilizando un código de tres letras o de una, tal como se observa en la
siguiente tabla:

Tabla 2 Aminoácidos proteicos con nomenclatura clásica sistema de tres letras y sistema de
una sola letra, impuesto en genética molecular.

Nomenclatura

Una Tres Nombre


Clasificación
letra letras

A Ala Alanina

G Gly Glicina

I Ile Isoleucina Ae
Apolares alifáticos

L Leu Leucina Ae

V Val Valina

F Phe Fenilalanina Ae

Apolares aromáticos
W Trp Triptófano Ae

C Cys Cisteina
Apolares con azufre
M Met Metionina Ae

N Asn Asparagina Polares alifáticos y sin


Q Gln Glutamina carga
S Ser Serina

T Thr Treonina Ae

Y Tyr Tirosina Polar aromático y sin


carga

R Arg Arginina
Polar con carga
H His Histidina Ae
positiva
K Lys Lisina

D Asp Ac. Aspártico o Aspartato Polar con carga


E Glu Ac. Glutamico o Glutamato negativa

P Pro Prolina Iminoacido


Ae = Aminoácido esencial
Tomado de: Manual de Prácticas de Laboratorio de bioquímica, Universidad Nacional Autónoma de México

Tabla 3 Pruebas bioquímicas para identificar aminoácidos.


Prueba bioquímica Descripción de la reacción química entre los
aminoácidos y los reactivos.

El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma


complejos coloreados con la ninhidrina: violeta
Reacción con la azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo
ninhidrina grupo amino es primario, amarillo para la prolina e
(Hidrato de hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene un
tricetohidrindeno) grupo amido en la cadena lateral. Esta reacción
también identifica los grupos alfa-amino libres
presentes en péptidos y proteínas

El anillo fenólico tiene un comportamiento


característico frente a las sales de Mercurio a pH
Reacción de Millón ácido, formando complejos color rojo ladrillo con el
anillo fenólico de la tirosina y las proteínas que la
contienen.

Los anillos aromáticos presentes en algunos


aminoácidos reaccionan con ácido nítrico
Reacción concentrado formando nitroderivados de color
Xantoprotéica amarillo o anaranjado por lo cual esta reacción
permite reconocer la presencia de Tirosina,
Fenilalanina y Triptófano.
El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de
Reacción de la Arginina reacciona con soluciones de alfa naftol en
Sakaguchi presencia de Bromo en medio alcalino formando
complejos coloreados rosados o rojos.

La presencia de anillos aromáticos fenólicos o


nitrogenados en la cadena lateral de los Aminoácidos
se puede identificar mediante la reacción con ácido
Reacción de Ehrlich sulfanílico y nitrito de Sodio por formación de sales
de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así
detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o
formando péptidos y proteínas.

El anillo indólico presente en la cadena lateral de los


Reacción de alfa-aminoácidos libres o haciendo parte de péptidos
Adamkiewick o y proteínas se puede reconocer mediante reacción
Hopkins Cole con el ácido glioxílico a pH ácido, puesto que forma
complejos de coloración violeta o

Los Aminoácidos azufrados como Metionina, Cisteína


y Cistina se reconocen por la formación de
Reacción con acetato precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris
de Plomo alcalino oscuro o negro que se forman cuando reacciona con
Acetato de Plomo en medio alcalino.

6.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO


Tabla 4 Materiales y reactivos.
Reactivos Materiales Cantidad

Reactivo ninhidrina Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15

NaOH Gradilla 2

Sulfato cúprico Pinza para tubos 2


(CuSO)

Ácido Pipetas Pauster con bulbo 4


acético(CH3COOH)

Cloruro de sodio Beaker o vasos de precipitados de 500 mL 5


(NaCl)

albúmina Estufa 1

Ácido nítrico (HNO3) Cámara de flujo laminas 1


Hidróxido de sodio Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 4
(NaOH) ml.

Acetato de Plomo Pera de goma para pipetas 4

α Naftol

Hipoclorito de sodio

Reactivo de
Hopkins- Cole

Ácido sulfúrico
(H2SO)

Reactivo de Millón

Aminoácidos:
Glicina, tirosina,
triptófano,
fenilalanina y
arginina

Fenol

Albumina de huevo

Procedimiento

6.2 REACCIÓN CON LA NINHIDRINA

El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos coloreados con


la ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo
grupo amino es primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y café
para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena lateral.
Esta reacción también identifica los grupos alfa-amino libres presentes
en péptidos y proteínas. Precauciones la ninhidrina es toxica.

Tabla 5 Procedimiento a realizar para la reacción de ninhidrina.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo
con 1.5 mL Preparar los tubos de Agregar 2 ml de
1 ninhidrina
de Glicina1% ensayo. solución de
ninhidrina (0.3%)
con 1.5 mL 
2 de ninhidrina
Agregue a cada tubo de
Albúmina1%
ensayo 1.5mL de la
con 1.5 mL solución correspondiente.
3 de Tirosina ninhidrina

1%
2 ml de solución (0.3%)
con 1.5 mL de
4 ninhidrina de ninhidrina a cada 1.5 ml de solución
Glicina 1%
tubo. respectiva
con 1.5 mL de
5 ninhidrina  +
Triptófano 1%
Tubos de ensayo en un Baño de agua
baño de agua hirviente hirviente por 10
por unos 10 minutos. minutos.
con 1.5 mL de
6 ninhidrina 
Leucina al 1%
Observar y tomar
apuntes de los cambios.

6.3 REACCIÓN DE BIURET

Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los


aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH
que se destruye al liberarse los aminoácidos. El reactivo de Biuret lleva
sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se
une con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta
(Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de
proteínas.

Tabla 6 Procedimiento a realizar para la reacción de Reacción de


Biuret.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


con 5 ml de NaOH 2,5N
solución de
1 + Preparar los tubos de 1 ml de
Leucina al
ensayo.
1% sulfato cúprico NaOH 2,5N

NaOH 2,5N +
con 1.5 mL
Agregue a cada tubo
2 de + 3 gotas de solución
de ensayo agregue 1
Albúmina1% de sulfato cúprico
sulfato cúprico ml de
al 1%
NaOH 2,5N NaOH 2,5N de la
con 1.5 mL solución
3 de Tirosina + correspondiente.
1%
sulfato cúprico 
NaOH 2,5N Agregue 3 gotas de
con 1.5 mL
4 de Glicina + solución de sulfato
1% cúprico al 1% a cada
5ml de solución
sulfato cúprico tubo de ensayo.
respectiva

Agite cada tubo de


con 1.5 mL NaOH 2,5N ensayo
de
5 + 
Triptófano
1% sulfato cúprico Observar y tomar
apuntes de los
cambios.

6.4 REACCION XANTOPROTEICA.


Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan con
ácido nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o
anaranjado por lo cual esta reacción permite reconocer la presencia de
Tirosina, Fenilalanina y Triptófano.

Tabla 7 Procedimiento a realizar para la reacción Xantoprotéica.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 1.5 ml Agregue, 0,5 ml de


de solución HNO3 HNO3
1 Preparar los tubos de
de Triptófano + ensayo. +
1%
NaOH 

Agregue, 0,5 ml de HNO3


concentrado en cada
HNO3
tubo, en la campana de
con 1.5 mL + extracción.
2 de
Albúmina1% NaOH 
1.5 ml de solución
Retire los tubos del baño respectiva
y déjelos enfriar.
HNO3 +

con 1.5 mL + Baño de agua
3 de Metionina Agregue lentamente 1 ml hirviente por 10
1% NaOH de Amoniaco (NH4OH) minutos.
concentrado en la
+
campana de extracción o
1.5 mL. de NaOH al 40%, Agregue 1 ml de
HNO3 Amoniaco (NH4OH) ó

con 1.5 mL 1.5 mL de NaOH al
de +
Observar y tomar 40%.
4
Fenilalanina NaOH apuntes de los cambios.
1% +

observe el cambio
de color

6.5 REACCION DE MILLON

El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a las sales


de Mercurio a pH ácido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo
fenólico de la tirosina y las proteínas que la contienen.

Tabla 8 Procedimiento a realizar para la reacción de millón.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 1.5 ml Reactivo de Agregue 15 gotas del Reactivo de


de solución Millón Millón
1 Preparar los tubos de ensayo.
de Tirosina
1% + +
sulfato cúprico 

Reactivo de agregue 15 gotas del Reactivo de Millón


con 1.5 mL Millón a cada tubo de ensayo
2 de
+ 
Albúmina1%
sulfato cúprico Agregue 3 gotas de solución de sulfato
cúprico al 1% a cada tubo de ensayo.
Reactivo de
Millón  1.5 ml de solución respectiva
con 1.5 mL
3 de Leucina +
+ Retire con cuidado los tubos de ensayo
1%
del baño de María y colóquelos en la
sulfato cúprico Baño de agua hirviente por 10
gradilla.
minutos

+
Observar y tomar apuntes de los
Dejar enfriar.
cambios.

6.6 REACCION DE SAKAGUCHI

El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina


reacciona con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio
alcalino formando complejos coloreados rosados o rojos
Tabla 9 Procedimiento a realizar para la reacción de Sakaguchi.
Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

Hidróxido de Sodio Enfríe en baño de hielo por 10


(NaOH minutos.
Preparar los tubos de ensayo.
con 5 mL de + +

1 solución de
alfa-naftol 1 ml de Hidróxido de Sodio (NaOH) al
Arginina 1% Enfríe en baño de hielo por 10 minutos. 5%
+
 +
hipoclorito de Sodio
1 ml de Hidróxido de Sodio (NaOH) al 5% a Dejar enfriar 10 minutos.
Hidróxido de Sodio cada tubo de ensayo.
(NaOH +

+ 2 gotas de alfa-naftol al 1%.
con 1.5 mL de Dejar enfriar 10 minutos.
2
Albúmina1% alfa-naftol +

+ 2 gotas de hipoclorito de Sodio al
Agregue con un gotero, 2 gotas de alfa-naftol 10%.
hipoclorito de Sodio al 1% a cada tubo de ensayo.

Hidróxido de Sodio 
con 1.5 mL de
(NaOH
3 proteína de Agregue 2 gotas de hipoclorito de Sodio al
trigo 1%. 10% a cada tubo.
+
alfa-naftol 

+ Observar y tomar apuntes de los cambios.

hipoclorito de Sodio

Hidróxido de Sodio
(NaOH

+
con 1.5 mL de
4 5 ml de solución respectiva
Leucina alfa-naftol

hipoclorito de Sodio

Tabla 10 Resumen de las reacciones de aminoácidos en las diferentes técnicas.

NINHIDRINA

(-) incolora (+) Violeta o (+) Rojo o


amarillo claro amarillo
No es proteína, fuerte
proteína ni polipéptido o Hidroxiprolina
aminoácido aminoácido o prolina

BIURET

(-) Azul o (+) Violeta


amarillo Proteínas y
aminoácidos polipéptidos

XANTOPROTÉICA
COAGULACIÓN

(-) Incoloro (+) Amarillo, (-) No (+) Coagula


naranja o coagula
Otros Albúminas o
verde
aminoácidos globulinas
Tirosina,
fenilalanina o Histonas,
triptófano protaminas o
polipéptidos

ADAMKIEWICK o
HOPKINS COLE SULFATO DE AMONIO

(+) Azul o (-) Incoloro (+) Precipita (-) No


violeta Globulinas Precipita
Tirosina o
Triptófano Fenilalanina Albúminas

MILLÓN

(+) Rojo (-) Incoloro

Grupo SH Tirosina Fenilalanina

SAKAGUCHI

(+) Negro o
(-) Incolora gris
(+) Rojo
Otros Cisteína,
Arginina
aminoácidos cistina,
metionina

Tomada:

6.7 PREGUNTAS:

Escriba la reacción para cada una de las pruebas realizadas.


Proponga de acuerdo a la pruebas una clasificación de los aminoácidos
utilizados y relacione la importancia de la aplicación de algunas de estas
pruebas aplicadas a otras áreas del conocimiento como: microbiología,
química de alimentos entre otras.
Para el siguiente pentapéptido, diga cuales pruebas y porque serán
positivas. (ALA-
VAL-GLY-GLU-LYS)
Defina los siguientes términos: aminoácidos, proteínas, análisis
cualitativo, cuantitativo.
7 Practica 3. BIOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

Referente teórico de proteínas y aminoácidos.


Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras
células. Los aminoácidos (compuestos orgánicos) son los ladrillos de
construcción de la proteínas. Los aminoácidos se agrupan de acuerdo con
su comportamiento químico. La síntesis de las proteínas ocurre mediante
la unión entre sí de las cadenas de aminoácidos. Los distintos aminoácidos
imparten diferentes comportamientos químicos en la estructura de
las proteínas. Debido a la presencia de diferentes aminoácidos en las
uniones peptídicas las proteínas reaccionan con una variedad de
compuestos formando productos coloreados.

Los aminoácidos tiene tres tipos de reacciones químicas importantes: (1)


reacciones debido a la presencia del grupo carboxilo (COO- ), (2)
reacciones debidas al grupo amino (NH), y (3) reacciones debido al grupo
R.
Las reacciones debidas al grupo carboxilo y al grupo amino son generales
y se dan para todos los aminoácidos. Las reacciones del radical R son
reacciones específicas; por ejemplo, cisteína da una reacción para azufre,
triptófano da ciertas reacciones de color debido a que su molécula
contiene el grupo indol, tirosina da otras reacciones de color debido a su
grupo fenólico, etc.

Existen reacciones de coloración que son específicas para aminoácidos de


esas proteínas y son importantes tanto para la detección como para el
dopaje de aminoácidos y proteínas. Existen también reacciones generales
porque sirven para caracterizar grupos comunes a todas las proteínas
como grupos amino o uniones

Tabla 11 Descripción de reactivos y métodos.


Método Descripción Desventajas

Biuret Gornell AG, C. J. Bardawill, and M. M. El método se usa para


DAVID. Determination of serum soluciones que tienen de
proteins by means of the biuret.
reaction. J. BioZ. Chem. 177: 751- 0.5 a 10 mg
766, 1949 proteína/ml.

Se basa en la reacción de sales de


Cu+2 con moléculas que contienen
Es un método poco
más de dos enlaces peptídicos en un
sensible. Es útil cuando
medio alcalino; el cobre es reducido
se quiere analizar
a Cu+ formando complejos color
grandes lotes de
púrpura que tienen un máximo de
proteína.
absorción a 540 nm.

Lowry Lowry, OH, NJ Rosbrough, AL Farr,


and RJ Randall. J. Biol. Chem. 193:
265. 1951
Este es un método muy
sensible, por lo que
Resulta de la reacción de Biuret permite trabajar con
sobre los enlaces peptídicos, además soluciones muy diluidas
de la reducción del reactivo de de proteínas (0.02 - 0.5
fosfomolibdato-fosfotungstato (Folin- mg proteína/ ml)
Ciocalteu) por las proteínas
pretratadas con cobre en medio
alcalino, dando una coloración azul,
determinado a 650 nm.

El Cu+ y los grupos R de la tirosina,


triptofano y cisteína reaccionan con
el reactivo de Folin, produciendo un
producto inestable que es reducido a
azul de molibdeno/tungsteno.

Bradford Bradford, M. M. (1976) Anal. Muestra interferencias


Biochem. 72, 248 con detergentes

Basado en el Azul Brillante de


Coomasie G-250 cambia de rojo a
azul, al unirse a residuos aromáticos
y arginina en las proteínas.

La reacción entre el colorante y la


proteína es muy rápida
(aproximadamente 2 min), y el
completo proteína-colorante
permanece disperso en solución por
un tiempo relativamente largo.

Rango de detección: 0.5-10 mg


proteína/ml.

7.1 PROCEDIMIENTO Y MATERIALES

Tabla 12 Materiales y Materiales y reactivos.


Reactivos Materiales Cantidad

Reactivo ninhidrina Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15

NaOH Gradilla 2

Sulfato cúprico (CuSO) Pinza para tubos 2

Ácido Pipetas Pauster con bulbo 4


acético(CH3COOH)

Cloruro de sodio (NaCl) Beaker o vasos de precipitados de 500 5


mL

albúmina Estufa 1

Ácido nítrico (HNO3) Cámara de flujo laminas 1

Hidróxido de sodio Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 4


(NaOH) 10 ml.

Acetato de Plomo Pera de goma para pipetas 4

α Naftol Vidrios reloj grandes

Hipoclorito de sodio Probeta 100 ml

Reactivo de Hopkins- Balón aforado de 25 ml


Cole

Ácido sulfúrico (H2SO) Agitador de vidrio

Reactivo de Millón Balanza analítica

Aminoácidos: Glicina, Espectrofotómetro


tirosina, triptófano,
fenilalanina y arginina
Fenol Micropipeta 10 μL

Albumina de huevo Micropipeta 20- 200 μL

Agua destilada Micropipeta 20- 200 μL

Ácido fosfórico Micropipeta 200-1000 μL

Etanol 1 caja con puntas de 200 μL


(amarillas) para micropipeta

1 caja con puntas de 200 μL


(amarillas) para micropipeta

1 caja con puntas de 1000 μL (azules)


para micropipeta.

Agitador vórtex múltiple para tubos

7.2 REACCIÓN DE BIURET

Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven


por tanto para su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta
reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos
ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye
al liberarse los aminoácidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre
(II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se une con los
enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya
intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

Tabla 13 Procedimiento a realizar para la reacción de Biuret.


Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

CuSO4 al Preparar los tubos de


con 3 mL de 1% ensayo.
4 a 5 gotas de
solución de
1 +  solución de CuSO4
Albúmina de
al 1%
huevo 1% hidróxido Añadir de 4 a 5 gotas
sódico de solución de CuSO4al +
1%
con 3 mL de CuSO4 al 2 ml hidróxido
solución de 1%  sódico
aminoácidos
2 + Añadir 2 ml de solución
Tirosina,
de hidróxido sódico al
Triptófano o hidróxido
20%.
Fenilalanina. sódico

CuSO4 al
1% Agitar para que se
con 3 mL de mezcle.
3 +
Leche 1%

hidróxido
sódico Observar y tomar
apuntes de los
CuSO4 al cambios.
1% con 3 mL de
con 3 mL de solución respectiva
4 Aceite de +
cocina +
hidróxido
sódico Agitar y observar
color violeta, azul o
CuSO4 al amarillo.
1%
con 3 mL de
5 +
Glucosa
hidróxido
sódico
7.3 REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS

Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de


sulfuro de plomo. Se basa esta reacción en la separación mediante un
álcali, del azufre de los aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución
de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

Tabla 14 Reacción De Aminoácidos Azufrados, Grupos SH .


Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

hidróxido Preparar los tubos de 2 ml hidróxido


sódico ensayo. sódico
con 3 mL de
solución de +  +
1
Albúmina de acetato de Añadir 2 ml de solución de solución de
huevo 1% plomo hidróxido sódico al 20%. acetato de
plomo al 5%

+
hidróxido Añadir 10 gotas de
con 3 mL de sódico solución de acetato de
solución de plomo al 5%
aminoácidos +
2 
Tirosina, acetato de
Triptófano o plomo Calentar el tubo hasta
Fenilalanina. ebullición.


hidróxido
sódico Observar y tomar apuntes con 3 mL de
de los cambios. solución
con 3 mL de +
3  respectiva
Leche 1% acetato de
plomo +

El precipitado de color Calentar el


negruzco indica que se ha tubo hasta
con 3 mL de hidróxido formado sulfuro de ebullición.
4 Aceite de sódico
cocina +
acetato de Plomo, utilizándose el
plomo azufre de los aminoácidos

hidróxido
sódico

con 3 mL de +
5
Glucosa acetato de
plomo

7.4 DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS: MÉTODO


DE BRADFORD.

Práctica sugerida de acuerdo a la disposición de los recursos.


INTRODUCCION

Existen varios métodos para determinar la concentración de proteínas de


una muestra, tales como la determinación de la absorbancia a 280 nm, o
mediante la formación de derivados coloreados de las proteínas, base de
los métodos de BIURET o de LOWRY. En estos casos se forma un complejo
coloreado de cobre con el enlace peptídico; en el método de Lowry,
además del complejo anterior también se forma un derivado de las
tirosinas que contribuye a la absorbancia total.

El método de Bradford se basa en el empleo de emplea un colorante


hidrofóbico cuyas disoluciones acuosas en presencia de ácido fosfórico
tienen un color pardo y que, al encontrarse en el entorno hidrofóbico del
interior de una proteína, origina un color azul intenso que se puede medir
fácilmente. Este método depende, pues de la interacción relativamente
inespecífica entre un colorante hidrofóbico y las proteínas, por lo que es
relativamente sensible a la presencia de contaminantes tales como restos
de detergente y líquidos orgánicos como el metanol.
La determinación de proteínas por el método de Bradford consiste en la
cuantificación de la unión de un colorante, el Azul de Coomassie G-250,
a la proteína, comparando esta unión con la de diferentes cantidades de
una proteína estándar (Albúmina de Suero Bovino (BSA)). La
cuantificación se hace midiendo la absorbancia en un espectrofotómetro,
a 595 nm, y graficando la absorbancia vs la concentración de proteínas,
obteniendo una curva de calibración de la proteína estándar. Con esta
curva de calibración, se puede interpolar la concentración de proteínas en
una muestra al medir su absorbancia a 595 nm.

1- Reactivo de Bradford
Azul de coomasie G-250 5 mg
Etanol 2.5 ml
Ácido fosfórico 5 ml
Agua Hasta 50 ml
Mezclar en el orden indicado, disolver con agitación y a continuación filtrar

2-Patrón de albúmina. Disolver 10 mg de albúmina bovina en 10 ml de


agua destilada, con lo que tenemos una disolución madre con una
concentración de 1 mg/ml.

1-Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0 hasta


60 µg; de tal manera que el volumen final en cada tubo sea de 300 µl.

Mezclar para ello el volumen adecuado de la disolución madre de albúmina


bovina de un 1 mg/ml y el correspondiente volumen necesario de agua,
de acuerdo con la siguiente tabla.

METODO

1-Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango desde 0 hasta


60 µg; de tal manera que el volumen final en cada tubo sea de 300 µl.
Mezclar para ello el volumen adecuado de la disolución madre de albúmina
bovina de un 1 mg/ml y el correspondiente volumen necesario de agua,
de acuerdo con la siguiente tabla.

Tabla 15 Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango


desde 0 hasta.
µg (prot) 0 10 20 30 40 50 60

µl (alb) 0 10 20 30 40 50 60

µl (agua) 300 290 280 270 260 250 240

µl total 300 300 300 300 300 300 300

2-Preparación de tres diluciones de la muestra problema:

Hacer una dilución 1:20 de la leche comercial; a continuación realizar


las diferentes diluciones de acuerdo con la siguiente tabla.
Tabla 16 Preparar la curva patrón de albúmina bovina en un rango
desde 0 hasta
Leche diluida A B C

V. leche (µl) 20 25 30

V. agua (µl) 280 275 270

V. total 300 300 300

Finalmente añadir 3 ml del reactivo de Bradford a todos los tubos; tanto


a las diluciones que contienen la albúmina como a las que contienen la
leche diluida. Agitar los tubos y a continuación proceder a la lectura de la
absorbancia a 595 nm en el colorimetro.

RESULTADOS
1- Elaboración de la recta patrón. Para ello representar en el papel
milimetrado adjunto la absorbancia de cada uno de los tubos que
contenían albúmina bovina frente a la cantidad de proteínas
correspondiente. Si se dispone de una calculadora con capacidad para
hacer rectas de regresión, compruebe el coeficiente de correlación de la
recta obtenida. En cualquier caso determine la pendiente de la recta.

2- Para las tres diluciones del problema, interpolar la absorbancia


obtenidas sobre la recta representada para saber la cantidad de proteínas
presentes en cada una de ellas. Alternativamente, haga el cálculo
mediante la pendiente de la recta.

3- Teniendo en cuenta los volúmenes de muestra usados en cada caso y


teniendo en cuenta la dilución realizada, calcúlese la concentración de
proteínas en la muestra analizada. Dar el resultado en gramos de
proteínapor 100 ml de leche.

7.5 PREGUNTAS:

¿Cuáles son los principales métodos colorimétricos usados en la


determinación de proteínas?
¿Cuál es la reacción de un alfa-aminoácido y ninhidrina?
¿Cuál es la reacción con el reactivo de Biuret?
¿Qué proteínas dan positivas con la prueba de Hopkins-cole?

¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo? 2. ¿Cuál


de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización? 3.
¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
4. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret? 5. ¿Una proteína coagulada
podría dar la reacción del Biuret? 6. Si se realiza la reacción del Biuret
sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?
8 Práctica 4: IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

Referente teórico.

Los hidratos de carbono constituyen el grupo de biomoléculas más


abundante sobre la superficie terrestre, representando aproximadamente
el 75 % de la materia orgánica existente. En ocasiones, se denominan
también carbohidratos, azúcares, sacáridos o glúcidos. Todos son
términos que hacen referencia a su sabor dulce, o a que poseen la
composición Cn (H2O)n. Estas moléculas usualmente contienen carbono,
hidrógeno y oxígeno en una proporción de 1:2:1. Los carbohidratos se
clasifican como monosacáridos, disacáridos o polisacáridos, dependiendo
del tamaño y la complejidad de la molécula. Los monosacáridos se
componen de una sola molécula de azúcar. Cuando dos monosacáridos se
unen se produce un disacárido, y cuando dos o más se unen se produce
un polisacárido.

En los animales los carbohidratos son esenciales desde el punto de vista


energético, ya que muchos órganos y células del cuerpo humano, como
el cerebro y los glóbulos rojos, obtienen su energía principalmente de la
glucosa. Pero sus funciones no se restringen a ser únicamente fuente de
energía, sino que también pueden desarrollar funciones estructurales, de
reconocimiento celular y adhesión. Estructuralmente, un hidrato de
carbono típico es una cadena hidrocarbonada con varios grupos alcohol y
un carbono más oxidado, en forma de grupo carbonilo. Este grupo oxidado
puede situarse en el extremo de la cadena (aldehído), o adyacente, en
posición 2 (cetonas)
Ilustración 1 Clasificación de carbohidratos.

Todos los monosacáridos y los disacáridos con enlace mono-carbonilo,


cuando se encuentran en solución a pH alcalino, tienen la capacidad de
reducir otros compuestos. Esta capacidad reside en las características
del grupo carbonilo (C anomérico en formas cicladas) libre. Esta
propiedad, y por tanto, la presencia de un azúcar reductor, se ponen de
manifiesto mediante las reacciones de:

Tabla 17 Diferentes ensayos para reconocimiento en


carbohidratos.
Ensayo Descripción del ensayo

Molisch: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de


carbohidratos en el que los polisacáridos y disacáridos se
hidrolizan con ácido sulfúrico concentrado hasta monosacáridos
y se convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil
furfural los cuales reaccionan con α-naftol formando un color
púrpura violeta.

Fehling -Fehling A: CuSO4 disuelto en H2O

-Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disueltos en agua

(Detecta la presencia de azúcares reductores) Los azúcares


reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ión
Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo
carbonilo del azúcar se oxida a grupo carboxilo. En medio
fuertemente básico, como es en este caso el NaOH, el ión Cu2+
formaría Cu (OH)2 insoluble, por eso se añade tartrato sódico
potásico en el Fehling B (el reactivo de Fehling consta de dos
componentes: Fehling A y Fehling B) que actúa como
estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.

NaOH +Calor

+R

CuSO2  Cu(OH)2  Cu2O (rojo


(azul) ladrillo)

Reacción

Benedict (Detecta la presencia de azúcares reductores) Se basa en la


reducción de Cu2+ a Cu+ en medio básico débil. Aunque es
similar a la reacción de Fehling, el medio básico débil y el
estabilizante (citrato sódico) utilizados hacen que este test sea
más sensible y estable.

-Sulfato cúprico.

-Citrato de sodio.

-Carbonato anhidro de sodio

Barfoed Ácido acético

Acetato cúprico

(Detecta la presencia de monosacáridos) El reactivo de Barfoed


es débilmente ácido y es reducido solamente por
monosacáridos, formándose como producto de reacción óxido
cuproso.

En medio ácido, tan sólo los monosacáridos son capaces de


reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+ así producido reduce al ácido
fosfomolíbdico a un complejo de intenso color azul oscuro.

Ioduro Los polisacáridos sin ramificar forman complejos característicos


cuando reaccionan con yodo. Los ramificados también lo hacen,
pero los complejos formados tienen menos intensidad de color.
Seliwanoff Este ensayo es específico para cetosas y se basa en la conversión
de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensación
con resorcinol formando así complejos coloreados.
Bial El reactivo de Bial contiene orcinol en ácido clorhídrico, el cual
forma complejos de coloración sólo con las pentosas.
Lugol El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro,
permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por
la formación de una coloración azul violeta intensa y el glicógeno
y las dextrinas por formación de coloración roja.

Rotación óptica

Es una propiedad importante que permite identificar los carbohidratos, y


determinar el grado de pureza de los mismos, particularmente
monosacáridos, ocasionada por la presencia de centros asimétricos o
quirales en la estructura molecular, los cuales desvían el plano de luz
polarizada. Esta propiedad no es exclusiva de los carbohidratos pues la
presentan todas aquellas sustancias denominadas óptimamente activas,
por tener en su estructura centros quirales.

Para la medición de la rotación óptica los factores importantes a tener en


cuenta son: La longitud de onda de luz polarizada, la cantidad de material
óptimamente activo, y la naturaleza del solvente cuando se usa. Los
cambios en la temperatura ocasionan solo pequeñas variaciones en las
medidas de la rotación.

Los datos de rotación óptica se representan como |α] = rotación específica


o | M] = Rotación molecular, donde:
|α| = α/LC
α: Rotación observada en grados angulares
L: Longitud en decímetros del paso de luz polarizada a través de la
muestra
C: Concentración en gramos por mililitro.
M: Peso molecular

| M | = M x | α |/100 cuando el plano de luz polarizada se desvía en el


sentido de las manecillas del reloj se antepone un signo positivo al número
de grados que fue rotado el plano de luz.
El plano de luz polarizada hacia la derecha se llaman dextrógiros o dextro
rotatorios, y esa característica se indica anteponiendo el signo (+) al
nombre del compuesto. Los compuestos que desvían el plano de luz
polarizada hacia la izquierda se llaman levógiros o levo rotatorios, y esa
característica se indica anteponiendo el signo (-) al nombre del
compuesto.

O H O H Los prefijos D y L no tienen nada que ver


C C con el carácter dextro/levo rotatorio de la
H – C – OH HO – C – H molécula, sino que indican la posición del
HO – C – H H – C – OH OH del penúltimo carbono en la
H – C – OH HO – C – H representación de Fischer. Para indicar su
H – C – OH HO – C – H poder rotatorio hay que utilizar los signos
CH2OH CH2OH (+) y (-). Da la casualidad de que el D-
D-glucose L-glucose gliceraldehído es dextrógiro (D-(+)-
gliceraldehído) y de que el L-gliceraldehído
es levógiro (L-(-)-gliceraldehído), pero pueden existir compuestos que
pertenecen a la serie D y que son levógiros, como la D-(-)-fructosa.

Ilustración 2 Molécula de glucosa.

8.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO.

Tabla 18 Materiales y reactivos.


Reactivos Materiales Cantidad

Reactivo de Benedict Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15


Reactivo Fehling A y Gradilla 2
reactivo Fehling B

Lugol Pinza para tubos 2

Glucosa Pipetas Pauster con bulbo 4

sacarosa Beaker o vasos de precipitados de 500 5


mL

almidón Estufa 1

Fructosa Cámara de flujo laminas 1

Reactivo Fehling A y B Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 4


ml.

α-naftol Pera de goma para pipetas 4

Vidrios reloj grandes

Probeta 100 ml

Balón aforado de 25 ml

Agitador de vidrio

Balanza analítica

8.2 PRUEBA DE BENEDICT

Es similar a la reacción de Fehling, el medio básico débil y el estabilizante


(citrato sódico) utilizados hacen que este test sea más sensible y estable.

Tabla 19 Prueba de Benedict (detecta la presencia de azúcares


reductores)
Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 ml de
reactivo de
1 Glucosa al
Benedict Preparar los tubos de Agregue a cada tubo
1%
ensayo. de ensayo 2
con 3 mL de
reactivo de  ml de reactivo de
2 sacarosa al
Benedict Benedict
1% Agregue a cada tubo de
ensayo 2 +
con 3 mL
reactivo de
3 de almidón
Benedict
al 1%
con 3 mL ml de reactivo de Baño de agua
de jugo de reactivo de Benedict. hirviente por
4
cebolla al Benedict
 10 minutos.
1%
Tubos de ensayo en un
con 3 mL de
reactivo de baño de agua hirviente
5 Fructosa al
Benedict por unos 10 minutos.
1%

Agite cada tubo de ensayo


con 3 mL reactivo de
6
de agua Benedict Observar y tomar apuntes
de los cambios. Positiva 3 ml de solución
aparece un precipitado respectiva
rojizo, verde o amarillo.

8.3 REACCIÓN DE FEHLING

Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ión


Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del
azúcar se oxida a grupo carboxilo.

Tabla 20 Reacción de Fehling (detecta la presencia de azúcares


reductores)

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 mL de Reactivo Fehling A


1
Glucosa al 1% Reactivo Fehling B Preparar los tubos de ensayo. Añadir reactivo Fehling A y
reactivo Fehling B
con 3 Ml de Reactivo Fehling A 
2 +
sacarosa al 1% Reactivo Fehling B Añadir 1 ml del reactivo Fehling A
y 1 ml del Baño de agua hirviente por
con 3 mL de Reactivo Fehling A
3  10 minutos.
almidón al 1% Reactivo Fehling B
Tubos de ensayo en un baño de
con 3 mL de Reactivo Fehling A agua hirviente por unos 10
4 jugo de cebolla minutos.
al 1% Reactivo Fehling B
con 3 mL de Reactivo Fehling A 
5
Fructosa al 1% Reactivo Fehling B Baño de agua hirviente por

10 minutos.


con 3 mL de Reactivo Fehling A
6 Observar y tomar apuntes de los
Lactosa al 1% Reactivo Fehling B cambios.

3 ml de solución respectiva

Reactivo Fehling A: disolver 7 g CuSO4 · 5 H2O en 100 ml de agua


destilada.
Reactivo Fehling B: 35 g de tartrato de sodio y potasio + 12 g NaOH en
100 ml de agua destilada

8.4 REACCIÓN DE MOLISCH


La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por
la reacción de Molisch, que a cierto punto es la reacción universal para
cualquier carbohidrato. Se basa en la acción hidrolizante y deshidratante
del ácido sulfúrico sobre los hidratos de carbono. En dicha reacción el
ácido sulfúrico cataliza la hidrólisis de los enlaces glucosídicos de la
muestra y la deshidratación a furfural (en las pentosas) o
hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se condensan con
el alfa naftol del reactivo de Molisch (reacción de Molisch) dando un
producto coloreado.

Tabla 21 Reacción de Molisch.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

reactivo de Molisch
con 3 mLde de
1 + Preparar los tubos de ensayo. reactivo de Molisch
Glucosa al 1%
H2SO4  +

reactivo de Molisch Agregue dos gotas de reactivo de Incline el tubo y deposite 1


con 3 mL de Molisch mL de H2SO4
2 +
Sacarosa al 1%

H2SO4
reactivo de Molisch Mezcle bien No mezcle
con 3 mL de
3 + 
Galactosa al 1%
H2SO4 Incline el tubo y deposite 1 mL de
H2SO4 concentrado deslizándolo
reactivo de Molisch lentamente por la pared del tubo.
con 3 mL de Ribosa
4 + 
1%
H2SO4 No mezcle. Sólo coloque el tubo en
posición vertical y observe la
reactivo de Molisch
formación del anillo rojo violeta que
con 3 mL de
5 + aparece en la zona de contacto de los
Fructosa al 1%
dos líquido
H2SO4 3 ml de solución respectiva

+
reactivo de Molisch
con 3 mL de coloque el tubo en posición
6 + vertical y observe la
maltosa al 1%
H2SO4 formación del anillo rojo
violeta

8.5 PRUEBA DE TOLLENS


En primer lugar, hemos de limpiar el tubo de ensayo donde se realizará
el experimento, hirviendo en éste NaOH al 10%. Entonces, se añaden 3
gotas de la muestra problema (o bien 50 mg de sólido), y 2,5 ml de
reactivo de Tollens recién preparado. Agitar el tubo y dejarlo estar
durante 10 minutos. Si al cabo de éste tiempo no se observa reacción, se
calienta el tubo en un baño de agua caliente.

Tabla 22 Prueba De Tollens.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

NaOH al 5%
con 3 mL de solución
1 + Preparar los tubos de ensayo. dos gotas de solución de
Glucosa al 1%
AgNO3 al 5%  α-naftol

NaOH al 5% añadir 2 gotas de una disolución de +


con 3 mL de solución
2 + NaOH al 5% 1 mL de H2SO4
de Sacarosa al 1%
AgNO3 al 5% 
NaOH al 5% ml de disolución acuosa de AgNO3 al
con 3 mL de solución 5%
3 +
de Galactosa al 1%

AgNO3 al 5%
Agitar el tubo y añadir
NaOH al 5%
con 3 mL de solución gota a gota y con agitación NH4OH
4 + 2N, hasta que se consiga disolver el
de Lactosa 1%
precipitado de AgOH
AgNO3 al 5%

NaOH al 5% 3 ml de solución respectiva
con 3 mL de solución No mezcle. Sólo coloque el tubo en
5 +
de Fructosa al 1% posición vertical y observe la
AgNO3 al 5% formación del anillo rojo violeta que
aparece en la zona de contacto de los
NaOH al 5% dos líquido
con 3 mL de solución
6 +
de maltosa al 1%
AgNO3 al 5%

8.6 REACCIÓN DE LUGOL (YODO)


La prueba de yodo se da como consecuencia de la formación de cadenas
de poliyoduro a partir de la reacción entre el almidón y el yodo presente
en el reactivo de lugol.

La amilosa y la amilopectina son componentes del almidón pero la amilosa


es de estructura lineal, con enlaces α (1-4), que forma hélices en donde
se juntan las moléculas de yodo formando un color azul oscuro; mientras
que la amilopectina es de estructura ramificada, con enlaces α (1-4) (1-
6), que forma hélices mucho más cortas y las moléculas de yodo son
incapaces de juntarse presentando un color intermedio entre anaranjado
o amarillo.
8.7 REACCIÓN DE LUGOL (YODO)
La prueba de yodo se da como consecuencia de la formación de cadenas
de poliyoduro a partir de la reacción entre el almidón y el yodo presente
en el reactivo de lugol.

La amilosa y la amilopectina son componentes del almidón pero la amilosa


es de estructura lineal, con enlaces α (1-4), que forma hélices en donde
se juntan las moléculas de yodo formando un color azul oscuro; mientras
que la amilopectina es de estructura ramificada, con enlaces α (1-4) (1-
6), que forma hélices mucho más cortas y las moléculas de yodo son
incapaces de juntarse presentando un color intermedio entre anaranjado
o amarillo.

Tabla 23 Reacción de almidones con lugol (yoduro potásico).

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 ml de solución
1 lugol
Glucosa al 1%
Preparar los tubos de Agregar 5 gotas de lugol
con 3 mL de solución ensayo.
2 lugol
sacarosa al 1%

con 3 mL de solución
3 lugol Agregar 5 gotas de lugol
almidón al 1%

con 3 mL de solución
4 lugol
jugo de cebolla al 1% Observar y tomar apuntes
de los cambios.
con 3 mL de solución
5 de almidón de papa al lugol
1%

3 ml de solución respectiva

6 con 3 mL de agua lugol


Observar y tomar apuntes de los
cambios.

8.8 PREGUNTAS
Explique por qué el monosacárido gliceraldehido da negativa la prueba
Molish.

¿Cuáles son las aplicaciones prácticas de las pruebas estudiadas?


Defina los siguientes términos: carbono anomérico, centro quiral,
levorrotatorio.

Dibuje los monosacáridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa,


clasifíquelos según el número de átomos de carbono y la función principal

Efectué un enlace hemiacetálico y uno hemicetálico, escriba las


diferencias entre ambos enlaces.

Escriba las funciones: aldehídica, cetónica, alcohólica, ácida, colóquelas


en orden de reactividad y explique el porqué de ese orden.

Explique en qué consiste la hidrólisis ácida de disacáridos.

Defina los siguientes términos: azúcar reductor y azúcar no reductor, cite


ejemplos.

Efectué un enlace glucosídico.


9 Practica 5. CARACTERÍSTICAS DE LOS ÁCIDOS GRASOS

Los lípidos (del griego lypos, grasa) son biomoléculas orgánicas formadas
básicamente por
C, H y O, aunque este último elemento se encuentra en proporciones
mucho más bajas que los dos primeros. Además, pueden contener P, N y
S. Constituyen un grupo de sustancias muy heterogéneas con
características químicas diversas, pero con algunas propiedades físicas
comunes, que podrían resumirse en estas dos:
_ Son mayoritariamente insolubles en agua.
_ Son solubles en disolventes orgánicos, tales como éter, cloroformo,
alcanos (ej: hexano), benceno, acetona y alcoholes.

De acuerdo a la estructura química los lípidos se clasifican en dos grupos,


de acuerdo al contenido en su composición ácidos grasos (Lípidos
saponificables) o no lo posean
(Lípidos insaponificables).

La saponificación consiste en una hidrólisis alcalina de la preparación


lipídica (con KOH o NaOH). Los lípidos derivados de ácidos grasos (ácidos
monocarboxílicos de cadena larga) dan lugar a sales alcalinas (jabones)
y alcohol, que son fácilmente extraíbles en medio acuoso.

Tabla 24 Clasificación de lípidos.


Lípidos saponificables Simples Acilglicéridos

Céridos

Complejos Fosfolípidos

Glucolípidos

Lípidos insaponificables Terpenos

Esteroides

Prostaglandinas
9.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO.
Tabla 25 Materiales y Materiales y reactivos.
Reactivos Materiales Cantidad
Aceite de girasol Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15

Agua destilada Gradilla 2

Hexano Pinza para tubos 2

Acetato de etilo Pipetas Pauster con bulbo 4

Etanol Beaker o vasos de precipitados de 500 mL 5

NaOH Estufa 1

KOH Cámara de flujo laminas 1

Reactivo Sudán III Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml. 4

Pera de goma para pipetas 4

Vidrios reloj grandes

Probeta 100 ml

Balón aforado de 25 ml

Agitador de vidrio

Balanza analítica

9.2 SOLUBILIDAD EN LÍPIDOS


Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella
se dividen en pequeñísimas gotitas formando una emulsión de aspecto
lechoso, que es transitoria, puede sepárese en reposo, por reagrupación
de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sitúa
sobre la de agua. Por el contrario, las grasas con solubles en los
llamados disolventes orgánicos como el éter, benceno, xilol, cloroformo,
etc.

Tabla 26 Determinación de solubilidad en lípidos.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 ml de Aceite 4 mL de agua Preparar los tubos de ensayo. 4 mL de hexano


1
vegetal destilada
con 3 ml de Aceite 
2 4 mL de hexano
vegetal
4 mL de hexano

Agite los tubos.

deje reposar unos minutos 3 ml de Aceite vegetal

+
Observar y tomar apuntes de los Agite los tubos
cambios.
+

Dejar en reposo.

Observar y tomar apuntes de los


cambios.

SAPONIFICACIÓN
Muchos lípidos, como por ejemplo: los ácidos grasos, reaccionan con
bases fuertes, NaOH o KOH, dando sales sódicas o potásicas que reciben
el nombre de jabones. Esta reacción se denomina de saponificación. Son
saponificables los ácidos grasos o los lípidos que poseen ácidos grasos
en su estructura.

Tabla 27 Ensayo de Saponificación.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

3 mL de 3 mL de NaOH Agregar manteca en un tubo de


1 ensayo.
aceite vegetal (1 N) Preparar los tubos de ensayo.

3 mL de Agregar 3 mL solución de NaOH


2 3 mL de KOH
aceite vegetal
(1 N).

Agitar.

Baño de agua hirviente por 3 ml de la solución de NaOH (1


N).
10 minutos.
 +

Dejar enfriar. Baño de agua hirviente por

 10 minutos.

Observar y tomar apuntes de los Observar y tomar apuntes de los


cambios. cambios.

Si posible repetir el mismo procedimiento con


KOH

9.3 REACCIÓN CON EL SUDÁN III


El Sudán III es un colorante que se utiliza para detectar específicamente
las grasas, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las
grasas. Al ser de color rojo, cuando se disuelve tiñe las grasas de color
rojo anaranjado.

Tabla 28 Tinción: Reacción con el Sudán III.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 ml de 3 ml de Aceite vegetal


1 Aceite Sudan III
vegetal Preparar los tubos de ensayo.

con 3 mL de 
2 Aceite Tinta roja Agregar 3mL de aceite vegetal.
vegetal

Agregar 8 gotas de Sudan III

8 gotas de Sudan III

Observar y tomar apuntes de los


cambios.
Observar y tomar apuntes de los
cambios.
9.4 PREGUNTAS:

¿Qué son los jabones? ¿Cómo se pueden obtener los jabones?


¿Por qué en la saponificación la glicerina aparece en la fase acuosa?
¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas?
Indica lo que ocurre con las mezcla aceite – sudan III y aceite-tinta y
explica a qué se debe la diferencia entre ambos resultados.
¿Qué ocurre con la emulsión de agua en aceite transcurridos unos minutos
de reposo? ¿Y con la de los otros compuestos empleados? ¿A qué se deben
las diferencias observadas entre ambas emulsiones?
¿Qué ocurre con la emulsión cuando se le añade detergente?
10 BIBLIOGRAFÍA

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