Qualitative Analysis of Carbohydrates  1 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Qualitative Analysis of Carbohydrates  
Julio Francisco 
Florida Institute of Technology 
   
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  2 
 

Abstract: 

The purpose of this experiment was to compare and identify an unknown carbohydrate 

compound to known carbohydrate samples through various of chemical testing. Theses chemical 

testings include the Benedict’s test, molisch test, inversion of sucrose,  Seliwanoff's test, Bial’s 

test, and thin layer chromatography (TLC). After performing all the test, the unknown compound 

was determined to be maltose. However, further testing must be conducted to confirm if the 

unknown carbohydrate is truly maltose.  

 
   
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  3 
 

Introduction: 
The following experiment was conducted to identify an unknown compound using six 

different testing techniques. The unknown compound can be determined by comparing the 

chemical reaction of known carbohydrates by applying various chemical tests. Qualitative data 

were collected. The known carbohydrates used in this experiment were glucose, fructose, 

galactose, arabinose, maltose, ribose, xylose, and sucrose. The following is an overall of the 

applications and usage of each test: 

Benedict’s Test 

The Benedict’s test is important to identify reducing sugars. Under an alkali solution, the 

reducing sugar would be heated resulting in the enolization of sugars. These sugars can 

potentially reduce Cu2+ to Cu+ which results in precipitation of a red copper(I) oxide. Therefore, 

the appearance of a red brick solution indicated the presence of a reducing sugar.  

There are many applications for the Benedict’s test. Since the 1900’s a modified  version 

of Benedict’s test was used to detect glucose in the urine in order to diagnose someone with 

diabetes mellitus. However, the introduction of Clinistix and Tes­Tape supplanted the use of the 

Benedict test since Clinistix and Tes­Tape provided a more accurate reading than the Benedict’s 

test (Ackerman, Williams, Packer,Hawkes, & Abler, 1958).  However, due to the limitation of 

urine glucose monitoring and the rise of blood glucose monitoring, urinary glucose test become 

less frequently used for detection of diabetes mellitus. Today self­monitoring of capillary blood 

glucose is commonly used to determine the blood glucose level for diabetic patient due to a more 

accurate reading than previous testing techniques (Cowart & Stachura,1990). There are many 

other applications of the Benedict’s test to discuss; however, such applications is beyond the 

scope of this paper. 
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  4 
 

 
 

Molisch Test 
The Molisch test is a test for general carbohydrate. In this test, carbohydrate is dehydrate 

to a furfural derivative in the presence of a concentrated acid (e.g. sulfuric acid). The furfural 

react with α­naphthol resulting in the formation of a red or violet color. Therefore, a positive test 

for a carbohydrate is denoted by the appearance of a red or violet colored solution.  

Researcher generally use the Molisch test to determined the presence of carbohydrate in 

variety of substances, from elastin protein to unripened guavas (Misra & Seshadri, 1968; Stein & 

Miller, 1938).  

Bial’s Test 

The Bial’s test is a chemical test used to detect the presence of a pentose molecule. If a 

pentose molecule was presence, then the Bial’s reagent will cause the pentose to dehydrate 

which result in the formation of furfural. The furfural further react with orcinol to give a 

blue­green condensation product. Therefore, the appearance of a blue­green color solution 

indicates the presence of a pentose molecule.  

Seliwanoff's Test for Ketose  

The Seliwanoff's test is used to detect the presence of ketose. If the ketose is presence, 

then the Seliwanoff’s reagent would dehydrate the ketose and form hydroxymethyl furfural. The 

hydroxymethyl furfural will further react with resorcinol giving off a red condensation product. 

Therefore, the presence of a ketose molecule is indicated by the formation of a red colored 

solution. 

 
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  5 
 

TLC for Carbohydrate 

TLC is a technique used to separate molecule from a complex mixture based on particular 

properties of the compounds (e.g. adsorption). Some of the advantage of using TLC method is 

the fact it is simple, expedient, inexpensive, and effective method of separation (Tyrpień, 

Bodzek, & Manka, 2001). The applications of TLC technique is so profound that it will go 

beyond the scope of the paper. 

Experimental Procedure: 

Benedict’s Test 

In the Benedict’s test, 5 ml of Benedict’s reagent was added to 5 test tubes. Then, 1 ml of 

0.1 M of glucose, maltose, arabinose, sucrose, and xylose were individual to each test tube. Place 

in boiling water bath for 5 to 50 minutes. Any color change was observed. 

Molisch Test 

In the Molisch test, 5 ml of 1:10 dilution of glucose, fructose, galactose, maltose, 

arabinose, ribose, xylose, sucrose, and two unknowns were placed into individual test tubes. 

Next, 2 drops of Molisch reagent and 3 ml of concentrated H2SO4 were added and observation 

was recorded. 

Bial’s Test 

For the Bial’s test, add 5 ml of Bial’s reagent to 1 ml aliquots of 0.01 M glucose, 

fructose, arabinose, ribose , and sucrose. Place in boiling water bath for fifteen minutes. Record 

appearance. 

 
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  6 
 

Seliwanoff's Test for Ketose  

For the Seliwanoff’s test, add 5 ml of Seliwanoff’s reagent to 1.0 ml aliquots of 0.01 M 

solutions of glucose, fructose, sucrose, galactose, and ribose. Place in boiling water bath for 

fifteen minutes. Record any changes in appearance. 

Inversion of Sucrose 

For the inversion of sucrose, add 5 ml of 0.1 M solutions of glucose, fructose, maltose, 

arabinose, ribose, xylose, sucrose, and unknown solutions into two different test tubes. Add 5 

drop of concentrated HCl to one test tube and heat both tube in boiling water bath for 10 

minutes. Afterward, add 5 ml of benedict’s reagent to test the presence of reducing sugar. 

Thin­Layer Chromatography of Carbohydrate 

In the TLC experiment, spot 0.1 M of sugar solutions and the unknown solutions with a 

capillary tube onto an activated silica gel plate. Allow the spot to dry. After the spot has been 

dried, place the plate into a glass block chromatocab filled with solvent to the 0.5 cm level. 

Allow the solvent to rise for twenty minutes. Remove the plate from the from the chromatocab in 

order for the plates to be analysis.  

  
Results: 
Table 1. Carbohydrate Identification Table. The following table demonstrate the observation for 
each test applied on individual carbohydrates. The shaded regions represent the omission of 
certain carbohydrate from certain test.  
Carbohydrate  Benedict’s  Molish Test  Bial’s Test  Seliwanoff's  Inversion of 
Test  Test  Sucrose  

Glucose   Red  Brown Color   Light peach  Gold color  No change 

Precipitate  color 
Formed  
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  7 
 

Fructose     Dark brown  Dark red  Bloody red  No change 

color  color  color 

Galactose     Red color    Light yellow  No change 

Maltose   Amber color  Red color      No change 

with 
precipitation 
in the bottom 

Arabinose   Amber color  Dark Red  Yellow color    No change 

with  color 
precipitation 
in the bottom 

Ribose     Light brown  Light silver  Dark yellow  No change 

color  color   color 

Xylose     Brown color      No change 

Sucrose   No color  Red color  Dark red  Bloody red  Sucrose was a 

change   color  color  darker hue in 
comparison to 
other 
carbohydrate 
compounds  

Unknown 1  A fusion of  Red color  Peach color  Peach  No change 

amber and 
blue color 
with 
precipitation 
formation 

Unknown 2           

Unknown 3           

Unknown 4           
 
Six carbohydrate identification tests were performed and the observation was recorded 

(Table 1). First, the molisch test was used to detect any carbohydrate. A positive result for the 

molisch test is indicated by the appearance of a red to violet color. Among all carbohydrate 
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  8 
 

tested, four carbohydrates changed to a red color. This includes galactose, maltose, arabinose, 

and sucrose. On the other hand, glucose, fructose, ribose, and xylose changed to a brownish 

color.  

The next test was the Benedict’s test which is common use to detect reducing sugars. A 

positive test for the Benedict’s test is indicated by the formation of yellow, green, or red 

precipitation. Glucose, maltose, arabinose, and unknown are the only carbohydrates that 

indicated a positive result for the benedict’s test. Furthermore, sucrose did not showed any color 

changes.  

The third test was the Bial’s test which is used to detect the presence of pentose. The 

presence of a pentose is indicated by the appearance of green­blue or olive­green color. The 

Bial’s test was conducted on solutions with glucose, fructose, arabinose, ribose, sucrose, and an 

unknown compound. None of the compounds gave an indication of a pentose.  

The next experiment conducted was the Seliwanoff’s test. The Seliwanoff’s test is used to 

detect the presence of a ketose. A positive result is indicated by the appearance of red color. 

Fructose and sucrose are the only two compounds that gave a positive result for the presence of 

ketose.  

The last test was the inverse of sucrose. Sucrose was the only carbohydrate that produced 

a different darker blue than other carbohydrate solution.  
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  9 
 

 
Figure 1.Thin Layer chromatography analysis of glucose, fructose, galactose, maltose, 
arabinose, ribose, xylose, sucrose, and unknown 1, 2, and 3. Solutions of 0.1 M of sugar 
compound were spotted onto a silica­based gel plate and allowed to dry. Once dried, the spotted 
plates were transferred into a glass chromatocab containing of approximately 500 mL solvent. 
The solvent consist of chloroform, glacial acetic acid, and water (v/v 30:35:5). The solvent was 
allowed to run to a height of 7 cm for approximately 20 minutes. Next, the plate was removed 
from the chromatocab for further analysis. It was determined that unknown 1 had similar 
migration pattern as maltose.  
 
A thin layer chromatography was conducted to identify the unknown compounds by 

comparing spots of the unknown compounds to known carbohydrate solution (Fig. 1).  It was 

observed that unknown 1 traveled the same distance as maltose. Furthermore, unknown 3 
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  10 
 

traveled the same distance as galactose, and unknown 4 travel similar distance as arabinose. 

Unknown 2 did not appeared in the TLC.  

Discussion: 

The first test was the Benedict’s test. The Benedict’s test is used to identify the presence 

of reducing sugar. A positive result is denoted by the formation of a yellow, green, or red 

precipitate. In the Benedict’s experiment, it was revealed that glucose, maltose, and arabinose 

gave a positive result for such test. On the other hand, ribose and sucrose gave a negative result 

indicating that the these two carbohydrates are non­reducing sugars. The result for the Benedict’s 

experiment was consistent with known facts. Also, the Benedict’s test indicated that the 

unknown compound is a reducing sugar. 

The second test was the Molisch test which is an eminent test used to detect the presence 

of soluble carbohydrate. A red to violet color is a positive indication of a carbohydrate. It was 

expected that all of the carbohydrate used would give a positive result. However, only galactose, 

maltose, arabinose, and sucrose gave a positive result. Glucose, fructose, ribose, and xylose gave 

a negative result. This may be due to the action of sulfuric acid (Dreywood, 1946). Since the 

carbohydrate was “burned” by the sulfuric acid, further testing must be conducted to ensure that 

experiment was performed properly. Furthermore, the unknown compound gave a positive result 

indicating that the unknown compound is a carbohydrate. 

The next test performed was the Bial’s test which is used to detect the presence of 

pentoses. The presence of pentose is indicated by the appearance of a bluish­green or olive­green 

color. None of the compounds gave a positive result for the Bial’s test. This is unexpected since 

arabinose, ribose, xylose are pentose molecules and, therefore, these molecules should indicated 
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  11 
 

a positive result for the Bial’s test. It can be assumed that the there might be an error that 

occurred in the experiment.  

The Seliwanoff’s test is used to detect the presence of ketoses. The compounds that gave 

a positive result were fructose and sucrose. It was unexpected to see that sucrose received a 

positive result due to the fact that sucrose is a disaccharide composed of both glucose and 

fructose. It can be postulate that the Seliwanoff's reagent reacted with the fructose component of 

sucrose leading to a positive result. Furthermore, the unknown compound did not gave a positive 

result for the Seliwanoff’s test, and therefore, the unknown compound could be potential be a 

pentose.  

In the inversion of sucrose, the only compound that changed appearance was sucrose. 

Invert sugar is the process of breaking down sugar, such as sucrose, into its individual 

monosaccharide components. Since sucrose is the only disaccharide used in this experiment that 

can be broken down, the result was consistent with the expected.  Also, this test indicates that the 

unknown compound is not a sucrose molecule since the compound does not undergo the process 

of inversion. 

The last experiment was the thin­layer chromatography. Based on the migration pattern, 

unknown 1 traveled the same distance as maltose. This indicated that the unknown compound 

may be maltose. Based on all the experimental tests performed, unknown 1 is a non­sucrose, 

reducing sugar. Also, the unknown compound can potential be a pentose; however, the Bial’s 

test must be perform properly to confirm that the unknown compound is truly a pentose 

molecule. With these information in mind, it can be postulate that unknown 1 is truly maltose. 
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  12 
 

Unknown 2,3, and 4 cannot be identified due to the lack of data. Further improvement 

must be made for future experiments. In particular, additional trials must be conducted to 

determine if the experiment is valid. Only one trial was performed in this experiment which does 

not give a good representation of the test performed and, therefore, addition trials is essential. 

   
  
Qualitative Analysis of Carbohydrates  13 
 

References:  

Ackerman, R. F., Williams, E. F., Packer, H., Hawkes, J. H., & Abler, J. (1958). Comparison of 

benedict's solution, clinitest, tes­tape and clinistix. Diabetes, 7(5), 398­402. 

doi:10.2337/diab.7.5.398 

Cowart, S. L., Stachura, M. E. (1990). Glucosuria. In Walker H.K., Hall W.D., Hurst J.W. (Ed.), 

Clinical methods: The history, physical, and laboratory examinations (3rd ed., pp. 

653­657). Boston: Butterworths. 

Dreywood, R. (1946). Qualitative Test for Carbohydrate Material. Industrial & Engineering 

Chemistry Analytical Edition,18 (8), 499­499. DOI: 10.1021/i560156a015. 

Experiment 5: Chemical Properties of Carbohydrate. 

Misra, K. & Seshadri, T. R. (1968). Chemical components of the fruits of psidium guava. 

Phytochemistry, 7(4), 641–645. doi:10.1016/S0031­9422(00)88240­0  

Stein, W. H., & Miller, E. G. (1938). The composition of elastin. Journal of Biological 

Chemistry, 125(2), 599­614. 

Tyrpień, K., Bodzek, P., & Manka, G. (2001). Biomedical Chromatography : BMC, 15, 50. 

DOI:10.1081/SPM­120025026