NORMA CHILENA OFICIAL NCh2751.

Of2003

Productos hidrobiológicos - Determinación de plomo

mediante espectrofotometría de absorción atómica

Preámbulo

El Instituto Nacional de Normalización, INN, es el organismo que tiene a su cargo el

estudio y preparación de las normas técnicas a nivel nacional. Es miembro de la
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION
PANAMERICANA DE NORMAS TECNICAS (COPANT), representando a Chile ante esos
organismos.

La norma NCh2751 ha sido preparada por la División de Normas del Instituto Nacional de
Normalización, y en su estudio participaron los organismos y las personas naturales
siguientes:

Centro de Estudios, Medición y Certificación

de Calidad, CESMEC Ltda. Eugenia Barros M.
Ximena Parra S.
Comisión Chilena Energía Nuclear, CCHEN Juan Villalobos A.
Corthorn Quality Chile S.A. Christian Dingemans C.
Fundación Chile Marcela Torres V.
Inspectorate Griffith René González F.
Instituto Nacional de Normalización, INN Laura Avila M.
Patricia Bley L.
Pilar Soto C.
Servicio Nacional de Pesca, SERNAPESCA Sandra Cortés A.
Sociedad General de Control Chile Ltda., S.G.S. Germán Staub N.
Tecnolab S.A. M. Verónica Villarroel R.
Universidad Católica de la Santísima Concepción Mabel Silva
Universidad Católica de Valparaíso - Laboratorio
de Asistencia Técnica M. Cecilia Herrera S.
Universidad Técnica Federico Santa María Gisela Bruhn L.
Isabel Jiménez C.

I
NCh2751

Esta norma se estudió dentro del marco del Proyecto FDI Optimización de la
Certificación de Productos Pesqueros de Exportación, para establecer el método de
determinación de plomo en los productos hidrobiológicos.

Por no existir Norma Internacional, en la elaboración de esta norma se ha tomado en

consideración la norma NCh2313/10.Of96 Aguas residuales - Métodos de análisis -
Parte 10: Determinación de metales pesados; la norma técnica de Procedimiento
LAB/NT2/00 del Servicio Nacional de Pesca de Chile; el método AOAC Official Method
9.2.17 (972.23), 2000, Lead in Fish para la mineralización por vía seca y para la
preparación de la muestra el método AOAC Official Method 35.1.01 (937.07), 2000,
Fish and Marine Products - Treatment and Preparation of Sample - Procedure.

Los Anexos A y B no forman parte del cuerpo de la norma, se insertan sólo a título
informativo.

Esta norma ha sido aprobada por el Consejo del Instituto Nacional de Normalización, en
sesión efectuada el 28 de Noviembre de 2002.

Esta norma ha sido declarada Oficial de la República de Chile por Resolución Exenta N°75,
de fecha 19 de Febrero de 2003, del Ministerio de Economía, Fomento y Reconstrucción,
publicada en el Diario Oficial del 04 de Marzo de 2003.

II
 NORMA CHILENA OFICIAL NCh2751.Of2003

Productos hidrobiológicos - Determinación de plomo

mediante espectrofotometría de absorción atómica

1 Alcance y campo de aplicación

Esta norma establece el método de espectrofotometría de absorción atómica para

determinar el contenido de plomo en productos hidrobiológicos.

2 Referencias normativas

El documento normativo siguiente contiene disposiciones que, a través de referencias en

el texto de la norma, constituyen requisitos de la norma.

NCh426/2 Agua grado reactivo para análisis - Especificaciones - Parte 2: Análisis

físico-químico y microbiológico de agua potable, aguas crudas y
aguas residuales.

3 Términos y definiciones

Para los propósitos de esta norma, se aplican los términos y definiciones siguientes:

3.1 curva de calibración: representación gráfica de la medición de una señal de un

instrumento en función de una cantidad o concentración de analito

3.2 muestra: porción obtenida de un conjunto identificado de unidades, que representan

un lote, obtenida mediante la aplicación de un plan de muestreo con el fin de realizar
pruebas y análisis químicos

3.3 plomo ( Pb ): elemento metálico que puede estar presente en los alimentos de
consumo humano y animal, que en ciertos niveles de contenido máximo establecido
causa daño a la salud, y se determina bajo las condiciones especificadas en esta norma
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NCh2751

3.4 productos hidrobiológicos: productos de las diversas especies marinas o de aguas

interiores, frescos o procesados

4 Principio del método

El método se basa en una digestión preliminar de la muestra para reducir interferencias

de materia orgánica y obtener el ion plomo en forma libre, seguido de atomización de la
solución para cuantificación del plomo, mediante espectrofotometría de absorción
atómica.

5 Aparatos

Los equipos que correspondan deben tener mantenimiento, calibración y/o verificación
vigente.

5.1 Balanza analítica, con resolución de 0,000 1 g.

5.2 Balanza de precisión, con resolución de 0,01 g.

5.3 Campana de extracción de gases.

5.4 Cápsulas, cuarzo, porcelana u otro material apto para calcinación, adecuada al
tamaño de muestra. (Uso exclusivo digestión vía seca).

5.5 Espectrofotómetro absorción atómica, con corrector de fondo equipado con

mechero para llama de aire - acetileno, o absorción atómica con horno de grafito.

5.6 Homogeneizador de alimentos.

5.7 Horno eléctrico o mufla, con dispositivo de control de temperatura, regulable a

450ºC ± 25ºC. (Uso exclusivo digestión vía seca).

5.8 Lámpara de cátodo hueco de plomo o de descarga sin electrodos.

5.9 Material volumétrico, clase A.

5.10 Matraces cónicos u otros adecuados para digestión por vía húmeda.

5.11 Placa calefactora, de temperatura regulable.

5.12 Material de uso habitual en laboratorio.

5.13 Elementos de seguridad, como guantes, anteojos y otros.

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 NCh2751

6 Reactivos y soluciones

6.1 Acetileno extra puro.

6.2 Acido clorhídrico, HCl 37% p.a.

NOTA DE PRECAUCION - El ácido clorhídrico está clasificado en Clase 8: Sustancias corrosivas1).

6.3 Acido nítrico, HNO3, 65% p.a., con contenido de plomo inferior a 0,01 µg/ml.

NOTA DE PRECAUCION - El ácido nítrico está clasificado en Clase 8: Sustancias corrosivas1).

6.4 Acido perclórico, HClO4, 75 % p.a.

NOTA DE PRECAUCION - El ácido perclórico está clasificado en Clase 5, División 5.1: Sustancias
comburentes1).

6.5 Agua, para análisis, clase 1 según NCh426/2.

6.6 Aire, de calidad especificada por el fabricante del espectrofotómetro absorción

atómica.

6.7 Amoníaco en solución, NH3, 25% p.a.

NOTA DE PRECAUCION - El amoníaco en solución está clasificado en Clase 8: Sustancias corrosivas, con
riesgo secundario Clase 2, División 2.3: gases tóxicos1).

6.8 Anaranjado de metilo, indicador p.a. (0,1% en agua).

6.9 EDTA, ácido etilendiamintetraacético C10H16N2O7 p.a.

6.10 Peróxido de hidrógeno, H2O2, 30%, p.a. (Uso exclusivo digestión vía húmeda).

NOTA DE PRECAUCION - El peróxido de hidrógeno está clasificado en Clase 5, División 5.1: Sustancias
comburentes1).

6.11 Nitrato de plomo, Pb (NO3)2 p.a.

6.12 Oxido de lantano, La2O3 p.a.

6.13 Solución patrón de plomo 1 000 mg Pb /L. Disolver 1,598 5 g de nitrato de plomo
(ver 6.11) en una mínima cantidad de ácido nítrico 1+1, agregar 10 ml de ácido nítrico
concentrado (ver 6.3) y aforar a 1 000 ml con agua para análisis (ver 6.5)

NOTA - Alternativamente usar solución patrón comercial.

1) Clasificación de acuerdo a NCh382 Sustancias peligrosas - Terminología y clasificación general, basada

en Recomendaciones de Naciones Unidas.
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6.14 Soluciones estándares de plomo

Preparar una serie de soluciones estándares en el rango óptimo de concentración lineal,

por diluciones apropiadas de la solución patrón de plomo de 1 000 mg/L, manteniendo
la matriz ácida de las muestras.

6.15 Solución buffer, (sólo para usar en caso de turbiedad a simple vista de la muestra,
previo a la atomización).

6.15.1 Dispersar 163 g de EDTA (ver 6.9), sobre 200 ml de agua para análisis contenida
en un matraz aforado de 2 L, agregar amoníaco en solución (ver 6.7), agitando hasta
disolución del EDTA.

6.15.2 Agregar con precaución, 60 ml de ácido perclórico, (ver 6.4), a

aproximadamente 500 ml de agua para análisis, enfriar la solución y agregar 50 g de
óxido de lantano, (ver 6.12), agitando hasta disolución total.

6.15.3 A la solución amoniacal de EDTA (ver 6.15.1), agregar ocho gotas de indicador
de anaranjado de metilo, luego agregar la solución de óxido de lantano (ver 6.15.2)
mientras se agita vigorosamente; si es necesario agregar mayor cantidad de amoníaco
en solución (ver 6.7), para mantener la alcalinidad de la solución al anaranjado de metilo
y aforar a volumen final de 2 L con agua para análisis (ver 6.5).

6.16 Disolución de ácido nítrico 3% y ácido clorhídrico 6%, en fracción de volumen en

agua para análisis.

7 Procedimiento

7.1 Limpieza del material de vidrio

Todo el material de vidrio que se utilice en el análisis se debe lavar con solución detergente
neutro y enjuagar con abundante agua potable. Luego sumergir el material en ácido
nítrico 20% en fracción de volumen por 2 h, retirar y enjuagar con abundante agua para
análisis (ver 6.5).

7.2 Preparación de la muestra

7.2.1 Productos en conserva

Abrir el envase, drenar durante 2 min sobre tamiz Nº7 o Nº12 y preparar el
homogeneizado del producto drenado en homogeneizador de alimentos durante 1 min. El
líquido se puede analizar en forma separada.

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7.2.2 Productos pesqueros congelados

Proceder a descongelar a temperatura ambiente no más de 4 h y descartar el drenado,

eliminar las espinas y la piel de ser necesario y preparar el homogeneizado del producto
en homogeneizador de alimentos.

7.2.3 Productos en salazón

Preparar una solución saturada de cloruro de sodio, NaCl, y sumergir en ella el producto en
salazón algunos segundos, retirar la sal superficial. Sacar de la solución y secar el producto
con toalla absorbente, eliminar las espinas de ser necesario, trozar y preparar el
homogeneizado.

7.2.4 Productos secos y productos hidrobiológicos procesados

Tomar una cantidad representativa y homogeneizar durante 1 min.

7.2.5 Pescado fresco

Limpiar, descamar, eviscerar y homogeneizar durante 1 min como se indica a

continuación:

a) Pescados de tamaño pequeño ( ≤ 15 cm).

En su totalidad.

b) Pescados de tamaño mediano.

Sacar y descartar cabeza, cola, aletas y espinas; cortar en filetes para obtener toda
la carne y piel.

c) Pescados de tamaño grande.

De cada uno de más de tres pescados cortar tres rebanadas en sentido transversal
de 2,5 cm cada una, la primera rebanada justo detrás de la aleta pectoral; la segunda
del medio del pescado, entre la primera rebanada y la abertura anal y la tercera
rebanada después de la abertura anal. Eliminar las espinas.

7.2.6 Mariscos frescos refrigerados y/o vivos

Lavar para remover todo sedimento y lodo suelto, drenar y desconchar. Recuperar
partes comestibles y homogeneizar 1 min.

7.3 Tratamiento de la muestra para ensayo

La cantidad de muestra a pesar debe estar en relación con el contenido máximo de Pb
establecido para el producto a analizar, por lo tanto se sugiere una cantidad equivalente
a un mínimo de 5 g de materia seca para un contenido máximo de 0,2 mg/kg.

Se detalla a continuación dos métodos de digestión alternativos para la mineralización

de la materia orgánica.

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7.3.1 Método por vía húmeda

7.3.1.1 Pesar una cantidad de muestra, M, preparada según 7.2, en un matraz cónico
para digestión (ver 5.10), llevar en paralelo a lo menos dos blancos de reactivos

7.3.1.2 Adicionar cuidadosamente, bajo campana y provisto de los elementos de

seguridad, 20 ml de ácido nítrico (ver 6.3) digerir sobre placa calefactora a ebullición
suave tapando el matraz con vidrio de reloj.

7.3.1.3 Mantener la digestión hasta observar disolución completa de la muestra.

Cuando la solución adquiere color café, retirar el matraz de la placa calefactora, esperar
que se enfríe y agregar 5 ml de ácido nítrico (ver 6.3), continuar con la digestión.

7.3.1.4 De ser necesario, repetir el procedimiento de adición de 5 ml ácido nítrico hasta

que la solución permanezca cristalina; retirar de la placa calefactora, enfriar y agregar
5 ml de peróxido de hidrógeno, (ver 6.10).

7.3.1.5 Calentar nuevamente para eliminar el ácido nítrico, lo que se verifica por la
ausencia de vapores de color pardo; reducir a un volumen inferior al volumen de aforo
final. Evitar durante todo el proceso que se seque la muestra.

7.3.1.6 Retirar de la placa calefactora y enfriar hasta temperatura ambiente. Si la

solución presenta turbiedad, agregar 1 ml de solución buffer (ver 6.15).

7.3.1.7 Trasvasijar cuantitativamente a un matraz volumétrico y aforar con agua para

análisis, (ver 6.5) a un volumen de 10 ml a 25 ml según el contenido de plomo
estimado.

7.3.2 Método por vía seca

7.3.2.1 Pesar una cantidad de muestra, M, preparada según 7.2, en una cápsula.
Distribuir la muestra en forma de obtener la máxima superficie de contacto con un
mínimo espesor.

7.3.2.2 Para muestras con elevado contenido de humedad, secar en estufa a

temperatura hasta de 150ºC; o colocar la cápsula sobre placa calefactora hasta
sequedad.

7.3.2.3 Introducir la cápsula en la mufla fría y lentamente elevar la temperatura

hasta 450ºC ± 25ºC, mantener a esta temperatura y calcinar durante 16 h. Retirar la
cápsula de la mufla y dejar enfriar en desecador a temperatura ambiente.

7.3.2.4 Cuidadosamente disolver las cenizas con 2 ml de ácido nítrico, (ver 6.3) y
evaporar hasta casi sequedad sobre placa calefactora, colocar nuevamente en mufla fría
y calcinar, repetir tratamiento con ácido nítrico y calcinación durante 1 h, hasta
obtención de cenizas blanco-grisáceas y libres de carbón. Llevar en paralelo a lo menos
dos blancos de reactivos.

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 NCh2751

7.3.2.5 Disolver las cenizas con 5 ml de disolución de ácido nítrico - ácido clorhídrico
(ver 6.16), en caso de ser necesario filtrar. Si la solución presenta turbiedad, agregar
1 ml de solución buffer (ver 6.15).

7.3.2.6 Trasvasijar cuantitativamente a un matraz aforado de 10 ml o 25 ml, de

acuerdo al contenido de plomo esperado, lavando la cápsula con sucesivas porciones de
disolución de ácido nítrico - ácido clorhídrico (ver 6.16), hasta completar volumen de
aforo.

7.4 Operación del equipo de absorción atómica

7.4.1 Seguir las instrucciones del fabricante para ajustar las condiciones óptimas de
operación del equipo para detección por llama o por horno de grafito.

7.4.2 Las condiciones instrumentales recomendadas para la determinación de plomo se

indican en Tabla 1:

Tabla 1 - Condiciones del equipo para determinación de plomo

Longitud de onda, mm 217,0 - 283,3 - 261,4

Corrector de fondo Encendido

7.5 Lectura de muestras y estándares

A continuación se detalla procedimiento para detección por llama. Alternativamente usar

horno de grafito para concentraciones no detectadas por este procedimiento.

7.5.1 Lavar el nebulizador aspirando agua que contenga 1,5 ml de ácido nítrico (ver 6.3)
por litro.

7.5.2 Llevar a cero el instrumento.

7.5.3 Atomizar los estándares y registrar su absorbancia para construir la curva de

calibración.

7.5.4 Atomizar la muestra y registrar su absorbancia.

7.5.5 Si la concentración de plomo de la muestra, se encuentra por sobre el intervalo de

calibración lineal, aplicar cualquiera de las siguientes alternativas para efectuar la lectura
en el intervalo de concentración adecuado:

a) Cambiar la longitud del paso óptico (girando el mechero) o seleccionar una longitud
de onda secundaria de menor sensibilidad y libre de posibles interferencias
espectrales. Preparar una nueva curva de calibración de acuerdo a estas
condiciones.

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NCh2751

b) Preparar una dilución de la preparación inicial (se recomienda no aplicar factores de

dilución mayores de 10).

7.5.6 Atomizar los estándares y los blancos al comienzo y al final de cada serie de
mediciones o a intervalo de tres muestras, si las series son de muchas muestras.

7.5.7 Si la solución de la muestra presenta turbiedad, agregar 1 ml de solución buffer

(ver 6.15) a las alicuotas de la muestra y soluciones estándares, antes de atomizar.

NOTA - Al finalizar las mediciones se recomienda aspirar solución de ácido nítrico (5% a 8% en fracción de
volumen) durante 15 min y luego lavar con abundante agua para análisis.

8 Expresión de resultados

8.1 A cada valor de absorbancia de las muestras restar el valor de absorbancia del
blanco de reactivo diluido, en las mismas condiciones de dilución que la muestra.

8.2 Interpolar los valores de absorbancia en la curva de calibración, para calcular la

concentración de plomo en las muestras.

8.3 El contenido de plomo en la muestra está dado por la ecuación:

C ⋅V ⋅ F
Pb =
M

en que:

Pb = contenido de plomo, expresado en miligramos por kilogramos, (mg/kg);

C = concentración de plomo obtenida en la curva de calibración, expresada en

microgramos/ml en solución de la muestra (µg/ml);

V = aforo, expresado en mililitros, (ml);

F = factor de dilución (cuando corresponde);

M = masa de la muestra, expresada en gramos, (g).

NOTA - Equivalencia de unidades: mg/kg = µg/g; mg/L= µg/ml.

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 NCh2751

9 Interferencias

9.1 La presencia de un alto contenido de sólidos disueltos puede generar absorción no

específica, debido a dispersión de la radiación o absorción molecular de banda ancha.

9.2 Este tipo de interferencias se puede corregir mediante el empleo del corrector de
absorción no específica.

9.3 La presencia de un alto contenido de sólidos disueltos también puede provocar una
variación en la velocidad de transporte de la muestra respecto de los estándares de
calibración, efecto de tensión superficial.

9.4 La variación en la velocidad de aspiración puede ser compensada reproduciendo la

condición de matriz en los estándares de calibración.

10 Aseguramiento de calidad

Es altamente recomendable que el laboratorio disponga de procedimientos escritos para

el control de calidad de sus análisis, para asegurar su competencia. En Anexo A se
señala lo que se debería incluir en estos procedimientos, entre otros.

11 Informe de resultados

El informe de resultados debe incluir, a lo menos, la información siguiente:

11.1 Nombre y dirección del laboratorio donde se efectuaron los ensayos.

11.2 Nombre y dirección del solicitante.

11.3 Identificación de la muestra.

11.4 Fecha de muestreo.

11.5 Fecha de recepción de la muestra.

11.6 Fecha y hora de ensayo de la muestra.

11.7 Identificación del método utilizado y condiciones instrumentales.

11.8 Resultados.

11.9 Nombre y firma del responsable.

11.10 Sistema de calidad del laboratorio, si lo tiene (por ejemplo, en base a ISO 17025).

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Anexo A
(Informativo)

Elementos que debería incluir el aseguramiento de calidad

del laboratorio, entre otros

A.1 Descripción de la validación del método de análisis, mencionando el o los materiales

de referencia utilizados.

A.2 Identificación del material de referencia utilizado y analizado conjuntamente con las
muestras.

A.3 Gráficos de control que demuestren que el método de análisis se encuentra bajo
control estadístico.

A.4 Pruebas de recuperación

Adicionar una solución de plomo de concentración conocida a la muestra y verificar que

el porcentaje de recuperación obtenido sea estadísticamente comparable al 100% de
recuperación.

NOTA - Los materiales de referencia deben ser, en lo posible, de una matriz natural y lo más similar a la
muestra a analizar. Se recomienda incluir muestras de un material de referencia (idealmente una cantidad no
inferior a un 5% del número total de muestras) en cada grupo de muestras a analizar, para fines de
demostrar la exactitud de los resultados. Los resultados obtenidos en el análisis de estos materiales de
referencia pueden ser utilizados para los gráficos de control.

A.5 Incertidumbre asociada a la medición.

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 NCh2751
Anexo B
(Informativo)

Bibliografía

[1] Journal of AOAC Official Method of Analysis 55, 727, 733 (1972).

[2] Journal of AOAC Official Method of Analysis 56, 406 (1973).

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NORMA CHILENA OFICIAL NCh 2751.Of2003

INSTITUTO NACIONAL DE NORMALIZACION ! INN-CHILE

Productos hidrobiológicos - Determinación de plomo

mediante espectrofotometría de absorción atómica

Fish and marine products - Determination of lead by atomic absorption spectrometry

Primera edición : 2003

Descriptores: productos hidrobiológicos, productos pesqueros, análisis químico,

determinación de contenido, plomo, espectrofotometría de absorción atómica

CIN 67.120.30; 67.120.99

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