I.INTRODUCCION.

La clorofila es un pigmento de las plantas, que les proporciona su color verde y

que absorbe la luz necesaria para la fotosíntesis. La clorofila absorbe
principalmente luz violeta roja y azul y refleja luz verde. La abundancia de
clorofila en hojas y su ocasional presencia en otros tejidos vegetales es la
causa de que esas partes de las plantas aparezcan verdes, pero en algunas
hojas la clorofila es enmascarada por otros pigmentos. La extracción y
reconocimiento de estos pigmentos es interesante para sus estudio y
conocimiento de sus propiedades.

Los pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son moléculas

químicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez.
El color de un pigmento depende de la absorción selectiva de ciertas longitudes
de onda de la luz y de la reflexión de otras. Constituyen el sustrato
fisicoquímico donde se asienta el proceso fotosintético. Hay diversas clases de
pigmentos como las clorofilas ( a, b ,c, d y bacterioclorofilas), también están los
carotenoides que estarán subclasificados en carotenos y xantofilas y por ultimo
tenemos a las ficobilinas de coloración azul y roja presentes en las algas
verdeazuladas, que comprenden el filo de los Cianotofitos. En esta practica se
utilizará diferentes reactivos el cual nos permitirán extraer los pigmentos con
mayor facilidad y así poder reconocer la importancia que tengan dichos
pigmentos dentro de una planta.

1.2.OBJETIVOS
 Separar e identificar la clorofila a, b, carotenos y xantofilas.
 II. REVISION BIBLIOGRAFICA.

2.1. LAS CLOROFILAS:

El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a

la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados
llamados clorofila a y clorofila b . Se encuentran prácticamente en todas las
plantas con semilla, helechos, musgos y algas. Pueden formarse en las raíces,
tallos, hojas y frutos a condición de que estos órganos estén situados por
encima del suelo y queden expuestos a la luz. También aunque aparentemente
falten en algunas hojas de color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras
sustancias colorantes de estas, puede comprobarse incluso allí la presencia de
las clorofilas, que estaban enmascaradas por los demás pigmentos (BARCELÓ
1992)

2.2.¿DÓNDE ESTÁN LOS PIGMENTOS?

Estos pigmentos se encuentran en el interior de la células vegetales

específicamente en una organela llamada cloroplasto . Los cloroplastos son
simplemente plástidos que contienen pigmentos clorofílicos. Los compuestos
clorofílicos están ligados químicamente con las estructuras internas del
cloroplasto (membrana tilacoides) y se hallan retenidos en estado coloidal.
Asociados con las clorofilas, existen también en los cloroplastos dos clases de
pigmentos amarillos y amarillo-anaranjados que son
los xantofilas y carotenides (CÓRDOBA 1979)
2.3. LOS PIGMENTOS:

Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y

combinaciones de colores del espectro, existe un predominio general de los
colores primarios: verde, amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los
vegetales por determinados compuestos químicos definidos,
llamados pigmentos. El color particular que presenta un determinado órgano
vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro o la combinación
de ellos. Se debe tener claro que cuando un vegetal presenta un color blanco,
es debido a la falta de tales pigmentos. La luz solar que incide sobre ellas no es
absorbida selectivamente como ocurre en las partes coloreadas, sino que
es transmitida o reflejada prácticamente sin sufrir modificación (FOGG 1967)

Los pigmentos vegetales, pueden dividirse en dos grandes grupos, en base a

su solubilidad:

a) Solubles en agua: antocianinas y antoxantinas, que se encuentran en el jugo

vacuolar.

b) Solubles en solventes orgánicos: clorofilas "a" y "b" y carotenoides (rojo,

naranja y amarillo), que se encuentran en las granas y tilacoides de los
cloroplastos.

Son los responsables de la captación de la energía luminosa en el proceso de

la fotosíntesis.
2.4. LA DIFERENCIA ENTRE LAS DISTINTAS CLOROFILAS EXISTENTES
(se conocen al menos siete).

Se encuentran en los sustituyentes que se presentan; así la clorofila "a"

(verde azulada) presenta un grupo metilo (-CH3) en el carbono 3, y la "b"
(verde amarillenta) un grupo aldehido (-CHO) en la misma posición. Entre los
carotenoides se encuentran los carotenos (anaranjados), cadenas
hidrocarbonadas de unos cuarenta átomos de carbonos, y las xantofilas
(amarillas u ocre), que son derivados oxigenados de aquellos (JAMES 1967)

2.5. LOS CAROTENOIDES.

El otro gran grupo de pigmentos son los carotenoides, que dan color
rojo-anaranjado o amarillo a las flores, hojas, frutos y semillas, y se diferencian
de las antocianinas por su estructura química y su localización celular. Los
carotenoides no son solubles en agua, sino que se encuentran unidos a las
proteínas de la membrana tilacoidal de los cloroplastos o asociados a proteínas
o en forma de cristales en otro tipo de plástidos. El β-caroteno es el carotenoide
más abundante en la naturaleza y el más importante para la dieta humana. Al
ser ingerido, el β-caroteno es transformado en Vitamina A en la mucosa del
intestino delgado, y ésta es almacenada principalmente en el hígado en forma
de retinol. La vitamina A es esencial para la visión nocturna y mantener
saludable la piel y los tejidos superficiales. Es necesaria para el crecimiento y la
diferenciación del tejido epitelial, y se requiere en el crecimiento del hueso, la
reproducción y el desarrollo embrionario. Junto con algunos carotenoides, la
vitamina A refuerza el sistema inmune. El β-caroteno también puede ser
absorbido y almacenado en el tejido graso sin ser modificado. Los carotenoides
resultan esenciales para la fotosíntesis como pigmentos accesorios en la
absorción de luz y protegiendo a las plantas de la luz solar, además se unen a
moléculas dañinas y evitan que dañen el ADN de las células (MILLER 1967)
2.6. LAS XANTOFILAS.

Son compuestos químicos parecidos a los carotenos, y a diferencia de

estos últimos además de contener carbono e hidrógeno contienen uno o mas
átomos de oxígeno dentro de la molécula, pero al igual que los carotenos,
presentan colores llamativos (rojo, naranja y amarillo). Vegetales como el
pimiento amarillo y rojo representa En una fuente importante de xantofilas.

Las xantofilas se encuentran también de forma natural en muchas plantas, son

compuestos pigmentados y presentan también acción fotosintética. Estos
pigmentos, más resistentes a la oxidación que las clorofilas, proporcionan sus
tonos amarillentos y parduzcos a las hojas secas (MONERRI 1992)

2.4. ¿CÓMO SE DIVIDEN LOS SOLVENTES?.

Los pigmentos clorofílicos son insolubles en el solvente universal

llamado agua. Pero sí son solubles (afinidad química) en solventes
orgánicos como por ejemplo alcohol etílico y acetona. A los solventes
que extraen simultáneamente todos los pigmentos de la hoja se los suele
llamar extractantes. Existen otros solventes que presentan afinidad por
algunos pigmentos y se los llama separadores, como por ejemplo el
tetracloruro de carbono y el éter de petróleo.

En el método de extracción simple se utilizará como extractante el

alcohol etílico y como separador el tetracloruro de carbono. Estos dos
solventes orgánicos responden en forma diferente a los pigmentos clorofílicos,
como así también a sus diferencias físicas que hacen que sean dos líquidos no
misibles y con diferente peso específico (RICHTER 1972)

2.5. ¿PORQUE SE USA ÉTER ETÍLICO PARA EXTRAER LA CLOROFILA?

La molécula de la clorofila tiene una compleja estructura, compuesta por
cadenas orgánicas, que le confiere un elevado carácter “hidrófobo”. En
consecuencia se debe realizar la extracción con un solvente orgánico donde la
clorofila tenga una elevada solubilidad como es el caso del éter etílico pero
también es muy soluble en otros solventes orgánicos (SÍVORI 1980)
 III. MATERIALES Y MÉTODOS.

3.1. Materiales.

 KOH al 20%
 Éter etílico.
 Agua destilada.
 Acetona.
 Éter de petróleo.
 Metanol.

3.2. Reactivos.

 Papel filtro.
 Mortero y pilón.
 Hojas de cacao.
 Pera de decantación.
 Soporte universal.
 Balanza analítica.
 Pipeta.
 Vaso precipitado.
 Hervidora.
 Embudo.
3.3. Metodología.

 Pesar 20 gr de hoja de cacao sin nervaduras.

 Hervir por 2 min las hojas.
 Ponerlo en un mortero y con ayuda del pilón aplastarlo, mientras se le
agrega poco a poco acetona.
 Filtrar el extracto con un papel filtro.
 Agregar 50 ml de éter petróleo al filtrado, y colocarlo en una pera de
decantación.
 Reposar la mezcla y observar las separaciones de los pigmentos
fotosintéticos en la parte superior y en la parte inferior acetona + la
antocianina que debe de ser eliminada por decantación.
 Lavar el filtrado de 2 a 4 veces con agua destilada y eliminar por
decantación el agua.
 Agregar 40 ml de metanol agitar y reposar.
 Se observa la separación de clorofilas a y b ubicándose la clorofila a
arriba de la clorofila b, separamos la clorofila b + el metanol + xantofilas
en otra pera de decantación.
 Agregar 20 ml de KOH al 20% a la clorofila a y agitar y decantar.
 Agregar 20 ml de H2O agitar y reposar, decantar y observar los
resultados que obtenemos.
 Para la identificación de la clorofila b agregar 40 ml de éter etílico,
decantar.
 Luego agregar 20 ml de KOH al 20% en metanol agitar y reposar,
decantar.
 Observar los resultados obtenidos.
 IV. RESULTADOS.

CAROTENOS

XANTOFILAS Y
CLOROFILA B.
CLOROFILA A

Figura 1. Se muestran los pigmentos fotosintéticos.

PERA DE DECANTACIÓN 2
PERA DE DECANTACION 1
CORIFILA A CAROTENOS CLOROFILA B XANTOFILAS
Se ubica Se ubican
debajo de los arriba de la Debido al tiempo, no se pudo observar la
carotenos clorofila A separación de estos dos pigmentos, pero la
debido a la debido a la xantofila debería estar arriba de la clorofila b
densidad densidad. por densidad aparentemente
Cuadro 1. Resultados de los pigmentos fotosintéticos obtenidos en la práctica.
 V. DISCUSION

Según BARCCELO 1992 el color verde tan uniformemente presente en los

vegetales es debido a la presencia de dos pigmentos estrechamente
emparentados llamados clorofila a y clorofila b. También aunque
aparentemente falten algunas hojas de color amarillo ,cuando extraen las
otras sustancias colorantes puede comprobarse incluso allí la presencia de
las clorofilas, que estaban enmascaradas por los demás pigmentos como
pudimos observar en la práctica en la hoja de cacao que la clorofila a de
color verde oscuro se sitúa en la parte baja de la pera de decantación y los
carotenos en la parte arriba de color anaranjado (caroteno) y la clorofila b de
color verde claro se sitúa también en la parte baja y de color amarillo
(xantofila) en la parte arriba esto se dio debido a densidad.

Según RICHTER 1972 los pigmentos clorofílicos son insolubles en el

solvente universal llamado agua. Pero si son solubles en solventes
orgánicos como el alcohol etílico y acetona. A los solventes que extraen
simultáneamente todos los pigmentos de la hoja. Existen otros solventes y
se los llama separadores como el tetracloruro de carbono y el éter de
petróleo, por eso utilizamos estos dos solventes orgánicos que responden en
forma diferente a los pigmentos clorofílicos, como así también a sus
diferencias físicas que hacen que sean dos líquidos no misibles.

Según SIVORI 1980 se usa el éter etílico debido a que la molécula de

clorofila tiene una compleja estructura, compuesta por cadenas orgánicas
que le confiere un elevado carácter “hidrófobo” por eso utilizamos en la
práctica para realizar la extracción con un solvente orgánico para que la
clorofila tenga una solubilidad como es el caso del éter etílico.
 VI. CONCLUSIONES.

Se obtuvieron los pigmentos fotosintéticos que son los que san color a las
hojas de las plantas ya que la fotosíntesis es un proceso que permite a los
vegetales obtener la materia y la energía que necesitan para desarrollar sus
funciones vitales.

Gracias a esta práctica, se logró observar cómo cambian las tonalidades de

estos pigmentos fotosintéticos que componen a las plantas y también se pudo
diferenciar que para cada obtención de pigmento el reactivo a usar varia,

VII. BIBLIOGRAFIA

1. BARCELÓ Coll y otros. 1992. "Fisiología Vegetal". Ed. Pirámide S.A. Madrid,
662 p.

2. Córdoba, C.V.1979. "Biología celular y molecular". Ed. A.Blume, Madrid.476

p.Cap. III

3. Fogg, G.B. 1967. "El crecimiento de las plantas". EUDEBA, Bs. As. p. 100-
164.

4. James, W.O. 1967. "Introducción a la Fisiología Vegetal". Omega, Barcelona.

328 p. Cap. I.

5. Miller, E.V. 1967. "Fisiología Vegetal". Uteha, Mexico. 344 p. Cap. IV

6. Monerri, C. y J.L. Guardiola. 1992. "Manual de prácticas de fisiología

vegetal". Dpto. de Biología Vegetal, Univ. Politécnica de Valencia. 158
p

7. Richter, G. 1972. "Fisiología del metabolismo" Ed. C.E.C.S.A. México, 417 p.

8. Sívori, E. ; Montaldi, E.R. y O.H. Casso. 1980. "Fisiología Vegetal".

Hemisferio Sur, Bs. As. 681 p. Cap. VIII.
 ANEXO.
2

Fig. 1 Filtrando la muestra triturada Fig.2 Extrayendo la parte la

Cual nos sirve

Fig. 3. Al cabo de un tiempo se aprecian las clorofilas presentes en nuestra

muestra a analizar