PENGARUH EKSTRAK DAUN TEH HIJAU (Camellia sinesis l.

)
TERHADAP JUMLAH SPERMATOZOA MENCIT JANTAN (Mus
musculus L.) YANG DIBERI PAPARAN ASAP ROKOK

JUDUL HALAMAN
SKRIPSI

Diajukan Oleh :

DIYAH ARUM SETIASIH

J500140108

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
2017
 PROPOSAL SKRIPSI

PENGARUH EKSTRAK DAUN TEH HIJAU TERHADAP MORFOLOGI

SPERMATOZOA MENCIT JANTAN ( Mus musculus ) YANG DIBERI
PAPARAN ASAP ROKOK

LEMBAR PERSETUJUAN
Yang diajukan Oleh :

Diyah Arum Setiasih

J500140108

Telah disetujui oleh Penguji Utama Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas

Muhammadiyah Surakarta, Pada hari Jum‘at, tanggal 21 Juli 2017

Pembimbing Utama

Nama Pembimbing Utama

NIP/NIK :

Kepala Biro Skripsi

Dr.__________________

NIK.
 PROPOSAL SKRIPSI

PENGARUH EKSTRAK DAUN TEH HIJAU TERHADAP MORFOLOGI

SPERMATOZOA MENCIT JANTAN ( Mus musculus ) YANG DIBERI
PAPARAN ASAP ROKOK

Yang diajukan Oleh :

Diyah Arum Setiasih

J 50014 0108

Telah disetujui oleh tim Penguji Fakultas Kedokteran Universitas

Muhammadiyah Surakarta

Pada hari Jum’at, tanggal 21 Juli 2017

Penguji

Nama : ……………………………………… (……………………….)

Nip/Nik :

Pembimbing Utama

Nama : ……………………………………… (……………………….)

Nip/Nik :

Pembimbing Pendamping

Nama : ……………………………………… (……………………….)

Nip/Nik :

LEMBAR PENGESAHAN

Dekan FK UMS

DR. Dr. Em. Sutrisna, M.Kes

ii
 DAFTAR ISI

Contents
JUDUL HALAMAN ....................................................................................... i

LEMBAR PERSETUJUAN............................................................................ i

LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................... ii

DAFTAR ISI ................................................................................................. iii

BAB I ............................................................................................................. 1

PENDAHULUAN ......................................................................................... 1

A. Latar Belakang ................................................................................. 1

B. Rumusan Masalah ............................................................................ 2

C. Tujuan ............................................................................................... 3

D. Manfaat ............................................................................................. 3

BAB II ............................................................................................................ 4

LANDASAN TEORI ..................................................................................... 4

A. Tinjauan Pustaka ............................................................................. 4

1. Teh ..................................................................................................... 4

a. Definisi ............................................................................................ 4

b. Taksonomi ...................................................................................... 4

c. komposisi kimia ............................................................................. 5

2. Teh hijau ........................................................................................... 7

3. Infertilitas .......................................................................................... 8

a. Definisi ............................................................................................ 8

b. Klasifikasi ........................................................................................ 8

c. Factor risiko ..................................................................................... 8

iii
 4. Spermatozoa ..................................................................................... 9

a. Definisi ............................................................................................ 9

b. Anatomi organ ............................................................................... 10

c. Spermatogenesis ............................................................................ 11

d. Analisis sperma ............................................................................. 13

e. Interpretasi hasil sperma normal............................................... 14

5. Rokok............................................................................................... 16

a. Definisi .......................................................................................... 16

b. Kandungan ..................................................................................... 16

c. Penyakit yang ditimbulkan......................................................... 18

d. Hubungan asap rokok dengan kesehatan sperma ................... 20

6. Tinjauan Penelitian Terdahulu ..... Error! Bookmark not defined.

B. Kerangka Teori .............................................................................. 20

C. Kerangka Konsep ........................... Error! Bookmark not defined.

D. Hipotesis .......................................................................................... 23

BAB III ........................................................................................................ 25

METODE PENELITIAN ............................................................................. 25

A. Jenis Penelitian ............................................................................... 25

B. Tempat dan Waktu Penelitian ...................................................... 25

C. Subjek Penelitian ............................................................................ 25

D. Teknik Sampling ............................................................................ 25

E. Besar Sampel .................................................................................. 26

F. Kriteria Restriksi............................................................................ 27

1. Kriteria Inklusi .............................................................................. 27

2. Kriteria Eksklusi ............................................................................ 27

iv
G. Variabel Penelitian ......................................................................... 27

1. Variabel Bebas .............................................................................. 27

2. Variabel Terikat ............................................................................. 27

3. Variabel Luar ................................................................................. 27

H. Definisi Operasional Variabel Penelitian ..................................... 28

1. Variabel Bebas : Ekstrak daun teh hijau (Camelia sinensis) ......... 28

2. Variabel Terikat : jumlah spermatozoa ......................................... 28

3. Variabel Luar ................................................................................. 29

I. Instrumen Penelitian ...................................................................... 30

J. Cara Kerja ...................................................................................... 30

K. Pemberian Perlakuan .................................................................... 33

L. Pengukuran Hasil ........................................................................... 34

M. Jadwal Kegiatan ............................................................................. 34

v
 1

BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang

Prevalensi merokok di Indonesia sangatlah tinggi sekitar 29,3 % terutama

pada laki-laki (Rikesdas,2013). Bahaya yang ditimbulkan oleh rokok dapat
menyerang siapa saja, baik perokok aktif maupun perokok pasif. Hal ini
menimbulkan banyak kekhawatiran mengingat banyaknya dampak buruk, seperti
terganggunya kesuburan pria atau infertilitas (Amarudin, 2012)
Infertilitas adalah ketidakmampuan untuk hamil, ketidakmampuan
mempertahankan kehamilan, ketidakmampuan untuk membawa kehamilan
kepada kelahiran hidup. Diperkirakan sekitar 50-80 juta pasangan (1 dari 7
pasangan) memiliki masalah infertilitas, dan setiap tahun muncul sekitar 2 juta
pasangan infertile (WHO, 2010). Sekitar 40% dari kasus tersebut disebabkan oleh
kelainan pada pria. Sebagian disebabkan oleh spermatogenesis abnormal yang
meliputi jumlah, motilitas dan morfologi (Saraswati, Februari 2015 )
Saat merokok terdapat dua reaksi, yaitu reaksi pembakaran dan reaksi pirolisa.
Reaksi pembakaran dengan oksigen akan membentuk senyawa CO 2 , H2O2, NO,
So, dan Co. Reaksi pirolisa menyebabkan pemecahan struktur kimia rokok
menjadi banyak senyawa kimia yang strukturnya sangat kompleks. Setiap satu
batang rokok yang dibakar, maka akan menghasilkan sekitar 4000 macam bahan
kimia, diantaranya ada 400 macam bahan kimia tersebut bersifat toksik seperti
bahan karsinogen, tar, nikotin, nitrosamin, karbonmonoksida, senyawa PAH
(Polynuclear Aromatic Hydrogen), fenol, karbonil, klorin dioksin dan furan
(Batubara, et al., 2013)
Mekanisme rokok menurunkan infertilitas dengan cara penurunan kadar
testosteron. Hal ini akan mengganggu proses spermatogenesis karena
spermatogenesis berjalan dibawah pengaruh dari testosteron. Sehingga pada tahap
pematangan spermatid menjadi spermatozoa matur, dapat terjadi gangguan yang
dapat mempengaruhi morfologi normal (Apriora, 2015)

1
 2

Saat merokok terjadi peningkatan ROS (Reactiv Oxygen Species), yaitu agen
pengoksidasi yang sangat reaktif milik kelas radikal bebas yang dihasilkan oleh
asap rokok. ROS menyebabkan kerusakan pada DNA spermatozoa dan
menyebabkan peningkatan apoptosis spermatozoa sehingga akan terjadi
penurunan spermatozoa (Sitohang, et al., 2015)
Timbulnya radikal bebas dalam tubuh diimbangi dengan adanya mekanisme
pertahanan endogen dan pemberian antioksidan. Antioksidan merupakan suatu zat
yang mampu menghambat atau mencegah kerusakan sel akibat reaksi oksidasi.
Sifat ini akan melindungi sel spermatozoa dari kerusakan akibat serangan radikal
bebas. Antioksidan dapat digolongkan menjadi 2 jenis yaitu antioksidan endogen
yang di produksi oleh tubuh sendiri dan antioksidan eksogen yang merupakan
antioksidan asupan dari luar tubuh (Khaira, 2010).
Berbeda dengan penelitian sebelumnya, yaitu “Pengaruh Vitamin E Terhadap
Jumlah Spermatozoa Mencit Jantan (Mus Musculus L) Yang Dipaparkan Asap
Rokok” (Sari, 2015) pada penelitian ini mencit diberi perlakuan berupa pemberian
ekstrak daun teh hijau yang berfungsi sebagai antioksidan dan diharapkan dapat
mencegah penurunan jumlah spermatozoa akibat radikal bebas yang berlebihan
tersebut. Flavonoid pada tumbuhan merupakan metabolit sekunder yang
dimanfaatkan untuk kesehatan dan bahan pengkhelat yang mendukung fungsinya
sebagai antioksidan (South (2013). Berdasarkan penelitian sebelumnya,
Kandungan flavonoid teh hijau (2,278±0,057) lebih tinggi dibandingkan teh hitam
(2,077±0,044) (Br, et al., 2015)

B. Rumusan Masalah
Apakah pengaruh ekstrak daun teh hijau (camellia sinesis l.) terhadap
jumlah spermatozoa mencit jantan (mus musculus l.) yang diberi paparan
asap rokok

2
 3

C. Tujuan
Mengetahui pengaruh ekstrak daun teh hijau (camellia sinesis l.) terhadap
spermatozoa mencit jantan (mus musculus l.) yang diberi paparan asap rokok

D. Manfaat
1. Manfaat teoritis
Penelitian ini dapat memberikan informasi mengenai pengaruh ekstrak
daun teh hijau terhadap jumlah spermatozoa yang sebelumnya diberi
paparan asap rokok
2. Manfaat aplikatif
a. Untuk masyarakat
Hasil penelitian dapat dijadikan sebagai salah satu obat yang
ekonomis
b. Untuk institusi
Dapat memberikan informasi pada institusi tentang ekstrak daun
teh hijau
c. Untuk peneliti lain
Dapat digunakan sebagai acuan dan informasi penelitian
selanjutnya.

3
 4

BAB II
LANDASAN TEORI

A. Tinjauan Pustaka
1. Teh
a. Definisi
Camellia adalah genus besar keluarga Tehaceae dengan banyak
spesies dengan nilai ekonomi dan ilmiah yang signifikan. Beberapa
spesies Camellia digunakan untuk menghasilkan teh hijau, minuman
yang populer. Diperkirakan lebih dari 3,6 juta ton daun teh diproduksi
setiap tahun di 40 negara (Lu, et al., 2012)
Berdasarkan cara pengolahannya dikenal beragam teh, di antaranya
ialah teh hitam dan teh hijau, teh oolong, dan teh putih (Towaha, 2013)

b. Taksonomi
Species : Camellia sinensis
Genus : C. L- camellia
Family : Tehaceae- Tea family
Ordo : Tehales
Subclass : Dilleniidae
Class : Magnoliopsida- Dicotyledons
Division : Magnoliophyta- Flowering plants
Superdivision : Spermatophyta- Seed plants (Mahmood, et al.,
2010)

4
 5

Gambar 1. Daun teh (Tariq, et al., 2013)

c. komposisi kimia
1) Fenol, golongan fenol yang terdapat dalam teh adalah:
a) Katekin
Senyawa katekin merupakan senyawa yang paling penting
yaitu sebagai antioksidan berkat gusus fenol yang dimilikinya.
Selain itu katekin juga berfungsi sebagai penentu warna, rasa
dan aroma dari teh yang diseduh (Towaha, 2013). Katekin
mudah mengalami kerusakan yang disebabkan oleh pemaparan
oksigen, panas, dan cahaya yang kemudian akan mengalami
epimerisasi menjadi gallocatechin gallate (GCG), catechin
gallate (CG), gallocatechin (GC), dan catechin (C) dan
epigallocatechin galat (EGCG) (Towaha, 2013). Kandungan
epigallocatechin galat (EGCG) merupakan katekin paling
dominan dalam teh hijau yang dapat mencapai hingga 50% dari
berat katekin dan penyumbang tertinggi sebagai fungsi
antioksidan (Yashin, et al., 2011).
b) Flavanol
Berbeda dengan katekin, flavonol tidak dipengaruhi oleh enzim
polifenol oksidase. Flavanol memiliki aktivitas yang dapat
menguatkan dinding pembuluh darah kapiler dan pengumpulan
vitamin C.

5
 6

2) Non fenol, terdiri dari :

a) Karbohidrat
Kandungannya dalam teh berkisar 3-5% dari berat kering daun
teh. Karbohidrat dalam daun teh dapat bereaksi dengan asam
amino dan katekin, dan dapat membentuk senyawa aldehid
dengan suhu tinggi yang memiliki aroma seperti caramel.
b) Pectin
Kandungannya dalam teh berkisar 4,9-7,6% dari berat kering
daun. Pada proses pengolahan teh, pektin akan terurai menjadi
asam pekat dan metil alkohol, dan sebagian metil alkohol akan
menguap dengan udara, dan sebagian akan bereaksi dengan
asam-asam organik yang akan menjadi ester yang berperan
sebagai penyusun aroma.
c) Alkaloid
Kandungan alkaloid didalam teh berkisar 3-4% dari berat
kering daun dan dapat memberikan sifat menyegarkan pada
seduhan teh.
d) Protein dan asam-asam amino
Kandungan protein didalam daun teh sangan kuat peranannya
terhadap proses pembentukan aroma pada teh terutama pada
daun teh hitam. Kandungan asam amino bebas dalam daun teh
berkisar 50%, yang didominasi oleh asam amino L-tehanin,
sisanya berupa glutamat, asam aspartate dan arginin.
e) Klorofil dan zat warna yang lain
Kandungan zat warna dalam teh berkisar 0,0019% dari berat
kering daun. Klorofil sangat berperan dalam warna hijau pada
teh karena salah satu ukuran penentu kualitas teh yaitu warna
dalam teh.
f) Asam organic

6
 7

Kandungan asam organik didalam teh berkisar 0,5-2% dari

berat kering daun. Didalam daun teh terkandung asam organik
berupa asam malat, asam sitrat, asam suksinat dan asam
oksalat.

g) Resin
Resin merupakan senyawa polimer rantai karbon, daun teh
mengandung resin berkisar 3% dari berat kering daun teh.
h) Vitamin-vitamin
Didalam daun teh terkandung beberapa jenis vitamin antara
lain: A, B1, B2, B3, B5, C, E dan K. Umumnya vitamin
didalam kandungan teh sangat peka terhadap proses oksidasi
dan suhu yang tinggi, sehingga kandungan vitamin tersebut
pada daun teh (tanpa oksidasi) lebih tinggi dibandingkan teh
hitam.
i) Mineral
Kandungan mineral didalam daun teh berkisar 4-5% dari berat
kering daun. Jenis mineral yang terkandung meliputi K, Na,
Mg, Ca, F, Zn, Mn, Cu dan Se
3) Senyawa aromatis
4) Enzim (Towaha, 2013)

2. Teh hijau
Teh hijau adalah Teh yang dipetik dan mengalami proses pemanasan
(steaming) untuk mencegah terjadinya oksidasienzimatis dari enzim
polifenol oksidase sehingga teh hijau memiliki kandungan katekin lebih
tinggi dibandingkan jenis teh lainnya (Lu, et al., 2012)

Polifenol pada teh, khususnya katekin dan flavin , dapat menjalankan

aktivitas antioksidan terutama melalui pengikatan radikal bebas , ion

7
 8

logam transisi kelat , dan modulasi oksidan atau antioksidan enzim untuk
gen. (wan, 2008)

Teh hijau memiliki kadar konsentrasi flavonol tertinggi (1.23-0.09 mmol

L-1) yang dicapai setelah 1 jam, lebih tinggi jika dibandingkan dengan
daun teh hitam (J. Abshenas,2011) Pemberian ekstrak daun teh terbukti
dapat menurunkan level oksidasi dan menurunkan resiko infertilitas.
Daun teh hijau memiliki antioksidan yang kuat dan dapat meningkatkan
kualitas pada gamet laki-laki karena kemampuan polifenol katekin yang
dapat menurunkan ROS (Agarwal, et al., 2017).

3. Infertilitas
a. Definisi
Infertilitas adalah ketidakmampuan untuk hamil, ketidakmampuan
mempertahankan kehamilan, ketidakmampuan untuk membawa
kehamilan kepada kelahiran hidup (WHO, 2012)

b. Klasifikasi
Infertilitas dibagi menjadi primer dan sekunder.
Infertilitas primer, yaitu ketika keadaan istri belum pernah hamil sama
sekali setelah berhubungan seksual secara teratur tanpa kontrasepsi
selama 12 bulan. Sedangkan infertilitas sekunder terjadi pada istri
yaitu ketidakmampuan seseorang memiliki anak atau
mempertahankan kehamilannya (Easly & Simerly, 2013) (HIFERI &
PERFITRI, 2013)

c. Factor risiko
Diperkirakan sekitar 50-80 juta pasutri (1 dari 7 pasangan) memiliki
masalah infertilitas, dan setiap tahun muncul sekitar 2 juta pasangan
infertile (WHO,2012). Sekitar 40% dari kasus tersebut disebabkan
oleh kelainan pada pria. Sebagian disebabkan oleh spermatogenesis
abnormal yang meliputi jumlah, motilitas dan morfologi (Saraswati,
Februari 2015 )

8
 9

1) Usia
Usia juga mempengaruhi terutama pada tingkat kesuburan wanita
yang berhubungan dengan masa reproduksi. Pada pria kesuburan
juga akan menurun berdasarkan kualitas sperma yang dihasilkan.
(Saraswati, Februari 2015 )

2) Gaya hidup
a) Konsumsi alcohol
b) Penggunaan marijuana berkepanjangan
c) Merokok – secara signifikan menurunkan jumlah sperma dan
motilitas sperma
d) Konsumsi kafein
e) Berat badan berlebihan – menghasilkan hormon adrenalin
berlebihan menyebabkan defisiensi testosteron yang berujung
pada in-fertilitas
f) Pakaian dalam ketat - meningkatkan suhu skrotum
g) Obat-obatan,. (HIFERI & PERFITRI, 2013) (Sugih, 2012)
3) Stress
4) Masalah reproduksi
Masalah di sistem reproduksi mengakibatkan infertilitas sekunder
seperti Infeksi vagina, disfungsi seksual, kelainan serviks,
sumbatan di tuba falopi, spermatogenesis abnormal, masalah
ejakulasi dll. (Saraswati, Februari 2015 ) (Mascarenhas, et al.,
2012)

4. Spermatozoa
a. Definisi
Spermatozoa merupakan sel yang tidak lagi mengalami
pembelahan atau pertumbuhan, berasal dari gonosit yang menjadi
spermatogonium, spermatosit primer dan sekunder dan selanjutnya

9
 10

berubah menjadi spermatid dan akhirnya berubah menjadi

spermatozoa. Ketika produksi hormone gonadotropin sudah cukup
maksimal untuk merangsang pembentukan spermatozoa yaitu pada
masa pubertas yang di produksi di tubulus semeniferus (Ahmad,
2014)

b. Anatomi organ
Testis terdiri dari 900 lilitan tubulus seminiferous, yang
mempunyai panjang rata-rata lebih dari setengah meter, dan
merupakan tempat pembentukan sperma. Sperma kemudian dialirkan
ke epididymis, berupa lilitan lainnya yang bermuara ke dalam vas
deferens, yang membesar menjadi ampula vas deferens tepat sebelum
vas deferens memasuki korpus prostat.

Terdapar dua vesikula seminalis yang terletak disebelah prostat,

bermuara ke dalam ujung prostatampula dan isi ampula yang masuk
ke ductus ejakulatorius menuju korpus prostat dan bermuara di uretra
pars interna yang kemudian berlanjut ke uretra pars prostatika. (Hall,
2011)

10
 11

Gambar 2. Anatomi organ testis (Paulsen & Waschke, 2013)

c. Spermatogenesis
Proses spermatogenesis dari stem cell menjadi matur
membutuhkan waktu sekitar 90 hari, oleh karena itu pada bulan
selanjutnya dapat mempengaruhi kualitas semen. Optimal pada suhu
sedikit dibawah temperature darah,yang berlokasi di testis diluar
rongga panggul (William, 2008)

Sperma mulai dibentuk pada saat pubertas, ketika produksi

hormone gonadotropin sudah maksimal untuk merangsang
pembentukan spermatozoa. Saat di kandungan, sel-sel germinal
primordial berada pada tingkat perkembangan awal di antara sel
endoderm di dinding kantung kuning telur di dekat allantois.
Kemudian pada minggu ke-3 masa janin, sel tersebut akan bermigrasi
ke rigi urogenital yang saat itu tumbuh di daerah lumbal. Mulai dari
masa kandungan sampai masa pubertas nanti, sel-sel germinal
primordial ini akan mengalami fase istirahat, sampai suatu saat ketika

11
 12

lumen tubulus seminiferus telah sempurna dibentuk pada pubertas,

mereka akan berdiferensiasi menjadi spermatogonia.

Spermatogonia terdiri atas 2 tipe yaitu spermatogonia tipe A, yaitu

spermatogonia saat awal dibentuk yang selanjutnya akan megalami
rangkaina pembelahan secara mitosis dan terbentuk lah
spermatogonia tipe B. Spermatogonia tipe B akan bergerak ke lumen,
termodifikasi dan membesar membentuk spermatosit primer.
Spermatosit primer ini akan bergerak semakin ke arah lumen sambil
membelah secara miosis menjadi spermatosit sekunder. Pada fase
miosis pertama, proses yang berlangsung cukup lama adalah pada
tahap profase I, yakni sekitar 22 hari. Proses selanjutnya yakni
metafase, anafase dan telofase yang berlangsung dengan cepat.
Setelah terbentuk spermatosit sekunder, kemudian akan membelah
kembali secara miosis (miosis II) menjadi spermatid. Spermatid yang
dihasilkan sekarang telah haploid, atau memiliki setengah dari
kromosom induknya (spermatosit primer). Langkah selanjutnya
adalah tahap dimana spermatid berdiferensiasi menjadi spermatozoa.
Hasil akhir dari spermatogenesis adalah spermatozoa yang haploid
(n), dimana satu spermatosit primer menghasilkan empat
spermatozoa. (Ahmad, 2014)

12
 13

Gambar 3. Spermatogenesis (Hall, 2011)

d. Analisis sperma
Beberapa syarat yang harus diperhatikan untuk menjamin hasil
analisis sperma yang baik

1. Lakukan abstinensia (pantang segama) selama 2-3 hari

2. Keluarkan sperma dengan masturbasi dan hindari dengan cara
segama terputus

13
 14

3. Hindari pengguanaan pelumas pada saat maturbasi

4. Hindari pengguanaan kondom untu menampung sperma
5. Gunakan tabuga dengan mulut yang lebar sebagai tempat
penampung
6. Kirim sampel secepat mungkin
7. Tabung dilengkapi nama jelas, tanggal dan waktu pengumpulan.
Metode pengeluarannya sama (masturbasi atau segama terputus)
8. Hindari paparan temperature terlalu tinggi (>38℃) atau terlalu
rendah (<15℃)

e. Interpretasi hasil sperma normal

Tabel 1. Nilai normal analisis sperma berdasarkan kriteria WHO

Kriteria Nilai rujukan normal

volume 2 ml atau lebih

Waktu liquefikasi Dalam 60 menit

PH 7,2 atau lebih

Konsentrasi 20 juta per millimeter atau lebih

Jumlah sperma total 40 juta per ejakulat atau lebih

Lurus cepat (gerakan yang 25% atau lebih

progresif dalam 60 menit setelah
ejakulasi (1))
Jumlah antara lurus lambat (2) dan 50% atau lebih
lurus cepat (1)
Morfologi normal 30% atau lebih

vitalitas 75% atau lebih yang hidup

14
 15

leukosit Kurang dari 1 juta per mililiter

Keterangan :

Derajat 1 : gerak sperma cepat dengan arah yang lurus

Derajat 2 : gerak sperma lambat atau berputar-putar

Tabel 2. Terminologi dan Definisi Analisa Sperma Berdasarkan kualitas

Sperma (Sarwono, 2011)

Terminologi Definisi
Normozoospermia Ejakulasi norma sesuai dengan nilai rujukan WHO

Oligozoospermia Konsentrasi sperma lebih rendah dari pada nilai

rujukan WHO

Astenozoospermia Konsentrasi sel sperma dengan motilitas lebih

rendah dari pada nilai rujukan WHO

Teratozoospermia Konsentrasi sel sperma dengan morfologi lebih

rendah dari pada nilai rujukan WHO

Azoospermia Tifak didapatkan sel sperma didalam ejakulat

Aspermia Tidak terdapat ejakulat
Kristospermia Jumlah sperma sangat sedikit yang dijumpai setelah
S
sentrifugasi

15
 16

5. Rokok
a. Definisi
Rokok adalah bahan adiktif yang berisi tembakau yang dibakar
kemudian dihirup asapnya, termasuk rokok kretek, rokok putih, cerutu
atau bentuk lainnya yang dihasilkan dari tanaman nicotiana tabacum,
nicotiana rustica dan spesies lainnya atau sintetisnya yang mengandug
nikotin, tar, dengan atau tanpa bahan tambahan. Rokok biasanya
berbentuk silinder yang digulung oleh kertas berukuran panjang 70
hingga 120mm dengan diameter sekitar 10mm yang berisi daun
tembakau yang telah di cacah (Anon., 2012)

b. Kandungan
1) Nikotin
Nikotin adalah senyawa kimia yang secara alami terdapat
dalam asap rokok dan dalam tembakau yang tidak dibakar.
Nikotin merupakan racun yang diserap ke dalam sistem pembuluh
darah melalui paru-paru dan disirkulasikan ke otak, dalam waktu
yang sangat cepat serta dapat menyebabkan penurunan kadar
hormon testosteron. Nikotin memproduksi rasa senang, tenang
dan rileks yang membuat penggunanya ketagihan (Amarudin,
2012) (Batubara, et al., 2013)
Nikotin paling mudah diabsorpsi pada lingkungan basa
terutama melalui membran mukosa oral dan nasal karena epitel
daerah tersebut tipis dan kaya suplai darah serta mudah diserap
melalui kulit.

Pada seseorang yang merokok secara regular, kadar nikotin

dalam darah akan meningkat dalam 6-8 jam. Tiap batang rokok
akan menghasilkan konsentrasi nikotin dalam darah sekitar 5-30
ng/mL (Gayatri, et al., 2012)

2) Tar

16
 17

Tar adalah kondensat asap yang merupakan total residu

dihasilkan saat rokok dibakar setelah dikurangi nikotin dan air,
yang bersifat karsinogenik dan menyebabkan berbagai penyakit
diantaranya kanker, penyakit jantung, bronchitis, serta termasuk
didalamnya terdapat nikel dan cadmium yang dapat gangguan
kehamilan, dan impotensi (Anon., 2012) (Batubara, et al., 2013)

3) Karbonmonoksida

Karbonmonoksida merupakan gas racun yang tidak

berwarna dan tidak berbau yang diabsorpsi melalui paru, masuk
ke dalam aliran darah kemudian akan berikatan dengan
hemoglobin untuk membentuk karboksi-hemoglobin (COHb)
yang kadarnya dalam darah dapat diukur sebagai marker absorpsi
asap rokok. Karbonmonoksida dapat menyebabkan berkurangnya
pengiriman dan pemanfaatan oksigen pada jaringan tubuh
(Inayatillah, et al., 2014)

4) Acetol

Acetol adalah hasil pemanasan aldehyde ( sejenis zat yang

tidah bewarna yang bebas bergerak) dan mudah menguap dengan
alcohol.

5) Hydrogen Sulfide

Merupakan gas yang beracun dan mudah terbakar jika

terpapar bau yang keras

6) Ammonia

Amoniak merupakan gas yang tidak berwarna yang terdiri

dari sangat merangsang. nitrogen dan hidrogen. Zat ini tajam
baunya dan

17
 18

7) Formic acid

Formic acid adalah sejenis cairan tidak bewarna yang

bergerak bebas dan dapat membuat lepuh. Baunya sangat tajam
dan menusuk.

8) Hydrogen cyanide

Hydrogen cyanideadalah sejenis gas yang tidak bewarna,

tidak berbau dan tidak berasa. Cyanide mengandung racun yang
sangat berbahaya, sedikit masuk ke dalam tubuh dapat
mengakibatkan kematian.

9) Formaldehyde

Formaldehyde adalah sejenis gas tidak bewarna dan berbau

tajam. Gas ini mengandung racun keras terhadap semua
organisme hidup, juga tegolong sebagai pembasmi hama dan
pegawet. (Amarudin, 2012)

10) Phenol
11) Pyridine
12) Methyl Chloride
13) Methanol

c. Penyakit yang ditimbulkan

Asap rokok dapat menimbulkan kelainan atau penyakit pada
hampir semua organ tubuh yaitu :

1) Otak : stroke, perubahan kimia otak

2) Mulut dan tenggorokan : kanker bibir, mulut, tenggorokan dan
laring
3) Jantung : kelemahan arteri, meningkatkan serangan jantung

18
 19

4) Paru : penyakit paru obstruktif kronik, kanker paru, asma

5) Hati : kanker hati
6) Abdomen : kanker lambung, pankreas dan usus besar
7) Ginjal dan kandung kemih : kanker
8) Reproduksi : impotensi, kanker leher rahim, mandul
9) Kaki : gangrene
10) Saluran pernafasan :
i. Penyakit paru obstruktif kronik
Iritasi saluran napas oleh asap rokok dan bahan toksik
lain akan menimbulkan reaksi inflamasi saluran napas
sehingga terjadi deposit sel radang neutrofil maupun
makrofag di tempat tersebut. Neutrofil akan mengeluarkan
elastase yang berlebihan mengakibatkan metaplasia sel
epitel sekretori dan hipertrofi kelenjar mukus. Elastase
netrofil menghambat mucociliary clearance. Di samping itu
elastase neutrofil akan merangsang produksi mukus
berlebihan akibat hipertrofi kelenjar dan metaplasia sel
sekretori.
ii. Kanker paru
Telah diketahui perokok merupakan faktor risiko
kanker paru. Asap rokok mengandung bahan toksin dan
iritan, mutagenik dan karsinogenik termasuk reactive
organic radicals (RORs) yang memicu proliferasi sel,
kerusakan kromosom, perubahan formasi DNA dan aktivasi
onkogen.
iii. Interstitial lung disease (ILD)
Merupakan sekelompok penyakit heterogen paru
umumnya ditandai dengan sesak napas, batuk kering, diffuse
interstitial infiltrate yang membatasi fungsi paru dan
gangguan pertukaran gas. Interstitial lung disease dapat
berupa sarkoidosis, fibrosis paru idiopatik (IPF),

19
 20

pneumokoniosis dan penyakit yang berhubungan dengan

jaringan ikat. (Haris, et al., 2012)

d. Hubungan asap rokok dengan kesehatan sperma

Saat merokok terdapat dua reaksi, yaitu reaksi pembakaran
dan reaksi pirolisa. Reaksi pembakaran dengan oksigen akan
membentuk senyawa CO 2 , H2O2, NO, So, dan Co. Reaksi pirolisa
menyebabkan pemecahan struktur kimia rokok menjadi banyak
senyawa kimia yang strukturnya sangat kompleks. Setiap satu batang
rokok yang dibakar, maka akan menghasilkan sekitar 4000 macam
bahan kimia, diantaranya ada 400 macam bahan kimia tersebut
bersifat toksik seperti bahan karsinogen, tar, nikotin, nitrosamin,
karbonmonoksida, senyawa PAH (Polynuclear Aromatic Hydrogen),
fenol, karbonil, klorin dioksin dan furan (Batubara, et al., 2013)
Mekanisme rokok menurunkan infertilitas dengan cara
penurunan kadar testosteron. Hal ini akan mengganggu proses
spermatogenesis karena spermatogenesis berjalan dibawah pengaruh
dari testosteron. Sehingga pada tahap pematangan spermatid menjadi
spermatozoa matur, dapat terjadi gangguan yang dapat mempengaruhi
morfologi normal. (Apriora, 2015)
Pada penelitian lain, 54 dari 72 orang perokok mengalami
penurunan jumlah spermatozoa. Penelitian terebut menunjukkan
bahwa antibodi antisperma meningkat pada perokok yang
menyebabkan berkurangnya jumlah spermatozoa. Perokok juga
diketahui memiliki konsentrasi non metiltetrahidrofolat yang dapat
menyebabkan berkurangnya jumlah spermatozoa (Philip, et al., 2015)

B. Kerangka Teori
Rokok merupakan salah satu faktor resiko yang menyebabkan infertilitas pada
pria. Saat merokok terjadi peningkatan ROS (Reactiv Oxygen Species), yaitu agen
pengoksidasi yang sangat reaktif milik kelas radikal bebas yang dihasilkan oleh

20
 21

asap rokok serta dapat mengakibatkan stress oksidatif. ROS menyebabkan

kerusakan pada DNA spermatozoa dan menyebabkan peningkatan apoptosis
spermatozoa sehingga akan terjadi penurunan spermatozoa (Sitohang, et al., 2015)
juga akan mempengaruhi hormone testosterone yang bertanggung jawab atas
spermatogenesis (Apriora, 2015).
Kandungan flavanoid yang terdapat dalam ekstrak daun the hijau berfungsi
sebagai antioksidan dengan cara menghambat radikal bebas seteah diberi paparan
asap rokok.

21
 22

Kandungan:

Nikotin , Tar,
Ekstrak daun Karbonmonoksida, Acetol,
teh hijau Hydrogen Sulfide, Pyridine,
Rokok
Methyl Chloride, Methanol,
Ammonia, Formic acid,
flavonoid Hydrogen cyanide,
Formaldehyde, Phenol
Asap rokok

Radikal bebas
antioksidan

ROS

Stress oksidatif

Kerusakan DNA ↓ Hormon

testosteron

Apoptosis sel Gangguan

spermatozoa spermatogenesis

motilitas
↓ kualitas
spermatozoa viabilitas

morfologi
↓ penurunan
jumlah
Gaya hidup

infertilitas
stress

Penyakit lain

usia

22
 23

Gambar 4. Kerangka Teori

Keterangan gambar :

: variabel bebas dan terikat yang diteliti

: yang tidak diteliti
: yang menghambat

C. Hipotesis
Pemberian Ekstrak Daun Teh Hijau Dapat Mempengaruhi Jumlah
Spermatozoa Mencit Jantan (Mus Musculus L.) Yang Diberi Paparan Asap
Rokok.

23
 24

24
 25

BAB III
METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian
Penelitian ini menggunakan desain penelitian eksperimental laboratorium
dimana peneliti memberikan perlakuan terhadap sampel yang telah ditentukan
yaitu berupa hewan coba dilakukan di laboratorium dengan metode posttest
only controlled grup design (Taufiqqurohman, 2008).

B. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di laboratorium Patologi Klinik Fakultas
Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta pada bulan November
2017. Subjek yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit (Mus
musculus) jantan galur swiss webster berusia 2-3 bulan dengan berat badan ±
20-30 gr.

C. Subjek Penelitian
Subjek penelitian berupa 30 ekor mencit (Mus musculus) jantan galur
swiss webster berusia 2-3 bulan, berat badan ±20 gram, dan tampak sehat,
sedangkan kriteria eksklusinya adalah mencit yang terdapat kelainan anatomi
(seperti kecacatan pada kaki, telinga atau ekor), gerak tidak aktif, dan terdapat
luka.

D. Teknik Sampling
Teknik pengambilan sampel yang dipakai adalah purposive sampling,
dimana pemilihan subjek sampel dipilih sengaja berdasarkan keinginan
peneliti. Sampel berasal dari 30 ekor mencit yang telah dikelompokan
menjadi kelompok satu, dua, tiga, empat, dan lima.

25
 26

E. Besar Sampel
Jumlah sampel yang digunakan dalam penelitian ini dibagi menjadi 5
kelompok. Sampel diambil dari populasi tersebut dan besarnya ditentukan
bedasarkan rumus Federer sebagai berikut:

Rumus federer :

(n-1) x (t-1) ≥ 15

Keterangan : n = Jumlah sampel tiap kelompok

: t = Jumlah Kelompok

Banyak Kelompok : 5 Kelompok (t = 5)

Sampel tiap Kelompok : (n-1) x (t-1) ≥ 15

(n-1) x (5-1) ≥ 15

(n-1) x 5≥ 15

4n – 4≥ 15

n ≥ 15 + 4 / 4

n ≥ 4,75

n ≥5

Setelah dilakukan penghitungan dengan menggunakan rumus federer

didapatkan jumlah mencit 5 ekor mencit untuk setiap kelompok perlakuan
sebanyak 5 kelompok, sehingga didapatkan jumlah keseluruhan mencit dalam
penelitian ini adalah 30 ekor mencit. Jumlah sampel yang digunakan penulis
minimal 5 ekor mencit per kelompok. Selama penelitian kemungkinan mencit
mengalami kematian dan sakit cukup besar sehingga jumlah sampel ditambah
satu ekor. Sehingga penulis menggunakan 6 mencit perkelompok.

26
 27

F. Kriteria Restriksi
1. Kriteria Inklusi
a. Mencit jantan (Mus musculus).
b. Sehat dan mempunyai aktifitas normal.
c. Berumur 2-3 bulan.
d. Berat badan ±20 gram.
2. Kriteria Eksklusi
a. Mencit jantan (Mus musculus) stres saat penelitian.
b. Mencit jantan (Mus musculus) sakit saat penelitian.
c. Mencit jantan (Mus musculus) terdapat kelainan anatomi (seperti
kecacatan pada kaki telinga atau ekor) saat penelitian.
d. Mencit jantan (Mus musculus) mati saat penelitian.

G. Variabel Penelitian
1. Variabel Bebas
Pemberian ekstrak daun teh hijau dengan berbagai dosis perlakuan.
Skala Variabel : Rasio
2. Variabel Terikat
Variabel terikat pada penelitian ini adalah jumlah spermatozoa yang
sebelumnya sudah diberi paparan asap rokok.
Skala Variabel : Rasio
3. Variabel Luar
a. Variabel terkendali
Variasi genetik, jenis kelamin, umur, suhu udara, berat badan, dan
jenis makanan mencit semua disamakan.
b. Variabel tidak terkendali
Kondisi psikologis hewan uji/stress, reaksi hipersensitivitas, imunitas
hewan percobaan, abnormalitas spermatogenesis.

27
 28

H. Definisi Operasional Variabel Penelitian

1. Variabel Bebas : Ekstrak daun teh hijau (Camelia sinensis)
Ekstrak daun teh hijau (Camelia sinensis) adalah ekstrak yang dibuat
dari daun teh hijau (Camelia sinensis) dengan teknik maserasi etanol
70%. Daun teh hijau (Camelia sinensis) diperoleh di daerah perkebunan
teh hijau (Camelia sinensis) Kemuning, Jawa Tengah, dan di ekstraksi di
Laboratorium Farmakologi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Pemberian ekstrak daun teh hijau (Camelia sinensis) diberikan selama 46
hari secara peroral dengan sonde lambung dalam 3 dosis dari penelitian
sebelumnya mengenai efek pemberian ekstrak daun teh hijau (Camelia
sinensis) terhadap jumlah.

Dosis I : ekstrak daun the hijau 1,25% di berikan pada mencit KP1.

Dosis II : ekstrak daun the hijau 2,5% di berikan pada mencit KP2.

Dosis III : ekstrak daun the hijau 5% di berikan pada mencit KP3.
Skala pengukuran adalah Skala Rasio.

2. Variabel Terikat : jumlah spermatozoa yang telah diberi paparan asap

rokok
Jumlah spermatozoa mencit adalah banyaknya spermatozoa yang
diperoleh dari kauda epididymis. Pada penelitian ini mencit (Mus
musculus) jantan galur swiss webster diberi paparan asap rokok setiap
hari, kemudian diberikan ekstrak daun the hijau dalam berbagai dosis.
Penghitungan jumlah spermatozoa dilakukan ada hari ke 47 dengan cara
memisahkan cauda epididimis dengan memotong bagian proksimal
corpus epididimis dan bagian distal vas deferens. Selanjutnya dimasukkan
kedalam cawan petri yang berisi 1 ml NaCl 0,9%, bagian proksimal cauda
dipotong, lalu ditekan perlahan hingga sekresi cairan epididimis keluar
dan tersuspensi dengan Nacl 0,9%.(Claudia et al. 2013). Proses tersebut

28
 29

dilakukan berulang hingga suspensi tercampur rata. Kemudian dengan

menggunakan bilik hitung improve neubaeur hitung di bawah mikroskop.
3. Variabel Luar
a. Varibel luar yang dapat dikendalikan. Variabel ini dapat dikendalikan
melalui homogenisasi.
1). Makanan
Makanan yang diberikan berupa standar dan air minum ad
libitum.
2). Genetik
Jenis hewan uji yang digunakan adalah mencit (Mus musculus)
dengan galur Swiss webster.
3). Jenis kelamin
Penelitian ini menggunakan mencit (Mus musculus) jantan.
4). Umur
Umur hewan percobaan berupa mencit (Mus musculus) pada
penelitian ini adalah 2-3 bulan.
5). Berat Badan
Berat badan hewan percobaan berupa mencit (Mus musculus)
pada penelitian ini sebesar ± 20 gram.
6). Suhu Udara
Hewan percobaan diletakkan dalam ruangan dengan suhu udara
berkisar 25-280C.
b. Variabel luar yang tidak dapat dikendalikan
1). Kondisi psikologi/stress pada mencit dapat dipengaruhi oleh
lingkungan sekitar. Lingkungan yang terlalu ramai, pemberian
perlakuan yang berulang kali dan perkelahian antara mencit dapat
mempengaruhi kondisi psikologis mencit.
2). Imunitas dari masing-masing mencit
3). Reaksi hipersensitivitas
4). Abnormalitas spermatogenesis yang memang tidak diperiksa saat
pemilihan sampel. Hal ini mengakibatkan tidak terbentuknya

29
 30

spermatozoa baru meskipun sudah diberikan perlakuan yang akan

mempengaruhi hasil penelitian ini.

I. Instrumen Penelitian
1. Alat
Alat yang digunakan adalah sebagai berikut :
a. Kandang mencit 5 buah yang sudah dimodifikasi, masing-masing
untuk 6 ekor mencit.
b. Timbangan
c. Spidol, untuk pemberian tanda
d. Handscoon
e. Masker
f. Pengaduk
g. Kertas saring
h. Vakum evaporator
i. Pisau steril
j. Mikroskop
k. Bilik hitung neubauer
l. Pipet
m. Cawan petri
n. Wadah pembiusan
2. Bahan
Bahan yang akan digunakan adalah sebagai berikut :
a. Makanan dan minum hewan percobaan
b. Aquades
c. Daun the hijau (Camellia sisnensis)
d. Rokok
e. Etanol
f. Etil klorida
J. Cara Kerja
1. Persiapan hewan percobaan

30
 31

Mencit (Mus musculus) di peroleh dari peternakan Abunawwas FK

Universitas Muhammadiyah Surakarta. Kemudian diadaptasikan selama 7
hari di laboratorium farmakologi. Setelah diadaptasikan, keesokan
harinya dilakukan penimbangan untuk menentukan dosis, penimbangan
dan dilakukan pembagian kelompok secara random menjadi 5 kelompok.
Tiap kelompok terdiri dari 6 ekor.

2. Cara Penentuan Ekstrak

Ekstrak daun the ( Camellia sinensis) yang disiapkan dengan metode
maserasi dengan langkah sebagai berikut:
a. Daun the ( Camellia sinensis) dijemur dibawah sinar matahari secara
tidak langsung (ditutup kain hitam) sampai kering
b. Kemudian daun the ( Camellia sinensis) dihaluskan hingga berubah
bentuk menjadi serbuk.
c. Ekstraksi dilakukan pada suhu ruang. Setiap gram 200g daun the (
Camellia sinensis) yang telah dihaluskan direndam dalam 1500ml
etanol 70%, diaduk menggunakan pengaduk kaca yang steril.
d. Ekstrak akhir disaring dengan kertas penyaring.
e. Filtrat yang didapatkan dipekatkan/disuling di dalam vakum
evaporator berputar pada suhu 40 0C dan disimpan pada suhu 4 0C
untuk penggunanan lebih lanjut.
f. Setelah mendapatkan ektrak, untuk membuat 1,25% ekstrak daun the
hijau diperlukan 25mg ekstrak daun the dan aquades 100ml.
g. Cara yang sama untuk membuat ekstrak daun the hijau 2,5% dan 5%
adalah kelipatan dari dosis sebelumnya.
3. Pengelompokan Subjek
Pada hari ke 47 dimulai percobaan. Subjek penelitian dibagi menjadi 5
kelompok secara random. Masing-masing kelompok terdiri dari 6 ekor
mencit. Adapun pengelompokan subjek adalah sebagai berikut:
a. Kelompok kontrol negatif diberi aquadest
b. Kelompok kontrol positif diberi paparan asap rokok

31
 32

c. Kelompok perlakuan I diberi paparan asap rokok + ekstrak the hijau

1,25%
d. Kelompok perlakuan II diberi paparan asap rokok + ekstrak the hijau
2,5%
e. Kelompok perlakuan III diberi paparan asap rokok + ekstrak the hijau
5%.
f. Pada hari ke-47, dilakukan pengambilan sperma mencit dengan cara
mengambil cauda epididymis

4. Terminasi Hewan Uji

a. Hewan uji dimasukkan wadah transparan yang bertutup dan memiliki
satu lubang kecil di bagian tutup (seperti toples).
b. Kemudian etil klorida disemprotkan kedalam wadah melalui lubang
kecil yang berada pada tutup, kemudian lubang kecil tersebut di tutup.
c. Tikus dibiarkan beberapa detik hingga tertidur (terbius).
d. Selanjutnya tangan kiri memegang bagian leher hingga kepala atas
tikus, tangan kanan memegang bagian pangkal ekor.
e. Lalu tarik bagian kepala dan pangkal ekor hingga terjadi dislokasi
tulang leher.
f. Hewan uji dipastikan telah mati yang kemudian dikubur menjadi satu
pada kedalaman 50 cm.

32
 33

K. Pemberian Perlakuan
Rancangan eksperimental posttest with control group design

Mencit jantan usia 2-3bulan, berat

badan ± 20 gram

Adaptasi pakan standar selama 1 minggu

randomisasi

Kotrol positif Kontrol negatif Perlakuan 1 Perlakuan 2 Perlakuan 3

(KP) 6 ekor (KN) 6 ekor 6 ekor 6 ekor 6 ekor

1 batang 1 batang 1 batang 1 batang

Diberikan rokok + ektrak rokok +
rokok rokok + ektrak
Aquades the hijau ektrak the the hijau 5%
1,25% hijau 2,5%

Perlakuan dilakukan
selama 47 hari

Hari ke 48 mencit
dikorbankan

Hitung jumlah sperma

Analisis Data

Gambar 5. Cara Kerja

33
 34

L. Pengukuran Hasil
Data yang diperoleh kemudian diolah dengan progam komputer Statistical
Product and Service Solution (SPSS) 17.0 for Windows lalu diuji normalitas
datanya dengan uji Shapiro-Wilk. Jika data berdistribusi normal maka
dilakukan uji Anova dan bila ada perbedaan rata- rata yang bermakna
dilanjutkan Post hoc test menggunakan analisis LSD dan Homogenous Subset
dengan α = 0,05. Akan tetapi, apabila distribusi data tidak normal dapat
dilakukan uji Kruskall Wallis sebagai alternatif uji Anova yang setara. Uji
ANOVA adalah uji untuk membandingkan perbedaan rerata lebih dari 2
kelompok. Adanya perbedaan yang bermakna antar kelompok menunjukkan
bahwa analisis data perlu dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney (Post Hoc
Test). Uji Mann-Whitney (Post Hoc Test) untuk mengetahui letak perbedaan
terkecil antara kelima kelompok. Derajat kemaknaan yang digunakan adalah α
= 0,05.

M. Jadwal Kegiatan
Tabel 3. Jadwal Kegiatan

Tahun 2016

Kegiatan Bulan

8 9 10 11 12

Penyusunan
Proposal

Ujian Proposal

Revisi Proposal

Penelitian

Analisis Data

34
 35

Penyusunan
Skripsi

Ujian Skripsi

Revisi Skripsi

35
36
References
Agarwal, A., Roychoudhury, S., Virk, G. & Cho, C.-L., 2017. Potential role of green tea
catechins in the management of oxidative stress-associated infertility. Elsevier, Volume
34, pp. 487-498.

Ahmad, s., 2014. Evaluasi Kromatin Sperma Sebagai Indikator Kualitas Sperma. JMJ, 2(1).

Amarudin, 2012. pengaruh merokok terhadap kualitas sperma pada pria dengan
masalah infertilitas studi kasus kontrol di jakarta tahun 2011. FKM UI.

Anon., 2012. peraturan pemerintah no.109. s.l.:s.n.

Apriora, V. A. A. &. K. O., 2015. gambaran morfologi pada perokok sedang di lingkungan
pe grup yang datang ke bagian biologi fakultas kedokteran universitas andalas. jurnal
kesehatan andalas, p. 4(2):425–429..

Batubara, I. V. D., wantouw, b. & tendean, l., 2013. Pengaruh Paparan Asap Rokok
Kretek Terhadap Kualitas Spermatozoa Mencit Jantan (Mus Musculus). Jurnal e-
Biomedik (eBM), pp. 330-337.

Br, R. S., jose, c. & fia, g., 2015. Total Fenolik, Flavonoid, Dan Aktivitas Antioksidan
Produk Teh Hijau Dan Teh Hitam Tanaman Bangun-Bangun (Coleus Amboinicus) Dengan
Perlakuan Ett Rempah Rempah. JOM FMIPA, 2(1).

Easly, C. D. & Simerly, C. S. G., 2013. Stem cell therapeutic possibilities: future
therapeutic optionsfor male-factor and female-factor infertility. Elsevier Ltd, pp. 75:80-
27.

Gayatri, a., susanto, a. d. & setiawati, a., 2012. Nicotine Replacement Therapy. CDK-189,
39(1).

Hall, J. E., 2011. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology Twelfth Edition. s.l.:s.n.

Haris, a., ikhsan, m. & rogayah, r., 2012. Asap Rokok sebagai Bahan pencemar dalam
Ruangan. CDK-189, 39(1).

HIFERI, H. E. R. d. F. & PERFITRI, P. F. I. V. I., 2013. In: Konsensus penanganan infertilitas.

s.l.:s.n.

Inayatillah, I. R., Syahrudin, E. & susanto, a. d., 2014. Kadar Karbon Monoksida Udara
Ekspirasi pada Perokok dan. J Respir Indo, 34(4).

Khaira, K. 2., 2010. Menangkal radikal bebas dengan antioksidan. Jurnal saintek, II(2), pp.
183-184..

37
Lu, H., Jiang, W., Ghiassi, M. & Mantri, N., 2012. Classification of Camellia (Theaceae)
Species Using Leaf Architecture Variations and Pattern Recognition Techniques. PLoS
ONE, 7(1).

Mahmood, T., Akhtar, N. & Khan, B. A., 2010. The morphology, characteristics, and
medicinal properties of Camellia sinensis’ tea. Journal of Medicinal Plants Research ,
4(19), pp. 2028-2033.

Mascarenhas, M. N. et al., 2012. National, Regional, and Global Trends in Infertility

Prevalence Since 1990: A Systematic Analysis of 277 Health Survey. PLOS Medicine,
9(14).

Paulsen, F. & Waschke, J., 2013. Sobotta Atlas Anatomi Manusia. s.l.:s.n.

Philip, g. h., nagalinga, D. & pullanna, k., 2015. EFFECTS OF CIGARETTE SMOKING ON
SEMEN PARAMETERS OF MEN. International Journal of Pharmaceutical Sciences and
Research, 6(10), pp. 4310-4315.

putri, a. p., 2015. │Efek Vitamin C Terhadap Kualitas Spermatozoa Yang Diberi Paparan
Asap Rokok. J MAJORITY, p. Volume 4 Nomor 1.

Roychoudhury, S., Agarwal, A., Virk, G. & Cho, C.-L., 2017. Potential role of greentea
catechins in the management of oxidative stress-associated infertility. ELSEVIER, pp.
487-498.

Saraswati, A., Februari 2015 . INFERTILITY. J MAJORITY. Volume 4 Nomor 5.

Sari, p. d., 2015. Pengaruh Vitamin E Terhadap Jumlah Spermatozoa Mencit Jantan (Mus
Musculus L) Yang Dipaparkan Asap Rokok. Fakultas Kedokteran universitas lampung.

Sarwono, 2011. Ilmu Kandungan Edisi Ketiga. s.l.:P.T. Bina Pustaka Sarwono
Prawirohardjo.

Sitohang, A. G., Wantouw , B. & Queljoe , E. d., 2015. Perbedaan Antara Efek Pemberian
Vitamin C Dan Vitamin E Terhadap Kualitas Spermatozoa Tikus Wistar (Rattus
Norvegicus) Jantan Setelah Diberi Paparan Asap Rokok. Jurnal e-Biomedik (eBm), 3(1).

Sugih, F., 2012. Infertilitas Pria Akibat Kerja. CDK-195 vol. 39 no. 7.

Tariq, A. L., Nirjantha , D. & Reyaz, A. L., 2013. Antimicrobial Activity Of Camellia Sinensis
Leaves Against Gram Positive And Gram Negative Bacteria. World Research Journal of
Pharmaceutical Research, 1(1), pp. 1-4.

Taufiqqurohman, M. A., 2008. Metodolagi Penelitian Kedokteran untuk Ilmu Kesehatan.

Surakarta: CSGF.

38
Towaha, J., 2013. Kandunan Senyawa Kimia Pada Daun Teh (Camellia sinensis). Warta
Penelitian Dan Pengembangan Tanaman Industri, Vol.19 No.3.

WHO, 2010. WHO laboratory manual for the Examination and processing of human
semen. s.l.:s.n.

Yashin, A., Yashin , Y. & Nemzer, B., 2011. Determination of Antioxidant Activity in Tea
Extracts, and Their Total Antioxidant Content. American Journal of Biomedical Sciences,
3(4), pp. 322-335.

39