ESCUELA POLITÉCNICA NACIONAL

FACULTAD DE INGENIERÍA CIVIL Y AMBIENTAL

INGENIERÍA AMBIENTAL

PRÁCTICA DE LIMNOLOGÍA

Análisis de Fosfatos, Nutrientes y Clorofila a

Jeniffer Cuestas

2018-A
PRACTICA N°1

1. Tema: Análisis De Clorofila “A” Por El Método Espectrofotométrico

2. Objetivo:

 Determinar la concentración de clorofila “a” en una muestra de agua,

empleando el método modificado de Nusch.

3. Marco Teórico:
La clorofila a (𝐶55 𝐻72 𝑀𝑔𝑁4 𝑂5 ) corresponde aproximadamente al 75% de los
pigmentos verdes encontrados en la naturaleza. La concentración de clorofila-a
se utiliza para estimar en forma indirecta la biomasa de las comunidades
fitoplanctónicas, debido a que es el principal pigmento fotosintético presente en
las algas (Rivera et al, 2005).
Medición espectrofotométrica.
Consiste en leer el extracto de clorofila en la cubeta a las longitudes de onda
propuestas por la ecuación escogida. Normalmente estas longitudes de onda
corresponden a los máximos de absorción para los diferentes pigmentos siendo
los más comunes 665, 645, 630 Y 480 nm, Hay que proceder, además, a una
lectura a 750 nm para determinar la turbidez y color, y sustraer el valor obtenido
de cada uno de los otros valores.

4. Cálculo de la concentración de clorofila.

El método de Nusch emplea la siguiente ecuación:
𝑣
𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓 "𝑎" = 29.6 × 𝐿 × × [(𝐴665 − 𝐴750 ) − (𝐴𝑎665 − 𝐴𝑎750 )]
𝑉
Donde:
Clorof “a”: concentración de clorofila [µg/l]
L: longitud del paso de la luz a través de la cubeta [cm]
v: volumen del extracto [ml]
V: volumen de la muestra filtrada [ml]
A665 y A750: absorbancias sin acidificar.
Aa665 y Aa750: absorbancias luego de la acidificación.
El factor 29.6 incluye el coeficiente de absorción específico de la clorofila “a” pura
en etanol [l/µg cm]

5. Datos
Los datos obtenidos en laboratorio para clorofila a fueron los siguientes:
LONGUITUD DE ONDA
Medio
630 645 663 665 750
Etanol 0.045 0.064 0.144 0.146 0.007
FONDO 1
Acidificado 0.043 0.06 0.014 0.142 0.003
OLIGOTRÓFICO Etanol 0.068 0.084 0.162 0.165 0.027
FONDO 2
Acidificado 0.046 0.064 0.127 0.135 0.026
 Etanol 0.05 0.06 0.143 0.14 0.0093
SUPERFICIE 1
Acidificado 0.051 0.066 0.139 0.144 0.009
Etanol 0.029 0.039 0.083 0.084 0.006
SUPERFICE 2
Acidificado 0.015 0.023 0.051 0.051 0.007

Datos Morfométricos del Lago de Estudio (Guatavitas)

DIMENSIONES SÍMBOLO UNIDAD Originales

Longitud Máxima Lmax m

437

Longitud Máxima Efectiva Le m

437
Ancho Máximo B m
325

Ancho Efectivo Be m
325
L/B - - 1.34
Área Total a m² 114017
Área Superficial A m²
114017
Ancho Medio Bm m
260.9

Longitud de la Línea Costera lo m

1305

Índice de desarrollo de la línea

F m
costera
1.090
Profundidad Máxima Dmax m
30
Profundidad Media Dm m
12.7
Volumen V km³ 1.45E+15
Volumen V m³ 1450510
Vd V - 1.27
Profundidad relativa Dr %
7.9

6. Resultados
Aplicando e método de Nusch se utiliza la siguiente ecuación
𝑣
𝐶𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓 "𝑎" = 29.6 × 𝐿 × × [(𝐴665 − 𝐴750 ) − (𝐴𝑎665 − 𝐴𝑎750 )]
𝑉
Los valores obtenidos fueron:

Cl a (ug/l)

FONDO 1 0

FONDO 2 0.8584
OLIGOTRÓFICO
SUPERFICIE 1 -0.12728

SUPERFICE 2 1.0064

Para calcular el Índice trófico se empleó el método de Carlson

TSI

FONDO 1 -

FONDO 2 22.933
OLIGOTRÓFICO
SUPERFICIE 1 -

SUPERFICE 2 24.67

También para definir el Índice Trófico se puede usar el método OCDE

Tabla N°1. Grado de Eutrofia que pueden alcanzar los lagos.

 Los datos morfométricos obtenidos de lago nos indica que

L/B - 1.34 Es Un lago regular

Índice de desarrollo de la
m
línea costera Se lo considera un lago
1.090 regular
Índice de Desarrollo de Es un Lago tipo Cóncavo de
-
Volumen 1.27 forma similar a una U
Dr >4, Es un Lago profundo
Profundidad relativa %
7.9 con área pequeña

7. Conclusiones

 Los datos obtenidos de clorofila en superficie y fondo de lago de estudio

según el método OCDE, indican un estado trófico de un cuerpo de agua
oligotrófico ya que la cantidad de clorofila a en superficie esta entre los
rangos 1-2,5 ug/l, lo que significa que hay una baja productividad primaria
y una limitada cantidad de organismos fotosintetizadores.
 El cálculo del Índice Trófico de Carlson indican que el cuerpo de agua es
oligotrófico ya que el valor obtenido es menor a 40, al tener estas
características el lago podría tener aguas trasparentes y difícilmente se
presentaría problemas con algas.
 Al relacionar los datos de clorofila obtenidos con la morfometria del lago
de Estudio, el lago podría presentar condiciones oligotróficas debido a su
área pequeña en comparación con su profundidad, ya que no habría un
aporte de nutrientes significativo lo que hace que no haya muchos
organismos fotosintetizadores, y como es profundo hace que exista una
mayor difusión de estos organismos en el cuerpo de agua.

8. Recomendaciones
 Se debe tomar muestras de manera habitual ya que se tendría en cuenta
periodos de lluvia y periodos secos, lo cual influye en la cantidad de
organismos fotosintetizadores en los cuerpos de agua.
 Al momento de realizar la práctica asegurarse que se cumplan las 24
horas en la oscuridad a temperatura ambiente para lograr un dato
representativo de Clorofila a.
 Se debe registrar el valor exacto de muestra filtrada asegurándose de que
se sature el filtro para obtener resultados representativos.

9. Bibliografía

Dorador, C. (2003). Variaciones temporales de parámetros físicos, químicos y biológicos de un lago de

altura: el caso del lago Chungará. Obtenido de https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?pid=S0716-
078X2003000100002&script=sci_arttext#t1
Rivera, C., Zapata, A., Pinilla, G., & Donato, J. (2005). COMPARACIÓN DE LA ESTIMACIÓN DE LA
CLOROFILA-a MEDIANTE LOS MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICO Y FLUOROMÉTRICO.
Obtenido de http://www.scielo.org.co/pdf/abc/v10n2/v10n2a07.pdf
PRACTICA N°2

1. Tema: Amoniaco, Nitratos y Nitritos

2. Objetivo

 Determinar la presencia de amoniaco, nitratos y nitritos en una muestra de agua.

3. Marco Teórico

Todas las formas de nitrógeno son inofensivas a los organismos acuáticos excepto el
amoníaco no ionizado y el nitrito, que puede ser tóxico para los peces. El nitrito no es
generalmente un problema en los cuerpos de agua, sin embargo, si hay bastante
oxígeno disponible en el agua para que se oxide, el nitrito puede ser convertido
fácilmente a nitrato. El contenido en amoníaco, materia orgánica, nitritos y bacterias
indicadoras de contaminación fecal son los mejores indicadores de la calidad de un
agua. La presencia de amoníaco indica una degradación incompleta de la materia
orgánica.

4. Reactivos Materiales y Equipos:

Nitratos
 Reactivo Nitra Ver 5 Nitrate Regent.
 Espectrofotómetro (Método 355)
 Probeta de 50mL
 Pipeta de 1mL
 Propipeta

Nitritos
 Reactivo Nitri Ver 3 Nitrite Regent.
 Espectrofotómetro (Método 371)
 Probeta de 50mL
 Pipeta de 1mL
 Propipeta

Amoniaco
 Reactivo Mineral Stabilizer, Polyvinyl Alcohol Dispersing, Reactivo Nessler.
 Espectrofotómetro (Método 380)
 Probeta de 50mL
 Pipeta de 1mL
 Propipeta

5. Procedimiento

NITRATOS:
Método de reducción de Cadmio (Alto rango 0,30 – 30mg/l NO-3 – N)
 Seleccionar el programa 355 en el espectrofotómetro.
 Agregar 10 mL de muestra en una celda.
  Agregar el reactivo Nitra Ver 5 NitrateRegent en la celda anterior. (si hay
presencia de nitratos se tendrá un color ámbar)
 Mezclar vigorosamente. (Esperar 5 minutos)
 Agregar 10 mL de muestra en otra celda.
 Proceder a encerar (se registrará 0.0 mg/L NO3- - N).
 Proceder a leer la muestra con reactivo (mg/L NO3- - N).

NITRITOS:
Método de Diazotization (Bajo rango 0,002 – 0,3 mg/l NO-2 – N)
 Seleccionar el programa 371 en el espectrofotómetro.
 Agregar 10 mL de muestra en una celda.
 Agregar el reactivo Nitri Ver 3 NitriteRegent en la celda anterior. (si hay presencia
de nitritos se tendrá un color rosado)
 Mezclar vigorosamente. (Esperar 20 minutos)
 Agregar 10 mL de muestra en otra celda.
 Proceder a encerar (se registrará 0.0 mg/L NO2- - N).
 Proceder a leer la muestra con reactivo (mg/L NO2- - N).

AMONIACO:
Método Nessler (0,02 – 2,50 mg/l NH3 – N)
 Seleccionar el programa 380 en el espectrofotómetro.
 Agregar 25 mL de muestra en una probeta.
 Agregar 25 mL de agua destilada en una probeta.
 Agregar 3 gotas del reactivo Mineral Stabilizer a cada probeta. Tapar con papel
aluminio y mezclar.
 Agregar 3 gotas de Polyvinil Alcohol Dispersing a cada probeta. Tapar y mezclar.
 Agregar 1 mL del reactivo Nessler en cada probeta. Tapar y mezclar.
 Esperar 1 minuto para que reaccionen los componentes.
 Succionar 10 mL del contenido de cada probeta, y agregar a dos celdas
respectivamente.
 Proceder a encerar el equipo (muestra de agua destilada con reactivos) (0.0 mg/l
NH3-N).
 Proceder a leer la muestra con reactivos (mg/L NO3 - N).

6. Datos

Nitrógeno
Nitrito Nitratos
Amoniacal
[mg/l] [mg/l]
[mg/l]
FONDO 1 0.007 0.3 0.02

FONDO 2 0.004 0.3 0.14

OLIGOTRÓFICO SUPERFICIE
0.003 0.4 0.06
1
SUPERFICE
0.005 0.6 0.09
2
Perfil de Temperaturas vs Oxígeno Disuelto

OLIGOTRÓFICO (Lunes 16:45)

Temperatura
h [cm] OD [mg/l]
[°C]
30 20.6 7.95
25 20.6 7.92
20 20.8 7.87
15 20.8 7.93
10 20.9 8
5 20.9 7.85
0 20.5 7.98

Perfil de Temperatura y Oxígeno Disuelto (Lunes 16:45)

35

30

25

20
Altura

15 Temperatura

10 OD

0
0 5 10 15 20 25
Temperatura

OLIGOTRÓFICO (Martes 15:30)

Temperatura OD
h [cm]
[°C] [mg/l]
30 20.2 7.32
25 20.1 7.25
20 20.8 7.2
15 21.8 7.11
10 22.4 7.08
5 23 7.06
0 22.9 7.02
 Perfil de Temperatura y Oxígeno Disuelto (Martes 15:30)
35

30

25

20
Altura

Temperatura
15
OD
10

0
0 5 10 15 20 25

7. Resultados
 Según el Perfil de Oxigeno y de temperaturas, los cambios en estos dos factores
influyen en disponibilidad de Nutrientes.
 Las curvas de Oxígeno Disuelto en los dos días de estudio tiendes a ser
ortogradas, características de cuerpos oligotróficos.
 La mayor cantidad de nutrientes se encuentra en la superficie del lago analizado.
8. Conclusiones
 Los datos de fondo de nutrientes muestran que a mayor profundidad menor
disponibilidad de nutrientes.
 La cantidad de nitritos en el fondo ya que son producto de la degradación de los
sedimentos del cuerpo de agua analizado.
 La cantidad de nitratos y amoniaco en la superficie son mayores que los datos
de fondo lo que nos indica que no hay fenómenos de mezcla.
 Relacionando los datos obtenidos con el lago de estudio (Guatavitas), al estar
este lago en una zona templada y siendo muy profundo las mezclas se
encuentran limitadas por lo que la distribución de nutrientes en la columna de
agua no es uniforme, los nitritos pueden ser un problema porque al ser profundo
el lago, la parte de fondo tendrá a tender condiciones que favorezcan a la
degradación y con ello al aumento de los nitritos.

9. Recomendaciones
 Se debe tomar en cuenta las temperaturas y el oxígeno disuelto en toda la
columna de agua ya que nos dará una visión más clara de cómo están
distribuidos los nutrientes en la columna de agua y si se pueden presentar
fenómenos de mescla.
  Se debe tomar muestras de nutrientes de toda la columna de agua, de esta forma
se tendrá se podrá analizar de mejor forma el tipo de nutriente y que factores
influyen en su disponibilidad.
 En el momento de realizar la practica seguir las instrucciones para la preparación
de la muestra, cumplir con el tiempo de agitación y rasposo recomendados por
los instructores de laboratorio.
10. Bibliografía
Cabrera, E. (2003). Determinación de nitratos y nitritos en agua. Comparación de costos.
Obtenido de http://www.scielo.org.mx/pdf/rsqm/v47n1/v47n1a14.pdf
DANE. (2013). Sistema de Información del Medio Ambiente. Obtenido de Nitrogenos
Totales:
https://www.dane.gov.co/files/investigaciones/pib/ambientales/Sima/Nitrogenos
_totales_13.pdf
Wayne, A., & Warwick, V. (2013). Nutrientes y su limitación del crecimiento del
fitoplancton. Obtenido de http://horizon.documentation.ird.fr/exl-
doc/pleins_textes/divers08-10/36616.pdf
 PRÁCTICA N°3
1. Tema: Fosfatos

2. Objetivos:

 Determinar la presencia de fosfatos en una muestra de agua.

3. Marco Teórico

El fósforo está presente en las aguas naturales en forma de fosfatos. Los fosfatos se
encuentran en los fertilizantes y los detergentes y pueden llegar al agua con el
escurrimiento agrícola, los desechos industriales y las descargas de aguas negras.

Los fosfatos estimulan el crecimiento de las algas lo que puede ocasionar un crecimiento
rápido de las algas. Al crecer las plantas y las algas, ahogan a otros organismos.

Tabla Nº 1 Calidad del agua de acuerdo al nivel de fosfato

Nivel de Fosfato Calidad del Agua

(en ppm)
0,0 - 1,0 Excelente
1,1 - 4,0 Buena
4,1 - 9,9 Aceptable
10,0 o más Mala

Tabla N°2 Nivel de Productividad según el Fosforo Total

Los niveles de fósforo son generalmente menores en regiones montañosas de

geomorfología cristalina. La concentración de fósforo aumenta en tierras bajas
derivadas de depósitos rocosos sedimentarios. Lagos ricos en materia orgánica, tales
como pantanos y ciénagas tienden a exhibir concentraciones de fósforo más altas.

4. Reactivos Materiales y Equipos:

 Materiales:

 Matraz erlenmeyer de 125mL.

 Plato calentador.
 Probeta de 25 mL.
 Espectrofotómetro.
 Papel aluminio.

Reactivos:

Fosfato total

 Reactivo potassium persulfate.

 Reactivo phos ver 3.
 Ácido sulfúrico 5,25N (2mL).
 Hidróxido de sodio 5N (2mL).
 Agua destilada.
 Agua cruda y tratada.

Ortofosfato
 Reactivo phos ver 3 phosphate.
 Agua cruda y tratada.
5. Procedimiento:

FOSFORO TOTAL (Método Ácido Persulfato Digestion):

 Agregar 125 mL de muestra en un erlenmeyer.
 Agregar el contenido del reactivo Potassium Persulfate y agitar.
 Agregar 2 mL de ácido sulfúrico 5,25 N.
 Calentar la muestra hasta alcanzar ebullición en una plancha de calentamiento por
alrededor de 30 minutos. Mantener el volumen alrededor de 20mL adicionando agua
destilada.
 Enfriar la muestra a temperatura ambiente.
 Agregar 2 mL de hidróxido de sodio 5N. Agitar.
 Colocar la muestra en una probeta de 25mL. Aforar a 25 mL con agua destilada.
 Agregar el contenido del Reactivo Phos Ver 3 a la muestra. Esperar 10 minutos para
que reaccione.
 Escoger el programa 536 en el espectrofotómetro. Proceder a encerar con la muestra
sin reactivos.
 Realizar la lectura de la concentración de fósforo total en mg/L.

ORTOFOSFATO (Método 8048 PhosVer3 rango 0,02 – 2,50 mg/l (PO4)-3 )

 Seleccionar el programa 490 en el espectrofotómetro.
 Agregar 10 mL de muestra en una celda.
 Agregar el Phos Ver 3 Phosphate en la celda anterior. Tapar con papel aluminio y
mezclar por 30 segundos.
 Agregar 10 mL de muestra en otra celda.
 Proceder a encerar con la muestra sin reactivos.
 Proceder a leer la muestra con reactivo (mg/L (PO4)-3).

6. Datos
 Orto Fósforo
fosfatos Total
[mg/l] [mg/l]
FONDO 1 0.1 -

FONDO 2 0.12 0.03

OLIGOTRÓFICO
SUPERFICIE 1 0.24 0.28

SUPERFICE 2 0.21 0.29

Los datos morfométricos obtenidos de lago nos indica que

L/B - 1.34 Es Un lago regular

Índice de desarrollo de la
m
línea costera Se lo considera un lago
1.090 regular
Índice de Desarrollo de Es un Lago tipo Cóncavo de
-
Volumen 1.27 forma similar a una U
Dr >4, Es un Lago profundo
Profundidad relativa %
7.9 con área pequeña

7. Resultados
Datos TSI según Carlson para Fósforo

TSI

FONDO 1 -
FONDO 2 53.493214

OLIGOTRÓFICO SUPERFICIE
1 81.5261403
SUPERFICE
2 81.9665574

Tabla N°1. Grado de Eutrofia que pueden alcanzar los lagos (OCDE)
8. Conclusiones
 Según la clasificación OCDE, nos indica que el cuerpo de agua analizada tiene
características de un lago mesotrófico en la parte del fondo del lago, el cual
puede ser un indicador temprano del comienzo de un proceso de eutrofización.
Pero a diferencia de la Superficie este cuerpo de agua presenta condiciones
eutróficas, podría deberse a que no hay muchos consumidores primarios pero
existe la degradación de materia orgánica o que hay sedimentos de fosforo que
provienen de la formación geológica en donde se encuentre el cuerpo de lago.
 El valor de Índice Trófico de Carlson nos indica que nuestro cuerpo de agua
presenta condiciones eutróficas ya que supera el rango de 40 -50, esto puede
ser un problema porque a futuro puede causar problemas de Eutrofización y con
ello la degradación de la calidad del Agua.
 En relación con la morfología de nuestro el lago estudio (Guatavitas), la cantidad
de fosforo indica que es un cuerpo eutrofizado pero hay que tener en cuenta que
la cantidad de orto fosfatos que se obtuvo es un indicativo de calidad de agua
excelente según bibliografía, esto quiere decir que la cantidad asimilable se
encuentra dentro de los límites y los organismos que aprovechan estos fosfatos
también están controlados debido a que no hay la cantidad suficiente de
nutrientes que puedan causar el crecimiento incontrolado de algas, como
nuestro lago es uniforme pero tiene un volumen muy grande los fosfatos se
encuentra dispersos en todo el cuerpo de agua en poca concentración.
9. Recomendaciones
 Para afirmar que el fosforo está siendo el causante de los problemas de
eutrofización de un lago debemos fijarnos si los fosfatos (asimilable) son los que
forman la mayor parte de ese fosforo, ya que si los fosfatos se encuentra en sus
límites, serian otros los factores que causen eutrofización.

10. Bibliografía

Gonzalez, L. (2010). INFLUENCIA DE LA DEFICIENCIA DE NITRÓGENO Y FÓSFORO

EN LAS INTERACCIONES COMPETITIVAS ENTRE. Obtenido de
http://www.bdigital.unal.edu.co/5336/1/linamariagonzalezgonzalez.2010.pdf
Massol, A. (2010). Fósforo. Obtenido de MANUAL DE ECOLOGIA MICROBIANA:
https://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p3-fosforo.pdf
Sánchez, J. (2010). EL FOSFORO, PARAMETRO CRITICO DE CALIDAD DE AGUA
TECNICAS ANALITICAS Y DE MUESTREO. Obtenido de
http://www.ingenieroambiental.com/junio/fosforo.pdf
Conclusiones Generales
 La forma del lago Guatavitas nos indica que es un lago de formación volcánica,
la característica principal de estos lagos es que tienen grandes profundidades lo
cual influye mucho en como se diluyen los nutrientes, y una característica de los
lagos de origen volcánico es que son oligotróficos, es decir que su productividad
primaria es pequeña e indica la poca presencia de nutrientes y de
fotosintetizadores en sus aguas.
 La temperatura y el oxígeno influyen en gran manera en la disposición de
nutrientes dentro del agua, al ser el lago Guatavitas muy profundo este se
estratificara es decir que en la superficie donde se encuentra la mayor actividad
fotosintética tendrá más valores de Nutrientes y de Clorofila A, a medida que se
desciende este valor va a descender.
 El agua proveniente de ese tipo de lagos es segura ya que no tienen turbidez
que afecte su calidad y su sabor, así mismo permite la vida de especies acuáticas
que solo viven en este tipo de lagos por ejemplo la trucha.