FACULTAD DE INGENIERÍA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS Y AMBIENTALES

CARRERA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

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ASIGNATURA: Bioquímica
FECHA: 20 de junio del 2018
INFORME
Tema: Métodos De Determinación De Proteínas
Introducción
Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de
rutinaria básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta,
cuando se quiere conocer la actividad específica de una preparación enzimática, para el
diagnóstico de enfermedades, así como para otros muchos propósitos.
Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas y el presente tema de
investigación vamos a estudiar las distintas técnicas que nos permiten analizar desde un
punto de vista cuali y cuantitativo, el contenido proteico de las muestras biológicas
haciendo especial hincapié en el estudio de las proteínas. Las proteínas están presentes en
todas las células y en los distintos líquidos corporales: suero o plasma, orina, líquido
cefalorraquídeo Si nos centramos en las proteínas plasmáticas, podemos diferenciar: ·
Proteínas plasma-específicas (albúmina + globulinas) se sintetizan fundamentalmente en
el hígado, pero también en: células plasmáticas, ganglios linfáticos, bazo y médula ósea.
Así, la determinación de las proteínas totales sirve para el diagnóstico de afecciones
hepáticas, afecciones de la médula ósea y otras afecciones del metabolismo o
nutricionales. (Martínez, 2017)
Objetivos:
 Conocer el procedimiento teórico-experimental del análisis de proteínas por
diferentes tipos de métodos
 Determinar el contenido de proteínas solubles en diversas matrices

Marco Teórico
Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las biomoléculas
más versátiles y más diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo.
Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, por ejemplo estructural (como el:
colágeno), inmunológica (anticuerpos), Contráctil (actina y miosina),entre otras
La determinación de la cantidad de proteína no es sencilla y el valor obtenido en cada
caso depende del método utilizado

Cuadro 1. Cuadro de la clasificación de los diferentes métodos de separación de proteínas

Las proteínas son indispensables para la vida, sobre todo por su función plástica
(constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda célula), pero también por sus
funciones biorreguladoras (forma parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son
proteínas).Existen numerosas fuentes de nitrógeno no proteico que pueden interferir en
algunos métodos de análisis
Las proteínas son macromoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. Por
sus propiedades físicoquímicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas simples
(holoproteidos), que por hidrólisis dan solo aminoácidos o sus derivados; proteínas
conjugadas (heteroproteidos), que por hidrólisis dan aminoácidos acompañados de
sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas por desnaturalización y
desdoblamiento de las anteriores (Reyes, 2015)
1. Método Del Ácido Bicinconinico (BCA)
1.1. Historia
Este método fue propuesto por primera vez por Lowry en 1951. El ensayo del ácido
bicinconínico y el ensayo de Hartree–Lowry son modificaciones subsecuentes del
procedimiento original de Lowry.
El ácido bicinconínico (BCA) fue inventado por Paul K. Smith en 1985 en la compañía
Pierce Chemical Company, tanto el ensayo de BCA como el de Lowry se basan en la
conversión del Cu2+ a Cu1+ en condiciones alcalinas. Esta conversión es definida como
la reacción de Biuret. Esta reacción es influenciada por cuatro aminoácidos (cisteína,
cistina, tirosina y triptófano) y también por la cadena peptídica Se basa en que las
proteínas reducen los iones cúpricos del reactivo BCA a iones cuprosos en medio básico.
Cambio de color del verde (BCA) al morado (Verdini, 2017)
 Cuadro 2. Composición del método del ácido bicinconinico (BCA)

2. Método De Absorción Uv A 280nm

2.1. Historia
Desde la Grecia clásica, la luz solar se ha empleado en el tratamiento de afecciones
diversas, como artritis, edema, ictericia y diversos trastornos cutáneos. Gran parte de estos
efectos beneficiosos son debidos al calentamiento producido por la radiación infrarroja;
otros son directamente imputables al efecto fotoquímico de la radiación ultravioleta
Hasta entonces sólo podía emplearse la fuente natural de UV que proporciona el sol.
Finsen, utilizando un aparatoso dispositivo de producción artificial de UV, basado en arco
de carbón, trató numerosas afecciones de tuberculosos cutánea, lo que le valió la
concesión del premio Nóbel de Medicina en 1903 y la consideración de creador de la
terapia ultravioleta, a la que incluso se pretendió denominar «finsenterapia», siguiendo
las costumbres de la época. Tras los trabajos del médico danés, se multiplicaron las
indicaciones terapéuticas de la radiación UV, al tiempo que se encontraban nuevos
sistemas de producción, como la lámpara de mercurio. En 1919, Hulshisky demostró las
propiedades antirraquíticas de la luz ultravioleta, que hoy día suponen uno de sus
principales efectos terapéuticos.
La mayoría de las proteínas muestran una absorción a 280 nm., la cual se atribuye al grupo
fenólico de la tirosina y al grupo indólico del triptofano. (Martínez, 2017)

Cuadro 3. Grupos proteínicos

 Es necesaria la calibración con una proteína estándar
 La solución debe ser clara e incolora, la turbidez puede afectar los resultados
 Los ácidos nucleicos interfieren (anillos de purina y pirimida), no así el amonio
 Tiene la ventaja de que no es necesario utilizar reactivos y la muestra no se daña
o destruye durante la determinación
  Se determina la cantidad de luz absorbida una solución proteica.
 Para el cálculo de la concentración de dicha solución se aplica la ley de Lambert
–Beer

A = ε*c *l
Donde:
A = absorbancia
 = Coeficiente de extinción molar
l = longitud de la celda.
C = concentración

3. Método De Adhesión De Colorante

Controlando el pH y la fuerza iónica del medio los grupos funcionales ácidos y básicos
de las proteínas pueden interactuar con grupos orgánicos de carga opuesta
Al realizarse la unión se presenta coloración o bien un cambio de ésta comúnmente se
usan colorantes sulfonados los cuales reaccionan a pH ácido con el grupo amino y el
grupo guanidina pueden adherirse colorantes anicónicos o catiónicos
El colorante aniónico se une a los grupos catiónicos de los residuos básicos de las
proteínas (histidina, arginina, lisina) y forman un complejo insoluble.
El colorante en exceso permanece soluble y se relaciona inversamente con la
concentración de proteínas (Torres, 2016)

Cuadro 4. Método de Método De Adhesión De Colorante

4. Método de Bradford
Método por unión de colorantes es sensible, simple, rápido, barato y pocas sustancias
permiten su determinación como un colorante, Comassie Blue G-250 a las proteínas. El
colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas
se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de
extinción mayor que el colorante libre.
Pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren están
los detergentes y las soluciones básicas
Los aminoácidos que son reconocidos por el colorante son arginina, fenilalanina,
triptofano y prolina
El azul de Coomasie libre se detecta a 470 nm mientras que la forma unida a proteínas a
595 nm. Esto se debe a que el Coomassie se une preferencialmente a los aminoácidos
mencionados y cambia de un estado catiónico a uno aniónico. (Verdini, 2017)

Cuadro 5. Representación esquemática de la interacción de la luz (longitudes de onda) con una

proteína.

Conclusiones
Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo ya que
cumplen muchas funciones
Varios estudios respaldan la aplicación del método de Bradford, también se ha
establecido su correlación con método de adhesión de colorante .Cada laboratorio de
acuerdo al equipamiento disponible debe establecer la validación del método y la
aplicación de acuerdo a las matrices
Recomendaciones
Observamos que es muy importante saber identificar las proteínas en los alimentos que
constituimos diariamente esto se pudo observar a través de las diferentes reacciones que
se presentan en los alimentos

Bibliografía
Martínez, G. (16 de Mayo de 2017). Determinación de proteínas de un alimento por diferentes metodos.
Obtenido de Determinación de proteínas de un alimento por diferentes metodos:
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/16338/Determinaci%C3%B3n%20de%20protein
as.pdf?sequence=1
Reyes, E. F. (13 de Enero de 2015). Métodos para la cuantificación de proteínas . Obtenido de Métodos
para la cuantificación de proteínas :
http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/acym/27_METODOS_PARA_LA_CUANTIFICACION_D
E_PROTEINAS.pdf
Torres, M. (18 de Agosto de 2016). Metodologias analiticas aplicables al etiquetado nutricional .
Obtenido de Metodologias analiticas aplicables al etiquetado nutricional :
https://www.achipia.gob.cl/wp-content/uploads/2016/06/4-M--todos-Proteina-Lic.-Q.-
Marcela-Torres.pdf
Verdini, R. (23 de Junio de 2017). Ánalisis de contenido de proteinas en los alimentos . Obtenido de
Ánalisis de contenido de proteinas en los alimentos :
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/124179/mod_resource/content/4/QA-
2017-PROTEINAS-METODOS.pdf