PRACTICA DE CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

ACEITE ESENCIAL DE ORÉGANO

BARBOSA JAIME ANNY

RIVERA ANAYA ÁNGEL
VEGA USTARIZ JUAN LUIS

ING: SIRCARLOS MOLINA

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE INGENIERÍA Y TECNOLOGÍAS
INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
QUÍMICA INDUSTRIAL
VALLEDUPAR-CESAR
2018-01
 INTRODUCCIÓN
La cromatografía agrupa un conjunto importante de diversos métodos que facilitan
la separación, detección e identificación de compuestos estrechamente
relacionados en mezclas complejas. En todas las separaciones cromatografías, la
muestra se disuelve en una fase móvil que puede ser un gas, un líquido etc, la cual
se hace pasar, a través de una fase estacionaria inmiscible fija, en una columna o
en una superficie sólida. Las dos fases, se eligen de tal forma que los componentes
de la muestra se distribuyen en cantidades distintas entre la fase móvil y la fase
estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase
estacionaria, se mueven con mucha lentitud con el flujo de la fase móvil, en cambio,
los componentes unidos débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez.
Como consecuencia de las distintas velocidades de migración, los componentes de
la muestra se separan en bandas o zonas distintas que se pueden analizar en forma
cualitativa y cuantitativa.
Cromatografía en Capa Fina Entre los métodos de cromatografía en plano, están la
cromatografía en capa fina (TLC) y la cromatografía una gota de la muestra cerca
de uno de los extremos de la placa y se debe marcar su posición con un lápiz. Luego
que se ha evaporado el solvente en el que estaba disuelta la muestra, se coloca la
placa en un recipiente cerrado y saturado con los vapores del solvente, con el que
se efectuará el proceso. Uno de los extremos de la placa, se introduce en el solvente
de desarrollo, pero se procura evitar el contacto directo de éste con la muestra. Una
vez que el solvente de desarrollo se desplazó la mitad o las dos terceras partes de
la longitud de la placa, se retira ésta del recipiente y se seca. Las posiciones de los
componentes de las muestras se determinan entonces por cualquiera de los
siguientes procedimientos; 1. Métodos Químicos y 2. Métodos Físicos.
1. Métodos Químicos: Consisten en realizar una reacción química entre un reactivo
revelador y los componentes separados, para ello se aplica un nebulizado sobre la
placa con los reactivos reveladores (ver figura Nº 3). Generalmente se utiliza como
reactivo revelador yodo, el cual forma complejos coloreados, con los componentes
orgánicos (con tonos amarillo-marrón). Asimismo, existe otro reactivo revelador
bastante utilizado, es el ácido sulfúrico, que reacciona con los componentes
orgánicos, produciendo manchas negras. También, es utilizado el permanganato
potásico, que deja unas manchas de color amarillo. El tamaño de las manchas, no
está relacionado con la cantidad de componente separado. Además de estos
reveladores generales, existen otros específicos: 2,4-dinitrofenilhidracina para
aldehídos y cetonas, Verde de bromocresol para ácidos carboxílicos,
Paradimetilamino benzaldehido para aminas, Ninhidrina para aminoácidos.
2. Métodos Físicos: El más común, consiste en añadir al adsorbente, un indicador
fluorescente, de tal forma, que al colocar la placa bajo una lámpara ultravioleta y
dependiendo del indicador y de la longitud de onda, aparecen manchas.
OBJETIVOS

 Conocer la técnica de cromatografía en capa fina (ccf), sus características y

los factores que en ella intervienen.
 Determinar algunos de los componentes de los aceites esenciales del
orégano a través de la cromatografía de capa fina.
 Identificar los flavonoides y terpenoides como compuestos principales del
aceite esencial de orégano.
 Calcular valores de Rf de sustancias

MARCO TEORICO
Cromatografía
En 1906, el botánico Ruso M. Tswett realizó un experimento que condujo al
descubrimiento de lo que hoy conocemos como cromatografía. Colocó un
extracto de pigmentos vegetales en la parte superior de una columna de vidrio
rellena de carbonato de calcio (CaCO3). Al agregar éter, observó que la mezcla
original se separaba en diversas bandas coloridas que descendían a través de
la columna a diferentes velocidades. Un rasgo característico de la cromatografía
es la presencia de dos fases; dispuestas de tal manera que mientras una
permanece estacionaria dentro del sistema (fase estacionaria), la otra se
desplaza a lo largo de él (fase móvil). La clave de la separación en cromatografía
es que la velocidad con la que se mueve cada sustancia depende de su afinidad
relativa por ambas fases (equilibrio de distribución). En el experimento de
Tswett, la separación de los pigmentos vegetales se logró gracias a que cada
uno de ellos tenía una afinidad diferente por las fases. En general, los
componentes más afines a la fase estacionaria avanzan lentamente (más
retenidos) mientras que los más afines a la fase móvil (menos retenidos) se
mueven con mayor rapidez. Por consecuencia, el medio cromatográfico
(columna, placa o papel) funciona como un controlador de la velocidad de cada
sustancia que constituye la mezcla, logrando así su separación y mediante el
uso de un detector, su caracterización química. Aunque los principios
fundamentales son los mismos, se acostumbra clasificar los métodos
cromatográficos según el estado físico de la fase móvil: Cromatografía líquida.
La fase móvil es un disolvente o mezcla de disolventes y la fase estacionaria un
sólido que interactúa con las sustancias que se desea separar (cromatografía
líquido-sólido), o bien un líquido inmiscible con la fase móvil, depositado en la
superficie de un sólido (cromatografía líquido-líquido). Esta forma de
cromatografía puede realizarse con diferentes arreglos experimentales: en
columna, en capa delgada o en papel. En el primer caso, la fase estacionaria
se encuentra rellenando un tubo; en el segundo, se dispersa sobre una lámina
de vidrio o aluminio formando un lecho de espesor uniforme; en la cromatografía
en papel, la fase estacionaria es la solución acuosa contenida en el interior de
las celdas formadas por las fibras de la celulosa, y es por tanto una forma de
cromatografía líquido líquido.

Cromatografía de gases. En este caso la fase móvil es un gas inerte (helio o

nitrógeno) y la fase estacionaria es un sólido (cromatografía gas-sólido) o un
líquido “sostenido” por un sólido inerte (cromatografía gas-líquido). Este tipo de
cromatografía siempre es en columna, ya que es la única manera de que la fase
móvil gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema. La columna
puede estar rellena con la fase estacionaria, en forma semejante a la
cromatografía líquida, o bien la fase estacionaria puede depositarse sobre las
paredes de un tubo muy delgado (0.25mm de diámetro) y largo (hasta 100m).
Este tipo de columnas se conocen como columnas capilares y proporcionan la
mayor capacidad de separación. De acuerdo con el mecanismo de retención, la
cromatografía se puede clasificar en los siguientes tipos:

 adsorción (normal, de fase reversa)

 partición líquido-líquido  intercambio iónico
 permeación sobre gel
 De afinidad
Las áreas de aplicación son muy diversas y abarcan prácticamente todas las
actividades en las que interviene la química, por ejemplo: se emplea en: El
análisis de drogas y fármacos en fluidos biológicos como la saliva, la sangre, la
orina; Seguir la transformación de las sustancias responsables de la transmisión
neurológica; Determinar la presencia de contaminantes en el medio ambiente;
Descifrar la composición de los combustibles fósiles; Realizar el control de
calidad de los productos químicos y farmacéuticos manufacturados; en fin, la
lista de ejemplos es interminable

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una capa, uniforme,

de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los
requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo
que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de
adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Es
preciso también poder guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa
para activarlas. La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un
sólido. La fase estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo
general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes
que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares. Polaridad de
los compuestos orgánicos en orden creciente:
Hidrocarburos < olefinas < flúor < cloro < nitro < aldehído
 Aldehído < Ester < alcohol < cetonas < aminas < ácidos < amidas

La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros

métodos cromatográficos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya que el
utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las
separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. Pueden
usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruirían el cromatograma. El
método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles, lo que hace
que sea un método adecuado para fines analíticos. Al realizar la elección del
adsorbente se debe tener en cuenta el tamaño de las partículas del adsorbente,
cuanto más finamente dividido esté mayor será su adhesión al soporte, aunque
también se le puede añadir un adherente. En la elección del eluyente influyen
varios factores:
 Precio.
 Pureza.
 No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad).
 No utilizar compuestos muy volátiles.
 Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).
La elección del eluyente se realiza de forma empírica. Hay que estudiar la
polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares.

Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos

coloreados con los componentes orgánicos (con tonos amarillo-marrón), pero las
manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente señalar las
manchas aparecidas. Otro reactivo revelador bastante utilizado es el ácido sulfúrico,
que reacciona con los componentes orgánicos produciendo manchas negras. Sin
embargo debe tenerse en cuenta que el tamaño de las manchas no está relacionado
con la cantidad de componente separado.
 MATERIALES Y REACTIVOS

Placa cromatografía aceite esencial de orégano ácido acético

Ciclohexano beaker 100 ml pipeta 10 ml

Éter silica gel

 PROCEDIMIENTO
 Se Preparó la fase móvil ciclohexano (14,75ml) , éter(9,75ml) y ácido
acético(0,25)
 Con un capilar se aplicó la muestra (aceite de orégano) sobre la silica gel

 Una vez aplicada la muestra sobre la placa, ocurre un proceso en el cual una
muestra es arrastrada a lo largo de la fase estacionaria, por una fase móvil.
La forma más común, de realizar una corrida cromatografía es depositar.

 Se espera media hora, hasta que la muestra alcance un desplazamiento

considerado.
 Después es aplicado el revelador que idéntica los flavonoides tractivo de
godin y es secado en la mufla por una hora a 100 °C, posteriormente es
llevado a la luz visible.
CALCULO DEL RF