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CRICIÚMA, 2018
INTRODUÇÃO
O sistema proposto, tem a finalidade de identificar os bacilos Gram negativos,
oxidase negativa e fermentadores da glicose. Essa identificação é realizada através de
10 provas bioquímicas a partir de 5 meios de cultura, que associados à leitura da
fermentação da lactose, permitem uma identificação segura da bactéria questionada
(LABORCLIN, 2004).
Os 5 tubos de meios de cultura, fornecem a leituras das seguintes provas
bioquímicas (NEWPROV, 2018):
Desaminação do L-Triptofano (LTD) ou Triptofano-Desaminase (TRI)
Produção de gás sulfídrico (H2S)
Fermentação da glicose (GLI)
Produção de gás a partir da glicose (GAS)
Descarboxilação da L-Lisina (LIS)
Produção de Indol (IND)
Descarboxilação da Ornitina (ORN)
Motilidade (MOT)
Utilização do citrato como única fonte de Carbono (CIT)
Fermentação da Rhamnose (RHA)
MATERIAIS E MÉTODOS
Materiais:
1. Placa com o cultivo da bactéria a ser identificada.
2. Minikit de provas bioquímicas para enterobactérias.
3. Bico de Bunsen.
4. Alça bacteriológica.
5. Agulha bacteriológica.
6. Óleo mineral estéril.
7. Reativo de Kovacs
Métodos:
1. Escolher uma colônia isolada e, com auxílio de agulha bacteriológica flambada,
recolher metade desta colônia.
2. Inocular no primeiro tubo por picada e estria na superfície inclinada do meio,
deixando a tampa frouxa.
3. Sem flambar, semear o segundo tubo por dissolução, selar com óleo mineral
estéril e fechar bem a tampa.
4. Ainda sem flambar, semear o terceiro tubo, com picada central única, deixando
a tampa do tubo frouxa.
5. Recolher a outra metade da colônia e semear no quinto tubo através de
dissolução; selar com óleo mineral estéril e fechar bem a tampa.
6. Voltar ao quarto tubo com a agulha bacteriológica e estriar a superfície. Este
tubo deverá ser deixado por último para receber inoculo leve, assim como para
evitar arraste de nutrientes do meio original com a agulha, uma vez que estes
nutrientes poderão dar reações falso positivas. A tampa do tubo deverá
permanecer frouxa.
7. Incubar os 5 tubos a 35º ± 2º C por 18 a 24 horas. (LABORCLIN, 2004).
Leitura:
TUBO 1 - MEIO DE EPM (ágar inclinado verde):
Permite a leitura das provas do LTD, Glicose, Gás e H2S. O LTD (desaminação
do L-Triptofano) é evidenciado pelo desenvolvimento de cor verde-garrafa no ápice do
tubo. A leitura da Glicose é feita pela observação de coloração amarela na base do tubo,
com ou sem produção de gás, evidenciado pela ruptura do meio ou a formação de
bolhas. A produção de gás sulfídrico é verificada pelo aparecimento de cor negra.
RESULTADOS
REFERÊNCIAS
LABORCLIN. Kit para enterobactérias. Disponível em:
<http://www.interlabdist.com.br/dados/produtos/bula/doc/34248cac45c55984.pdf>
Acesso em: 05 de mai. de 2018.
ANEXOS
FOTOGRAFIA 1 – Tubos 1 ao 5 da esquerda para direita, após 24h na estufa.