UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA

FACULTAD DE INGENIERIA Y CIENCIAS AMBIENTALES

CARRERA PROFESIONAL: INGENIERIA AGROFORESTAL ACUICOLA

BIOQUIMICA Y GENETICA

REACCIÓN DE BIURET PARA DETERMINACION DE PROTEÍNA

ALUMNO: FERNANDEZ DAVILA, WILKER

CICLO: II

DOCENTE: ING. RAMON LOPEZ

CARRERA: IAFA

PRACTICA: Nº 4

FECHA: 07/07/17

YARINACOCHA, PERÚ
2017
 I. INTRODUCCION

La determinación de las proteínas totales en el líquido cefalorraquídeo

(LCR), forma parte de los estudios bioquímicos realizados a este material
clínico y, junto con el análisis de glucosa en el líquido, constituye un
parámetro importante para la diferenciación de trastornos neurológicos o
patologías relacionadas es el producto de una alta presión intracreaneana
ocasionada por un tumor cerebral, una hemorragia intratecal, o bien
debido a una inflamación bacteriana o viral de las meninges; encefalitis o
poliomielitis. El mayor incremento de proteínas totales ocurre durante las
meningitis bacterianas. La síntesis intratecal aumentada de
inmunoglobulinas, particularmente lg G, ocurre en enfermedades
desmielinizantes del SNC, especialmente en la esclerosis múltiple (7).Los
métodos para la determinación de proteínas totales deben ser muy
sensibles debido a la baja concentración de proteínas presentes en el
LCR. Además, el método debe ser rápido y sencillo, ya que la mayoría de
los análisis de LCR revisten el carácter de emergencia. Los métodos
utilizados con mayor frecuencia son los turbidimétricos; los basados en la
unión con un colorante (Lowry y sus variantes) y los métodos del biuret
(4,7).En este estudio se evaluó un procedimiento basado en la prueba del
biuret, modificando el reactivo empleado en la determinación de proteínas
totales en el suero. Este método se comparó con el empleado actualmente
en los laboratorios de los hospitales de la Caja Costarricense del Seguro
Social (C.C.S.S.); el cual también se basa en el principio del biuret.
II. OBJETIVO
1.1 General:
 Estudiar la prueba de Biuret y sus características en presencia de
la caseína.
1.2 Específicos:
 Identificar el carácter proteico de la caseína, mediante la formación
de un complejo azulado.

 Comprobar la presencia de enlaces peptídicos en la estructura de

la caseína.

III. MARCO TEÓRICO

 CASEÍNA
La caseína es una proteína conjugada de la leche del tipo
fosfoproteína que se separa de la leche por acidificación y
forma una masa blanca. Las fosfoproteínas son un grupo de
proteínas que están químicamente unidas a una sustancia
que contiene ácido fosfórico. En la caseína la mayoría de los
grupos fosfato están unidos por los grupos hidroxilo de los
aminoácidos serina y treonina. La caseína en la leche se
encuentra en forma de sal cálcica (caseinato cálcico). La
caseína representa cerca del 77% al 82% de las proteínas
presentes en la leche y el 2,7% en composición de la leche
líquida.
 REACCIÓN DE BIURET
La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada
a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la
más sencilla que da positiva esta reacción la presencia de
proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la
reacción del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en
solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se
basa en la formación de un compuesto de color violeta,
debido a la formación de un complejo de coordinación entre
 los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del
nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos
presentando un máximo de absorción a 540 nm. La
producen los péptidos y las proteínas, pero no los
aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace
peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los
aminoácidos. Cuando una proteína se pone en contacto con
un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja
denominada Biuret. Debido a dicha reacción fue que
observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre
más solución de proteína precipitó una coloración violeta.
Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo
reacción positiva. Precipitando a una coloración amarilla la
reacción nos torna negativa al no haber presencia de
proteínas. “Da positiva esta reacción en todos los
compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos
consecutivos en sus moléculas”.

IV. MATERIALES
 Leche1/2 litro
 3 limones.
 Cocina eléctrica
 Ácido acético
 Centrifuga
 4 tubos de centrifuga
 Vaso de precipitado
 Un litro de agua destilada.
 Bureta
 Soporte universal
 V. PROCEDIMIENTO

1. Agregamos la leche a un vaso de precipitado de 250 ml

2. Luego utilizamos limos para cortar la leche, mientras agitamos con la varilla
de vidrio.
3. Calentamos para lograr que la leche se corte más rápido
4. Agregamos ácido acético para que se corte más rápido y obtener mejores
resultados.
5. Agregamos cantidades iguales de leche en cuatro tubos de centrifuga y lo
llevamos a la centrifuga.
6. Colocamos los tubos frente a frente
7. Dejamos centrifugar las muestras durante 5 minutos
8. Después extraemos los tubos y logramos separar la caseína del liquido
9. Nuevamente agregamos agua para lograr mejores resultados agitamos y
llevamos a la centrifuga por 5 minutos mas
10. Luego agregamos etanol al 100% en cantidades iguales a todos lo tubos y
agitamos bien para lograr una buena consistencia.
11. Nuevamente llevamos nuestra muestra a la centrifuga durante 5 minutos.
12. En un vaso de precipitado añadimos la caseína obtenida
13. Agregamos hidróxido de sodio NaOH al 0.1N a la muestra obtenida
14. Sacamos toda la parte amarilla (grasa) hasta que la muestra quede
homogénea.
15. Agregamos 100 ml de agua destilada
16. En un tubo de ensayo agregamos 10 ml de la muestra
17. Aquí agregamos 5 ml de reactivo Biuret
18. Logramos comprobar que nos dio un color lila típico color de la presencia
de proteína.
19. Agregamos acido en la solución que quedo en el vaso de precipitado hasta
lograr ver el punto isoeléctrico de la caseína
 VI. RESULTAOS Y DISCUSIÓN
Observamos un color
lila lo que nos indica
que la reacción fue
positiva.
Fig: 1

DISCUSIÓN
Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado, se forma
una sustancia compleja denominada Biuret. Observamos que la reacción de
Biuret fue positiva con la solución de caseinato. Por este motivo tomó una
coloración violeta indicando la presencia de enlaces peptídicos y por ende la de
proteínas.

VII. COMCLUSION
Las proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas
(mercurio,cobre ,plomo) formando precipitados

En las reacciones donde se obtuvo precipitación se debió a un

cambioen el estado físico de la proteína , mientras que en la
coagulación se haproducido un cambio en el estado físico y en la
estructura química por eso es irreversible.
VIII. BIBLIOGRAFIA
http://www.monografias.com
http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf

IX. ANEXOS