Microbiología General y Bucal

Práctica 1: El laboratorio de
Microbiología
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Descripción
Un laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para manejar y estudiar microorganismos.
El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estándares técnicos y de seguridad propios de un laboratorio
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes en la muestra por lo q
precauciones para evitar contaminaciones que den lugar a resultados erróneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaución por su potencial patogenicidad.
Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que deben ser esterilizad
Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura común sin haber sido esteri
El el laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en caso de vertidos:
Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido con solución desin
desinfectante fenólico diluido, etc.). Aclarar con agua los restos de desinfectante.
En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas metálicas, limpiar posteriomente para evitar el
En caso de derramamientos de material peligroso o formación de aerosoles: evitar inspiraciones de
minutos hasta que las partículas se hayan depositado y limpiar con mascarilla, guantes y otros útile
En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con desinfectante y posteriormente cubrir con
desinfectante. Dejar durante 15 minutos y limpiar. En caso necesario aclarar con agua.
En caso de derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel humedecido y pos
necesario.
Los laboratorios deberán disponer de los aparatos e instrumental necesario para el correcto desarrollo de s
Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiología Clínica que impliq
medios e instrumentos, con el fin de asegurar la adecuada realización de los aislamientos, identificación y
y la realización precisa de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos como referencia terapéutica. E
contemplar la existencia de registros de formación de personal.
es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de protección personal en el manejo de
Los equipos del laboratorio deben funcionar de forma que se asegure la reproducibilidad de los resultados
El laboratorio deberá estar bajo la dirección y responsabilidad de un facultativo con la especialidad corresp
para realizar aquéllas determinaciones clínicas que el laboratorio tenga autorizadas.
El personal técnico y sanitario del laboratorio deberá disponer la titulación adecuada para las funciones qu
la legislación vigente.

Estructura de un laboratorio de Microbiología Clínica

Área administrativa
Área de recepción de muestras
Área de extracción que deberá:
Disponer de material de un solo uso para contacto con muestras biológicas.
Disponer de un área de extracciones y toma de muestra, una sala de espera para los pacientes y los servicio
Disponer de personal legalmente autorizado para la toma de muestras.
Disponer de un manual de extracción, toma y transporte de muestras.
El manual antedicho deberá ser elaborado por el responsable
Área de trabajo: análisis y procesado de muestras
El puesto de trabajo debe debe de estar limpio y ordenado

El material necesario debe prepararse antes de empezar a trabajar y colocarse de forma adecuada para que
evitarán accidentes y se minimizará el riesgo de contaminación
Nunca se debe pipetear con la boca. Utilizar siempre elementos manuales o automáticos.
Todo el material utilizado debe estar estéril.

1. Elementos y materiales más frecuentes de un laboratorio de Microbiología Clínica

1.1. Mesas de laboratorio y fregadero

1.2. Vitrinas y armarios

1.3. Mechero Bunsen

Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del mechero (zona asépt
En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama
Antes de comenzar a trabajar se procurará disponer de todo el material necesario para el procesamiento de
Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminación de las muestras o/ y cultivo por microorganism

1.4. Gradillas

1.5. Estufa de incubación

Es una cámara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.

Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura óptima de crecimiento (gene

1.6. Frigorífico o cámaras refrigeradas

Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos.
Generalmente están a una temperatura fija de 4ºC.
1.7. Congeladores
Se utilizan para la conservación de reactivos y microorganismos a temperaturas inferiores a 0ºC, llegando
20º, -40º y -80º).
1.8. Microscopio óptico
1.9. Centrífuga
Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrífuga lo que permite la separación de los distintos comp
la precipitación en el fondo del tubo de las partículas en suspensión.

1.10. Cámaras de seguridad biológica (ver practica 2)

1.11. Desionizador de agua.

La mayor parte de los trabajos que se realizan en un laboratorio de Microbiología Clínica necesitan la utili
de evitar cualquier tipo de interferencia. Entre otra características debe: estar exenta de materiales en susp
entre 5,0 y 7,5. Durante años se ha utilizado agua destilada, en la actualidad los destiladores se han ido ab
a desionizadores que funcionan con resinas de intercambio iónico. También se pueden utilizar otras técni

1.12. Contador de colonias: Es un aparato que mediante la iluminación de la placa y una lupa, nos permi
colonias y por tanto facilita su recuento.
1.13. Balanzas

1.14. Baños termostáticos: son recipientes que contienen agua y un sistema de regulación de la temperatu
medios de cultivo o incluso para incubar cultivos de microorganismos.

1.15. Agitador/ mezclador

vortex agitador horizon

1.16. Jarras de anaerobios:
Recipientes que se usan para conseguir una atmósfera libre de oxígeno para el cultivo de microorganismos

1.17. Asas de siembra:

Se utilizan para sembrar. Pueden ser metálicas o de plástico, curvas o rectas (para la siembra por picadura)

1.18. Ph-metros:
1.19. Material fungible

Placas de Petri: recipientes para la preparación de medios de cultivo sólidos

Placas de Petri con medio sólido

Tubos con medio líquido

Tubos con medio sólido

Pipetas de vidrio, de plástico y pipeteadores.

Pipetas
 Pipeteador automático Pipeteador man

Pipetas automáticas (micropipetas) y puntas de pipeta:

Se utilizan para pipetear pequeñas cantidades de líquidos.
Se utilizan con puntas desechables de distinto tamaño y color según la micropipeta. Existen cuatro tamaño
20-200 µm y de 200-1000 µm.

Asas acodadas o Asas de Digralsky:

Se utilizan para la extensión de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri

Portas y cubres
Para realizar las observaciones al microscopio.

Vasos de precipitados y matraces

Cucharas y espátulas:
Se utilizan para pesar muestras o medios de cultivo.

Área de limpieza de material y eliminación de residuos

Zona donde se procede a la esterilización mediante autoclave del material utilizado. El material desechabl
reciclave se procede a la eliminación de residuos y lavado. De esta manera el material queda dispuesto par

Área de esterilización
Procedimiento por el que se consigue la muerte de todos los organismos vivos y formas de resistencia en

Autoclave
Es el equipo más utilizado.
Es un procedimiento de esterilización mediante calor húmedo. Se realiza en al autoclave durante 15 ó
115°C ó 121°C, según la naturaleza del material que se desee esterilizar.
Autoclavado: es un procedimiento en el que se emplea vapor a presión (a 1 atmósfera). Como tiene gran po
y el tiempo utilizados son menores que los que se emplean con el horno Pasteur (121º C, 15-20 minutos).

Se utiliza para esterilizar: Medios de cultivo, ropa, material de plástico resistente al calor húmedo, ob
con la humedad y sobre todo material de vidrio.

Horno de Pasteur: emplea altas temperaturas (160-180º C) durante un tiempo prolongado (1.5 a 3 ho
capacidad de penetración se usa para esterilizar vidrio y metales. Actúa principalmente desnaturalizan
secundariamente oxidando los compuestos celulares.
Área de preparación de medios
Almacén de reactivos
Área de seguridad microbiológica
Debe ser una zona diferenciada y aislada para la manipulación de microorganismos susceptibles de formar
infecciosos.

Asas microbiológicas y su uso

Por Quistián García Hylary

1) Asa en argolla o anillos, no calibrada.

Generalmente son de alambre de nichrome. Sirve para la siembra por estrías e

inoculaciones en general.

2) Asa recta o en hilo.

Sirve para trasladar una sola colonia a medios de identificación, o sub-cultivo.

3) Asa de platino en anillo.

Calibrada para tomar 0.001 ml, para uro-cultivo.

4) Asa espatulada.

Para manipular colonias duras y tomar muestras.

5) Asa de alambre grueso en “L”

Para purificar colonias de hongos y procedimientos especiales.

6) Aguja de disección con punta aguda.

Para purificar colonias pequeñas y distribuir las preparaciones de hongos en fresco.

Por Ramírez Hernández Jessica

Las asas bacteriológicas deben ser totalmente cerradas, de un diámetro no superior a 3 mm y

con un vástago no mayor de 5 cm y deben sujetarse en mangos de metal, no de vidrio.

El asa bacteriológica es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta de una base que
puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que puede ser de nicromo,
tungsteno platino que termina o en aro o en punta.
Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inóculos (pequeño volumen que contiene
microorganismos en suspensión) desde la solución de trabajo también llamada “solución
madre” al medio de cultivo (sólido o líquido) o de un medio a otro (resiembra). También sirve
para la realización de frotis.
La cantidad de inóculo que se trasvasa viene determinado por el diámetro del aro final del
filamento, que se encuentra calibrado y normalmente oscila entre 0,1 y 0,01 ml.
Descripción y Aplicación: Asa bacteriológica, de níquel cromo, con mango de aluminio,
calibradas y sin calibrar, para siembra de muestras de cultivos.

Característica: Color negro

Medida: Diámetro punta 1/100 5mm

Presentación: Paquete con10 piezas

Información técnica

Calibre del alambre 22 a. w. g.

Longitud del mango 20 cm+-5%

Longitud del asa 6.5 cm+-5%

Longitud total 26.5 cm+-5%

Característica: Color rojo

Medida: Diámetro Punta 1/1000 3 mm

Presentación: Paquete con 10 piezas

Información técnica

Calibre del alambre: 22 a. w. g.

Longitud del mango 20 cm+-5%Longitud del asa 6.5 cm+-5%

Longitud total 26.5 cm+-5%

Características: Punta recta sin calibrar.

Presentación: Paq c/10 piezas

*Información técnica:

Calibre del alambre 22 a. w.g.

Longitud del mango 20 cm+-5%

Longitud del asa 6.5 cm+-5%

Longitud total 26.5 cm+-5%

Asa redonda

Para diluciones:

 Metálica

 platino

Diámetros en:

Asa recta para Inoculación y/o Picadura

 Metálica
 platino

Asa metálica:

•Redonda con mango

Por Rascón Castrejón Lizeth

El asa bacteriológica o asa de platino es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta
de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio, y un filamento que puede ser
de nicromo, tungsteno, o platino que termina o en un arito de 5mm o en punta.

Se emplea para transportar o arrastrar inóculos (pequeño volumen que contiene

microorganismos en suspensión) desde la sustitución, solución de trabajo también llamada
“solución madre” al medio de cultivo (solido o liquido) o de un medio a otro (resiembra).
También sirve para la realización de frotis.

Cantidad de inocula que se trasvasa viene determinando por el diámetro del aro final del
filamento, que se encuentra calibrado y normalmente oscila 0.01 y 0.001 ml.

Existen varios tipos:

1) Asa de siembra estéril: Son de plástico y desechables, se les identifica por colores de cada
una.

2) Asa de siembre por radiación: De solo un uso en poli estireno, gran flexibilidad, también se
les identifica por colores.

3) Asa de siembra metálica: Son de metal y entre ellos se pueden distinguir entre un asa en
forma de anillo, en forma de lanceta, o en forma de aguja.

Por Rangel Osorio Hugo

Asas bacteriológicas de platino.

El asa bacteriológica o asa de platino es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta
de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que puede ser
de nicromo, tungsteno o platino que termina o en un arito de 5 mm o en punta.

Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inóculos (pequeño volumen que contiene
microorganismos en suspensión) desde la solución de trabajo también llamada “solución
madre” al medio de cultivo (sólido o líquido) o de un medio a otro (resiembra). También sirve
para la realización de frotis.

Por Rascón Castrejón Lizeth

El asa bacteriológica o asa de platino es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta
de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio, y un filamento que puede ser
de nicromo, tungsteno, o platino que termina o en un arito de 5mm o en punta.

Se emplea para transportar o arrastrar inóculos (pequeño volumen que contiene

microorganismos en suspensión) desde la sustitución, solución de trabajo también llamada
“solución madre” al medio de cultivo (solido o liquido) o de un medio a otro (resiembra).
También sirve para la realización de frotis.

Cantidad de inocula que se trasvasa viene determinando por el diámetro del aro final del
filamento, que se encuentra calibrado y normalmente oscila 0.01 y 0.001 ml.

Existen varios tipos:

1) Asa de siembra estéril: Son de plástico y desechables, se les identifica por colores de cada
una.

2) Asa de siembre por radiación: De solo un uso en poli estireno, gran flexibilidad, también se
les identifica por colores.

3) Asa de siembra metálica: Son de metal y entre ellos se pueden distinguir entre un asa en
forma de anillo, en forma de lanceta, o en forma de aguja.

Por Reyes Marcial Luis Diego

Las asas se utilizan para sembrar. Constan de una base que puede estar hecha de platino,
aluminio, acero y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o platino. En general las
asas son empleadas para transportar arrastrar o trasvasas inoculos de un medio a otro.
También sirven para la realización de frotis.

Asa de platino: su uso principal es trasvasar inoculos de un medio a otro, de igual manera se
usa también al momento de sembrar por estrías. Su aro generalmente mide unos 6 mm.

Aguja de inoculación: esta es un asa con una punta, su uso principal es la siembra por picadura
en tubos.
Asa acodada: se utilizan para la extensión de microorganismos sobre la superficie de un medio
de cultivo en placa.

Embalaje de alimentos[editar]

Folios de aluminio cubriendo diversos elementos.

Las hojas de aluminio se emplean en el embalaje de alimentos, proporcionando un aumento

de su vida de consumo, de esta forma puede verse en bebidas, lácteos y otros productos
sensibles. La hoja actúa en estos casos como una barrera contra la luz (que acaba degradando
las grasas), los olores, las bacterias, y evitando que se gane o pierda humedad. Las láminas de
aluminio se emplean también como elementos de cocina para elaborar tartas,
cocinar pescados, carnes, etc.13

El uso casero de estas hojas está muy extendido a lo largo del mundo y puede encontrarse en
casi cualquier nevera envolviendo a los alimentos (generalmente con la intención de prevenir
olores), para portar alimentos como los sandwichs en un almuerzo, o en las tiendas de take-
away o comida rápida, por ejemplo en Estados Unidos los restaurantes de cocina tex-
mex ofrecen los burritos envueltos en hojas de aluminio, en Europa se ofrece de la misma
forma los kebab turcos.

Aislante[editar]

 El papel de aluminio se utiliza también muy ampliamente como aislamiento

térmico (barrera y reflectividad)14, en los intercambiadores de calor (conducción de
calor) y los cables de electricidad (barrera y conductividad eléctrica). Las láminas en
una aleación especial son utilizados incluso en las intervenciones estructurales en
forma de panal de algunos componentes estructurales de los aviones. El papel de
aluminio debido a su alta conductividad y características hacen que sea un accesorio
en los filtros de tabaco hookah: una hoja de papel de aluminio perforado que se coloca
entre el carbón y el tabaco.

 En oficinas donde la entrada del sol es muy agresiva, se acostumbra a tapar la ventana
con una lámina de madera cubierta con este papel.
En la cocina[editar]

Kimbap en una hoja de alumnio, uno de los usos más habituales en casa.

El papel de aluminio también se utiliza en las barbacoas de algunos de los alimentos más
delicados, tal y como las setas y hortalizas; Los alimentos son envueltos en papel de aluminio y
posteriormente colocado en la parrilla y evitar de esta forma la pérdida de humedad que
puede dar lugar a una texturas menos atractivas.

Como es el caso con todos los elementos metálicos, el papel de aluminio reacciona
al microondas de forma negativa15 y debe evitarse su empleo. Esto se debe al efecto de los
campos eléctricos de las microondas causan la acumulación de cargas de forma brusca en
algunas partes puntiagudas de la hoja aluminio; Si se acumula bastante carga se descarga a un
lugar diferente de la lámina, creando una chispa (por ejemplo arcos). Debido a la frecuente
utilización de los servicios de alimentación, esta comúnmente conduce a incendios en la cocina

¿De qué material está compuesto la espátula de laboratorio?

La espátula de laboratorio está formado por 2 partes:

 Una lámina plana de metal (también puede ser de porcelana) cuyo borde es afilado.

 Un mango que puede ser de metal, madera o plástico.

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Si la espátula es de acero inoxidable, garantizará una duración mas prolongada así como su
facilidad para limpiar los residuos de las sustancias que hemos utilizado. Esto nos dará una
fiabilidad de no contaminar las sustancias con las que trabajemos en los próximos ensayos.
La calidad de la espátula depende de la resistencia y flexibilidad de la hoja. Tenemos 2 tipos de
espátula:

 Espátula de hoja angosta y flexible: se usan para superficies pequeña.

 Espátula de hoja ancha y flexible: se usan para superficies grandes.

¿Cuál es la función de la espátula?

Se utiliza para tomar pequeñas muestras de sustancias (o compuestos) en

polvo (generalmente granulares) para realizar diversas operaciones como: pesarlo, disolverlo,
etc..

Propipeta

Utensilio de goma, creada especialmente para asegurar la transferencia de líquidos de todo

tipo, especialmente los que poseen propiedades específicas (infecciosos, corrosivos, tóxicos,
radiactivos o estériles).

Propipeta

Se utiliza en conjunto con la pipeta.

Forma de Uso

 Para expeler el aire se debe presionar la válvula “A” sobre la parte superior del bulbo.

 Succione el líquido hacia arriba presionando la válvula “S” ubicada en la parte inferior.

 Para descargar presione la válvula “E” que se encuentra al costado de la válvula “S”.

Las tres válvulas posen bolillas de vidrio que controlan el vacío para un preciso trabajo de
llenado y vaciado de las pipetas.

El gotero es un instrumento de laboratorio, el cual se usa para trasvasar pequeñas cantidades

de líquido vertiéndolo gota a gota.
El gotero también es conocido con el nombre de cuentagotas. Es un tubo hueco terminado en
su parte inferior en forma cónica y cerrado por la parte superior por una perilla o dedal de
goma.
Se utilizan los goteros para añadir reactivos, líquidos indicadores o pequeñas cantidades de
producto de un recipiente a otro.

El uso de los goteros o cuentagotas esta limitado cuando se requiere precisión en la cantidad
de líquido vertido. Para esos casos existen instrumentos más apropiados como la pipeta o
la bureta.

Los materiales de los cuales pueden estar hechos los goteros son: aluminio o plástico,
plástico, vidrio, silicio.
Frasco de laboratorio, vidrio ámbar

Frascos de laboratorio, vidrio de borosilicato 3.3, vidrio ámbar, con rosca según DIN EN ISO
4796-1, tapón de rosca azul y anillo de vertido azul de PP, con graduación, rotulación blanca.

Modelo: DESIGNACIÓN

7253380 Frasco de laboratorio, vidrio ámbar, 100 ml, redondo

7253386 Frasco de laboratorio, vidrio ámbar, 250 ml, redondo

7253390 Frasco de laboratorio, vidrio ámbar, 500 ml, redondo

7253393 Frasco de laboratorio, vidrio ámbar, 1000 ml, redondo

7253394 Frasco de laboratorio, vidrio ámbar, 2000 ml, redon

Cultivos bacterianos
Colonias de bacterias Escherichia coli (más grande, rosa) y Proteus vulgaris
(más pequeña, de color castaño) que crecen juntas en una placa Petri. En
circunstanciasnormales estas bacterias son inofensivas y habitan en el intestino
humanofavoreciendo la digestión, si bien pueden convertirse en patógenas y p
roducir infecciones del tracto urinario. Los científicos y médicos llevan a cabo c
ultivosbacterianos y estudian sus características con el fin de adquirir conocimi
entosrespecto a las enfermedades bacterianas y su prevención.

Para que sirve una caja de Petri?

Son utilizadas en bioquímica para llevar a cabo cultivos de microorganismos.

2. ¿Cuál es la finalidad de utilizar materiales estériles en el laboratorio?

El propósito del proceso de esterilización es destruir la contaminación microbiana delos

productos no estériles. La destrucción microbiana mediante agentes físicos oquímicos sigue
una ley exponencial, que nos permite calcular la probabilidad
desupervivencia de un microorganismo a partir de la dosis suministrada en eltratamiento. La
probabilidad de supervivencia está en función del número y tipos demicroorganismos (carga
biológica), de la letalidad del proceso de esterilización y enalgunos casos, del medio ambiente
en el que se encuentren los microorganismosdurante la esterilización.

3. ¿De que esta formada el asa bacteriológica?

Son varillas metálicas o de vidrio que llevan de un extremo alambre de platino; cuandoEl
alambre es recto se llama aguja y cuando el alambre forma un anillo de diámetrovariable en su
extremidad tómale nombre de asa.

4.- ¿Utilidad del mechero Bunsen?

Dispositivo que se utiliza mucho en los laboratorios debido a que proporciona unallama
caliente, constante y sin humo. Debe su nombre a Robert Bunsen el que lo creo.Los mecheros
Bunsen constan de un tubo vertical, enroscado en su parte baja a unpie por donde entra el
gas.Mediante un aro metálico móvil se regula la entrada de aire.La mezcla se enciende por la
parte superior.