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Fundamentação teórica:

Técnica de Esgotamento por Estriamento:

A técnica de semeadura por esgotamento é utilizada para obtenção


de colônias soladas em meio sólido. A técnica visa obter colônias isoladas
de bactérias presentes em materiais biológicos, permitindo a diferenciação
de diferentes bactérias.

Técnica de Esgotamento por Espalhamento:

Esta tecnica tem a finalidade de espalhar o material na superfície da


placa com o auxílio de um swab para a obtenção de colônias isoladas após a
diluição, realizando a semeadura por toda a placa de petri. A semeadura
com o swab deve ser feita em três direções distintas, com diferença de 30
graus, e com a alça em toda a superfície, girando a placa.

Quando há desenvolvimento de colônias isoladas na superfície do


meio, considera-se o isolamento correto. Neste método verificam-se as
características de colônias quanto aos seguintes aspectos:

a) tamanho: o tamanho das colônias varia desde dimensões muito


pequenas (puntiformes), com apenas uma fração de milímetros de
diâmetro, até colônias muito grandes, com 5 a 10 mm de diâmetro. Outras
bactérias, como, por exemplo Proteus sp espalham-se sobre toda a
superfície do ágar.

b) borda: a periferia das colônias bacterianas pode formar muitos


desenhos diferentes, dependendo da espécie. Pode ser inteira, ondulada,
lobulada, denticulada ou franjada.

c) elevação: as colônias podem ser achatadas, espraiadas, convexas


(baixa e alta), umbilicada, centro saliente.

d) cromogênese ou pigmentação: opaca, translúcida ou com pigmento.

e) forma: as colônias podem ser circulares, irregulares ou rizóides.

f) consistência da massa de crescimento: pode ser butírica ou de


consistência semelhante à da manteiga, facilmente removível com a alça de
inoculação: viscosa ou mucóide;seca ou quebradiça.

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (ANTIBIOGRAMA)

Antibiogramas são bioensaios conduzidos “in vitro” que visam testar a


sensibilidade de bactérias aos antimicrobianos. A proposta primária deste
teste é guiar o clínico na escolha do agente apropriado para a terapia. Os
testes de rotina fornecem dados acumulados, que são informações sobre os
agentes para uso empírico. Além disso, estes testes são utilizados para
avaliar “in vitro” a atividade de novos agentes, e auxiliar no mapeamento
da emergência de bactérias resistentes. A suscetibilidade antimicrobiana
pode ser reportada qualitativamente como sensível, intermediário ou
resistente; ou quantitativamente em termos de MIC (minimun inhibitory
concentration) ou MBC (minimun bactericidal concentration).

1- Teste Quantitativo da sensibilidade aos antimicrobianos:


Método de diluição: consiste em preparar sucessivas diluições dos
antibióticos em meio sólido ou líquido e em seguida semear a bactéria em
estudo. Após incubação determina-se MIC e/ou MBC.

2- Método de difusão de Bawer e Kirk (modificado pela FDA): é


um teste qualitativo, no qual discos de papel impregnados com o antibiótico
são colocados na superfície do ágar uniformemente semeado com o
microrganismo. A droga se difunde no ágar e produz inibição do agente
sensível, formando um halo de inibição que deve ser medido e comparado
com tabelas padronizadas.

Ao invés de uso de antibióticos, pode ser utilizado produtos químicos


que interfiram no crescimento bacteriano, como antissépticos e
desinfetantes.No método de disco-difusão, um disco de papel filtro é
embebido com uma substância química e colocado em uma placa de agar
inoculada; uma zona de inibição indica efetividade.

Tipos de Desinfetantes:

Álcool:

− Os álcoois exercem sua ação desnaturando as proteínas e


dissolvendo os lipídeos.
− Em tinturas, eles aumentam a efetividade de outros produtos
químicos anti-microbianos.
− O etanol aquoso (60 a 95%) e o iso-propanol são usados como
desinfetantes.

Halogênios (Iodo e Cloro):

− Alguns halogênios (iodo e cloro) são usados isoladamente ou como


componentes de soluções inorgânicas ou orgânicas.
− O iodo pode ser combinado com certos aminoácidos para inativar
enzimas e outras proteínas celulares.
− O iodo está disponível como tintura (em solução com álcool) ou como
iodofor (combinação a uma molécula orgânica).
− A ação germicida do cloro baseia-se na formação de ácido hipo-
cloroso quando o cloro é adicionado á água.
− O cloro é usado como desinfetante em forma gasosa (Cl2 ou ClO2) ou
em um composto, como o hipo-clorito de cálcio, o hipo-clorito de
sódio, o di-cloro-iso-cianureto de sódio e as cloraminas.

Fenol e compostos fenólicos

− Os compostos fenólicos exercem sua ação lesando as membranas


plasmáticas.