UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE QUÍMICA
LABORATORIO UNIFICADO DE FISICOQUÍMICA
Castelán Gómez Margarita, Sánchez Sánchez Sergio Omar

FORMACION DE LIPOSOMAS PARA LA ENCAPSULACION DE FERTILIZANTE

RESUMEN

En el presente trabajo se desarrolla la metodología para la formación de liposomas con la finalidad

de encapsular el ingrediente activo de un fertilizante, en este trabajo se utilizó el fertilizante Rosasol
20-20-20+TE de la marca ROSIER, para su liberación prolongada. Se trató la yema de huevo con
una proporción 2:1 etanol – tensoactivo, posteriormente se caracterizó con una solución de
cloroformo (2mL), acetona (2mL) y ácido sulfúrico (2mL). Para mayor eficacia en la formación de
liposomas, se utilizó colesterol puro de la marca SIGMA, Life Science en tratamiento con etanol y
Tween 80, evaporando el disolvente utilizado para posteriormente hidratar con vapor de agua. Las
pruebas de caracterización finales fueron IR (índice de refracción), absorbancia, pH y tamaño de
partícula. Con el último estudio, se determinó que las partículas (liposomas) formadas fueron de
142nm, tamaño dentro del rango reportado por la literatura: 100-200nm para mayor estabilidad.

INTRODUCCIÓN

Los liposomas son nanopartículas esféricas que tienen un rango de tamaño que va de 20 – 500 nm
de diámetro. Al ser huecas, tienen la finalidad de encapsular el ingrediente activo de alguna
sustancia con el propósito de que éste sea liberado en un medio de manera continua. Este tipo de
agregados son utilizados en su mayoría por la industria farmacéutica. Aterrizando este tema a la
aplicación en fertilizantes, es con el motivo principal de que los sustratos que contiene el fertilizante
sean aprovechados con mayor eficacia por las plantas. El sustrato que desea ser encapsulado, se
guardará en los liposomas según la naturaleza del mismo. En la figura 1. se muestra un esquema
que representa la encapsulación en liposomas.

a) b)

Figura 1. a) Carga hidrofílica y b) Carga lipofílica.

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Los liposomas se clasifican de tres maneras basándose en su tamaño:

a) SUV (Small Unillamelar Vesicles): tamaño de partícula 20 – 70 nm

b) LUV (Large Unillamelar Vesicles): tamaño de partícula 70- 400 nm
c) GUV (Giant Unillamelar Vesicles): tamaño de partícula 10 – 100 µm

La estabilidad de éstos dependerá del tamaño de partícula, es por ellos que los más estables tienen
un tamaño que varía de 100 – 200 nm. Cabe destacar que los liposomas son estructuras
sumamente estables debido a las fuerzas hidrofóbicas de las cadenas hidrocarbonadas y las
interacciones iónicas de las cabezas cargadas con el agua.

DISEÑO EXPERIMENTAL

Dada que la formación de liposomas está dada por capas lipídicas, se decidió realizar estas
estructuras con colesterol, extrayéndolo de la yema de huevo, para lo cual se realizaron 5 muestras
con diferentes tensoactivos para determinar con cual podría obtenerse mayor cantidad de
colesterol. Una vez realizado el tratamiento se caracterizaron las muestras bajo la reacción de
Salkovsky y posteriormente se seleccionaron las muestras con mayor parecido entre sí (coloración
y volumen de precipitado). Para la formación de las estructuras se decidió trabajar con Tween 80 y
colesterol siguiendo el método de formación de inyección de éter, debido a la falta de este reactivo,
se modificó utilizando etanol y realizando inyección rápida y lenta para las muestras de Tween 80,
mientras que la muestra de colesterol se realizó la mezcla en bulto.

Para la caracterización de las muestras, antes y después del tratamiento para la obtención de
liposomas, se realizaron disoluciones de fertilizante, tomando muestras de pH, IR (índice de
refracción), tamaño de partícula, así como la absorbancia. Al no observar cambios notables con la
toma de absorbancia, pero sí en el cambio de pH e IR, la toma del tamaño de partícula en las tres
muestras preparadas se concluyó que había la presencia de liposomas.

DATOS EXPERIMENTALES

• Obtención de colesterol, muestras con diferentes tensoactivos.

Tabla 1. Variación de tensoactivos para la obtención de colesterol de la yema de huevo.

Tensoactivo Volumen de
tensoactivo (mL)
Span 20 10
Tween 20 10
Tween 80 10
Alcohol Tridecílico 10
Alcohol Etoxílico 10

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 Figura 2. Tratamiento con tensoactivos para Figura 3. Prueba de caracterización en base a
obtención de colesterol. la reacción de Salkovsky.

Los tensoactivos que mejor resultado dieron para la obtención de colesterol, fueron: Tween 20,
Tween 80 y alcohol tridecílico. De éstas tres opciones, se seleccionaron las dos con las cuales se
obtuvo mayor cantidad de lecitinas precipitas, es decir, opción 3 y 4: Tween 80 y alcohol tridecílico.
Para la caracterización del colesterol se tomó una muestra de los tubos 2, 3 y 4 para colocarlos en
un vaso de precipitados a los cuales se les añadió acetona, cloroformo y ácido sulfúrico (2mL de
cada sustancia), las mezclas se tiñeron de un color rojo quemado, al compararlas con la
caracterización del colesterol puro (SIGMA, Life Science) se observó una gran similitud con las
muestras de los tubos 3 y 4, los cuales contenían el Tween 80 y alcohol tridecílico respectivamente,
por lo que se infiere que la obtención de colesterol a partir de la yema de huevo fue exitosa.

Para la formación de liposomas se utilizó el método de inyección de etanol rápida, lenta y mezclado
en bulto.

En la inyección rápida se tomó 1g de Tween que se diluyó en 4mL de EtOH para inyectarlo de forma
rápida en una disolución que contenía 0,175g de fertilizante en 2,5mL de agua, esta se calentó a
60-70°C para la evaporación del solvente y formar una película lipídica que después se hidrató con
vapor para lograr lo formación completa de liposomas.

En la inyección lenta se tomaron las mismas medidas para las disoluciones. Al momento de la
inyección, la disolución del fertilizante se mantuvo en baño María a una temperatura de 60°C, se
realizó la inyección de forma lenta para después dejar enfriar la mezcla a temperatura ambiente y
estabilizar la mezcla.

En el mezclado en bulto se diluyó 0,001g de colesterol en 4mL de EtOH, esta mezcla se le agrego
a la disolución del fertilizante (0,175g de fertilizante en 2.5mL de agua) que se mantuvo a 60°C para
evaporar el solvente y formar una película en el vaso que después se hidrató con vapor de agua.

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 Figura 4. Inyección rápida Tween 80 - EtOH Figura 5. Inyección lenta Tween 80 - EtOH Figura 6. Mezclado en bulto - EtOH

CARACTERIZACIÓN

Se tomaron muestras de la disolución de fertilizante antes del tratamiento para la formación de

liposomas y tenerla como referencia. Para la caracterización de los liposomas se hicieron tres
pruebas, medición del pH, índice de refracción y determinación del tamaño de partícula. En la
determinación del pH e índice de refracción se realizó la prueba a la muestra de referencia como a
la muestra después del tratamiento para comparar los resultados y determinar si se formaron o no
los liposomas. Para la determinación del tamaño de partícula se utilizó un analizador de tamaño de
partícula basado en el método de dispersión de la luz obteniendo los datos siguientes.

Tabla 2. Caracterización de liposomas

Tamaño Tamaño
partícula partícula pH antes pH IR antes IR
Método Mezcla mínimo máximo del después de después
(nm) (nm) tratamiento del tratamiento de
tratamiento tratamiento
Rápida Tween 80 - 149 956 4.5 7.60 1.3355 1.3387
Etanol
Lenta Tween 80 – 142 1029 4.5 7.29 1.3351 1.3390
Etanol
Bulto Colesterol - 250 1728 7 7.34 1.3352 1.3352
Etanol

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 Grafico 1. Inyección rápida Tween 80 - EtOH Grafico 2. Inyección lenta Tween 80 - EtOH

Grafico 3. Mezclado en bulto Colesterol - EtOH

ANÁLISIS DE RESULTADOS

De acuerdo a los gráficos que se mencionaron en el apartado de resultados, destacan los siguientes
puntos:

a) Gráfico 1. (Inyección rápida Tween 80 – EtOH): Se obtuvieron mayor número de partículas

con diámetro menor (149.97nm). A pesar de que visualmente no se observó algún cambio
notable, ya que se mantuvo la coloración azul sin presentar algún cambio en turbidez.
El mayor número de partículas pequeñas se obtuvieron en esta técnica.
b) Gráfico 2. (Inyección lenta Tween 80 – EtOH): Se observa mayor número de partículas de
tamaño 1029nm, por otro lado, visualmente se observó una solución opaca y turbia.
c) Se observó un cambio de pH ácido (4.5) a neutro – básico: 7.56 después del tratamiento, lo
que podría explicarse por la encapsulación.
d) La formación de liposomas utilizando colesterol puro, no resultó de la manera prevista, ya
que se obtuvieron el mismo número de partículas de dos tamaños:250 y 1728nm.
e) El IR aumentó después del tratamiento, es decir, disminuyó la velocidad de la luz en el medio,
esto podría ser atribuido a que se formaron partículas que impiden el libre paso de la luz.

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CONCLUSIONES
a) El alcohol tridecílico como el Tween 80 son buenos para la extracción del colesterol de la
yema de huevo.
a) El Tween 80 es un mejor tensoactivo para lograr la formación de liposomas.
b) La inyección rápida a temperatura ambiente favorece la formación de liposomas por encima.
de la inyección lenta y el mezclado en bulto.
c) La inyección de etanol e hidratación con vapor de agua, resultó de utilidad para la formación.
de liposomas y la encapsulación del fertilizante dentro de estos.
d) La estabilidad de los liposomas depende del tamaño de estos, así como la técnica utilizada
para la formación de los liposomas.

REFERENCIAS

a) www.ucm.es
b) Pedro Lorenzo Fernández, “Farmacología básica y clínica”, editorial Medica Panamericana,
Mar 2, 2015.
c) http://www.lipomize.com/es/liposomas-que-son
d) http://www.personal.us.es
e) https://liposomas.wordpress.com/2010/11/17/tecnicas-de-fabricacion-de-los-liposomas/
f) https://es.slideshare.net/ingridjohanasierramejia/practica-colesterol
g) Eva Irma Vejar Rivera, “Practicas de Bioquímica Descriptiva, editorial Universidad de
Sonora, Feb., 23, 2010