Laboratorio No 7

Tema: Técnicas de tinción: Esporas y cápsula

Objetivos

1. Observar las endosporas y su disposición en las formas vegetativas.

2. Comparar las distintas morfologías y disposiciones que adoptan las endosporas
en las diferentes especies bacterianas empleadas.
3. Entender el fundamento de las tinciones negativas
4. Observar la morfología de las cápsulas

Fundamento
Algunos géneros bacterianos, entre los que se destacan Clostridium sp y Bacillus sp,
producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen
cuando las condiciones ambientales son desfavorables ya sea por agotamiento de
nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, entre otras. Al
terminar el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la espora al
exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva
célula vegetativa.

Algunas bacterias producen exopolimeros que se acumulan alrededor de la superficie de

la envoltura celular que se denomina generalmente cápsula. La mayoría de estos
exopolimeros son de naturaleza polisacarídica o proteica. La cápsula no es una
estructura indispensable para la bacteria y su producción se ve influenciada por la
existencia de genes específicos y por factores ambientales
Materiales y Equipos
Item Tipo Descripción
01 BIOL Cultivos bacterianos: especies del género Bacillus sp y Klebsiella
pneumoniae en medios enriquecidos con glucosa y sacarosa
02 MAT Asas bacteriológicas curvas
03 MAT Laminas y laminillas
04 MAT Lápiz graso
05 MAT Mechero
06 EQUIP Microscopio
Reactivos
Ítem Descripción
01 Colorante verde de malaquita 5%
02 Colorante safranina 0.5%
03 Tinta china
04 Aceite de inmersión
Procedimiento
Paso Descripción: Tinción de esporas
1 Preparar los frotis bacterianos según clases anteriores
2 Teñir con verde de malaquita, calentar pasando la llama del mechero debajo
de la lámina evitando que hierva o seque el colorante, sólo debe humear
durante 5 minutos. (5 o 6 vapores)

3 Lavar con abundante agua el exceso de colorante

4 Teñir con safranina durante 1 minuto

5 Lavar con abundante agua el exceso de colorante

6 Secar la preparación y observarla en el microscopio.

7 Anotar la disposición y la morfología de las endosporas.

Paso Descripción: Tinción de cápsula

1 Seleccionar láminas limpias y secas

2 Preparar los frotis bacterianos según clases anteriores sin dejar secar el
extendido
3 Agregar una gota de tinta china y mezclar bien

4 Colocar el cubreobjetos evitando formar burbujas de aire

5 Presionar y secar con la ayuda de toallas absorbentes los sobrantes del

colorantes
6 Observar al microscopio, teniendo en cuenta cerrar un poco el diafragma
7 Reconocer la capsula y graficar
Consulta
1. Qué son las estructuras teñidas con verde de malaquita que aparecen en el medio
circundante.
2. Porqué es necesario cultivar los microorganismos formadores de cápsula en
medios de cultivo enriquecidos de azúcares.

Bibliografía
Descripción
MADIGAN el al. (2003). Brock: Biología de los microorganismos. (Décima edición)
Editorial Pearson – Prentice Hall, Madrid.
JAWETZ, Ernest. (1998) Microbiología médica. (Decimotercera edición). Editorial El
Manual Moderno.