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TRABAJO PRÁCTICO Nº 7: PROBLEMAS DE CINÉTICA ENZIMÁTICA

Problema 1:
Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reacción catalizada
por una enzima hipotética son:
[S] (moles/l) V (µmoles/min)
5x10-2 0.25
-3
5x10 0.25
-4
5x10 0.25
5x10-5 0.20
-6
5x10 0.071
-7
5x10 0.0096

a) ¿Cuál es la velocidad máxima para esta reacción?


b) ¿Por qué la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10 -4 M
c) ¿Cuál es la concentración de enzima libre para una [S] de 5x10 -4 M?
d) ¿Cuál es la Km de la enzima?
e) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10-6
y [S]=1x10-1
f) Calcular la concentración de producto formado en los cinco primeros minutos de reacción
utilizando 10 ml de una disolución de sustrato 2x10-3 M.

Problema 2:
Se estudió la actividad de la enzima ureasa, que cataliza la reacción:
CO(NH2)2+H2O  CO2+2NH2
en función de la concentración de urea, con los resultados siguientes:

Concentración de urea (mmoles dm-3) 30 60 100 150 250 400


V inicial (mmoles urea consumidos min-1 mg enzima-1) 3,37 5,53 7,42 8,94 10,70 12,04
¿Cuáles son los valores de Km y Vmáx para esta reacción?

Problema 3:
Se investigó el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reacción catalizada
enzimáticamente sobre un solo sustrato, obteniéndose los siguientes resultados

Concentración de sustrato Concentración del inhibidor


(mmol L -1) (mmol L -1)
0 0.5 1.0
Velocidad de reacción  (mol L -1 min-1)
0.05 0.33 0.20 0.14
0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) ¿De que manera actúa el inhibidor? B) Obténgase los valores para Vmáx, y Km.

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Problema 4:
A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar de que manera está
actuando el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad máxima.
[S] mM µg producto/h µg producto/h
(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)
2 139 88
3 179 121
4 213 149
10 313 257
15 370 313

PROBLEMAS PARA RESOLVER

Problema 5:
Calcular qué velocidad se obtendrá en una reacción enzimática si la velocidad máxima es
igual a 100 y la concentración de sustrato es a) 10 Km b) Km/3.
Sol.: a) 91 %; b) 25%

Problema 6:
Se detectó actividad de una determinada enzima en extractos de hígado y cerebro. Para
dilucidar si la actividad detectada era atribuible a la misma enzima presente en ambos
órganos, o a especies distintas de la enzima propias de cada órgano, se llevaron a cabo
estudios cinéticos con distintos sustratos. Uno de los sustratos, ensayado siempre bajo
idénticas condiciones en 1 ml de volumen total incluyendo 0,1 ml de extractos de cada
órgano, resultó ser transformado a las siguientes velocidades iniciales:

Concentración de sustrato Velocidad (moles/min)


(moles/ml) Hígado Cerebro
1 0,14 0,085
2 0,23 0,14
5 0,39 0,23
10 0,50 0,30
Den las características de la enzima que puedan ser determinadas a partir de estos datos, y
muéstrese cuáles de ellas son de interés en relación con la cuestión de la identidad de las dos
enzimas.
Sol.: los valores de Km son los mismos

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Problema 7:
La fructosa difosfatasa (que cataliza la hidrólisis de la fructosa difosfato a fructosa-6-fosfato y
fosfato) es inhibida por AMP. Los siguientes datos se obtuvieron a partir de un estudio de la
enzima del hígado de rata:
FDP (moles ml-1)
4 6 10 20 40
-1 -1 -1
AMP (moles ml ) Velocidad inicial (moles ml min )

0 0,059 0,076 0,101 0,125 0,150


8 0,034 0,043 0,056 0,071 0,083
Comentar estos resultados en relación a las constantes cinéticas en cada caso.
Sol.: Km 8 moles ml-1; Vmáx sin inhibidor 0.185 moles ml-1 min-1; Vmáx con inhibidor
0.102 moles ml-1 min-1

Problema 8:
Habiéndose conseguido aislar de Salmonella typhimurium una enzima (E) que cataliza la
reacción A→P, se decidió hacer un estudio estructural y cinético de dicha enzima:

[A] mM 1,00 0,55 0,25 0,20


V(mmol P/ min) 1,00 0,71 0,50 0,41
V (nmol P/min) con J 0,66 0,41 0,25 0,20
donde J es un inhibidor de E cuya influencia como tal se quiere estudiar. [J] = 0,25mM.
a) Calcular la Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformación A--P en
presencia de E.
b) Que tipo de inhibidor es J?
c) Cuál sería el efecto sobre la Vmax de la enzima, un aumento de la concentración de J?

Solución: Se calcula siguiendo el mismo procedimiento que el problema 4


a) Vmax = Vmax’ = 1.66 mmol P/min
b) KM = 0.5 mM
c) KM’ = 1.25 mM (con inhibidor) (Inhibición Competitiva)

Problema 9
La cinética de una enzima viene determinada como función de la concentración de sustrato
en presencia y ausencia del inhibidor I.
[S], Mx10-5 0.3 0.5 1.0 3.0 9.0
V(µmol/min) sin inhibidor 10.4 14.5 22.5 33.8 40.5
-4
V(µmol/min) con inhibidor 10 M 2.1 2.9 4.5 6.8 8.1
a) Calcular la Km y la Vmax en presencia y ausencia de inhibidor
b) Que tipo de inhibidor es?
Solución: Se calcula siguiendo el mismo procedimiento que el problema 4
a) Vmax = 50 µmol/min
b) Vmax’ = 9.5 µmol/min
c) KM = 1.1x10-5 M
d) Inh. No Competitiva