Anti-apoptosis y supervivencia celular: una revisión

Abstracto
La muerte celular programada tipo I (PCD) o apoptosis es crítica para la autodestrucción celular
para una variedad de procesos tales como el desarrollo o la prevención de la transformación
oncogénica. Las formas alternativas, que incluyen el tipo II (autofagia) y el tipo III (necrótico)
representan los otros tipos principales de PCD que también sirven para desencadenar la muerte
celular. La PCD debe estar estrictamente controlada ya que la muerte celular no regulada está
involucrada en el desarrollo de un gran número de patologías diferentes. Para contrarrestar la
multitud de procesos que son capaces de desencadenar la muerte, las células han ideado una
gran cantidad de procesos celulares que sirven para prevenir la PCD inapropiada o
prematura. Estas estrategias de supervivencia celular implican una miríada de cambios
fisiológicos y genéticos coordinados y sistemáticos que sirven para protegerse de la muerte.
Aspectos destacados de investigación
► La antiapoptosis es mecánicamente distinta de la apoptosis. ► Los procesos antiapoptosis se
observan comúnmente en células resistentes a la apoptosis. ► Múltiples procesos fisiológicos y
genéticos median la antiapoptosis y la supervivencia celular. ► La atofagia a veces puede
prevenir y algunas veces iniciar la muerte celular. ► Los procesos de pro-supervivencia pueden
servir para inhibir algunas formas de necrosis.
1. Introducción: una visión general de la muerte celular programada (PCD)
La muerte celular apoptótica es un mecanismo (s) genéticamente programado (s) que permite a
la célula suicidarse [1-4] . La apoptosis es críticamente importante para la supervivencia de los
organismos multicelulares al eliminar células dañadas o infectadas que pueden interferir con la
función normal [5,6] . Las vías extrínseca e intrínseca representan los dos principales procesos
apoptóticos bien estudiados [2,7] . La vía extrínseca está mediada por un subgrupo de la
superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNFR) que incluye TNFR, Fas y
TRAIL. La activación de estos llamados receptores de muerte conduce al reclutamiento y
activación de caspasas iniciadoras tales como las caspasas 8 y 10 ( Fig. 1).) El proceso implica
la formación y activación de complejos tales como el complejo de señalización que induce a la
muerte (DISC). Esto conduce a la activación de una caspasa efectora, típicamente caspasa 3.
La caspasa 3 activa es responsable de la escisión de varios sustratos de muerte que conducen a
las características distintivas bien conocidas de una célula apoptótica, incluida la fragmentación
del ADN, nuclear fragmentación, formación de ampollas en la membrana y otros cambios
morfológicos y bioquímicos. La evidencia más reciente sugiere una complejidad y diversidad aún
mayores en las vías extrínsecas que también involucran la activación cruzada de otras vías
apoptóticas, como la apoptosis intrínseca y las vías secundarias necróticas [2,8](véase también
más adelante).
Figura 1 .Representación esquemática de las vías celulares de apoptosis o muerte celular programada tipo II (PCD)
con énfasis en los mecanismos que promueven la supervivencia. Se ilustran una variedad de reproductores
centrales que incluyen diferentes proteínas de membrana incrustadas en la membrana celular, las mitocondrias se
muestran como un óvalo naranja y un óvalo vacío representa el núcleo. La muerte celular y los genes
antiapoptóticos se muestran respectivamente como cuadros negros y azules. Hay dos formas de PCD tipo I
llamadas intrínsecas y extrínsecas. La forma intrínseca se desencadena por una variedad de estímulos que incluyen
una serie de tensiones. Las tensiones conducen a la activación de Bax (a través de la activación de Bcl-2 BH3 solo
proteínas), la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y ceramida que sirven como segundos
mensajeros que convergen en las mitocondrias. Esto conduce a la liberación de factores apoptogénicos que
incluyen citocromo c, endonucleasa G (Endo G) y factor inductor de apoptosis (AIF). El citocromo c se combina con
procaspasa 9, APAF-1 y dATP para formar el apoptosoma que conduce a la muerte celular mediante la activación
de una cascada de caspasa. La apoptosis extrínseca también se debe a la activación de la misma cascada de
caspasas como la forma intrínseca, pero en este caso, se activa mediante receptores de tipo citocina para TNF,
TRAIL y FasL. La comunicación cruzada entre las formas extrínseca e intrínseca se produce a través de la
activación mediada extrínsecamente de la proteína BH3 única de la Oferta en su forma activa tBid. Una variedad de
proteínas sirven para antagonizar PCD de tipo I, incluidos los inhibidores de las proteínas de apoptosis (IAP), FLIPs,
Faim3 y las proteínas anti-apoptóticas Bcl-2, de las cuales Bcl-2 es la más común.

La célula autónoma o la vía intrínseca se centra en gran medida y / o regulada por la mitocondria [9 -
11] . La forma más ampliamente estudiada de apoptosis intrínseca es iniciada por la liberación mediada por
estrés del citocromo c de la mitocondria que resulta en la formación del apoptosoma ( Fig. 1).) El
apoptosoma luego activa la caspasa del iniciador, típicamente caspasa 9, lo que conduce a la activación de
la caspasa verdugo 3. Esto conduce al mismo tipo de respuesta apoptótica que se observa para la ruta
extrínseca. En respuesta a los estímulos apoptóticos, los miembros proapoptóticos de la familia de
proteínas Bcl-2 (Bax y Bak) se activan y actúan sobre las mitocondrias para inducir la liberación de
citocromo c. Otras proteínas proapoptóticas también son liberadas por las mitocondrias incluyendo Smac /
Diablo (segundo activador derivado mitocondrial de la proteína Caspase / Direct IAP-Binding con LOw
pI), la serina proteasa Omi / HtrA2, la endonucleasa G (EndoG) y el factor inductor de la apoptosis
(AIF) [12-14]. Estos ejemplos posteriores, así como algunos otros descritos más adelante, demuestran
claramente el papel central de las mitocondrias en el proceso altamente regulado y complejo de muchas
formas de muerte celular programada (PCD) [9,11,15-17] . Como se mencionó anteriormente, la activación
de la ruta mitocondrial también puede ocurrir después de la activación de la ruta extrínseca. Se ha
demostrado que esto ocurre a través de la escisión de la caspasa 8 del miembro pro-apoptótico Bcl-2 Puja a
su forma tBid activada [10] . Este ejemplo relativamente simple de diafonía entre vías apoptóticas
aparentemente distintas sirve además para ilustrar un tema común de las complejas interrelaciones que
ahora se observa comúnmente en los diferentes procesos implicados en la regulación de la muerte celular
(véase también más adelante) [8,13,17]. 18].
Además de la muerte celular tipo I o apoptótica, existen al menos otras dos formas principales de muerte
celular programada [2,4,19] . La autofagia ha recibido mucha más atención en los últimos años debido a los
roles duales y algo contradictorios que desempeña en las decisiones de mediación entre la vida y la
muerte. La autofagia es un importante proceso multifuncional, que las células utilizan para reciclar
constituyentes celulares, un proceso que desempeña un papel importante en la homeostasis celular
normal [20,21]. La capacidad de reciclar componentes viejos en nuevos bloques hace que la autofagia sea
esencial para la supervivencia durante la inanición. Los estudios que son más recientes también han
demostrado que la autofagia se activa por una multitud de tensiones y es fundamental para sobrevivir a
estas tensiones. Se informa que la autofagia es tan poderosa y omnipresente que es probablemente el arma
más impresionante en el arsenal anti-muerte de la célula [22] . Casi paradójicamente, la autofagia también
se conoce como PCD de tipo II que se puede describir como un tipo de muerte celular independiente de las
caspasas que se asocia con la presencia de autofagosomas [23-27] .
La necrosis o muerte celular tipo III se pensó originalmente como la forma catastrófica de la
muerte [25] . La evidencia más reciente, incluido el hecho de que hay inhibidores genéticos de algunas
formas de necrosis, sugiere que los subformularios de muerte necrótica pueden tener un componente
genético. Por ejemplo, además de activar la apoptosis, la estimulación de los receptores de TNF-α también
puede conducir a la inducción de una necrosis programada llamada necroptosis [28] . Se ha implicado la
activación mediada por receptor de la proteína de interacción de receptor Receptor 1 (RIP1) y la formación
de un complejo activo inductor de necroptosis que consiste en RIP1 y RIP3. Por lo tanto, también funciona
como una forma de PCD que se produce en ciertas situaciones patológicas (es decir, en el corazón o el
cerebro durante la isquemia) [29,30].. El lisosoma en sí mismo puede participar directamente en la PCD
tipo III mediante la liberación de componentes lisosómicos como las proteasas que pueden desencadenar la
muerte celular [31] . Otros orgánulos como el retículo endoplasmático (RE) pueden tener funciones más
complejas, ya que puede estar involucrado en el desencadenamiento de PCD tipo III o tipo I [32,33] . Las
formas más especializadas o alternativas de muerte celular incluyendo anoikis (la PCD que ocurre cuando
las células pierden anclaje, contacto con su substrato o células vecinas) y piroptosis (muerte celular
mediada por infección) también son importantes bajo algunas condiciones o en algunos tipos de
células [34- 37]. La diversidad en los procesos implicados en la inducción de PCD oculta la complejidad y
un gran número de proteínas diferentes que pueden prevenir las diferentes formas "especializadas" de
apoptosis [38-41] .
Aunque se han presentado muchas excelentes revisiones globales sobre la muerte celular, se han realizado
comparativamente muy pocos intentos de proporcionar una revisión exhaustiva de los procesos implicados
en la promoción de la supervivencia celular. Dada la abrumadora evidencia de que la antiapoptosis es un
proceso celular global que es complementario pero distinto de la apoptosis (piense en quinasas frente a
fosfatasas), aquí hemos intentado proporcionar un marco de tipo global para los procesos de supervivencia
celular y antiapoptosis. El tema es enorme y nos disculpamos por la omisión de un gran número de
referencias que no pudimos incluir aquí debido a limitaciones de espacio. Remitimos al lector a una serie
de excelentes revisiones que proporcionan un análisis más profundo de algunos de los subtemas dentro del
campo de supervivencia celular [4,38,42-55] .

2 . Regulación de la apoptosis
2.1 . Inducción de apoptosis
Todos los metazoos, así como todas las células de protozoos examinadas, tienen la capacidad de sufrir
apoptosis cuando las condiciones son apropiadas [16,56-59] . El sacrificio de células individuales que son
defectuosas, dañadas o de otra manera una amenaza potencial para la integridad de todo el organismo, o de
la colonia en el caso de los protozoos, se considera un mecanismo de supervivencia importante. La
apoptosis puede ser inducida por una amplia gama de estímulos que se encuentran durante los procesos
normales o fisiopatológicos [3,60].. Por ejemplo, los agonistas del receptor de la muerte pueden ser
utilizados por las células inmunes para desencadenar la apoptosis en poblaciones específicas de células
defectuosas. Por el contrario, el aumento de la estimulación neurohormonal, que incluye niveles elevados
de agonistas para los receptores adrenérgicos y angiotensina II (AngII) acoplados a proteínas G (GPCR)
que se observan en pacientes con insuficiencia cardíaca crónica, también desencadena la muerte celular en
células musculares cardíacas y esqueléticas [61-63 ] . Además de estímulos específicos, como los agonistas
de los receptores, otros estímulos, incluyendo una multitud de otras tensiones extracelulares e intracelulares
que pueden servir para inducir la vía apoptótica intrínseca [3,57]. Estos incluyen una gran variedad de
diferentes tensiones físico-químicas tales como agentes quimioterapéuticos (es decir, doxorrubicina),
alteraciones en la temperatura y la osmolaridad, agentes deteriorantes del ADN, compuestos generadores
de radicales libres (es decir, H 2 0 2 ), la eliminación de nutrientes, oxígeno o factores de crecimiento ,
citoquinas proinflamatorias y procesos fisiológicos normales como el envejecimiento y el
desarrollo [3,62,64-71]. Algunos de estos, así como una serie de otros estímulos apoptóticos están
vinculados a enfermedades específicas. Los estímulos patológicos incluyen isquemia y reperfusión
posterior que se observa en ataques cardíacos o accidentes cerebrovasculares, así como otros procesos que
incluyen la acumulación de proteínas RE mal plegadas que a menudo se observan y pueden ser la base de
la muerte celular observada en enfermedades neurológicas como el Parkinson [17]. , 55,72] .
Los procesos implicados en el inicio de la cascada proapoptótica intrínseca en respuesta a un estrés
apropiado son como muchos procesos asociados con la PCD, muy bien estudiados pero aún no
completamente comprendidos ( figura 1 ). Lo que parece ser claro, al menos en algunos casos, es que el
estrés conduce a la activación de miembros pro-apoptóticos Bcl-2 como Bax o Bak [10,73-75] . Active Bax
se recluta a las mitocondrias y forma poros que permiten la liberación de factores pro-apoptogénicos como
el citocromo c, que luego conduce a la formación del apoptosoma. Esto sirve para iniciar la cascada de
señalización apoptótica intrínseca que implica la activación secuencial de las caspasas efectoras e
iniciadoras que conducen a la muerte celular ( Fig. 1).) Las especies de oxígeno reactivo (ROS) también
representan un jugador importante en este proceso [76,77] . Cabe señalar que el término ROS se refiere a
una serie de diferentes moléculas fisiológicamente relevantes, incluidos aniones superóxido (O 2 · 2 ),
peróxido de hidrógeno (H 2 O 2 ), radicales libres de hidroxilo (OH ·), óxido nítrico (NO ·) así como
algunas combinaciones de ROS (es decir, NO · y O 2 · 2 ) pueden producir nuevas especies como
peroxinitita (ONOO - ) [4,78,79] . Distintos estímulos conducirán a la producción de diferentes especies de
ROS y, a su vez, provocarán respuestas diferentes [80,81].. Sus niveles se incrementan en respuesta al
estrés probablemente debido a un aumento en el daño mitocondrial. Parece estimular la cascada apoptótica
causando daño a muchos componentes celulares, incluidas proteínas, lípidos y la propia mitocondria, lo
que a su vez facilita la liberación posterior de factores apoptogénicos [77,82] . Al igual que ROS, la
ceramida esfingolípida también juega un papel crítico pro-apoptótico. Aunque se sabe menos acerca de la
ceramida, probablemente debido en parte a las dificultades técnicas para controlar los niveles de
esfingolípidos, está claro que la ceramida es un segundo mensajero proapoptótico ubicuo cuyos niveles son
elevados en respuesta a múltiples tensiones [83-85]. ]. Se ha demostrado que la ceramida activa una
variedad de dianas intracelulares, pero el mecanismo por el cual induce la apoptosis no es bien
conocido [86] .
De la discusión anterior resulta bastante claro que Bax, ROS y ceramida son mediadores importantes de la
muerte celular inducidos por una variedad de diferentes tensiones ( figura 2 ). Se sabe bastante sobre la
regulación y la función de estos factores. Por ejemplo, la fuente de aumentos mediados por el estrés en
ROS es probablemente la mitocondria o NADPH oxigenasa [82] . De forma similar, la activación mediada
por estrés de la esfingomielinasa (SMase) que sirve para producir ceramida a partir de la esfingomielina es
probablemente la principal fuente del aumento de la ceramida durante las tensiones [83] . Aunque se han
desarrollado numerosos modelos, la activación de Bax por el estrés activado BH3 solo proteínas Bcl-2, es
el escenario más probable [74]. Ceramida, ROS y Bax activo parecen comportarse independientemente el
uno del otro ya que los aumentos en cualquiera de los tres son suficientes para desencadenar la muerte
celular. Sin embargo, también están íntimamente relacionados de tal manera que los aumentos en
cualquiera de los tres conducen a un aumento en los niveles del otro oa un aumento en su capacidad para
funcionar. Los mecanismos comúnmente propuestos de diafonía entre la apoptosis mediada por ROS y Bax
implican la activación convergente de proteínas proapoptóticas comunes, como la quinasa JNK, así como
la posibilidad de que proteínas como Bcl-2 tengan funciones dobles como inhibidor de Bax, además de ser
capaz de mediar un pequeño aumento en la producción de ROS y, por lo tanto, servir para mediar en un
aumento en las respuestas de supervivencia [76,87]. Por lo tanto, Bcl-2 puede inhibir simultánea e
independientemente a ambos Bax y servir para activar los sistemas de defensa celular. La función posterior
fue apoyada por la observación de que la disminución de la expresión de Bcl-2 conduce a un aumento del
estrés oxidativo, mientras que la sobreexpresión de Bcl-2 conduce a una reducción del estrés
oxidativo [88,89] . Un escenario alternativo sugiere que ROS puede servir como activador directo de la
proteína activadora Bh3 Bcl-2 Bnip3 de Bax [90]. Las conversaciones cruzadas adicionales son evidentes
por las observaciones de que los aumentos en los niveles de ceramida pueden servir para desencadenar
aumentos en ROS, mientras que otros han demostrado que el aumento de ROS puede aumentar los niveles
de ceramida [91-93]. La capacidad de la ceramida para ayudar a Bax activado a formar poros
mitocondriales representa otra manifestación de la interferencia presente en el sistema [94] . Más
recientemente, se ha propuesto un papel directo para la proteína pro-apoptótica Bcl-2 Bak para la
producción de ceramida en respuesta a estímulos apoptóticos [95] . A pesar de esto, se sabe muy poco
sobre cómo el estrés se transduce en aumentos de ROS, ceramida o Bax activado ( Fig. 2 ). De hecho, no
hay evidencia clara para diferenciar si los aumentos en ROS o ceramida o la activación de Bax representan
el evento inicial que sirve para desencadenar la apoptosis mediada por estrés. Por lo tanto, el proceso por el
cual el estrés inicia la apoptosis permanece indefinido [13,75,94] .

Fig. 2 .Representación esquemática de los procesos implicados en la inducción de la muerte celular mediada por
estrés y su inhibición por proteínas antiapoptóticas clave. La liberación de los factores mitocondriales apoptogénicos
está mediada por la acción de al menos tres mensajeros proapoptóticos diferentes, incluidos Bax activo, especies
reactivas de oxígeno (ROS) y la ceramida esfingolípida (que se muestran como recuadros rojos). La activación
mediada por estrés de BH3 solo proteínas Bcl-2, de mitocondrias (u otros sistemas productores de ROS como
NADPH oxidasa) y de esfingomielinasa (SMase) (las tres se muestran en cajas de color violeta) respectivamente
conduce a niveles aumentados de Bax activo, ROS y ceramida. Ceramide que sirve como sustrato para SMS1,
junto con Bax inactivo, se muestran en recuadros verdes. Se han identificado genes antiapoptóticos que pueden
prevenir la muerte celular en respuesta a aumentos para los tres factores (que se muestran en recuadros
azules). Bcl-2 puede prevenir los efectos de Bax activo, las proteínas de barrido de ROS pueden prevenir los
efectos de ROS y la ceramida que utiliza la enzima Sphingomyelin Synthase 1 (SMS1) puede prevenir los efectos
de la ceramida. Un mecanismo común u objetivo que sirve para transducir las tensiones en los procesos que activan
los tres sistemas diferentes responsables del aumento de Bax activo, ROS o ceramida está representado por una
caja negra. Se prevé un único objetivo común que trifurca debido a las observaciones de que la sobreexpresión de
cualquiera de los tres tipos de genes antiapoptóticos puede prevenir la muerte celular mediada por estrés. Por lo
tanto, las respuestas mediadas por estrés que conducen a la muerte tienen características de una vía lineal así
como de una serie de vías ramificadas. El inserto muestra un modelo simplificado que ilustra el concepto de una
ruta lineal donde todos los genes antiapoptóticos pueden prevenir la muerte celular mediada por estrés. La diafonía
que se produce entre las diferentes ramas en la ruta es extensa y puede mostrarse que ocurre en muchos niveles,
algunos de los cuales se muestran al conectar flechas. Por ejemplo, la expresión ectópica de Bax activa conduce a
la activación de las tres ramas ya que también se observan aumentos en la ceramida y ROS. La observación
adicional de la sobreexpresión de muchas otras secuencias anti-apoptóticas tales como los genes que codifican una
variedad de chaperonas o proteínas de choque térmico también puede prevenir la muerte celular en respuesta a la
activación de una o las tres ramas de la ruta de estrés. Un escenario alternativo que no está representado, para
explicar las estrechas interrelaciones entre los diferentes procesos, sería un modelo de reóstato modificado. La
muerte celular en respuesta al estrés ocurre cuando se alcanza una cierta concentración umbral de segundos
mensajeros pro-apoptóticos. Las tensiones aumentan la concentración de muchos de estos mensajeros, mientras
que cualquier gen o proceso que disminuya los niveles de cualquiera de los segundos mensajeros reduce el estrés
y disminuye la probabilidad de que se desencadenen cascadas inductoras de muerte celular. Un escenario
alternativo que no está representado, para explicar las estrechas interrelaciones entre los diferentes procesos, sería
un modelo de reóstato modificado. La muerte celular en respuesta al estrés ocurre cuando se alcanza una cierta
concentración umbral de segundos mensajeros pro-apoptóticos. Las tensiones aumentan la concentración de
muchos de estos mensajeros, mientras que cualquier gen o proceso que disminuya los niveles de cualquiera de los
segundos mensajeros reduce el estrés y disminuye la probabilidad de que se desencadenen cascadas inductoras
de muerte celular. Un escenario alternativo que no está representado, para explicar las estrechas interrelaciones
entre los diferentes procesos, sería un modelo de reóstato modificado. La muerte celular en respuesta al estrés
ocurre cuando se alcanza una cierta concentración umbral de segundos mensajeros pro-apoptóticos. Las tensiones
aumentan la concentración de muchos de estos mensajeros, mientras que cualquier gen o proceso que disminuya
los niveles de cualquiera de los segundos mensajeros reduce el estrés y disminuye la probabilidad de que se
desencadenen cascadas inductoras de muerte celular.

La dificultad para identificar y asignar función a los factores proapoptóticos se facilita mediante la
identificación de secuencias antiapoptóticas que evitan la activación o promueven una disminución en los
niveles de ROS, Bax activo o ceramida. Por ejemplo, la sobreexpresión de numerosos genes que codifican
captadores de ROS como glutaredoxinas, peroxirredoxina, superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa, el
gen que codifica la ceramida utilizando esfingomielina sintasa 1 (SMS1) o el gen que codifica la proteína
inhibidora de Bax Bcl-2 puede evitar el estrés mediado apoptosis en muchas células [10,77,96-104]. De
acuerdo con la naturaleza íntima del diálogo cruzado entre los tres factores, cualquiera de los tres genes
antiapoptóticos diferentes puede servir para prevenir la apoptosis en respuesta a Bax, ceramida o ROS. Por
lo tanto, algo paradójicamente, los aumentos en los niveles de Bax, ROS o ceramida activados pueden
servir para activar la apoptosis, mientras que el bloqueo individual de cualquiera de estos es suficiente para
prevenir la apoptosis. Hemos desarrollado una representación esquemática de las interrelaciones entre Bax,
ceramida y ROS con estrés y muerte celular ( figura 2 ). A pesar de la inadecuación del modelo, es bastante
claro que los avances en nuestra comprensión de la antiapoptosis conducen a un aumento en nuestra
comprensión de los paradigmas involucrados en los procesos de muerte celular regulada.
Es de interés señalar que varios eucariotas inferiores, como la levadura, sufren muerte celular programada
dependiente mediada por estrés (CPD) a pesar del hecho de que no parecen tener
un ortotipoBax [58,105] . Esto es evidencia en apoyo de ROS o ceramida como el mediador central de la
apoptosis. Sin embargo, debe observarse que la existencia de un posible homólogo funcional de Bax ha
sido sugerida por las observaciones de que los mamíferos Bax y Bcl-2 expresados ectópicamente parecen
conservar su capacidad de regular la apoptosis en levaduras [75].. Además, como se observó en células de
mamíferos, sobreexpresar heterogéneamente Bax activo en levadura conduce a aumentos en la muerte
celular mediada por estrés que se puede bloquear al sobreexpresar simultáneamente el inhibidor Bax Bcl-2
o genes que codifican captadores ROS o una ceramida que utiliza proteína [101,106-110] ] .
Además de ROS y ceramida, se ha demostrado que una serie de otros segundos mensajeros intracelulares,
como el calcio y el nucleótido 2'-desoxiuridina 5'-trifosfato (dUTP), desencadenan respuestas
apoptóticas [111-114] . Aunque el papel de dUTP en la muerte selectiva de células se ha identificado hace
mucho tiempo en el desarrollo de la mosca de la fruta, la evidencia más reciente sugiere que tiene un papel
más amplio en el inicio de respuestas proapoptóticas [113,115,116] . Se sabe que este nucleótido causa
daño en el ADN y muerte celular cuando se incorpora incorrectamente en el ADN [113,114,117]. En
efecto, los niveles dUTP elevados son responsables de los efectos inductores apoptóticos de muchos
compuestos quimioterapéuticos que promueven la muerte celular, al menos en parte, al crear desequilibrios
en el conjunto de nucleótidos (es decir, inhibidores de la timidilato sintasa) [113,118] . Una mayor
incorporación de dUTP en el genoma de los virus puede ser un mecanismo común utilizado por las células
infectadas para matar virus o suicidarse [114] . No es sorprendente que muchos virus codifiquen su propia
dUTPasa [114] . Una vez más, la importancia de estos segundos mensajeros queda resaltada por las
observaciones de que las proteínas de unión a calcio tales como fortilina así como la enzima dUTP
metabolizante dUTPasa son capaces de prevenir la muerte celular en respuesta a algunas tensiones cuando
se sobreexpresan en células [111,113] (Khoury y Greenwood, sin publicar).
2.2 . Regulación negativa de la apoptosis
Las células monitorean su entorno y continuamente toman decisiones sobre si deben continuar
viviendo. Cuando se enfrenta a una posible señal de apoptosis, la célula desea evitar el desencadenamiento
de la apoptosis prematura o innecesaria y, al mismo tiempo, quiere asegurarse de iniciar la apoptosis si la
señal es de intensidad significativa. Esto se logra equilibrando las maquinarias pro y
antiapoptóticas [38,42,43] . En el laboratorio podemos determinar la dosis máxima de un estrés (una
combinación de tiempo de exposición y concentración del agente utilizado) que no ocasionará
la muerte [119-121] . Peróxido de hidrógeno (H 2 O 2) es un agente de uso común para inducir apoptosis y
es un excelente factor estresante que puede servir para ilustrar este punto. En nuestras manos, las curvas de
respuesta a la dosis / viabilidad utilizando H 2 O 2 han demostrado que 24 h de exposición a 0,6 M
H 2 O 2 para C 2 C1 2 células de mioblastos de ratón y 4 h de exposición a 0,8 mM H 2 O 2para la levadura
de tipo salvaje son las dosis máximas que causan poca o ninguna muerte celular en estas células. A esta
dosis de estrés, las células no sufren apoptosis porque resisten activamente la muerte celular. La evidencia
de que esto debe ser cierto, se basa en la observación de que tales estímulos inductores no apoptóticos leves
pueden inducir apoptosis en células que tienen niveles de expresión reducidos de varios genes diferentes
que codifican diferentes proteínas antiapoptóticas, como la lectina galectina 3, los miembros de la familia
Bcl-2 Mcl-1 y Bcl-xL, así como las enzimas como la esfingosina quinasa-1 por knock out o
siRNA [99,122-128]. Por lo tanto, la ausencia de genes antiapoptóticos aumenta la sensibilidad a los
agentes inductores de apoptosis subletales. Se deduce que un aumento en los niveles de genes
antiapoptóticos conduce a una mayor resistencia a los estímulos apoptóticos. Por lo tanto, se aumenta la
dosificación mínima de un estrés requerido para matar una célula que está sobreexpresando genes
antiapoptóticos. Esto conduce a la definición viable de un gen antiapoptótico como una secuencia que
disminuye o aumenta la supervivencia celular en respuesta a una dosis dada de estrés si sus niveles son,
respectivamente, disminuidos o aumentados [12,38,96,99,122-141].. La redundancia genética en diferentes
procesos anti-apoptóticos hace que varios genes eviten la apoptosis cuando se sobreexpresan, mientras que
su pérdida no mejora las respuestas apoptóticas. Se ha informado una cantidad impresionante de genes
funcionalmente diversos que se comportan como secuencias antiapoptóticas (ver Sección 4.2 ). El número
de genes anti-apoptóticos candidatos aún no caracterizados identificados en pantallas o como genes que
están regulados positivamente en células resistentes a la apoptosis indica claramente que la lista aún no está
completa [142-148] .
Vale la pena mencionar que hay tres familias de proteínas antiapoptóticas bien caracterizadas que incluyen
proteínas inhibidoras de FLICE (FLIP), Bcl-2 e inhibidores de proteínas de apoptosis (IAP) que se
describen en la mayoría de las discusiones sobre vías apoptóticas dependientes de caspasas ( Fig.
1 ) [1,42,44] . De gran importancia en la regulación de la apoptosis es el dominio de homología Bcl-2 (BH)
que contiene la familia de proteínas. Esta familia contiene reguladores de la apoptosis negativos y
positivos, siendo Bax el miembro proapoptótico más estudiado, mientras que Bcl-2 es el miembro
antiapoptótico más estudiado [10,74].. Bcl-2 antagoniza los efectos de Bax e impide la liberación de
citocromo c. La función de Bcl-2 no se limita a inhibir Bax ya que Bcl-2 puede inhibir la apoptosis en
respuesta al citocromo cy microinyectado y cuando se sobreexpresa en células de levadura a pesar del
hecho de que el genoma de levadura no codifica un ortólogo directo de Bax [106,107,149,150] . En
contraste con la vía intrínseca, el inicio de la cascada de señalización apoptótica mediante la estimulación
de los receptores de la Muerte parece asemejarse más a una cascada de señalización de tipo de citoquina
tradicional [151].. Sin embargo, esta vía también está regulada negativamente para prevenir la muerte
celular inapropiada. Los FLIP (proteína inhibidora FLICE) representan el inhibidor más comúnmente
examinado de la ruta extrínseca. Los FLIP contienen el mismo dominio DED que la caspasa 8 y, por lo
tanto, pueden competir e impedir la activación de caspasa 8 al interferir con su reclutamiento al receptor
activado [152] . La tercera clase bien estudiada de proteínas de supervivencia celular es la familia de
inhibidores de la apoptosis (IAP). Estos sirven para unir e inhibir tanto el iniciador como las caspasas
efectoras por lo que pueden regular ambas formas de apoptosis [153] . Esta clase funcional de proteína se
describió por primera vez en el genoma de baculovirus y subraya los recursos colocados por los virus para
controlar las respuestas apoptóticas [154]..
Antagonizar directamente las proteínas proapoptóticas y aumentar los niveles de expresión de los genes
antiapoptóticos, incluidos los genes implicados en el metabolismo de los segundos mensajeros
proapoptóticos, son probablemente las estrategias de supervivencia más comúnmente
informadas [4,42] . Otras formas de aumentar la supervivencia en respuesta al estrés incluyen una
diversidad de otros procesos, algunos de los cuales les gusta la activación mediada por receptor de las
cascadas de quinasas (es decir, quinasas reguladas extracelulares (Erk1 / 2) y Akt quinasas) son rápidos ya
que pueden ocurrir en ausencia de nueva síntesis de ARN o proteína [69]. Nuestra comprensión de la
diversidad de los procesos antiapoptóticos, la diversidad de los genes antiapoptóticos implicados y los
mecanismos mediante los cuales algunos de estos procesos y genes funcionan para contrarrestar las
respuestas apoptóticas se han mejorado enormemente a partir del estudio de las células que muestran una
mejora resistencia a la muerte celular induciendo tensiones y procesos.
3. Vías y procesos antiapoptóticos y pro-supervivencia identificados en células resistentes
a la apoptosis
Las células que muestran una mayor resistencia al estrés se caracterizan por su requerimiento de que se
induzcan niveles más altos de estímulos apoptóticos para la muerte celular. Una amplia variedad de tipos
de células puede mostrar una mayor resistencia que puede ser inducida por una amplia variedad de
diferentes condiciones. Se ha demostrado que la capacidad de evadir la apoptosis es inducida por un rango
de diferentes alteraciones que incluyen cambios fisiológicos tales como la activación / activación de rutas
de señalización mitogénicas (es decir, Erk1 / 2, Akt), la inactivación / regulación negativa de ciertas
moléculas apoptóticas ( es decir, receptor Fas, Bax) [69,130,155,156] a la regulación positiva de varios
genes antiapoptóticos, como Bcl-2 y cFLIP [157,158].. Por lo tanto, en las siguientes secciones
describiremos las condiciones que sirven para hacer que las células sean más resistentes, así como también
la amplia diversidad de mecanismos conocidos que confieren fenotipos antiapoptóticos a estas células.
3.1 . Pre-acondicionamiento
Los breves períodos submúltiples de detención y reinicio del flujo sanguíneo (isquemia / reperfusión)
inducen un fenotipo que protege los efectos de períodos más largos de isquemia /
reperfusión [52,53,159,160] . Aunque este proceso probablemente ocurre en todos los tipos de células, se
ha estudiado ampliamente (al menos para los metazoos) en el corazón y el cerebro, históricamente debido a
la importancia que tienen los eventos isquémicos en la etiología de los ataques cardíacos y los accidentes
cerebrovasculares [52,53,159,161]. En consecuencia, enfocamos en gran medida nuestra discusión en estos
sistemas ya que nuestra comprensión del proceso de anti-apoptosis mediada por pre-condición
probablemente se entienda mejor en estas células. El precondicionamiento isquémico da lugar a dos tipos
de protección temporalmente distintos. El precondicionamiento clásico proporciona una ventana de
protección temporal que se produce minutos después del estímulo previo a la condición (que generalmente
consta de 3-4 períodos cortos de isquemia / reperfusión) [52,53,160] . La protección puede durar hasta
120 minutos e implica una serie de proteínas de señalización que incluyen la activación de múltiples
cascadas de proteína quinasa como ERK y Akt, muchas de las cuales tienen propiedades
antiapoptóticas [53].. En respuesta a los mismos estímulos, también se induce una segunda forma de
preacondicionamiento, llamada preacondicionamiento de inicio tardío. Esto proporciona una protección a
largo plazo que dura de 24 a 72 h después del estímulo previo a la condición [52,53,160] . Esta forma de
acondicionamiento previo requiere síntesis de proteínas e implica la expresión incrementada de varios
genes que codifican proteínas tales como proteínas de choque térmico (HSP), antioxidantes, enzimas que
utilizan ceramida, así como una serie de otros genes antiapoptóticos. , muchos de los cuales codifican
proteínas de función desconocida [52,53,162] . Que estos genes son antiapoptóticos se demuestra por el
hecho de que muchos de ellos disminuyen la muerte mediada por isquemia / reperfusión cuando se
sobreexpresan en los corazones de ratones transgénicos [96,97,135,136,163].. Del mismo modo, la
protección de los estímulos apoptóticos también se observa cuando los genes individuales antiapoptóticos
se sobreexpresan en células cultivadas [47] . Además de aumentar la expresión de genes antiapoptóticos,
también debe observarse, aunque no se aborda aquí, que la protección proporcionada por el
preacondicionamiento de inicio tardío también puede ocurrir a través de otros mecanismos tales como la
disminución en la expresión de pro- genes apoptóticos tales como Bax.
Los efectos protectores del precondicionamiento isquémico / de reperfusión también pueden imitarse en
células cultivadas [119-121, 164] . Por lo tanto, a pesar de la disponibilidad de varios modelos animales,
las células cultivadas, incluidos los cardiomiocitos cultivados primarios y las neuronas, se han utilizado
ampliamente para estudiar el precondicionamiento [165-168].. De interés aquí, se encontró que los
fenotipos pre-acondicionados como resistentes a la apoptosis no son exclusivamente dependientes del uso
de isquemia / reperfusión leve como estímulo. En efecto, la resistencia a dosis inductoras de apoptosis de
prácticamente cualquier agente inductor de apoptosis es suficiente para conferir una precondición
citoprotectora como fenotipo. En organismos de mamíferos, los efectos citoprotectores del
preacondicionamiento parecen estar mediados por la liberación de varios agentes que incluyen agonistas
para receptores acoplados a proteína G (GPCR) como adenosina, adrenérgicos y opioides [49].. Aunque
estos agonistas pueden conferir efectos citoprotectores en células cultivadas, su liberación no es
responsable de la mediación de los efectos de todos los agentes de acondicionamiento previo. Se ha
demostrado que una amplia gama de diferentes agentes y tensiones ambientales inducen efectos similares a
los previos a la condición. Las metodologías globales de expresión génica que incluyen chips de genes,
proteómica y experimentos de hibridación sustractiva, así como los enfoques de genes candidatos revelan
que la expresión aumentada de genes antiapoptóticos es también un mecanismo común que sirve para
invocar fenotipos de supervivencia incrementados en respuesta a una amplia variedad de agentes
acondicionadores y condiciones en animales completos y en células cultivadas [159]. Algunos ejemplos
incluyen fibroblastos humanos sometidos a estrés de microgravedad en el transbordador espacial, las
células cardíacas de ratones pretratados con sulfuro de hidrógeno mostraron una mayor protección contra el
estrés de isquemia / reperfusión, la retina de cachorros de ratones hiperóxicos e hipóxicos condicionados, la
región del núcleo accumbens de el cerebro de ratas en la fase aguda temprana de abstinencia alcohólica y
ceramida suministrada exógenamente a neuronas corticales de rata primarias, el uso de pretratamiento con
calor para proteger de tensiones tales como el peróxido de hidrógeno donante de ROS, así como el uso de
bajos niveles subletales de el peróxido de hidrógeno donante de ROS para proteger contra la apoptosis
mediada por el agotamiento del suero [119-121,147,167,169-172]. Además, precondiciones como
fenotipos que son al menos parcialmente dependientes de la expresión incrementada de genes de
supervivencia es un proceso altamente conservado que se observa en varias especies diferentes, incluyendo
bacterias, levaduras y metazoos inferiores [162,173-175] . La similitud en el proceso entre metazoos y
protozoos es tal que muchos genes anti-apoptóticos de mamíferos pueden servir funcionalmente para
proteger a las células de levadura de la apoptosis mediada por estrés [105,176] .
La citoprotección mediada preacondicionada inducida por niveles sub-letales de diferentes tensiones parece
estar mediada por la expresión incrementada de un grupo central de genes antiapoptóticos potentes. Estos
incluyen genes que codifican captadores de ROS, así como proteínas de choque térmico (HSP) y otras
chaperonas. Los HSP en realidad representan un gran número de proteínas diferentes que pertenecen a
varias subfamilias diferentes [177,178] . Aunque originalmente se identificaron como proteínas cuya
expresión aumenta en respuesta al estrés por calor, ahora se sabe que también se inducen diferentes HSP y
para proteger a las células de una variedad de tensiones inductoras de apoptosis, así como funciones en la
homeostasis que ayudan a plegar proteínas [179]. Es probable que las HSP protejan las células ayudando a
replegar las proteínas desnaturalizadas debido a las tensiones y ayudando a detectar las proteínas dañadas
para la degradación. La subfamilia HSPA / HSP70, que consta de al menos 13 miembros diferentes, es una
de las HSP más grandes y ampliamente estudiadas. Varios estudios han demostrado que la sobreexpresión
de miembros de la subfamilia HSP70 puede proteger a las células de diferentes tensiones inductoras de
apoptosis [180,181] . Se han reportado otras funciones anti-apoptóticas de HSP70 y otras HSP, incluyendo
la prevención de la liberación de factores pro-apoptóticos tales como el factor inductor de apoptosis (AIF)
de las mitocondrias [182].. Aunque todos los HSP se consideran chaperones, hay varias proteínas que
funcionan como chaperonas sin ser HSP. Algunos de estos chaperones con funciones antiapoptóticas
incluyen miembros del antígeno Bcl-2 asociado (BAG) y familias de clusterina [183,184] . Algunas de
estas proteínas, como BAG, probablemente sirven para inhibir la apoptosis al actuar como co-chaperonas
para otras proteínas como las HSP, aunque hay evidencia reciente de que BAG puede ser citoprotectora al
inducir la autofagia (ver también la Sección 5 ) [185,186] . Esto desmiente uno de los temas centrales de la
antiapoptosis que las proteínas capaces de prevenir o reparar el daño celular mediado por el estrés
probablemente sean citoprotectoras [4]. Además de los genes comúnmente regulados por incremento,
parece haber un subconjunto de genes que están regulados positivamente por tensiones específicas. Por
ejemplo, los agentes que dañan el ADN conducirán a la regulación positiva de las enzimas de reparación
del ADN que luego servirán para proteger las células dañadas por el ADN [81] . En ausencia de daño en el
ADN, es poco probable que estos genes sean citoprotectores y, por lo tanto, no serán inducidos por agentes
que no dañen el ADN. Un hallazgo algo sorprendente es la observación de que los estreses que podrían
esperarse para causar daños similares en una célula, como dos donantes diferentes de especies reactivas de
oxígeno (ROS) pueden tener patrones significativamente diferentes de expresión genética
alterada [80,81].. Esto sugiere que existe un amplio y complejo repertorio de genes citoprotectores
activados por estrés que están disponibles para la célula que enfrenta diferentes tensiones.
Aunque se han descrito varias permutaciones en el proceso de preacondicionamiento , dos de ellas incluyen
post acondicionamiento [187] y preacondicionamiento remoto [188,189]vale la pena discutir aquí. Como se
menciona anteriormente, la administración de un estímulo de preacondicionamiento antes de un evento de
isquemia / reperfusión mayor en un tejido tal como el corazón conducirá a cardioprotección según se juzga
por un tamaño de infarto disminuido. Sorprendentemente, el post-acondicionamiento es el fenómeno en el
que un estímulo del tipo de preacondicionamiento administrado después del insulto apoptótico cardíaco
todavía dará como resultado el mismo grado de cardioprotección. Esto tiene implicaciones clínicas ya que
los pacientes generalmente se ven después y no antes y el evento de isquemia /
reperfusión. Mecánicamente, esto sugiere que los procesos antiapoptóticos pueden anular las señales
inductoras de apoptosis incluso después de que se hayan iniciado. Por otro lado, el preacondicionamiento
remoto es un proceso que conduce a la protección en sitios distantes del sitio que está sujeto a un régimen
de precondición. Así, una serie de eventos isquémicos / reperfusión cortos en una extremidad pueden
conducir a la inducción de un programa de citoprotección en un área remota como el corazón. Esto sugiere
que las células sometidas a preacondicionamiento liberan un factor o factores (como los agonistas del
receptor, como se discutió anteriormente) que pueden difundir e inducir efectos anti-apoptóticos en otras
células. La aplicación clínica del preacondicionamiento remoto ha mostrado algunas promesas, así como
algunas limitaciones[166,189,190] .
3.2 . Cáncer
La homeostasis celular normal se mantiene mediante un equilibrio entre los procesos de crecimiento y
muerte celular. Los desequilibrios en cualquiera de ellos pueden conducir a un crecimiento celular
descontrolado y al desarrollo de cáncer [11,158,191] . Por lo tanto, la activación constitutiva o el aumento
de muchas proteínas mitógenas como myc, src y ras o vías promotoras del crecimiento como la proteína
activada mitogénica (MAP) quinasas, receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y
fosfatidilinositol 3-quinasas (PI3K) a menudo conducen a un crecimiento incontrolado eso sirve para
promover la oncogénesis [69,156] . Alternativamente, la regulación alterada del proceso de apoptosis
también se ha relacionado con todos los diferentes procesos de oncogénesis, que incluyen el inicio, la
progresión y la metástasis [4,34,35,43,45].. Dado que el desarrollo de un fenotipo antiapoptótico es una de
las características distintivas que se requieren para que las células se vuelvan cancerosas, nuestra
comprensión de los procesos que pueden conducir a la antiapoptosisprobablemente se caracterice mejor en
las células cancerosas [38,43,158,192,193] . En efecto, el miembro prototípico de la familia Bcl-2, Bcl-2,
se identificó originalmente como un gen oncogénico cuya expresión aumentó en la mayoría de los linfomas
foliculares debido a una translocación cromosómica recíproca (t14; 18) [194,195].. Los estudios de
sobreexpresión revelaron que Bcl-2 era un oncogén atípico ya que no servía para promover el crecimiento
sino que se descubrió que previene la muerte celular en respuesta a diferentes tensiones. Estos estudios
sirvieron como preludio para el desarrollo de nuestra comprensión de la importancia central de los
diferentes miembros pro y anti-apoptóticos de la familia Bcl-2 en la regulación de la muerte celular [74] .
Se ha descrito una variedad de otras alteraciones que conducen a una mayor resistencia a la apoptosis en
diferentes células cancerosas [4,34,35,43,45] . Estos incluyen una disminución en la expresión de genes
pro-apoptóticos, tales como Bax, así como la disminución de la señalización de los receptores de la
muerte. Sin embargo, la regulación al alza de los genes antiapoptóticos es probablemente el mecanismo
más comúnmente informado utilizado para evadir la apoptosis. Los genes identificados como regulados
positivamente incluyen los genes antiapoptóticos comúnmente observados, tales como Bcl-2 y c-
FLIP. Otros genes antiapoptóticos comunes que se ha demostrado que están regulados de manera ubicua
incluyen una variedad de proteínas de choque térmico y chaperonas, así como genes que codifican
secuestrantes de especies reactivas de oxígeno (ROS) [4,46,60,196].. La caracterización de los genes
regulados por incremento en las células cancerosas también ha servido y probablemente continuará
sirviendo para identificar muchos nuevos genes antiapoptóticos [142,145,146,148,197] . Por ejemplo,
Abtraham et al. [142]identificó una cantidad de genes regulados en las células HeLa. De estos, la
metaloproteinasa 15 (MMP-15) se eligió para un estudio posterior y se demostró que previene la apoptosis
cuando se sobreexpresa tanto en HeLa como en adenocarcinoma de pulmón humano. Esto sugiere que,
además de su potencial para promover la invasión tumoral en su papel como una proteinasa de matriz
extracelular, la MMP-15 también puede estar involucrada en la oncogénesis como un gen
antiapoptótico. La realización de la importancia de la expresión aumentada de muchos genes
antiapoptóticos diferentes en la mediación del proceso de tumorigénesis ha conducido al desarrollo de
estrategias farmacológicas para dirigir estas proteínas como coadyuvantes para mejorar los efectos de la
terapéutica existente [44,126,127,133,134] .
Los fenotipos antiapoptóticos de las células tumorales se desarrollan en respuesta a los microentornos
estresantes, que incluyen limitaciones en la disponibilidad de nutrientes y oxígeno, en las que se
desarrollan [46,158,198] . Estas tensiones son similares a los efectos que los niveles subletales de tensiones
tienen en todas las células y recuerdan lo que ocurre en respuesta al preacondicionamiento. Tipos similares
de cambios fenotípicos ocurren en las células cancerosas que desarrollan resistencia a los agentes
quimioterapéuticos. Por ejemplo, las pantallas de chips de genes identificaron supervivencia celular o
genes antiapoptóticos como una clase principal de genes regulados en numerosas células que desarrollan
resistencia a una multitud de agentes quimioterapéuticos, incluida la resistencia a los inhibidores de la
histona desacilasa en líneas celulares de cáncer de colon [44, 445, 144, 199] .
3.3 . Actividad sináptica y otros procesos neuronales
La actividad neuronal sirve para promover la supervivencia celular, al menos en parte, a través de la
activación del neurotransmisor N- metil- D- aspartato (NMDA) receptores de glutamato [200]. Los
transitorios de calcio neuronales provocados por la estimulación de los canales de iones permeables al
calcio NMDA sirven para activar un programa de supervivencia que tiene similitudes con los procesos
observados en el preacondicionamiento. Los experimentos fisiológicos, farmacológicos y de chips de genes
indican que la citoprotección mediada por NMDA temprana implica la activación de proteínas de
supervivencia como quinasas, mientras que la citoprotección de mayor duración implica la regulación
positiva de genes antiapoptóticos y la regulación a la baja de genes proapoptóticos. Documentos recientes
del grupo de Bading han utilizado chips genéticos para identificar cientos de genes que se expresan
diferencialmente en respuesta a la estimulación de NMDA o actividad sináptica en neuronas cultivadas del
hipocampo obtenidas de ratones recién nacidos [143,144]. Además, el análisis funcional de un subconjunto
de estos genes sirvió para identificar Bcl6 y Btg2 como nuevos genes de supervivencia neuronal. Varios
otros genes regulados positivamente, incluidos muchos que se clasifican como genes inhibidores de la
actividad regulados por la muerte (AID), esperan un análisis más detallado. La actividad sináptica
aumentada observada en este tipo de estudios se relaciona con la formación de nuevas conexiones
neuronales que se producen durante la plasticidad sináptica. Estos resultados sugieren que la estimulación
de las vías antiapoptóticas endógenas también puede tener un potencial terapéutico para limitar la apoptosis
en enfermedades degenerativas neurológicas como el Alzheimer, el Parkinson o el accidente
cerebrovascular [41,55,201] . El concepto de invocar procesos anti-apoptóticos también se ha explorado
para una serie de otras enfermedades neurológicas, como el glaucoma [202]. El glaucoma es una
enfermedad neurooftalmológica que es una causa común de ceguera que ocurre debido a la apoptosis
inapropiada de las células ganglionares de la retina (RGC). Aunque la presión intraocular (PIO) es un
factor de riesgo común, el disparador exacto de PCD sigue siendo en gran parte desconocido [203] . Sin
embargo, la pérdida de soporte trófico es un factor probable dado que los agonistas neurotróficos como el
Factor Neurotrófico Derivado del Cerebro (BDNF) pueden desempeñar un papel protector [203] . Como
todas las otras células examinadas, las RGC son capaces de montar mecanismos de defensa protectores
preacondicionados en respuesta al estrés leve. En RGC, la expresión de varios genes potenciales
antiapoptóticos aumenta en respuesta a diferentes formas de estrés [204]. Uno de dichos genes, la proteína
de choque térmico 27 (hsp27) es inducida por una variedad de tensiones, incluido el precondicionamiento
isquémico [205] . Además, se ha demostrado que su sobreexpresión aumenta la resistencia a la muerte
celular mediada por estrés en células de ganglio de rata cultivadas [206] . Esto saca a relucir el concepto,
que discutiremos más adelante en más detalle (ver sección 4.5 ), que la capacidad de explotar la maquinaria
antiapoptótica endógena para prevenir la muerte celular mediada por estrés probablemente sea una
estrategia útil para tratar una variedad de enfermedades neurológicas. enfermedades con apoptosis
aumentada que incluyen glaucoma, esclerosis múltiple (EM), apoplejía, epilepsia, esclerosis lateral
amiotrófica (ELA) [48,202,207-209] .
Una variedad de otros agonistas de receptor así como otros agentes difusibles tales como la neuroprotectina
1 autocoide (NPD1) también son capaces de prevenir la apoptosis en células neuronales [210] . NDP1 se
produce por la acción de la 15-lipoxigenasa sobre el ácido graso esencial del ácido docosahexaenoico
(DHA). Aunque los objetivos moleculares exactos de NDP1 no son bien conocidos, ejerce profundos
efectos neuroprotectores en respuesta a múltiples tensiones, incluidos estados de enfermedades. Además, la
producción de NDP1 aumenta en respuesta a tensiones como el estrés oxidativo. Estos efectos de NDP1 se
ilustran en un estudio reciente que demostró que NDP1 mejoraba la supervivencia de las células
ganglionares de la retina de animales sometidos a la sección del nervio óptico [211].. Las observaciones de
que los niveles endógenos de NDP1 así como los niveles de expresión del gen de 15-lipoxigenasa se
incrementaron después de la axotomía del nervio óptico sugieren que los niveles de NDP1 son parte de la
respuesta antiapoptótica de las células neuronales.
3.4 . Condiciones hipometabólicas
Muchos organismos pasan por una fase de tipo de reposo que les permite sobrevivir períodos prolongados
de estrés severo. Ejemplos bien estudiados incluyen la hibernación y los fenómenos de diapausas [212-
214] . El proceso posterior se utiliza para describir numerosos fenómenos como el estadio "dauer"
en Caenorhabditis elegans , etapas de esporas observadas en muchos protozoos como la levadura y el
moho de lodo, así como la pausa que se observa en los embriones de preimplantación de
mamíferos [214]. Por otro lado, la hibernación se ve en una variedad de organismos, pero probablemente se
describa mejor como un estupor "similar al sueño" observado en numerosas especies animales, incluidos
muchos mamíferos. Estas etapas de latencia permiten la supervivencia en condiciones ambientales
estresantes, como los extremos de temperatura y la menor disponibilidad a largo plazo de nutrientes,
incluidas las fuentes de energía y el agua. La supervivencia se ve reforzada por las adaptaciones
fisiológicas, como la disminución del metabolismo que sirve para conservar energía, así como las
adaptaciones genéticas que permiten la activación de genes que codifican proteínas tolerantes a la
congelación. Estas tensiones ambientales combinadas con las tensiones intracelulares que surgen (es decir,
una mayor acumulación de productos de desecho) son suficientes para inducir una muerte celular
significativa en ausencia de adaptación al estrés.[159,215,216] . En efecto, como se observó en el
preacondicionamiento de la resistencia mediada al estrés por isquemia / reperfusión, existe una expresión
aumentada de genes antiapoptóticos en ambos animales que están latentes y que están surgiendo de la
hibernación. Muchos de los genes identificados son omnipresentes, tales como HSP, antioxidantes y
quinasas mitogénicas. Se cree que las quinasas mitogénicas, incluido ERK1 / 2, son antiapoptóticas en
virtud de su capacidad para promover la proliferación celular, mientras que otras quinasas, como las
Proteína quinasas A y C, a veces son pro y a veces antiapoptóticas [69].. Sin embargo, hay informes sobre
la identificación de una variedad de otros genes de función desconocida que sugieren que aumentar nuestra
comprensión del mecanismo protector de estrés de la hibernación conducirá a la elucidación de nuevos
procesos antiapoptóticos, muchos de los cuales pueden tener un valor clínico [216- 220] .
3.5 . Respuestas de estrés global
En respuesta al estrés, las células han desarrollado mecanismos de defensa para prevenir, reparar y, en
general, mitigar el daño [4,60,177]. Uno de los procesos de supervivencia más antiguos descritos,
originalmente identificado como respuesta global al daño del ADN mediado por UV, fue la respuesta SOS
bacteriana en E. coli [81,221] . Los mecanismos mediante los cuales el daño del ADN se transduce en
respuestas fisiológicas y genéticas para contrarrestar los efectos negativos del estrés son procesos elegantes
y complejos. Algunos de ellos valen la pena analizar aquí con un pequeño detalle, ya que pueden ser los
sistemas sensibles al estrés mejor caracterizados y, como tales, sirven como modelos para desarrollar
nuestra comprensión de sistemas similares sensibles al estrés en células eucarióticas [81]. De una manera
simplista, el sistema SOS es en gran parte dependiente del represor transcripcional de unión a ADN
específico de la secuencia LexA expresado constitutivamente. Durante el crecimiento normal, LexA se une
y reprime la expresión de varios genes que contienen un motivo llamado SOS. Tras el daño del ADN, la
replicación se detiene en el área de daño y esto permite que la proteína RecA se una al ADN
monocatenario que queda expuesto en el sitio de las horquillas de replicación estancadas. Esto sirve para
activar la actividad proteasa de RecA y junto con otras proteínas, RecA activada ayuda a la degradación de
la proteína LexA. La disminución en los niveles de LexA conduce a la desrepresión transcripcional y la
activación de la transcripción de los genes LexA reprimidos. Por lo tanto, hay un aumento en los niveles de
la expresión de varios genes, los productos de los cuales sirven como la respuesta coordinada de
supervivencia al ADN dañado. De forma análoga a la respuesta al daño del ADN, las células desarrollan
una respuesta global al estrés del choque térmico, la Respuesta al Choque de Calor (HSR), un proceso que
está mediado en gran parte por un aumento en la activación y síntesis de un activador de transcripción
específico (σ32 en bacterias y Factor de choque térmico, HSF en eucariotas) que ocurre en respuesta a la
acumulación de proteínas desnaturalizadas y mal plegadas [60,177,222] . En el caso de HSR, los genes que
se inducen en gran medida consisten en Proteínas de Choque de Calor (HSP) y proteasas que actúan
respectivamente como chaperonas para ayudar en el replegamiento y en la degradación de proteínas mal
plegadas. Dependiendo de la proteína y el contexto celular, las proteínas mal plegadas pueden ser dirigidas
a la degradación por el bien conocido 20S proteosoma, el lisosoma o el autofagosoma [178,223].. En las
bacterias, la proteína DegP, que es un miembro de las altamente protegidas proteasas HtrA (proteína de
requerimiento de alta temperatura A), es un ejemplo interesante. Esta proteína es una proteína de respuesta
al estrés crucial que tiene tanto la función de la chaperona como la función de la proteasa y, por lo tanto,
está implicada en el reconocimiento y la degradación de proteínas mal plegadas [224] . La activación de
proteínas y vías existentes combinadas con cambios en la expresión génica es un tema común que sirve
para mediar estrategias de protección inmediatas ya largo plazo en respuesta a múltiples tensiones
diferentes.
Similares, aunque los procesos de respuesta al estrés más complejos están presentes en las células
eucariotas. Se han demostrado las vías globales sensibles al estrés para daños en el ADN, calor y frío,
estrés osmótico, estrés oxidativo, estrés mecánico, hipoxia, inanición (autofagia), estrés metabólico, el
estrés de las proteínas desplegadas en el ER (Respuesta de Proteína Desplegada, UPR) así como también el
estrés causado por patógenos como la invasión de virus [3,60,81,177] . Hay una serie de procesos únicos
que ocurren en respuesta a tensiones específicas. Por ejemplo, el estrés osmótico provoca cambios
fisiológicos en los niveles de osmolitos que sirven para rectificar las alteraciones mediadas por el
estrés. Este proceso ha sido bien caracterizado en levaduras y requiere la activación de una cascada MAP
quinasa específica (vía HOG) [225]. Estas tensiones globales conducirán a PCD, a través de la activación
de las vías típicas, si son de suficiente intensidad. Por lo tanto, la sobreexpresión de los genes
antiapoptóticos más comunes, como los captadores de ROS y las proteínas de choque térmico, típicamente
servirán para retrasar o prevenir la muerte celular en respuesta a las tensiones globales [4,177,226] .
3.6. Envejecimiento
El envejecimiento es un proceso progresivo multifacético que implica una disminución gradual de la
función de un organismo que sirve para disminuir la viabilidad y aumentar el riesgo de muerte [227] . Con
los años, se han ideado muchas hipótesis para ayudar a explicar los defectos que se acumulan durante el
proceso de envejecimiento [228-232] . Un papel central para las alteraciones en el metabolismo de la
energía, así como un aumento en la acumulación de ROS y los aumentos posteriores en la acumulación de
daño celular han servido como un foco para mucha investigación. Como en la apoptosis, estos defectos
apuntan a las mitocondrias como un regulador central del envejecimiento. Aunque ha sido difícil precisar
en eucariotas superiores, está claro que el envejecimiento es causado por PCD al menos en eucariotas
inferiores [57,233].. La identificación de la levadura sir2 (regulador de la información silenciosa 2) y sus
equivalentes funcionales en otras especies, incluyendo el ortólogo SIRT1 (Sirtuin 1) como proteínas que
prolongan la vida útil, han servido para confirmar la conservación evolutiva del proceso de
envejecimiento [230,234] . El hecho de que SIRT1 puede prevenir la apoptosis mientras que otros genes
antiapoptóticos de mamíferos pueden prolongar la vida también refuerza el concepto de que la muerte
celular mediada por el envejecimiento probablemente sea una muerte celular programada que involucre la
maquinaria apoptótica o necrótica [56,234,235] . Además de SIRT1, hay un total de siete genes SIRT que
codifican desacilasa de histonas de clase III [234].. Estos sirven en una variedad de diferentes procesos
celulares que incluyen la senescencia, el envejecimiento, la apoptosis, la proliferación y la regulación del
ciclo celular. La identificación de polifenoles de diferentes fuentes de alimentos como el resveratrol del
vino tinto y la disminución de la ingesta calórica (restricción calórica o CR) como procesos que pueden
activar sir2 / SIRT1 han servido como un tema central y también han generado un enorme interés en
envejecimiento / investigación farmacéutica [230,232] . A pesar de estos éxitos, la búsqueda de reguladores
del proceso de envejecimiento continúa [230] . Por ejemplo, un estudio reciente identificó el ácido
litocólico como un lípido intracelular como un modulador negativo del envejecimiento en la levadura que
podría, entre otras cosas, regular negativamente la muerte celular mediada por mitocondrias [236].. Otros
moduladores intracelulares del envejecimiento incluyen la espermidina [235] . La activación de los efectos
protectores de la autofagia parece ser el mecanismo por el cual algunos de estos compuestos, incluidos la
espermidina y las sirtulinas, retrasan el envejecimiento [237, 238] .
Un enfoque alternativo al envejecimiento de la investigación se centra en las diferencias que existen en la
vida de diferentes especies [228] . Muchos invertebrados, como los moluscos y los mamíferos, como
ciertas especies de ballenas, pueden vivir cientos de años [229,239] . La combinación de la genómica y los
enfoques fisiológicos con las especies de larga vida puede dar pistas sobre el proceso de
envejecimiento. La investigación con algunas especies de murciélagos y aves de larga vida ha identificado
ROS como de importancia central [231] . Por ejemplo, las mitocondrias de una especie de murciélagos
marrones de larga vida parecen producir menos ROS por unidad de oxígeno consumido que otras especies
similares pero de vida corta [240] . Por otro lado, la resistencia al daño mediado por ROS es mayor en
algunas especies de aves de larga vida[241] . En general, una comprensión de los mecanismos que una
célula ha desarrollado para prevenir el envejecimiento sin duda aumentará nuestra comprensión de los
mecanismos reguladores que sirven para retrasar la apoptosis.

4 . Identificación de secuencias anti-apoptóticas

El análisis de los perfiles de expresión génica global en células resistentes a la apoptosis ha identificado
con éxito una serie de genes que están regulados positivamente en diferentes tipos de células resistentes a
la apoptosis [53,197,242-245] . Muchos de los genes identificados en estos experimentos tienen
propiedades antiapoptóticas conocidas, como Bcl-2, Hsp72 o Hsp90, lo que indica que pueden estar
directamente implicados en la capacidad de evadir la apoptosis [196].. Aunque un posible papel anti-
apoptótico no puede deducirse a partir de las secuencias de muchos de los otros genes regulados
positivamente, se ha especulado que muchos de estos representan secuencias anti-apoptóticas
potencialmente novedosas. A pesar del hecho de que se han identificado muchos genes nuevos
antiapoptóticos al caracterizar algunos de estos genes regulados positivamente, no obstante, sigue habiendo
demasiados genes que se han regulado positivamente mediante el análisis de chips de genes para analizar
ciegamente cada secuencia en busca de un potencial características -apoptóticas [142-148,169]. Por
ejemplo, aunque MMP15 es un ejemplo de un nuevo gen antiapoptótico que originalmente se identificó
como regulado positivamente en una línea celular tumoral, el mismo estudio informó una cantidad de otros
genes regulados positivamente cuyo potencial como reguladores antiapoptóticos no ha sido
caracterizado [142] .
Los enfoques alternativos han tenido éxito en la identificación de genes antiapoptóticos. Por ejemplo, la
proteína bolsa anti-apoptótica se identificó como una proteína que interactúa con Bcl-2 usando una pantalla
de interacción de dos híbridos que posteriormente se descubrió que mejoraba los efectos pro-supervivencia
de Bcl-2 [246] . En sistemas genéticos como la levadura y C. elegans , la detección de mutantes que
muestran una mayor sensibilidad a diferentes tensiones ha llevado a la identificación de nuevos genes pro-
supervivencia [213, 247] . Aunque muchos de estos genes son específicos de los organismos modelo, un
gran número de estos tienen ortólogos conservados funcionalmente en células de mamíferos, y dada la
intercambiabilidad de muchos genes en estos sistemas, es probable que muchos tengan la misma función en
mamíferos.[16,105,176] . Aunque las pantallas genéticas idénticas no pueden llevarse a cabo en células de
mamíferos, una serie de enfoques, como el uso global de pantallas de ARNip, sin embargo, han sido
fructíferos en la identificación de reguladores apoptóticos [248-250] .
4.1 . Levadura como sistema modelo para identificar nuevas secuencias anti-apoptóticas de
mamíferos
La levadura es un sistema genético que ha servido para desentrañar e identificar genes implicados en varios
procesos básicos como el control del ciclo celular, el envejecimiento (el resveratrol compuesto
antienvejecimiento del vino tinto se identificó por primera vez en la levadura) y la autofagia [21,237,251]. -
254] . Los conocimientos proporcionados por la levadura al desarrollar el marco para nuestra comprensión
de estos y otros procesos celulares básicos se ejemplifican por el hecho de que 2 investigadores de levadura
(L. Hartwell por su trabajo con Saccharomyces cerevisiae y P. Nurse por su trabajo con S. pompei ) fueron
premiados el premio Nobel de medicina 2001 [254,255]. Más recientemente, se ha demostrado que la
levadura y la mayoría de los organismos unicelulares eucariotas experimentan muerte celular codificada
genéticamente que es mecánicamente similar al proceso de PCD mitocondrial visto en los
metazoos [57,105,263-265][16,256-261] . Una gran cantidad de diferentes estudios durante los últimos diez
años han servido para demostrar que la levadura S. cerevisiae es un modelo ampliamente utilizado y
efectivo para estudiar la apoptosis [57,233,261,262] . Aunque la apoptosis de la levadura fue inicialmente
controvertida, su aceptación ahora es generalizada . Dado que la levadura es un sistema genético tan
poderoso, disecar el proceso de PCD en la levadura es probable que aumente nuestro conocimiento sobre la
PCD de la misma manera que la levadura ha servido para aumentar nuestra comprensión de otros procesos
celulares básicos. En efecto, la similitud y la intercambiabilidad funcional entre muchos genes diferentes de
levadura y humanos es tan común [176,255], no es sorprendente que los genes de mamíferos identificados
como reguladores negativos de PCD en las pantallas de levadura, también son antiapoptóticos cuando se
expresan en células de mamíferos [266-269] . Aunque la levadura está emergiendo como un modelo
ampliamente utilizado en gran parte debido a su susceptibilidad a los enfoques genéticos, hay una serie de
otros sistemas que se han desarrollado que proporcionan nuevas ventajas para el estudio de la muerte
celular.[59] . Por ejemplo, los estudios de modelos de crustáceos de muerte celular han revelado similitudes
y diferencias en los procesos pro- y anti-apoptóticos [270] . Por ejemplo, algunos animales como el
camarón parecen tener una mayor capacidad para tolerar la infección viral mediante un proceso
denominado acomodación viral [271] . Por lo tanto, otros estudios en otros sistemas modelo probablemente
identificarán nuevos procesos anti-apoptóticos.
Por lo tanto, la levadura tratable genéticamente proporciona una estrategia alternativa para seleccionar e
identificar nuevas secuencias antiapoptóticas. Un sistema de selección utilizado comúnmente implica el
uso de cepas de levadura que expresan condicionalmente un ADNc para una forma activa del Bax
proapoptótico de mamífero [105,272-274] . Aunque la levadura no contiene proteínas tipo Bcl-2, la
expresión heteróloga de Bax o Bak proapoptótico en la levadura sirve para inducir la muerte en un proceso
que es mecánicamente similar a lo que ocurre en las células de mamíferos [75,274-277] . Numerosos
grupos han explotado el fenotipo dependiente de Bax condicionalmente letal como un sistema para detectar
genotecas de ADNc heterólogas e identificar nuevas secuencias
antiapoptóticas [101,109,110,266,268,272,278,279]. Muchos de los genes así identificados también han
servido para arrojar luz sobre el proceso de anti-apoptosis. Por ejemplo, la identificación de las proteínas
captadoras de ROS como supresores de los efectos letales de la expresión de Bax implica claramente el
papel de las ROS en la PCD en la levadura [108-110] . La naturaleza antiapoptótica de algunos genes,
como la esfingomielina sintetasa 1 (SMS1) [101] , identificada en dicha pantalla ha sido confirmada en
células de mamífero [100,138,280] .
4.2 . El repertorio de genes anti-apoptóticos de mamíferos
El Bcl-2 antiapoptótico es probablemente el gen antiapoptótico más potente y más estudiado, y muestra
muchas de las características del gen ideal antiapoptótico [44,195] . Bcl-2 se expresa de manera ubicua y
constitutiva de modo que su inactivación da como resultado una muerte celular mejorada en respuesta a
estímulos. Está regulado por incremento para prevenir la apoptosis en muchas condiciones que sirven para
mejorar la supervivencia celular, incluido el estrés que deben soportar las células tumorales de crecimiento
rápido. En muchos tumores se presenta una translocación cromosómica frecuente que da como resultado
una expresión aumentada de Bcl-2 [194] . Por lo tanto, Bcl-2 es responsable de una de las características o
formación de tumores en muchos cánceres, a saber, la capacidad de evadir la
apoptosis [11,158]. Funcionalmente, es bien conocido como un supresor del miembro pro-apoptótico Bcl-2
Bax. A pesar de esto, es probable que Bcl-2 tenga otras funciones antiapoptóticas que sean independientes
de Bax [281] . Además, Bcl-2 puede ser uno de los primeros genes antiapoptóticos descritos. En efecto, los
primeros informes identificaron claramente que los efectos oncogénicos de Bcl-2 se debían a la capacidad
para prevenir la muerte celular y no a ninguna de las propiedades de promoción del
crecimiento [194] . Aquí discutiremos el gran número de otros genes anti-apoptóticos que ahora se han
descrito.
Es difícil compilar una lista exhaustiva de genes de supervivencia celular y antiapoptóticos. Un análisis de
los resultados de las búsquedas de la literatura existente sobre Pubmed, utilizando palabras clave como
antiapoptosis y genes de supervivencia celular, reveló una multitud de artículos que describen más de 150
genes únicos diferentes. Además, hay 785 entradas de genes antiapoptóticos en la base de datos de Gene
Ontology ( http://www.geneontology.org/) La lista posterior es una sobreestimación, ya que contiene el
mismo gen de múltiples especies, así como cierta cantidad de otros tipos de redundancias, como la
inclusión de genes que codifican parejas de receptor-ligando coincidentes. Ambas listas son incompletas ya
que carecen de algunos genes de tipo antiapoptótico. Esta última parte refleja la falta de una ontología
genética comúnmente utilizada para los genes pro-supervivencia, así como algunos otros problemas, como
el hecho de que muchos genes anti-apoptóticos también son genes tanto antiapopóticos como pro-
apoptóticos. Este hecho posterior puede reflejar diferencias en la función de variantes empalmadas
alternativamente, en diferentes miembros de la misma familia de genes, así como diferencias específicas
del tipo de célula. Por ejemplo,[282] y se ha informado que es pro y anti-apoptótico [283-286] . Es
probable que la confusión se deba, al menos en parte, a que existen cuatro genes diferentes de TSC22
empalmados alternativamente en los genomas de ratón y humanos [285,286] . Otros ejemplos de genes con
funciones dobles incluyen ligandos para ciertos receptores acoplados a proteína G (GPCR) que se unen a
más de un subtipo de receptor. Por ejemplo, la estimulación mediada por adrenalina de los receptores β1 y
β2-adrenérgicos respectivamente conduce a respuestas pro y anti-apoptóticas [287].. Sin embargo, lo que es
digno de mención es la diversidad en la función de los diferentes genes antiapoptóticos y de supervivencia
celular. Dependiendo de la clasificación utilizada, hay al menos 11 categorías funcionales diferentes que
están representadas. Incluyen las secuencias antiapoptóticas clásicas como Bcl-2, IAP y
cFLIP [10 , 42 , 152 , 288] , chaperonas, incluidas las que participan en el plegamiento adecuado de las
proteínas después del estrés ER, así como una serie de proteínas de choque térmico [196, 289-291]. , los
genes que codifican proteínas antioxidantes o eliminadores de radicales libres como la superóxido
dismutasa (SOD) [292-294] , una serie de diferentes tipos de receptores, incluidos los GPCR, esteroides,
citoquinas y receptores tirosina quinasas [65,71,200,295-300], Enzimas incluyendo un número de quinasas
tales como ERK1 / 2, así como una variedades otros tales como esfingomielina sintasa y
dUTPase [100.101.113.156.280.301] , integrinas y uniones de hendidura como conexinas [302,303] ,
proteínas mitocondriales incluyendo proteínas implicadas en el transporte de electrones [268] , un gran
número de diferentes factores de transcripción incluyendo FOXO y NF? B, así como otro ADN y ARN
proteínas algunos de los cuales están implicados en la reparación de la unión al ADN [304-307] , proteínas
implicadas en la regulación de la traducción de proteínas, tales como el miembro de la familia eIF4G
DPA5 [308] y una variedad de proteínas bacterianas y virales, muchas de función desconocida que pueden
inhibir la muerte celular en su huésped [42,154,309] .
Finalmente, hay una gran cantidad de genes antiapoptóticos que se clasifican como funcionalmente
desconocidos. No solo se desconocen los mecanismos mediante los cuales previenen la apoptosis, a
menudo se desconoce su función básica en la célula. Este es el caso de la familia de las tres proteínas de la
familia Gadd45. GADD45 (detención del crecimiento y daño inducible por ADN) son genes conservados
que son inducibles en respuesta al estrés y que pueden servir tanto para funciones pro como anti-
apoptóticas [310] . Muchas otras proteínas son como la familia de proteínas llamada BAG. Estos
representan una familia compleja de proteínas que se conservan de la levadura a las plantas para el
hombre [183]. Como se describió anteriormente, se identificaron originalmente como proteínas que
interactúan con Bcl-2 que tenían efectos antiapoptóticos cuando se sobreexpresaban. Se clasifican como
chaperones, pero la forma en que funcionan como proteínas antiapoptóticas sigue siendo en gran parte
desconocida. Un estudio reciente sugiere que al menos un miembro de la familia puede estar involucrado
en las respuestas UPR que protege del estrés ER [311] . Otro ejemplo interesante de una secuencia
antiapoptótica huérfana funcionalmente es el gen TMEM85 humano. Originalmente se demostró que
funcionaba como un gen antiapoptótico al evitar la muerte celular mediada por Bax y ROS en la
levadura [312] . Aunque su función aún se desconoce, un estudio reciente del ortólogo de levadura
( YGL231c ahora ECM4) sugiere que es parte del complejo de retículo endoplásmico multiproteico que
parece estar involucrado en la regulación del estrés ER [313] . Estos resultados son consistentes con la
observación previa de que las células de levadura que carecen de YGL231c son más sensibles a los efectos
inductores apoptóticos de la a-sinucleína asociada con el Parkinson [314] . Además, es probable que la lista
de genes antiapoptóticos continúe creciendo. Algunos de estos nuevos genes provendrán de los genes, que
se ha demostrado y que probablemente se muestre en el futuro, se regulan positivamente en células
resistentes a la apoptosis [142-148] . Otras fuentes de nuevos genes antiapoptóticos vendrán de las
pantallas genéticas [248,249,315]. Por ejemplo, varios grupos han informado que aislaron múltiples
secuencias de cDNA de mamíferos que pueden prevenir la muerte celular mediada por Bax en levaduras,
pero aún no han caracterizado a la mayoría de ellas [101,266,268,272] . Por lo tanto, el examen de
secuencias antiapoptóticas conocidas sirve para resaltar la diversidad de los procesos antiapoptóticos y para
iluminar el hecho de que aún existen lagunas significativas en nuestro conocimiento.
4.3 . los siRNAs aumentan el repertorio de secuencias antiapoptóticas
Los mecanismos tradicionales bien conocidos que controlan los niveles de proteína producidos a partir de
un gen implican una serie de pasos reguladores diferentes. Estos incluyen procesos que regulan el nivel de
transcripción del gen, eventos postranscripcionales como la regulación del procesamiento y la vida media
del ARNm no procesado y maduro, mecanismos postraduccionales que regulan la tasa de traducción del
ARNm a proteína también como la vida media de la proteína en sí. Una de las adiciones más recientes a
estos procesos reguladores es la interferencia de ARN (ARNi) [316,317]. El ARNi es un mecanismo
postranscripcional que implica la producción de pequeñas moléculas de ARN que son capaces de unirse a
moléculas de ARNm e inhibir su traducción y posiblemente, al menos en algunas especies, mejorar la
degradación del ARNm. Aunque se ha descubierto una gran cantidad de información con respecto a la
producción y los procesos implicados en los siRNA, una discusión en profundidad está más allá de nuestro
alcance aquí, pero se puede obtener más información de las revisiones existentes sobre el tema [318-
320] . Parece haber más de 700 diferentes siRNA codificados por el genoma que participan en la
regulación de cientos de genes diferentes [318]. Nuestra comprensión de su importancia es probablemente
incompleta, pero sí sabemos que están involucrados en la regulación de una multitud de procesos celulares
y fisiológicos, incluida la apoptosis, y por lo tanto se comportan como reguladores globales. Un ejemplo
bien caracterizado es miR21 [320,321] . Los niveles de miR21 aumentan en el número de cánceres y sus
efectos antiapoptóticos parecen deberse a su capacidad para disminuir la expresión de oncogenes, incluidos
pTEN y TPM1 [318].. En un estudio más reciente, miR21 también se identificó como uno de los 40 miRs
regulados diferencialmente en los corazones de ratas preacondicionadas. La capacidad de regular
negativamente o sobreexpresar miR21 in vivo y en cardiomiocitos cultivados sugirió que los aumentos en
los niveles de miR21 están directamente implicados en la mediación del fenotipo anti-apoptótico asociado
con preacondicionamiento [322] . Otros estudios sugirieron que el gen que codifica la muerte celular
programada 4 (PDCD4) puede ser el objetivo miR21 en las células cardíacas. Aunque no se conoce la
función exacta de PDCD4, sin embargo induce apoptosis cuando se sobreexpresa en cardiomiocitos
cultivados [322].. Por lo tanto, una disminución mediada por miT | R21 en la expresión de un gen pro-
apoptótico como PDCD4 puede conducir al aumento observado en la supervivencia celular. Estos y otros
tipos de pantallas para miRs tendrán diversos impactos en nuestra comprensión de los procesos de anti-
apoptosis. Por ejemplo, Sheng et al. [315] llevó a cabo una compleja pero elegante pantalla de suicidio
inverso utilizando una línea celular de glioma maligno de ratón diseñada para sobrevivir si la expresión del
factor de transcripción 5 activador anti-apoptótico (ATF5) está regulada negativamente. De este modo,
pudieron determinar que dos rutas de quinasas, RAS-MAP y PI3 quinasas conducen a un aumento de la
expresión de ATF5 y a un fenotipo citoprotector mediando un aumento en la transcripción del gen anti-
apoptótico MCL-1.
4.4 . Empalme alternativo de genes antiapoptóticos
El corte y empalme alternativo es un fenómeno común de los genes de mamíferos que a menudo conduce a
la producción de más de una proteína de un solo gen [323] . Una investigación reciente ha sugerido que el
92-94% de los genes humanos se empalman alternativamente y que el 86% de estos genes producen
variantes de empalme de baja abundancia [324] . Nuestros propios estudios reflejan esto, ya que hemos
demostrado que los cuatro supresores Bax humanos que hemos caracterizado de nuestra selección de
bibliotecas de ADNc de mamíferos en levaduras están codificados por genes complejos empalmados
alternativamente [101,286,312,325]. Uno de los miembros prominentes de estos genes codifica la
esfingomielina sintetasa 1 (SMS1). Es probable que SMS1 sea antiapoptótico en virtud de su capacidad de
usar la ceramida esfingolípida proapoptótica como sustrato, así como del hecho de que produce el promotor
del crecimiento, el diacilglicerol (DAG) [326] . El gen SMS1 del ratón está compuesto por 12 exones que
se empalman alternativamente para producir tres proteínas diferentes [327]. Se cree que la forma de residuo
363 de SMS1 es la proteína enzimáticamente activa, mientras que las formas truncadas C-terminal de la
proteína carecen de más de la mitad de la proteína y parece poco probable que sean activas. Esto tiene
varias implicaciones funcionales, incluida la observación de que muchas de las proteínas producidas por
corte y empalme alternativo carecen de un dominio funcional, pero retienen su capacidad para interactuar y
a menudo sirven para inactivar la proteína funcional de longitud completa. Este tipo de empalme
alternativo o regulado parece ser un fenómeno comúnmente observado para genes que codifican proteínas
que están implicadas en la regulación del estrés y la apoptosis en células de mamíferos y levaduras [328-
330].. Por ejemplo, la forma truncada del miembro Bcl3 Bcl-2 Nix, sNix, es anti-apoptótica en virtud de su
capacidad para unirse e inhibir la proteína Nix pro-apoptótica [331] . Esto sirve para indicar que el
repertorio de proteínas pro y anti-apoptóticas también requerirá una comprensión compleja de todo el
transcriptoma y el proteoma [332,333] .
4.5 . Implicaciones clínicas de la apoptosis
La apoptosis desregulada está implicada en la fisiopatología de numerosas enfermedades y procesos
patológicos [1,17,191] . El cáncer y las enfermedades autoinmunes son los ejemplos clásicos, pero no las
únicas enfermedades en las que aumenta la antiapoptosis. Por el contrario, un aumento de la apoptosis o
una disminución de la capacidad para llevar a cabo la antiapoptosis es una parte prominente de muchas
enfermedades, como el Alzheimer y el Parkinson, así como una serie de procesos fisiopatológicos, como
ataques isquémicos y cardíacos. [8]. 41,55,334]. Aunque la apoptosis desregulada no es necesariamente el
desencadenante que inicia muchas de estas enfermedades, la capacidad para controlar la apoptosis
probablemente recorrería un largo camino como terapias funcionales. En consecuencia, hay una gran
cantidad de estudios que intentan descifrar los procesos apoptóticos desregulados en enfermedades
específicas, así como desarrollar fármacos que pueden bloquear proteínas y procesos pro y antiapoptóticos
específicos o generales [34,41,50,55,198,335,336]. . Por ejemplo, la disminución de los niveles del ARNm
para el gen antiapoptótico galectin-3 usando ARNip aumentó la sensibilidad de las células tumorales a los
efectos inductores de la muerte de dos fármacos quimioterapéuticos de uso rutinario diferentes cisplatino y
5-fluorouracilo [122] .
Dado que las caspasas son mediadores clave del daño celular que ocurre durante la apoptosis, no es
sorprendente que hayan atraído una gran atención como potenciales dianas farmacológicas [337] . A pesar
del hecho de que existen inhibidores de caspasa, se ha informado que tienen una capacidad limitada para
prevenir la muerte celular en diferentes fisiopatologías [40,41,337,338] . Esta observación es consistente
con la idea de que además de la apoptosis dependiente de caspasa, las células tienen una multitud de
diferentes formas genéticamente programadas de suicidarse (es decir, muerte celular programada
autofágica y necrótica (PCD)) especialmente cuando se bloquea la apoptosis [25,338-342].. Por lo tanto,
una célula que enfrenta condiciones que requieren suicidio puede hacerlo de manera independiente o
dependiente de caspasa [262,338] . Los procesos independientes de caspasa que conducen a la apoptosis
pueden ser mediados, al menos en algunas circunstancias, por la liberación de las mitocondrias de proteínas
pro-apoptóticas tales como Endonucleasa G (Endo G) y Factor de Inducción de Apoptosis
(AIF) [15]. Cuando la endonucleasa G se libera de las mitocondrias, migra al núcleo y cataliza la escisión
del ADN nuclear en las células estresadas. AIF es una NADH oxidasa mitocondrialmente localizada que
también se libera debido a la permeabilización de la membrana mitocondrial en células estresadas. El daño
celular está mediado por AIF localizado citosólico y nuclear. De manera similar a lo que se observa con los
inhibidores de caspasa, los agentes antioxidantes, que se sabe que previenen la muerte celular mediada por
ROS en sistemas cultivados, no son tan efectivos para prevenir la muerte celular en todo el animal [40]. Por
el contrario, la sobreexpresión de varios genes antiapoptóticos, incluidos genes que codifican para
inhibidores de caspasa, como IAP y proteínas antioxidantes, conduce a la muerte celular disminuida
después de una lesión isquémica / reperfusión u otras situaciones proapoptóticas en el corazón y el
cerebro [41,97,98,135-137,163,343-345] . Esto está en línea con la observación de que los genes
antiapoptóticos son genes más anti-muerte que son capaces de bloquear las vías dependientes de caspasa e
independientes [40] . Se cree que las estrategias que sirven para imitar los estados "antiapoptóticos" de
origen natural probablemente tengan una mayor eficacia clínica que las drogas que inhiben las proteínas
proapoptóticas. [4,40,41,48,346,347].. Por lo tanto, actualmente se están desarrollando estrategias y
metodologías que promoverían mayores niveles de estas secuencias antiapoptóticas ya sea mediante la
inyección de proteínas recombinantes que pueden cruzar la bicapa lipídica de una célula y permanecer
funcional [40,50,348-351] o mediante inyección de ADNc (desnudo o viral) que puede tomarse y
expresarse en la célula para producir la proteína antiapoptótica [40,352,353] . La expresión de tales
proteínas en tejidos tales como el corazón es probable que sea transitoria, pero esto sería suficiente ya que
la protección anti-apoptótica solo se requeriría durante tiempos limitados después de un evento de isquemia
/ reperfusión.
Una prueba más de la utilidad de los genes antiapoptóticos para prevenir la apoptosis es proporcionada por
la biotecnología y las industrias farmacéuticas. Las líneas celulares de mamíferos se usan de forma
rutinaria para producir una variedad de productos biofarmacéuticos tales como proteínas recombinantes y
anticuerpos monoclonales. La producción de estos productos genera una multitud de tensiones ambientales
e intracelulares que sirven para inducir la apoptosis. Durante muchos años, se han generado líneas celulares
que sobreexpresan una variedad de diferentes genes antiapoptóticos, tales como Bcl-2, XIAP y Hsp72, para
limitar la muerte celular apoptótica y aumentar el rendimiento de los productos producidos [47] . La
capacidad de limitar la apoptosis también es de interés en otras células biotecnológicamente importantes,
como la levadura [354] .

5 .Autofagia y muerte autofágica

Los procesos y mecanismos reguladores por los cuales las células se comprometen realmente con el
suicidio celular no son tan simples como se describió anteriormente. La célula también ha desarrollado una
multitud de otras vías que pueden usarse para promover la muerte celular en condiciones apropiadas. La
complejidad y la naturaleza cooperativa de los procesos de muerte celular son evidentes en Bax / Bak doble
knockear células MEF [340-342]. Aunque estas células son incapaces de activar la vía de muerte celular
proapoptótica normal, sin embargo sufrirán muerte celular utilizando vías alternativas en respuesta a
estímulos apropiados. Los primeros estudios indicaron que la muerte de Bax / Bak doble knock out células
después de estímulos inductores de apoptosis fue probablemente debido a la activación de un proceso
autofágico. Por lo tanto, la muerte se asoció con los autofagosomas y podría ser inhibida por inhibidores
químicos de la autofagia y se demostró que era dependiente de los genes autofágicos APG5 y
Beclin [342] . Más recientemente, se demostró que la muerte celular mediada por ER en Bax / Bak con
doble inactivación se retrasó, pero pareció ocurrir a través de un proceso que tenía similitudes con la
necrosis. [341].. Se demostró que la autofagia se activaba en respuesta al estrés ER tanto en células de tipo
salvaje como en células de doble inactivación Bax / Bak. En las células de tipo salvaje, la autofagia fue
protectora ya que su inhibición sirvió para mejorar la muerte celular mediada por estrés ER. Por el
contrario, la inhibición de la autofagia sirvió para proteger las células de doble inactivación de Bax / Bak,
lo que indica que la autofagia interviene en la muerte celular.
Los estudios de muerte celular regulada han llevado a la identificación de tres tipos principales de muerte
celular programada genéticamente (PCD) [1,8,355] . La PCD de tipo I o la apoptosis es la forma mejor
caracterizada, mientras que las muertes de células autofágicas y necróticas se clasifican respectivamente
como tipo II y III [1,18,356] . Aunque se ha descubierto una gran cantidad de información con respecto a
los diferentes tipos de PCD, quedan muchas preguntas por responder. Uno de los aspectos que permanece
mayormente inexplorado de manera sistemática es el hecho de que la diversidad en los procesos implicados
en la promoción de la PCD sugiere que también existe un gran número de proteínas diferentes que pueden
prevenir las diferentes formas "especializadas" de apoptosis [38- 41,346] .
5.1 .La autofagia protege de la apoptosis
La autofagia, el proceso por el cual las células reciclan los constituyentes celulares, es una adaptación
crítica a la inanición y desempeña un papel importante en la función celular normal y en la
PCD [21,23,24] . Nuestra comprensión de la autofagia se aceleró en gran medida por la identificación,
mediante el cribado genético en la levadura, de unos 30 genes autofágicos conservados (ATG) necesarios
para el proceso de autofagia [357] . Numerosos estudios han demostrado que estos genes ATG funcionan
en una serie de cascadas de señalización interrelacionadas complejas que participan en la realización y
regulación de la autofagia [21].. A nivel macromolecular, la autofagia implica la formación y posterior
absorción de constituyentes celulares destinados a ser reciclados en estructuras llamadas
autofagosomas. Los autofagosomas maduros se fusionan con los lisosomas (vacuolas en la levadura) para
producir autofagolisosomas y la carga celular se degrada en bloques de construcción para la síntesis de
nuevos contenidos celulares o para ser utilizados para las necesidades energéticas de la
célula [20,25] . Existen diferentes formas de autofagia que incluyen muchas formas especializadas como la
autofagia mediada por microautophagy, mitophagy y chaperone[20,21,25]. Estos son mecanismos por los
cuales las células pueden deshacerse de proteínas específicas o porciones subcelulares específicas. Se cree
que el nivel constitutivamente bajo de autofagia sirve para una función de limpieza general para liberar a la
célula de material no deseado o dañado. Aquí estamos más interesados en la macroautopagia que se activa
en tiempos de inanición para reciclar grandes cantidades de material celular. Este proceso es claramente
importante ya que el bloqueo de la autofagia, ya sea genéticamente o farmacológicamente, conduce a una
muerte celular rápida en respuesta a la inanición [21,358-360] . Ahora se ha demostrado que la autofagia
está regulada positivamente y sirve para proteger a las células de una amplia variedad de otras tensiones,
incluido el estrés que se presenta en muchas enfermedades, como la isquemia / reperfusión cardíaca y el
cáncer. [20,21,223,361-364].. Una manera en que la autofagia puede servir como un proceso antiapoptótico
es eliminar las mitocondrias dañadas por aumentos de ROS (Reactive Oxygen Species) o Bax activado
antes de que tengan la oportunidad de liberar sus factores pro-apoptogénicos, como el citocromo c. La
eliminación de otros componentes celulares dañados como ER que contienen un exceso de proteínas no
procesadas (estrés ER) así como otros componentes dañados también pueden servir para disminuir el estrés
general y prevenir la apoptosis [360] . La capacidad de prevenir la necrosis mediada por el envejecimiento
sugiere que la autofagia puede ser capaz de proteger del estrés extremo [235,365,366] .
En algunos estudios recientes [186, 367-369] se han sugerido roles antiapoptóticos más extendidos para la
autofagia . Una de estas observaciones importantes implica un posible vínculo entre la autofagia y el
precondicionamiento [22,369,370] . El preacondicionamiento se refiere a los efectos citoprotectores que se
producen cuando las células se tratan con niveles sub-umbral y subletales de un estímulo
apoptótico [52,162] (ver sección 3.1 ). La regulación positiva de diferentes genes antiapoptóticos, de una
manera específica de tejido, se ha considerado durante bastante tiempo como una explicación satisfactoria
de los efectos del preacondicionamiento. Estudios más recientes sugieren que el acondicionamiento previo
protege las células mediante una regulación positiva de la autofagia positiva [22,369,370]. De similar
potencial de gran importancia para nuestra comprensión del proceso de la antiapoptosis es la observación
de que los efectos citoprotectores de la sobreexpresión de genes antiapoptóticos pueden deberse a su
capacidad de regular positivamente la autofagia.[186,367,368]. Un par de estudios recientes han sugerido
que algunas secuencias anti-apoptóticas como BAG1 y Hsp20 pueden funcionar para prevenir la muerte
celular activando la autofagia. Esto produce una cierta cantidad de lógica inherente dado que el fenotipo
anti-apoptótico asociado con preacondicionamiento se debe, al menos en parte, a la regulación positiva de
los genes antiapoptóticos. Se deduce que muchos de los genes antiapoptóticos regulados por incremento
pueden evitar la apoptosis cuando se sobreexpresan. Dado que la evidencia de que el fenotipo
antiapoptótico del preacondicionamiento también puede deberse al aumento de la autofagia, parece que la
sobreexpresión de genes antiapoptóticos puede ser un fenómeno común responsable de este fenotipo. La
definición clásica de una secuencia anti-apoptótica, que además de suprimir la muerte celular cuando se
sobreexpresa, las células deben mostrar una mayor sensibilidad a los estímulos apoptóticos en las células
que carecen del gen. Este es sin duda el caso de muchos genes como los captadores de ROS y diferentes
proteínas de choque térmico[99,122-128] . Es probable que estos tipos de proteínas antiapoptóticas jueguen
un papel directo en el repertorio antiapoptótico de las células. Tampoco es probable que una regulación
positiva de la autofagia sea responsable de los efectos antagonistas de otros procesos antiapoptóticos, como
la capacidad de Bcl2 para interferir directamente con la función proapoptótica de Bax activado [10] . Por
otro lado, la regulación positiva de la autofagia puede explicar otros escenarios antiapoptóticos que no se
pueden explicar fácilmente, como la capacidad de Bcl-2 para proteger las células de una manera
independiente de Bax. [149,150].. Estos representan desarrollos emocionantes porque una regulación
positiva de la autofagia puede ser un mecanismo general por el cual la miríada de genes antiapoptóticos,
muchos de los cuales con función desconocida, sirven para prevenir la muerte celular. Tal escenario
explicaría cómo la eliminación de algunos genes antiapoptóticos no conduce a una mayor sensibilidad a los
estímulos inductores de la apoptosis, aunque debe tenerse en cuenta que otros escenarios como la
redundancia en diferentes vías anti-apoptóticas pueden ser una explicación más simple. Sin embargo, el
concepto de que la autofagia es fundamental para el proceso de la antiapoptosis está en línea con la
compleja diafonía que ya se sabe que ocurre entre las diferentes PCD [281, 339, 355, 567, 37] .
5.2 .Muerte celular mediada por autofagia
El PCD de tipo II se acuñó como muerte celular autofágica ya que los marcadores típicos de apoptosis
estaban ausentes y se observaron numerosos autofagosomas en las células moribundas. Aunque existe una
gran cantidad de evidencia de que la autofagia puede conducir a la muerte celular, ahora hay un
movimiento creciente que está reevaluando qué tan fuerte es la evidencia para la ocurrencia generalizada de
muerte celular autofágica [25] . Uno de los ejemplos más sólidos en apoyo de este desafío proviene de
estudios inhibitorios. El papel citoprotector de la autofagia se demuestra fácilmente en respuesta a muchas
tensiones ya que la inhibición de la autofagia conduce a una mayor muerte celular [21] . Por lo tanto, se
argumenta que el bloqueo de la autofagia debería mejorar la supervivencia celular en células que sufren
muerte de células autofágicas de tipo II [25,365].. La incapacidad de prevenir la muerte celular mediante el
bloqueo de la autofagia puede deberse a varios factores, incluidos el número de estudios limitados que han
abordado el problema, así como el hecho de que los inhibidores farmacológicos utilizados para bloquear la
autofagia son bastante inespecíficos. Además, la mayoría de los enfoques genéticos utilizados en las células
de mamíferos involucran siRNAs y que tales caídas de los genes anti-autofágicos pueden no ser suficientes
para prevenir la autofagia [25,372-374] . La facilidad con la que se pueden utilizar las cepas que tienen
genes knockouts de genes autofágicos facilita nuestra capacidad para abordar estas y otras preguntas en la
levadura [57,235,375] .
Las opiniones divergentes con respecto a un papel potencial para la autofagia en la CPD de tipo autofágico
se mantienen, dado que hay varios otros ejemplos que defienden la importancia de la muerte celular
autofágica [223,363,373,376] . Por ejemplo, la PCD autofágica se produce en respuesta a estímulos
apoptóticos en células que no pueden llevar a cabo apoptosis debido a la inhibición farmacológica o debido
a la eliminación de genes específicos (doble KO Bak y Bax) [25,342,377] . Por lo tanto, se argumenta que
la muerte celular autofágica es un mecanismo de respaldo importante para garantizar la muerte celular. El
consenso parece sugerir que la autofagia es protectora al principio, pero la muerte se observa en células
sometidas a estrés prolongado que resulta en una activación prolongada de la autofagia [378-380] ( Fig.
3).) Queda por determinar si la muerte autofágica después de un estrés prolongado se debe al agotamiento
celular y / o al agotamiento de los componentes celulares o si se debe a la activación de un mecanismo
específico de PCD que sirve para matar activamente a las células. Nuestros resultados preliminares,
favorecen a los más recientes ya que hemos identificado una secuencia humana que se encontró como un
supresor Bax en levadura que puede prevenir la muerte celular en respuesta a periodos prolongados de
inanición en levadura o cuando la autofagia se activa con el inhibidor TOR rapamicina [381]. La
observación de que la muerte celular podría retrasarse con un gen específico sugiere que la muerte celular
autofágica es un proceso genético que está regulado y no simplemente una muerte provocada por el
agotamiento. El hecho de que no pudiéramos evitar la muerte de células autofágicas con todos nuestros
supresores Bax sugiere que la muerte de las células autofágicas no funciona al activar las vías apoptóticas
comunes. Las similitudes, diferencias y dialectos entre la muerte celular autofagia y apoptótica es un tema
actual de gran interés [17,191,339,355,356,382].
Fig. 3 .Autofagia o PCD de tipo II. La activación mediada por el agotamiento de nutrientes de TOR (objetivo de la
rapamicina) es el mecanismo mejor caracterizado que sirve para activar la autofagia. En su forma más simple, la
autofagia es mejor conocida como un proceso celular complejo que se activa en respuesta al estrés de la privación
de nutrientes que sirve para reciclar los componentes celulares con el fin de promover la supervivencia. Se está
acumulando una gran cantidad de evidencia de que esta forma de autofagia se activa por muchas formas leves de
estrés, incluido preacondicionamiento, para servir como el sitio de control celular central para prevenir la muerte
celular prematura o inadvertida de los tres procesos de PCD. La PCD tipo II o la muerte celular autofágica pueden
ocurrir en respuesta a la autofagia prolongada, así como en otras circunstancias, como cuando la PCD tipo I está
bloqueada (no se muestra, consulte el texto para obtener más detalles).

5.3 . Implicaciones clínicas

La creciente comprensión de la importancia de la autofagia en las respuestas fisiológicas al estrés, así como
su importancia en los procesos fisiopatológicos, como el cáncer, las enfermedades neurológicas y
cardiovasculares, es bastante evidente a partir del número de revisiones publicadas en el primer semestre de
2010 [20,26,237,238,355,383 -405] . En el cáncer es notable que muchos genes autofágicos son supresores
de tumores, mientras que un gran número de otros funcionan como oncogenes. Se cree que la autofagia
basal funciona para inhibir el desarrollo de tumores, mientras que se observa un aumento de la autofagia en
las células tumorales que están estresadas debido a los tratamientos
con agentes quimioterapéuticos [362,380,406] . Por lo tanto, actualmente se utilizan inhibidores
autofágicos y se están desarrollando muchos más para que sirvan como adyuvantes de los agentes
quimioterapéuticos.[362,380,406] . Por el contrario, la activación de la autofagia en respuesta a tensiones
tales como la isquemia puede promover la supervivencia de las células cardiacas y, por lo tanto, es
interesante el desarrollo de compuestos capaces de potenciar la autofagia. La ilustración más llamativa de
la importancia potencial y de largo alcance de la autofagia es el hecho de que se observa una disminución
en la muerte celular mediada por el envejecimiento tras la inducción de la autofagia en todas las especies
examinadas hasta ahora, incluyendo levadura, lombrices, moscas, ratones y primates [227,235,366] . Por lo
tanto, la identificación de nuevos objetivos implicados en la regulación de la autofagia y la muerte de
células autofágicas aumentará nuestro conocimiento de las PCD y puede conducir a aumentar los objetivos
terapéuticos [223,336].
6 . Muerte necrótica
La necrosis o PCD tipo III es la muerte celular que se observa en respuesta a tensiones graves tales como la
que se produce después de una lesión física o una isquemia prolongada [1,2,18] . De hecho, una cantidad
excesiva de la mayoría de los estímulos inductores apoptóticos dará lugar a necrosis. Por lo tanto, es común
que la respuesta dependiente de la dosis a estímulos apoptóticos sirva para identificar niveles subletales,
inductores de apoptosis y supraletales o inductores de necrosis. Los mecanismos responsables de
desencadenar la necrosis tradicionalmente han recibido poca atención porque se pensaba que era solo un
proceso físico que no estaba regulado. Se acumulan pruebas que sugieren fuertemente que la necrosis
puede regularse y puede ocurrir como una vía de muerte celular codificada genéticamente codificada por
apoptosis independiente [18,30,249].. El término necroptosis se ha acuñado para diferenciar la forma
regulada de necrosis del tipo accidental de muerte necrótica celular [338,407] . La identificación de
sustancias químicas capaces de inhibir la necroptosis, así como los ARNip implicados en la regulación del
proceso, sugiere que en muchos casos el proceso de muerte celular está regulado [18,249,408] . Aunque la
necroptosis puede ocurrir como parte de procesos fisiológicos normales, como ciertos aspectos del
desarrollo, es común solo en células en las que la ruta apoptótica normal está bloqueada. Por lo tanto, la
necroptosis, como la muerte celular autofágica, puede cumplir la función de ser un sistema de respaldo para
el suicidio celular si la vía apoptótica principal es defectuosa [18,56].. La activación cruzada de las vías de
muerte autofágicas (mediante calpaína activada) y mitocondrial (a través del aumento de Ca ++ ) también
puede contribuir a la muerte celular necrótica [33] ( Figura 4 ). Mecánicamente, la necroptosis se asocia
con un agotamiento en los niveles de ATP y un aumento en los niveles de Ca ++ tanto de fuentes externas
como de ER. Los aumentos en Ca ++ pueden activar calpaínas que pueden conducir a la rotura lisosomal y a
la liberación y activación de proteasas como catepsinas y destrucción celular. Recientemente se ha
demostrado que la muerte celular necrótica desempeña un papel importante en la muerte celular asociada
con el envejecimiento en levaduras y células de mamíferos [235,409].. Además, se encontró que la adición
de espermidina puede proteger a las células ancianas de la muerte necrótica a través de un proceso que
implica la inducción de la autofagia [235] .

Fig. 4 . Necrosis o PCD tipo III. Una forma de necrosis genéticamente codificada se reconoce como una forma de
PCD tipo III y a menudo se denomina necroptosis. Este proceso se observa con mayor frecuencia en condiciones
de estrés agudo, como la isquemia grave que ocurre después de un accidente cerebrovascular. Esto conduce a un
agotamiento en los niveles de ATP, que es uno de los rasgos distintivos mejor caracterizados de la PCD tipo
III. Algunos procesos intracelulares, como la acumulación de proteínas desplegadas que provocan estrés en el
retículo endoplasmático (ER, que se muestra como pliegues rojos) también sirven para activar la PCD tipo I
mediante la mediación de un aumento en la liberación de calcio (Ca + 2).) que puede causar daño mitocondrial y la
liberación de factores pro-apoptogénicos (no se muestra). El aumento de calcio también puede servir como el
mediador de la diafonía, ya que también puede activar la PCD tipo III o necrótica. La estimulación de los receptores
de TNF, bien conocidos por inducir apoptosis extrínseca, también puede conducir a la muerte celular por
necroptosis a través del complejo RIP3 / complejo RIP3.
Clínicamente, la necroptosis ocurre en todos los tejidos sometidos a isquemia, pero el proceso ha recibido
más atención con respecto a la lesión cerebral isquémica [33]. Las áreas de isquemia severa mueren por
necrosis mientras que las células menos afectadas se someten a muerte celular apoptótica. Se cree que el
desarrollo de inhibidores de la necrosis tendría efectos beneficiosos sobre los pacientes con accidente
cerebrovascular. A pesar del reciente conocimiento de la necroptosis, quedan muchas preguntas,
incluyendo cuáles son los mecanismos responsables de la ruptura del lisosoma. Aunque la activación de la
calpaína está asociada con este evento, no hay evidencia de que el bloqueo de la calpaína evite la ruptura o
la necrosis. La identificación de los objetivos de la calpaína sería útil para delinear aún más los procesos
implicados en el desencadenamiento de la necrosis. Algunas pistas sobre el (los) mecanismo (s) que
median los aumentos en la labilidad de las membranas lisosomales provienen de la observación de que es
más prevalente después de la degradación de materiales ricos en hierro debido al aumento en hierro redox
activo dentro de los lisosomas. El hecho de que el agente quelante intralysosomal desferrioxamina protege
contra la muerte celular es consistente con este concepto[410] . Por lo tanto, las condiciones específicas
pueden servir para preparar a la célula para la necrosis.

7 . Formas alternativas de muerte celular programada

Hay una serie de otras formas de PCD que se han documentado [36,191] . Muchos de estos procesos como
anoikis (griego, sin techo), catástrofe mitótica y piroptosis (griego, fuego o fiebre) se identificaron por
primera vez como desencadenados por estímulos únicos, respectivamente como desprendimiento de células
de su substrato (o de las células vecinas), prematuros entrada en mitosis e infección por una variedad de
organismos como Salmonella [37,45,411] . Aunque hay una serie de características únicas asociadas con
estos procesos, como la activación de la caspasa 1 para la piroptosis, queda por determinar si alguno de
estos procesos alternativos son formas únicas de PCD o si, como la necroptosis (ver arriba) representan
subformularios de los tipos existentes de PCD [36,191]. Sin embargo, los estudios de los mecanismos
utilizados para escapar de la muerte celular de estas otras formas de PCD han identificado algunos
mecanismos novedosos utilizados para prevenir la muerte celular, además de servir para desarrollar
estrategias terapéuticas para una serie de patologías. Por ejemplo, evitar la muerte celular mediada por
anoikis es una característica común y probablemente necesaria de las células tumorales que se están
sometiendo a metástasis [34,45] . Los estudios de metástasis de células han llevado a la identificación de
genes tales como la proteína de adhesión focal Talin1 y el receptor neurotrófico TrkB como genes anti-
anoikis [412,413].. Por otro lado, las bacterias y los virus han desarrollado una variedad de estrategias para
prevenir la autodestrucción mediada por el huésped, incluyendo la activación de los procesos y genes
antiapoptóticos endógenos o la expresión de sus propios genes antiapoptóticos [42,51] . Los estudios con
este tipo de inhibidores serán útiles para delinear las características únicas y comunes de estos tipos de
PCD.

8 . Perspectivas
Los mecanismos celulares responsables de prevenir la muerte celular en respuesta al aumento de las
tensiones y a la activación de las vías apoptóticas representan mecanismos complejos y diversos. Aunque
nuestra comprensión de la antiapoptosis ha aumentado dramáticamente en los últimos años, queda mucho
por dilucidar. Sin embargo, una serie de desarrollos recientes indican claramente que nuestra capacidad
para manipular los procesos antiapoptóticos endógenos, en oposición a la inhibición de la apoptosis per se,
conducirá a terapias funcionales para una serie de enfermedades y fisiopatologías. Finalmente, un área de
investigación prometedora que no se ha cubierto en esta revisión es la importancia emergente de las células
madre embrionarias humanas.[414] .