Prof.

Alejandro Yévenes
Grupos catalíticos contribuyen a la catálisis
1. Catálisis ácido – base
2. Catálisis covalente
3. Catálisis de unión a iones metálicos

Catálisis ácido-base general: Muchas

reacciones suponen la formación de
intermediarios cargados inestables que
tienden a descomponerse rápidamente.

Los intermediarios cargados a menudo se

pueden estabilizar transfiriendo protones a o
desde el sustrato o intermediario para
formar una especie que se descompone en
productos más fácilmente que en reactivos.

El término catálisis ácido-base general

se refiere a transferencias de protones
facilitadas por otra clase de moléculas
(no agua).

Varias cadenas laterales de aminoácidos

pueden actuar como dadores y aceptores
de protones en el sitio activo de la enzima.
Aminoácidos que participan an catálisis ácido – base
 Grupos catalíticos contribuyen a la catálisis
1. Catálisis ácido – base
2. Catálisis covalente
3. Catálisis de unión a iones metálicos

Catálisis covalente: En la catálisis covalente se forma un enlace transitorio entre la enzima y el sustrato.

Consideremos la hidrólisis de A-B, en presencia de un catalizador covalente (una enzima con un grupo
nucleofílico X:).

Esto altera la ruta de la reacción y sólo produce catálisis si la nueva ruta tiene una energía de activación
inferior a las de la ruta no catalizada.
 Grupos catalíticos contribuyen a la catálisis
1. Catálisis ácido – base
2. Catálisis covalente
3. Catálisis de unión a iones metálicos
Catálisis por iones metálicos. Interacciones iónicas entre un metal fijado a la enzima y el sustrato
pueden ayudar a orientar un sustrato para que reaccione o estabilizar estados de transición de la
reacción que estén cargados.

Los metales también pueden facilitar reacciones de oxido-reducción mediante cambios reversibles en el
estado de oxidación del ion metálico.

Catálisis ácido-base
general y covalentes
Esquema de un sitio activo: catálisis ácido – base
P = Concentración de Producto

A = Concentración de Sustrato

X = Concentración Complejo ES
Cinética enzimática: Efecto de la concentración de Sustrato
KR
E+S E+P
K-R

k1 k2
E+S ES E+P
k -1 k -2

k2 << k1 por lo que kR (de la reacción global) depende de k2

Si kR depende de k2, entonces depende de la [ES]

• Si hay poco S, hay poco ES por lo que la reacción será más lenta
• Si hay mucho S, hay mucho ES por lo que la reacción será más rápida
• Si hay exceso de S, toda la E disponible está como ES, por lo que se
alcanza la velocidad máxima de reacción
Ecuación de Michaelis - Menten
Ecuación de Michaelis – Menten: Parámetros

VMAX = Velocidad máxima de

la reacción.

Km = constante de Michaelis

Concentración de sustrato
a la cual la velocidad de la
reacción es ½ de Vmax.
 Ecuación de Michaelis – Menten: Km
Vmax [S ]
V0 
K m  [S ]

Vmax Vmax [S ]
Cuando V0 = Vmax / 2 
2 K m  [S ]

1 [S ]

2 K m  [S ]

K m  [S ]
 [S ]
2

K m  [S]  2[S]

K m  [S]
Ecuación de Michaelis - Menten

Si [S] es pequeña, entonces

Lo que explica la primera parte lineal

y por qué V0 depende la [S] en
cuando [S] es pequeña
Ecuación de Michaelis - Menten

Si [S] es muy grande, Km es despreciable

Simplificando por [S], tenemos

Lo que explica por qué V0 es

independiente de [S] cuando [S] es muy
grande
 Los dobles recíprocos de la Michaelis – Menten

Vmax [S ]
V0 
K m  [S ]
y=mx+n
1 K m  [S ]
 y equivale a 1/V0
V0 Vmax [S ]
m equivale a Km/Vmax
1 Km [S ]
  x equivale a 1/[S]
V0 Vmax [S ] Vmax [S ]
n equivale a 1/Vmax
1 Km 1
 
V0 Vmax [S ] Vmax
1 Km 1 1
 
V0 Vmax [S ] Vmax
Los dobles recíprocos: Ecuación de Lineweaver-Burk

y=mx+n
y equivale a 1/V0
m equivale a Km/Vmax
x
x equivale a 1/[S]
n equivale a 1/Vmax
 Los dobles recíprocos

1
0
V0
Km 1
0 
Vmax [S ] Vmax
1 Km
 
Vmax Vmax [S ]
Km
1
x [S ]
[S ]  K m
1 1

[S ] Km
Los dobles recíprocos: Ecuación de Lineweaver-Burk

1
0
[S ]
1 Km 1 1
 
V0 Vmax [S ] Vmax
1 1

V0 Vmax

x
Km varía entre enzimas, incluso entre sustratos de una enzima
 Constante catalítica

k1 k2
Vmax = k2·[ET]
E+S ES E+P k2 = Vmax/[ET]
k-1

k1 k2 k3
Vmax = k3·[ET]
E+S ES EP E+P k3 = Vmax/[ET]
k-1 k-2

Vmax = kcat [ET] kcat = Vmax / [ET]

 Constante catalítica o Números de recambio
kcat de algunas enzimas

Kcat también es conocido como el número de recambio, es equivalente al número

De moléculas de sustrato convertidas en producto por unidad de tiempo en una
sola molécula de enzima cuando la enzima esta saturado con el sustrato (Lehninger)
Kcat = Vmax/ Enz

Sí la enzima tiene dos o mas sitios activos, Kcat es usualmente llamada número de
Recambio, al máximo número de moléculas de S que convertido en producto por sitio
Activo por unidad de tiempo.

Número de recambio = Vmax / Número de sitios activos

Eficiencia catalítica

Kcat / Km
Análisis cinético en el estado estacionario
de las reacciones bisustrato.
(a) La enzima y ambos sustratos se unen
formando un complejo ternario. En el
sistema ordenado, el sustrato 1 debe
unirse antes de que el sustrato 2 se pueda
unir de manera productiva. En la unión
estadistica o al azar, la unión de los
sustratos se puede dar en cualquier orden.

(b) Ping Pong, se forma un complejo enzima-

sustrto, un producto abandona el complejo,
la enzima modificado forma un segundo
producto, regenerando el enzima. El
sustrato 1 puede transferir un grupo
funcional a la enzima (E´modificado
covalentemente) que es posteriormente
transferido al sustrato2. Mecanismo Ping-
pong o de doble desplazamiento
Análisis cinético en el estado estacionario de las reacciones bisustrato.
Sí las líneas se cortan se ha formado un complejo ternario en la reacción, si son paralelas, la
reacción transcurre a través de una ruta ping-pong o de doble desplazamiento.

En el mecanismo ordenado o al azar, los dos sustratos se unen a la misma

forma de enzima por lo que se altera la pendiente. En el mecanismo ping-
pong los sustratos no se unen a la misma forma de la Enzima por lo que la
presencia del segundo sustrato no afecta la unión y catálisis de la primera
parte de la reacción.
Relación entre la velocidad de reacción y Concentración de Sustrato:

(a) Cual es la concentración de sustrato para que la velocidad de reacción sea un cuarto de la
Vmax. Datos:
kcat de 30,0 s-1
Km de 0,0050 M.

(b) Determinar la fracción de Vmax que se obtendría a las siguientes concentraciones de

sustrato: [S] = 0.5 Km
[S] = 2 Km
[S] = 10 Km.
La hidrólisis de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilina (GPNA) para dar p-nitroanilina y N-glutaril-
L-fenilalanina, está catalizada por la enzima a-quimotripsina. En unas determinadas
condiciones de pH y temperatura, los datos cinéticos obtenidos han sido los siguientes:

N-glutaril-L-Fenilalanina-p-nitroanilida p-Nitroanilina + N-glutaril-L-fenilalanina

Los datos cinéticos para la enzima son:

Vmax= 12.5 mmol / L min
Km = 1.19 x 10-3 M
[E] = 4 x 10-6 M

Determine el valor del nº de recambio (k2):

este número de recambio significaría que 1 molécula de enzima es capaz de hidrolizar 52

moléculas de sustrato por segundo.
Se representan las gráficas de la velocidad inicial frente a concentración de glucosa, fructosa y de ATP de la
hexoquinasa y de su isoenzima hepática la glucoquinasa.
Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminoácidos, pero que catalizan la misma
reacción química. Estas enzimas suelen mostrar diferentes parámetros cinéticos, o propiedades de regulación
diferentes. La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer las necesidades
particulares de un determinado tejido o etapa del desarrollo.

a) Calcular los valores aproximados de Km y Vmax para glucosa de ambas enzimas y para ATP
b) ¿La hexoquinasa es específica para la glucosa o la fructosa?
c) ¿Qué enzima tiene mayor afinidad por la glucosa?
Efecto del pH en la actividad enzimática