Objetivos

 Aprender a calibrar el micrómetro del ocular para objetivos de 10x y 43x y en

algunos casos objetivos de 10x y 40x con el micrómetro de platina para poder medir
microorganismos y células.

 Calculo de las dimensiones (largo y ancho) de las células de algas (reservorio de

arquitectura) en el laboratorio con objetivos de 10x y 43x.

 Determinar el error de medición y asimismo el error de calibración.

Fundamento Teórico

Microscopio óptico compuesto

Un mi croscopio compuesto tiene

más de una lente objetivo. Los
microscopios compuestos se
utilizan especialmente para
examinar objetos
transparentes, o cortados en
láminas tan finas que se
transparentan. Se emplea para
aumentar o ampliar las
imágenes de objetos y
organismos no visibles a
simple vista. Además del
aumento una propiedad del
microscopio es su poder
resolutivo. Esta es la
capacidad de mostrar distintos
y separados dos puntos muy
cercanos y, por tanto, cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor será la definición
de un objeto

El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:

El sistema mecánico está constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar
y detener los instrumentos a observar.

El sistema de iluminación comprende un conjunto de instrumentos, dispuestos de tal

manera que producen las ranuras de luz.
El sistema óptico:
Es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto de lentes
que lo componen. Está formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una
imagen de la muestra que el ocular luego amplía.

 El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la

cercanía de la pieza con el ojo del observador. Tiene como función aumentar la
imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de
aumento van desde 5X hasta 20X
 Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revólver y producen el
aumento de las imágenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de
la preparación que se examina
Algunos objetivos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la
preparación. En la cara externa llevan una serie de índices que indican el aumento que
producen, la abertura numérica y otros datos. Así, por ejemplo, si un objetivo tiene
estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es plana cromático, su
aumento 40 y su apertura numérica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160
mm. El número de objetivos varía con el tipo de microscopio y el uso a que se destina.
Los aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 4X, 10X,
20X, 40X y 60X.

Micrómetro ocular

Un micrómetro ocular es un disco de vidrio que se adhiere a un ocular de un

microscopio. Un micrómetro ocular tiene una regla que permite al usuario medir el
tamaño de los objetos magnificados. La distancia entre las marcas de la regla depende
del grado de ampliación. La regla sobre un micrómetro ocular típico tiene entre 50 y
100 marcas individuales, es de 2 mm de largo y tiene una distancia de 0,01 mm entre
las marcas.

Micrómetro de platina

Estos micrómetros de platina de alta calidad se utilizan para calibración de rutina de

una variedad de instrumentos ópticos de medición, desde microscopios ópticos y
oculares hasta platinas x-y, y bancos ópticos El micrómetro de platina es en realidad
utilizado como un "espécimen" para calibrar por ejemplo, una retícula de ocular. Para
el usuario profesional del microscopio óptico o para el investigador, estos son los
estándares definitivos de calibración para sus microscopios de luz.

Calibración del micrómetro ocular

El ocular del microscopio posee una escala que es necesario calibrar para los distintos
aumentos que se puede lograr con el mismo. Pare ello se observará una platina que
tiene una escala de dimensiones conocidas, es decir hay una distancia X entre las
divisiones de la misma. Por el microscopio se observan ambas escalas y se
 determinará el número N de divisiones de la platina que coinciden con n divisiones del
micrómetro del ocular. Se deberá calibrar para cada objetivo del microscopio.

Materiales –Procedimiento

Materiales

Micrómetro de platina Micrómetro de ocular

Muestra de algas
Microscopio compuesto

Procedimiento

Muestras: Muestra de algas (estanque de arquitectura).

MICRÓMETRO DE PLATINA: En el microscopio se ven las rayas de color blanco, de 0

a 10 es una división compuesta por 10 subdivisiones, cada uno de 0.1mm, entonces el
micrómetro de la platina mide 1mm.
MICRÓMETRO DEL OCULAR: En el microscopio se ven las rayas negras, tiene 50
divisiones

Teniendo esas consideraciones pasamos a los pasos del procedimiento:

1. Colocar el micrómetro de la platina en la platina.

2. Colocar el micrómetro del ocular en el ocular.
3. Superponer el micrómetro del ocular sobre el micrómetro de platina para
determinar el N° de divisiones equivalentes de ambos micrómetros. (Los
cálculos se mostrarán más adelante).
Calibración del micrómetro ocular:

a) Determinar cuántas divisiones del micrómetro ocular coinciden con las

divisiones del micrómetro de platina. Con objetivo de 10x y 43x.

“x” será división de platina e “y” será división del ocular.

Medición de los microorganismos:

a) Con el micrómetro del ocular, se realiza la medida de microorganismos,

calculando el ancho y el largo tanto con el objetivo de 10x y 43x.
 1. Graficar los datos en papel milimetrado.
2. Mostrar la tabla de resultados.

2 Cálculos y Resultados

Calibración del micrómetro ocular:

2.1 OBJETIVO 10x:

1   d i v i si ó n  d e   pl at in a< >6.5  d i vi si one s   d e l   o cul ar

Dato: Di v i si ó n   d e   p l a t in a   :0.1m m=x  

Di v i si ón  d el   oc ular  : y

01
x=6.5 y   → y= =0.01538 m m  ≃              15.38 μ   ( f a c t o r   d e   c o n v e r s i ó n )
6.5

2.2 OBJETIVO 43x:

1  di v i si ón  d e   pl at ina< >28  d i vi si one s   de l   ocul a r

Dato:
 Di v i si ó n   d e   p l a t in a   :0.1m m=x

Di v i si ón  d el   oc ular :     y….  x=28 y

0.1
y=  =0.00357 m m  ≃3.57 μ   ( f a c t o r   d e   c o n v e r s i ó n ) .
28

Medición del microorganismo:

Cuerpo del microorganismo

ANCHO

LARGO

1. OBJETIVO 10x:

L a r g o=6 d i v i s i o n e s   d e l   o c u l a r=6×15.38 μ=92.28 μ

  A n c h o=1.5 d i v i s i o n e s   d e l   o c u l a r=1.5×15.38 μ=23.07 μ

2. OBJETIVO 43x:
 L a r g o=27 d i v i s i o n e s   d e l   o c u l a r=27×3.57 μ=96.39 μ

  A n c h o=6.5 d i v i s io n e s   d e l   o c u l a r=6.5×3.57 μ=23.21 μ

Calculo del error de medición:

23.21 μ m−23.07 μ m  
Error ancho= x 100 =0.607   ;
23.07 μ m

96.39 μ m−92.28 μ m
Error largo= x 100=4.45
92.28 μ m

Nª de calibración Medición Error Error

microscopi ancho largo
10x 43x 10x 43x
o
largo ancho largo ancho

2x<>13 1x<>28
y y
6
y= Y=3.57 92.28 23.21
15.38 u 96.39 u 0.607 4.45
u % %
23.07
u

Conclusiones

 La precisión de calibración puede haber sido afectada por la iluminación

utilizada como la visión de observador, así como el estado de los objetivos y
ocular.

 Calcular la medida adecuada al microorganismo es importante para poder

determinar las características de los microorganismos y poder dar un buen
tratamiento a las muestras de agua a analizar.

 Se concluye que sabiendo el tamaño de los microorganismos podemos

saber qué tipo de filtro usar para el tratamiento de aguas.

 El error del microscopio número 6 (el que yo uso) en el ancho es de

0.607%, se puede ver que es menos del 2%, por lo tanto, está dentro de los
valores admisibles.
  En el caso del largo el error es de 4.45%, lo que se concluye que esta fuera
del rango admisible y se debe volver a hacer el laboratorio.

Recomendaciones

 Tener sumo cuidado con micrómetro del ocular y de la platina, ya que si sufren
una caída se pueden quebrar o hasta romper.
 Antes de empezar todo trabajo limpiar el microscopio para evitar cualquier
problema con la visibilidad del ocular.
 Como hay 1 micrómetro de platina para todos los alumnos entonces por
cuestión de tiempo podemos realizar las mediciones a la célula con el
micrómetro del ocular y luego cuando se tenga en micrómetro de platina
calibrar el ocular.
 Verificar la calidad de cada microscopio y de sus objetivos, para no tener
problemas de visión en el futuro.
 Si ya encontró el alga con el objetivo de 10x, para pasar al objetivo de 43x
simplemente ya no mueva el portaobjetos y cambie de objetivo ligeramente
levante y baje el lente hasta encontrar el alga.
 Diferenciar claramente el micrómetro del ocular y de la platina para su correcta
calibración.
 Tener las precauciones al trabajar con lámparas ya que se calientan muy
rápido y algunas están defectuosas.
 Si deseamos calcular el error de calibración necesitamos un microscopio
patrón para poder realizar esta medición.
Bibliografía

 http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/scan2/05862/05862-09.pdf
 http://www.h-gac.com/community/water/ossf/OSSF-Treatment-Systems_Sand-Filter-
S.pdf
 http://eportal.magrama.gob.es/id_tax/ficha/buscador/4/31481
 http://eportal.magrama.gob.es/id_tax/report/taxon/4/31481

Cuestionario

1. Señalar el tamaño relativo de los microorganismos.

 Bacterias: Las bacterias que se estudian más a menudo en el laboratorio

miden aproximadamente 0.5 a 1.0 x 2.0 a 5.0 um (micrómetros).

 Hongos: Los cuerpos usualmente alargados o filamentosos miden de 5 a 10

um de grosor y por lo general ramificados.
  Protozoarios: De diámetro tienen aproximadamente de 1 a 4 um (diámetro
mayor).

 Virus: De tamaño relativo de 20-300 nm.

1. Escriba las principales características de:

BACTERIAS

 El primer nombre de una bacteria corresponde al género y el segundo l a especie.

 Las bacterias en un principio se clasificaron por su forma, la tinción Gram y por sus
necesidades de oxígeno, lo que se complementaba con los caracteres bioquímicos
y serológicos. En la actualidad se utiliza la genética para establecer relaciones
fundamentales.

 Las bacterias son procariotas, con ADN circular libre, ribosomas, sin mitocondrias y
una pared celular de peptidoglucano.

 La estructura bacteriana incluye:

Estructura interna: material nuclear, ribosomas, membrana nuclear.

Pared celular: peptidoglucano (más espacio periplasmático y en membrana externa

en bacterias gramnegativas).

Estructuras externas: cápsulas, Pili, flagelos.

 Las esporas están metabólicamente inertes en una capa protectora.

ALGAS

 Aunque su naturaleza de habitantes indígenas del suelo es discutida, lo cierto es

que se encuentran en casi todos los suelos de cualquier continente o isla.

 Son fotosintéticas y requieren acceso a la luz pero no solo se encuentran en las

primeras capas de la superficie.

 Las algas terrestres son más pequeñas y estructuralmente más simples que las
acuáticas.

 Se dividen en cuatro grupos: Clorofíceas de color verde, Cianofíceas de color azul-

verdoso, Bacilariofíceas o diatomeas y Xantofíceas de color amartillo-verdoso.

 El pH limita grandemente la población de algas. Las cianofíceas se desarrollan

mejor a valores de pH comprendidos entre 7 y 10, desapareciendo cuando se baja
de 5. Lo mismo ocurre a las diatomeas, pero las verdes no son apreciablemente
modificadas y por tanto dominan la flora de algas en ambientes ácidos, debido a la
ausencia de las otras formas.
 Al aumentar la humedad se aumenta generalmente el desarrollo de las algas. En
los suelos agrícolas la humedad no suele ser suficiente y la población sigue las
incidencias del clima lluvioso o seco o del riego.

PROTOZOARIOS

 Los protozoos incluyen parásitos intestinales y genitales, por ejemplo, Entamoeba

histoytica y Tricomonas vaginalis y parásitos de la sangre y los tejidos por ejemplo
Toxoplasma gandii y parásitos del paludismo.

 Los protozoos son unicelulares y tienen estructuras celulares eucariotas. Todos

tienen una etapa de trfozoito frágil y la mayoría tienen una forma quística resistente.

 Todos tienen signos vitales fuera del huésped humano y la mayoría puede
multiplicarse en el ser humano. La infección es por ingestión, por inhalación, por
picaduras de insectos o por el contacto sexual.

 Sus ciclos de vida varían desde la transmisión directa del trofozoito durante el coito
(Trichomonas) o la eliminación de quistes en las heces y la ingestión subsiguiente
(Entamoeba y otros protozoos intestinales) hasta la alternancia compleja de
generaciones en diferentes huéspedes (paludismo).

 La inmunidad protectora no está bien desarrollada en la mayoría de las infecciones

por protozoos, los cules son muy comunes y pueden ser múltilples.

HONGOS

 La estructura es eucariota y, por ende, a diferencia de las bacterias procariotas, los

hongos tienen un núcleo con una membrana nuclear, y el citoplasma contiene
mitocondrias, aparato de Golgi, lisosomas y retículo endoplasmático.

 La morfología consiste en pequeñas levaduras redondas o mohos filamentosos con

un micelo de hifas. Algunos hongos son dimorfos con una forma de levadura en los
tejidos y una forma miceliar en el medio ambiente.

 Todos los hongos se reproducen en forma asexuada con células haploides que se
dividen mediante mitosis para formar esporas.

 Los hongos imperfectos, en los que sólo se conoce la replicación asexual, incluyen
algunos microorganismos patógenos humanos.

 La reproducción sexual mediante meiosis constituye la base de la clasificación y la

denominación definitiva.

 Los microorganismos patógeno primarios son hongos que pueden infectar a

huéspedes anormales.

 Los microorganismos patógenos oportunistas sólo pueden infectar a huéspedes

anormales con las defensas alteradas.

 Los hongos producen enfermedad mediante micotoxinas, hipersensibilidad o

infección invasiva con lesión hística.
ROTÍFEROS

Filo de invertebrados acuáticos, pluricelulares, de tamaño pequeño, generalmente

microscópicos, provistos en la cabeza de una corona de cilios que parece una
rueda girando al moverse los cilios.

 El nombre rotíferos, que significa ‘portadores de ruedas’, proviene precisamente de

ese aparato rotador.

 Son de las primeras formas de vida microscópicas que se estudiaron, y se les

conocía como animálculos rueda. Oscilan entre 40 µm y 3mm y comprenden unas
1.500 especies.

 Los rotíferos son muy numerosos en todo el mundo y se encuentran principalmente

en ecosistemas dulceacuícolas, como charcas o lagos de agua dulce, aunque
también hay algunas especies marinas o terrestres.

 Se alimentan de otros microorganismos y unas pocas especies son parásitas. Los

rotíferos presentan sexos separados, aunque los machos son escasos y salvo en
condiciones adversas se desarrollan por partenogénesis.

 Clasificación científica: los rotíferos constituyen el filo Rotíferos (Rotifera), formado

por 3 clases: Seisonáceos, Bdeloideos y Monogonontos.

VIRUS

 Los virus constan de un genoma central de ARN o ADN y una coraza de proteína
que es la cápside (que en conjunto forman la nucleocápside).

 Los virus son entidades no celulares de muy pequeño tamaño (normalmente inferior
al del más pequeño procariota), por lo que debe de recurrirse al microscopio
electrónico para su visualización.

 Son agentes infectivos de naturaleza obligadamente parasitaria intracelular, que

necesitan su incorporación al protoplasma vivo para que su material genético sea
replicado por medio de su asociación más o menos completa con las actividades
celulares normales, y que pueden transmitirse de una célula a otra.

 Cada tipo de virus consta de una sola clase de ácido nucleico (ADN o ARN, nunca
ambos), con capacidad para codificar varias proteínas, algunas de las cuales
pueden tener funciones enzimáticas.

 Otras son estructurales, disponiéndose éstas en cada partícula virásica (virión)

alrededor del material genético formando una estructura regular (cápsida); en
algunos virus existe, además, una envuelta externa de tipo membranoso, derivada
en parte de la célula en la que se desarrolló el virión y en parte de origen virásico
(proteínas).

1. ¿Porque es importante conocer el tamaño de los microorganismos?

El tamaño de los microorganismos tiene importancia porque determina algunas
propiedades biológicas, de su ecología y su evolución y está muy relacionado con
la relación: superficie- volumen.
La cantidad de membrana disponible va a determinar las tasas de transporte. Cuanto
más pequeños, mayor superficie- volumen, mayor membrana y, mayor tasa de
transporte, por lo tanto, mayor velocidad de crecimiento. Esto hace que en los
hábitats naturales se multipliquen rápidamente.
Consecuencias evolutivas: A mayor velocidad de crecimiento, mayor velocidad de
evolución. No sabemos el límite de tamaño pero parece claro que tiene que haber
un límite por lo tanto a mayor tamaño, menor velocidad de transporte y por lo tanto
ineficiencia.
El tamaño también es importante para determinar la velocidad de sedimentación.
2. Describa las aplicaciones prácticas sobre la medición de los
microorganismos

 Proceso de filtración en las plantas de tratamiento de agua.

En el proceso de filtración el agua residual es roseada sobre la piedra y se deja que se

filtre a través del lecho, este filtro consiste en un lecho formado por un medio
sumamente permeable al que los microorganismos se adhieren y a través del cual
se filtra el agua residual. El tamaño de las piedras de que consta el medio filtrante
está entre 2.5 – 10cm de diámetro, la profundidad de estas varía de acuerdo al
diseño particular, generalmente de 0.9 – 2.4m con un promedio de profundidad de
1.8m.

 Proceso de filtración mediante membrana.

Este método se fundamenta en determinar el número y tipo de microorganismos

presentes en una muestra de agua de proceso, por medio de la filtración de la
misma a través de una membrana filtrante con poros de tamaño adecuado (0,45 μm
de diámetro), la consiguiente retención de los microorganismos sobre dicha
membrana y el cultivo de los mismos en diferentes agares de acuerdo al tipo de
microorganismo.
Es importante saber las medidas de los microorganismos para saber el tipo de
microorganismo presente en una muestra de agua cualquiera.

 Proceso biológico de tratamiento de aguas residuales (FILTRO,

PERCOLADOR, WETLAND).

 Filtro biológico (tratamiento de agua residuales)

El proceso de filtración biológica puede definirse como un sistema de lechos de

distintos materiales sobre los cuales se vierten de una manera continua o
intermitente las aguas residuales. A medida que las aguas residuales y el aire fluyen
a través del lecho, el limo biológico hace uso de ellos para obtener de los
compuestos orgánicos la energía necesaria para sus procesos vivientes, material y
energía para sintetizar nueva masa celular, el oxígeno necesario para las
reacciones de oxidación bioquímica y los nutrientes indispensables para la síntesis
celular.
La acumulación de crecimiento biológico sobre la superficie de medio que constituye el
lecho tiene un límite, por lo cual es arrastrado con el efluente del filtro percolador
por lo tanto se necesita el tamaño de los microrganismos para evitar la obstrucción
del relleno perjudicando flujo del agua residual y la transferencia de oxígeno a los
microorganismos aerobios.

 Percolador.

Un filtro percolador es una cama de grava o un medio plástico sobre el cual se rocían
las aguas negras pretratadas. En este sistema de filtro percolador, los
microorganismos se apegan al medio del lecho y forman una capa biológica sobre
éste. A medida que las aguas negras se percolan por el medio, los microorganismos
digieren y eliminan los contaminantes del agua.

 Wetland (tratamiento de aguas residuales)

Sistema de Tratamiento Biológico que imita el funcionamiento de los humedales

naturales usando la capacidad de estos para remover materia orgánica.

Los wetlands son áreas de tierra inundada que se conocen también como pantanos,
con poca profundidad para que la vegetación pueda llegar a la parte inferior y
sostenerse del suelo firme. Las plantas de estos sitios proveen a la superficie de
una película de bacterias, ayuda en la filtración y absorción de componentes,
transfiere oxígeno y controla el crecimiento de algas al evitar la penetración de la
luz solar.

Es necesario conocer el tamaño de los microorganismos de la película de las

bacterias para poder determinar la velocidad de crecimiento de las colonias para
poder así tener un mejor control sobre el crecimiento de algas.

 Método de filtro de membrana (determinación de coliformes).

Los filtros de membrana con profundidad ordinaria contienen poros tortuosos que
capturan microorganismos atrapándolas de forma aleatoria. El resultado es que se
capturan fracciones de microorganismos en el interior (intersticios) de la membrana
y por tanto, no se puede utilizar para su observación en superficie por microscopía
de luz o microscopía electrónica de barrido.

En contraste, los filtros de policarbonato contienen poros cilíndricos uniformes,

preferencialmente embebidos en la membrano, permitiene así una distribución
uniforme de la muestra en un plano a través de la superficie completa de la
membrana. Por tanto, todas las muestras son capturadas en una superficie plana,
uniforme y sin defectos. La precisión en el tamaño de los poros en una estrecha
distribución asegura una separación adecuada, o fracción de las muestras por su
tamaño.

Al estar libres de contaminantes, estas pantalllas microporosas son biológicamente

inertes, ofreciendo excelente resistencia química y estabilidad térmica. Proveen una
resistencia superior y adsorción del sustrato prácticamente nula. Estos factores
combinados con las capacidades únicas de las membranas de policarbonato, las
hacen ideales para una serie de aplicaciones en LM y SEM, tales como: Análisis de
partículas en el aire (incluyendo asbestos), quimiotaxis, citología, histología,
paleontología, parenterales y análisis de aguas para asbestos y otros agentes
inorgánicos en suspensión.