UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

NUMERACION DE COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES FECALES POR EL

METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE EN MUESTRAS AMBIENTALES
SOLIDAS O ALIMENTOS Y NUMERACION DE ENTEROBACTERIAS POR E
METODO DE RECUENTO EN PLACA

SEPTIMO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL- BO-112

SANCHEZ CHAVEZ MIGUEL- 20174535A

TAIPE ROMERO BRYAN ELVIS - 20171273F
JESUS DE LA CRUZ JEREMIAS - 20171087H

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
15 de junio de 2018
1. RESUMEN
En este laboratorio hemos realizados una serie de de procesos que tienen una
continuidad comenzando las diluciones para la posterior inoculación en caldo
lauril sulfato de sodio y así hacer la prueba presuntiva, para luego proceder a
analizar la presencia de coliformes totales y coliformes fecales en caldo brila
y EC respectivamente.
Para el conteo se utilizo el método del numero mas probable, que tiene una
tabla para determinar cuanto es la cantidad de microorganismos en la muestra
analizado. Por otro lado para la siembra de las colonias en el caldo se procedió
a realizar el método de la inoculación.
Como no siempre se puede llegar a un resultado exacto, la serio de los tubos
en todos los casos no coincidió con ninguno de la tabla pero que se
asemejaban a muchas por lo cual no fue de mucha preocupación.
En cuanto al conteo de enterobacterias también hubo complicaciones pero
menores ya que este era un simple recuento en placa así que la determinación
del numero de enterobacterias son muy cercanas alas reales.

2. INTRODUCCION
La denominación de Coliformes se le otorga a todo aquel grupo de bacterias
que tienen ciertas características bioquímicas en común y son de mucha
importancia como indicadores de contaminación del agua y de los alimentos.
El termino Coliformes proviene de Coli de la bacteria principal de este grupo,
el cual es la Escherichia Coli. Como ya se sabe la bacteria E. Coli es de origen
fecal; para distinguir a las demás que no son de origen fecal se utiliza el
termino de Coliformes Totales y a los de origen intestinal o fecal Coliformes
Fecales. Estos términos ayudan mucho para la diferenciación, ya que otorga
más veracidad y un alto grado de certeza si la contaminación que presenta el
agua es de origen fecal. Las investigaciones ecológicas han demostrado que
E. Coli proviene del tracto intestinal del hombre y de los animales de sangre
caliente, si puede sobre vivir e incluso multiplicarse en otros nichos
apropiados. Por lo tanto, la presencia de esta bacteria indica que puede haber
existido contaminación fecal y que el consumidor podría expuesto a patógenos
 entéricos cuando ingiere el alimento. Para la evaluación higiénica de alimentos
crudos o de productos que no habían sido sometidos al tratamiento de
inocuidad completo mediante calor, E. Coli es el microorganismo índice mas
valido. Todo esto muestra que la determinacion de coliformes totales y
principalmente fecales en los aimentos es importante para saber lo que en
verdad estamos consumiendo y que daños nos pueden causar.

3. OBJETIVOS
 Evidenciar la presencia y realizar el recuento de coliformes totales y
fecales por el metodo del numero mas probable.
 Manejar el metodo del NMP y su correcta interpretacion en el analisis
microbiologico.
 Analizar el recuento directo de enterobacterias y coliformes por medio de
placas de Agar cristal violeta bilis lactosa (VRBA).

4. MARCO TEORICO
METODO DEL NUMERO MAS PROBABLE
La técnica del NMP comprende siempre una prueba presuntiva y otra
confirmativa.
Esto es así porque una positividad en un tubo de la prueba presuntiva no
indica necesariamente la presencia del grupo bacteriano a determinar
(Coliformes Totales, Coliformes Fecales o Estreptococos Fecales), sino tan
solo es una presunción, que habrá de confirmarse posteriormente.
Sin embargo, una negatividad en la prueba presuntiva permite dictaminar la
ausencia de dicho grupo bacteriano en el agua examinada.
La denominada prueba presuntiva consiste en una metodología de tipo
general para cualquier grupo de bacterias, mientras que la prueba confirmativa
es específica.
Dilución primaria
1. Pesar 10 g del alimento o muestra sólida en condiciones asépticas.
2. Transferir a un vaso de licuadora previamente lavado y desinfectado con
alcohol
3. Agregar 90 ml de solución salina estéril (0.9 % p/v) y licuar por un minuto.
4. Si el alimento no necesita licuarse pesar 10 g de producto o 10 ml
directamente en un frasco de dilución con 90 ml de solución salina estéril y
agitar vigorosamente para homogenizar la muestra. Esta dilución
corresponderá a 10-1.
Diluciones decimales:
1. Se tomará 1 ml de la dilución 10-1 y se transferirán a un tubo que contiene
9.0 ml de agua peptonada al 0.1% (10-2).
2. Esta operación se repetirá para preparar tantas diluciones decimales como
sea necesario (10-3, 10-4, 10-5).
Prueba presuntiva para coliformes
1. Inocular una serie de tres tubos conteniendo 10 ml de caldo lauril sulfato y
campana de Durham, con 1 ml de dilución 10-1.
2. Proceder de igual manera con las diluciones 10-2 y 10-3. En total deberán
ser nueve tubos por muestra.
3. Incubar los tubos a 37° C por 48 h.
Prueba confirmativa de coliformes totales.
1. De los tubos positivos (producción de gas y turbidez) transferir
asépticamente una asada de los cultivos a tubos con 10 ml de caldo Brilla con
campanas de Durham, repetir la operación tres veces.
2. Incubar por 37° C por 48 hrs.
3. La presencia de gas en los tubos de fermentación de caldo Bilis Verde
Brillante significa test confirmativo positivo para coliformes, ausencia de gas
constituye un test negativo para coliformes.
Prueba confirmativa de coliformes fecales.
1. De los tubos positivos (producción de gas y turbidez) transferir
asépticamente una asada de los cultivos a tubos con 10 ml de caldo EC con
campanas de Durham, repetir la operación tres veces.
2. Incubar por 44.5° C por 24 h.
3. La presencia de gas en los tubos de fermentación de caldo EC significa test
confirmativo positivo para coliformes fecales, ausencia de gas constituye un
test negativo para coliformes fecales.
Cálculo y expresión de resultados coliformes totales
1. La combinación de tubos positivos y/o negativos en los test confirmativos
de caldo Bilis Verde Brillante es referida a la Tabla N° 1 (anexo) (NMP POR
GRAMO DE MUESTRA E INTERVALOS DE CONFIANZA DEL 95%
UTILIZANDO 3 TUBOS CON 0.1, 0.01 Y 0.001g DE MUESTRA) y se expresa
como: NMP de coliformes/g o mL. de muestra.
2. Si en vez de las porciones de muestra 0,1 - 0,01 - 0,001, se utiliza 0,01 -
0,001 -0,0001, se lee el resultado de la tabla y se multiplica por 10.
3. Cuando se utilizan más de 3 series de diluciones decimales, se considera
el resultado de 3 series, eligiendo la dilución más alta que da resultados
positivos en los 3 tubos ensayados y las dos diluciones siguientes. Utilizando
el resultado de estas 3 series, leer en la Tabla de N.M.P. y multiplicar por 10,
100, 1000, etc. Según las porciones de muestra consideradas.
BACTERIAS COLIFORMES
La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies
bacterianas que tienen ciertas características bioquímicas en común e
importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los
alimentos.
Coliforme significa con forma de coli, refiriéndose a la bacteria principal del
grupo, Escherichia coli, descubierta por el bacteriólogo alemán Theodor von
Escherich en 1860. Von Escherich la bautizó como bacterium coli ("bacteria
del intestino", del griego κολον, kolon, "intestino"). Con posterioridad, la
microbiología sistemática nombraría el género Escherichia en honor a su
descubridor.
Caracteres bioquímicos
El grupo contempla a todas las bacterias entéricas que se caracterizan por
tener las siguientes propiedades bioquímicas:
 Ser aerobias o anaerobias facultativas;
 Ser bacilos Gram negativos;
 No ser esporógenas; (Si es Gram negativo NO esporula)
Hábitat del grupo coliforme
Las bacterias de este grupo se encuentran principalmente en el intestino de
los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos,
pero también ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en
suelos, semillas y vegetales.
Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por las heces
de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse la mayoría de los
coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin
embargo, aun existen muchos coliformes de vida libre.
Los coliformes como indicadores
Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminación
fecal en el control de calidad del agua destinada al consumo humano en razón
de que, en los medios acuáticos, los coliformes son más resistentes que las
bacterias patógenas intestinales y porque su origen es principalmente fecal.
Por tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriológicamente segura.
Asimismo, su número en el agua es directamente proporcional al grado de
contaminación fecal; mientras más coliformes se aislan del agua, mayor es la
gravedad de la descarga de heces.
Bacterias que integran el grupo de los coliformes
El grupo de los coliformes incluye bacterias en forma de bacilo, gram
negativos, con las siguientes propiedades bioquímicas: oxidasa negativo y
capacidad de fermentar lactosa, con producción de gas en 48 horas a una
temperatura de 37 °C.
El grupo coliforme está formado por los siguientes géneros
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
Citrobacter
No todos los autores incluyen al género Citrobacter dentro del grupo coliforme.
Coliformes totales y Coliformes Termotolerantes
No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario
desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como
indicadores de contaminación. Se distinguen, por lo tanto, los coliformes
totales —que comprende la totalidad del grupo— y los coliformes fecales —
aquellos de origen intestinal—.
Desde el punto de vista de la salud pública esta diferenciación es importante
puesto que permite asegurar con alto grado de certeza que la contaminación
que presenta el agua es de origen fecal.
Coliformes Termotolerantes
Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo coliforme.
Son definidas como bacilos gram-negativos, no esporulados que fermentan la
lactosa con producción de ácido y gas a 44.5 °C +/− 0.2 °C dentro de las 24
+/− 2 horas. La mayor especie en el grupo de coliforme fecal es el Escherichia
coli.12
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el
suministro de agua puede estar contaminada con aguas negras u otro tipo de
desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias coliformes se
encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los
sedimentos del fondo.
Los niveles recomendados de bacterias coliformes fecales son
 Agua potable: 0 colonias por 100 ml de la muestra de agua.
 Natación: menos de 200 colonias por 100 ml de la muestra de agua
 Navegar/Pescar: menos de 1,000 colonias por 100 ml de la muestra
de agua.
E. coli
El aislamiento de esta bacteria en el agua da alto grado de certeza de
contaminación de origen fecal, alrededor del 99 %. No es absoluta porque se
han aislado cepas de E. coli que no tienen origen fecal, pero es un grado de
certeza más que razonable para certificar contaminación con ese origen. Sin
embargo, el aislamiento de este microorganismo no permite distinguir si la
contaminación proviene de excretas humanas o animales, lo cual puede ser
importante, puesto que la contaminación que se desea habitualmente
controlar es la de origen humano. Esto no significa menospreciar la de origen
animal, especialmente dada la existencia de zoonosis, enfermedades que son
comunes al hombre y animales, que también se pueden transmitir por el agua.
Contaminación fecal animal
La Escherichia coli de origen animal y la de origen humano son idénticas. Sin
embargo, algunos investigadores han encontrado que las bacterias del género
Rodococcus se asocian solamente a la contaminación fecal por animales.
Escherichia coli y bacterias coliformes termotolerantes
Las bacterias del grupo de los coliformes totales que son capaces de
fermentar lactosa a 44-45 °C se conocen como coliformes termotolerantes. En
la mayoría de las aguas, el género predominante es Escherichia, pero algunos
tipos de bacterias de los géneros Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter
también son termotolerantes. Escherichia coli se puede distinguir de los
demás coliformes termotolerantes por su capacidad para producir indol a partir
de triptófano o por la producción de la enzima β-glucuronidasa. E. coli está
presente en concentraciones muy grandes en las heces humanas y animales,
y raramente se encuentra en ausencia de contaminación fecal, aunque hay
indicios de que puede crecer en suelos tropicales. Entre las especies de
coliformes termotolerantes, además de E. coli, puede haber microorganismos
ambientales.
Coliformes e Higiene de alimentos
En la higiene de alimentos los coliformes no se consideran indicadores de
contaminación fecal sino solamente indicadores de calidad.
Los coliformes totales se usan para evaluar la calidad de la leche
pasteurizada, leche en polvo, helados, pastas frescas, fórmulas para
lactantes, fideos y cereales para el desayuno.
Los coliformes fecales se usan para evaluar los mariscos frescos.
Por último, la E. coli se usa como indicador en quesos frescos, quesillos,
cereales , masas con relleno, alimentos infantiles, cecinas cocidas y verduras
frescas.
Coliformes y aguas servidas
La prueba de coliformes totales y fecales también se utiliza para determinar la
calidad bacteriológica de los efluentes de los sistemas de tratamiento de
aguas servidas.
Eliminación de coliformes
La eliminación de coliformes puede realizarse tanto en agua (dióxido de cloro)
como en aire (equipos de ozono certificados)
ENTEROBACTERIAS
Las enterobacterias (orden Enterobacteriales y única familia
Enterobacteriaceae) son bacterias Gram negativas que contiene más de 30
géneros y más de 100 especies que pueden tener morfología de cocos o
bacilos. Los miembros de este grupo forman parte de la microbiota del
intestino (llamados coliformes) y de otros órganos del ser humano y de otras
especies animales. Algunas especies pueden vivir en tierra, en plantas o en
animales acuáticos. Sucumben con relativa facilidad a desinfectantes
comunes, incluido el cloro. Con frecuencia se encuentran especies de
enterobacterias en la bio-industria: para comprobar la sanidad de la
fermentación de quesos y productos lácteos, alcoholes y en tratamientos
médicos,como la producción de toxinas en el uso de cosméticos y fabricación
de agentes antivirales de la industria farmacéutica, etc.
Características
En la definición clásica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios
básicos, adicional a la aparición de nuevos métodos taxonómicos para incluir
a ciertos géneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que
forman parte de esta familia:
 Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y
otros pleomórficos.
 No son exigentes, son de fácil cultivo.
 Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo),
es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.
 Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
 Son anaeróbicos facultativos.
 Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con
o sin la producción de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores
de una amplia gama de substratos en condiciones aeróbicas.2
  Muchos géneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque
algunos géneros no son móviles.
Adicional a ello, las enterobacterias no forman esporas, algunas producen
toxinas y pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos. Son
quimioheterótrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples de
carbono y nitrógeno, generalmente sólo con D-glucosa, aunque algunas
requieren aminoácidos y vitaminas. La temperatura óptima de crecimiento es
de entre 22 °C y 37 °C.
Las diferencias entre los nombres de los diversos géneros provienen de
criterios más precisos, como la fermentación de los diferentes azúcares, la
producción o no de azufre, la presencia de enzimas metabólicas (β-
galactosidasa, desaminasas, descarboxilasas), etc. Los serotipos de
importancia médica y sanitaria pueden distinguirse entre sí por la presencia o
ausencia de antígenos en su constitución celular, tales como en el
lipopolisacárido (antígeno O), el antígeno flagelar (antígeno H) o el antígeno
capsular (antígeno K).1
Ecología
La mayoría de las especies pueden aislarse del intestino del hombre y de otros
animales, de allí su nombre "enterobacteria" (del griego entéron, intestino.
Pueden ser flora o ser transitorias en la cavidad bucal, en las regiones
húmedas de la piel, en especial el perineo, las fosas nasales y las vías
genitales femeninas. Son abundantes en la naturaleza, en particular en
medios húmedos y, por ser expulsadas por las heces, funcionan como
medidores epidemiológicos de salubridad e higiene poblacional.
En el intestino, representan una fracción importante de la flora aeróbica, se
encuentran en grandes números en el colon (desde el ciego hasta el recto),
donde contribuyen a la degradación de residuos alimenticios y a la producción
de gas intestinal como parte de la fermentación.
La especie Escherichia coli juega una función importante en el control de otras
especies intestinales, constituyendo cerca del 80 por ciento de la flora
aeróbica intestinal en una concentración aproximada de 108 en la materia
fecal. Otras especies de Enterobacteriaceae con una presencia numerosa
intestinal son Proteus y Klebsiella, mientras que otras especies, como
Citrobacter, Hafnia, Providencia y Enterobacter están presentes de manera
irregular.
En ciertas oportunidades, los comensales del intestino pueden resultar
patogénicos como oportunistas en infecciones urinarias, pulmonía, septicemia
o sobreinfecciones, en especial en inmunosuprimidos, en el uso de ciertos
antibióticos, desnutrición, etc.
Patogenia
La presencia de enterobacterias dentro del organismo es normal, pero puede
determinar la aparición de infecciones, cuya gravedad depende
principalmente de la capacidad patológica o de la virulencia de la especie en
cuestión y de las características del hospedador. Introducidas por los
alimentos, provocan problemas intestinales al adherirse y atravesar la barrera
de la mucosa gastrointestinal, manifestada por diarreas y deshidratación.
Ciertas especies provocan patologías específicas:
 La especie Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea.
 La especie Shigella dysenteriae es el agente responsable de la
disentería bacilar.
 La especie Escherichia coli enterotóxica es responsable de la
gastroenteritis infantil.
 La especie Yersinia pestis es responsable de la peste.
 La especie Serratia marcescens usualmente causa infecciones
nosocomiales como resultado de tratamiento en un hospital.
Las enterobacterias incluyen a organismos que resultan patógenos para el ser
humano como la Escherichia coli o la Salmonella, especialmente importantes
en la mortalidad infantil en países en desarrollo3 y patógenos para las plantas
como Erwinia, en la mayor parte de los casos causando infecciones
oportunistas. Todos los bacilos de Enterobacteriaceae son resistentes a
antimicrobianos comunes, tales como la penicilina, la meticilina y la
clindamicina, entre otros.
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Materiales y sustancias
El tubo de ensayo es un
instrumento de laboratorio que se
utiliza principalmente como
Tubos de
contenedor de líquidos y sólidos a
ensayo
las cuales se les va a someter a
reacciones químicas u otras
pruebas
Se emplea para transportar,
arrastrar, trasvasar inóculos
(pequeño volumen que contiene
microorganismos en suspensión)

Asa de desde la solución de trabajo

siembra también llamada “solución madre”
al medio de cultivo (sólido o
líquido) o de un medio a otro
(resiembra). También sirve para la
realización de frotis.
La pipeta es un instrumento
volumétrico de laboratorio que
permite medir la alícuota de un
líquido con mucha precisión.
Suelen ser de vidrio o plástico.
Pipetas Está formada por un tubo
transparente que termina en una
de sus puntas de forma cónica, y
tiene una graduación (una serie de
marcas grabadas) con la que se
indican distintos volúmenes.
 Un mechero o quemador Bunsen
es un instrumento utilizado en los
Mechero laboratorios científicos para
Bunsen calentar, esterilizar o proceder a la
combustión de muestras o
reactivos químicos.

El caldo lauril sulfato se utiliza para

la detección de bacterias
coliformes en agua y aguas
Caldo Lauril
residuales en un entorno de
Sulfato de
laboratorio. El caldo lauril sulfato
Sodio
no está destinado a ser utilizado en
el diagnóstico de enfermedades u
otras condiciones en humanos.
El caldo de bilis verde brillante al
se utiliza para la detección de
bacterias coliformes en agua,
alimentos y productos lácteos en
Caldo Verde
un entorno de laboratorio. El caldo
Brillane Bilis
de bilis verde brillante al no está
destinado a ser utilizado en el
diagnóstico de enfermedades u
otras condiciones en humanos.
El agar endo (también llamado
medio endo) es un medio de
cultivo microbiológico de color rosa
Agar Endo
pálido. Fue originalmente
desarrollado para el aislamiento de
Salmonella typhi, pero ahora es
 usado mayormente como un
medio para coliformes
La caja o placa de Petri es un
recipiente redondo, de cristal o
plástico, con una cubierta de la
misma forma que la placa, pero
Placas Petri
algo más grande de diámetro, para
que se pueda colocar encima y
cerrar el recipiente, aunque no de
forma hermética.

El agar VRBA es un media para el

Agar VRBA conteo de enterobacterias de una
muestra.

Un contador de colonias es un
instrumento utilizado para contar
Contador de
colonias de bacterias o de otros
Colonias
microorganismos que crecen en
una placa de agar.

Procedimiento
 Determinacion de coliformes totales y fecales.
1. Pesar 10 g del alimento o muestra sólida en condiciones asépticas.
2. Transferir a un vaso de licuadora previamente lavado y desinfectado
con alcohol
3. Agregar 90 ml de solución salina estéril (0.9 % p/v) y licuar por un
minuto.
4. Si el alimento no necesita licuarse pesar 10 g de producto o 10 ml
directamente en un frasco de dilución con 90 ml de solución salina estéril
y agitar vigorosamente para homogenizar la muestra. Esta dilución
corresponderá a 10-1.
5. Se tomará 1 ml de la dilución 10-1 y se transferirán a un tubo que
contiene 9.0 ml de agua peptonada al 0.1% (10-2).
 6. Esta operación se repetirá para preparar tantas diluciones decimales
como sea necesario (10-3, 10-4, 10-5).
Prueba presuntiva para coliformes
1. Inocular una serie de tres tubos conteniendo 10 ml de caldo lauril sulfato
y campana de Durham, con 1 ml de dilución 10-1.
2. Proceder de igual manera con las diluciones 10-2 y 10-3. En total
deberán ser nueve tubos por muestra.
3. Incubar los tubos a 37° C por 48 h.
Prueba confirmativa de coliformes totales.
1. De los tubos positivos (producción de gas y turbidez) transferir
asépticamente una asada de los cultivos a tubos con 10 ml de caldo Brilla
con campanas de Durham, repetir la operación tres veces.
2. Incubar por 37° C por 48 hrs.
3. La presencia de gas en los tubos de fermentación de caldo Bilis Verde
Brillante significa test confirmativo positivo para coliformes, ausencia de
gas constituye un test negativo para coliformes.
Prueba confirmativa de coliformes fecales.
1. De los tubos positivos (producción de gas y turbidez) transferir
asépticamente una asada de los cultivos a tubos con 10 ml de caldo EC
con campanas de Durham, repetir la operación tres veces.
2. Incubar por 44.5° C por 24 h.
3. La presencia de gas en los tubos de fermentación de caldo EC significa
test confirmativo positivo para coliformes fecales, ausencia de gas
constituye un test negativo para coliformes fecales.
 Recuento de enterobacterias

1. Preparar las muestras por el procedimiento realizado anteriormente en

preparacion y dilucion de muestra.
2. Pipetear en placas esteriles 1 ml de las diluciones de 10-1 a 10-4 del
alimento.
3. Adicionar a cada placa petri 15 ml de agar VRBA fundido y templado a
45 ºC.
 4. Mezclar el contenido de las placas mediante movimientos de vaiven y
rotacion.
5. Dejar solidificar la muestra (5-10 min)
6. Cubrir la superficie del agar añadiendo a cada placa 10 ml de agar VRBA
fundido y templado a 45 ºC.
7. Cuando se haya solidificado la segunda capa de agar, incubar las placas
invertidas a 37 ºC durante 24 horas.
8. Contar todas las colonias de color rojo con halo de precipitado rojizo
sobre placas conteniendo entre 20-200 colonias.
9. Calcular el numero de colonias de enterobacterias por gramo de
muestra.

6. RESULTADOS
Tubos positivos
Diluciones
-1 -2 -3 -4 -5 -6
Caldo

3 3 3 3 3 0
Caldo LST

3 3 3 3 3 0
Caldo Brila

3 3 1 1 0 0
Caldo EC

 Caldo LST: 20 x 104 NMP/g

 Caldo Brila: 20 x 104 NMP/g
 Caldo EC: 700 NMP/g
Conteo de colonias de enterobacterias
Diluciones
-1 -2 -3 -4 -5
Medio

Incontables Incontables Incontables 138 29

VRBA

 Ya que 138/29 es mayor que dos, se elige el menor así que hay: 29 x
105 UFC.
7. DISCUSION DE RESULTADOS
 Como se menciono en el resumen los resultados no coinciden
necesariamente con las tablas por el cual se hace un análisis mas agudo
de las tubos con verdadero gas y no vapor de agua llegando así a algún
cambio de resultados para adaptarse a la tabla.
 Otra causa de los errores pueden ser la contaminación en la inoculación
así también el tiempo en la incubadora de las muestras debido al horario
de atención del laboratorio.
 En el recuento en placa hay la presunción también de contaminantes pues
tres placas salieron incontables, haciendo de nuestra suposición algo muy
real pero con los resultados obtenidos si se puedo obtener la UFC.

8. CONCLUSIONES
 La primera conclusión es que una practica de laboratorio no siempre
saldrá exitosa y que esto conlleva a que haya problemas con el laboratorio
que necesite de resultados favorables del otro.
 El método del numero mas probable es muy exacto pero a la vez muy
ambiguo pues necesita en casos la manipulación de ciertos resultados
para llegar a obtener el numero de microorganismos de la muestra.
 El método de determinación de coliformes totales y fecales en los
alimentos es de gran ayuda ya que nos da resultados sobre lo que
ingerimos y sobre todo de que si estos alimentos son de buena
procedencia o no. .
 Aprendimos un nuevo método de conteo de microorganismos lo cual nos
ayuda a obtener mayor conocimiento sobre el estudio de
microorganismos que nos ayudara en nuestra carrera.

9. RECOMENDACIONES
 Cuidar las muestras que se necesitaran a posterior para otro laboratorio.
 Esterilizar bien los objetos al momento de inocular las muestras y hacer
los cambios necesarios de materiales para un buen resultado.
  No dejar mucho tiempo las muestras en la incubadora pues esto puede
hacer variar la caracterización de tubos gas positivos o negativos.
 Al hacer el conteo en placa tener mucha paciencia y a la vez mucha
atención para llegar a tener el valor mas cercano al real de las UFC.

10. FUENTES DE INFORMACION

 http://www.anmat.gov.ar/renaloa/docs/Analisis_microbiologico_de_los_al
imentos_Vol_III.pdf (13 de mayo de 2018)
 http://www.analizacalidad.com/docftp/fi148anmic.pdf (13 de mayo de
2018)
 Madigan, M. T., J. M. Martinko y J. Parker. 2003. Brock. Biología de los
microorganismos. 10a Ed. Prentice Hall Iberia. España.
 Prescott L.M., Harley J.P. and Klein G.A.. 2009. Microbiología. 3a edición.
Mc GrawHill-Interamericana. Madrid.

11. ANEXOS

Tabla del NMP

Procedimiento para la determinación de coliformes totales y fecales por el método
del NMP.

Pesando 10g de pescado crudo Los tubos para las diluciones

Muestra de pescado licuada con agua peptonada Realizando las diluciones

Tubos con caldo LST Placa Petri para el recuento de enterobacterias

Vertiendo agar VRBA a las placa Petri que ya contenían 1 ml de cada dilución