PRACTICA DE LABORATORIO

N°01
DETERMINACION DE LA ACTIVIDADA AMILOLITICA DE LA ALFA AMILASA
I.INTRODUCCIÓN

Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de

acelerar las reacciones químicas sin modificar la constante de equilibrio del
sistema. Su actividad es afectada por diversos factores:• Concentración de
sustrato• pH• Concentración de enzima• Temperatura• Inhibidores• Fuerza
iónica, constante dieléctrica, etc. Concentración del sustrato.- A mayor
concentración del sustrato, a una concentración fija de la enzima se obtiene la
velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en
la concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción.
Concentración de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un
aumento en la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática
hacia cierto límite. Temperatura.- Un incremento de 10°C duplica la velocidad de
reacción, hasta ciertos límites. El calor es un factor que desnaturaliza las
proteínas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su
actividad. PH.- El pH óptimo de la actividad enzimática es 7, excepto las enzimas
del estómago cuyo pH óptimo es ácido. Presencia de cofactores.- Muchas
enzimas dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para
funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la
concentración del cofactor debe ser igual o mayor que la concentración dela
enzima para obtener una actividad catalítica máxima.
II.OBJETIVO

 Conocer la actividad enzimática del alfa-amilasa.

 Conocer cómo afecta las distintas condiciones en que actúa la enzima alfa –
amilasa.

III.REBICION BIBLIOGRAFICA

 http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis206.pdf

IV.MATERIALES Y MÉTODOS.

 Agua destilada
 Pipetas de 5 ml
 Plumón indeleble
 6 tubos de ensayo
 Material para baño maría
 Vaso de precipitación.

4.1REACTIVOS
 Almidón bufferado al 1°/°
 PH 6.9
 HCL:0.05
 NaCL 0.1M
 Solución yodada
 Alfa amilasa
 Benedict cualitativo
 Cloruro de sodio 0.1 m
III.PROCEDIMIENTO.
ETAPA SISTEMAS DE INCUBACION

Tubo de ensayo

IA IIA
Solución de almidón bufferado al 1% 5ml 5ml
Cloruro de sodio 0.1 M 1ml 1ml
Agua destilado 4ml 3ml

Colocar ambos sistemas de reacción en baño maría a 37°C por 5 minutos luego
agregar alfa amilasa .sometiendo a incubación a 37°C por 15 minutos

IV.RESULTADOS
TABLA N° 01: Evaluación de sustrato residual de la actividad amilolitica de la alfa
milasa

I II
Color inicial incoloro incoloro
Color final Azul violácea marrón
Rx enzimática(si/no) no si
sustracto abundante escaso

CONCUSION:

HCL PH desnaturalización de la enzima

 Forma nativa
 Forma desplejada
 Perdida de tridemensional
 Perdida de centro activo
 Se tiene la reacción : perdida de su función como enzima
EVALUACIÓN DE SUSTRATO RESIDUAL
TUBOS DE ENSAYO

I II
HCL 0,5N 5ml 5ml
De los tubos I y IIDE LA ETAPA 0,5ml 0,5ml
“A”transferir a
Solución yodada (IK y 10k) 0,5ml 0,5ml

RESULTADO
TABLA N° 02: determinación de los productos formados de la actividad amiolitica de la
alfamilasa

I II
Color inicial Celeste Celeste
Color final celeste Celeste/rojo ladrillo
Rx enzimática(si/no) no si
Producto formado ausencia Presencia

CONCLUSION:

Almidón con reacción con el yodo coloración azul violácea

I2 internaliza en la estructura del almidón

Formación de un complejo coloreado

 DETERMINACION DE LOS PRODUCTOS DE LA REACCION

TUBOS DE ENSAYO
I II
De los tubos I y II etapa “A” transferir 1ml 1ml
a
Benedict cualitativo 5ml 5ml

Someter los contenidos en los tubos a ebullición por 10 minutos .Al termino del tiempo
mezclar uniformemente .Observar el color de los contenidos en ambos sistemas de 1
reacción .Anotar y sacar conclusiones

RESULTADO
Azúcar reductor

 Agente reductor reduce a otra molécula dona e- (pierde e-)

 Agente oxidante oxida a otra molécula recibe e- (gana e-)

CONCLUSIÓN
Almidón no fue transformado en su totalidad

V.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Bohinski , Robert 1991 bioquimica 5°edicion editorial addinson –wesley

iberoamericana Argentina
 http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis206.pdf
VI.ANEXOS
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE AGRONOMIA

TEMA:

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD AMILOLITICA DE LA ALFA AMILASA

ALUMNOS:

-SAAVEDRA BARRETO ANA MELBA

PROFESOR:

TRUJILLO– PERU
2018