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ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD: CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

INFORME DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

PRÁCTICA No. 4

PREPARACIÓN Y SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: ALLAN CRISTOPHER JOHNSON CHEME

GRUPO No.: 2

DOCENTE: ANA KARINA ALBUJA LANDI

NIVEL: TERCERO PARALELO: “B”

LUGAR DE REALIZACIÓN: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2016/12/06 2016/12/23
2. OBJETIVOS

2.1. GENERAL

 Conocer los principios generales de la preparación y técnicas de esterilización de


diversos materiales y medios de cultivo de uso común en Microbiología.

2.2. ESPECÍFÍCOS

 Preparar medios de cultivo solidos de agar Kliger y Mac Conkey


 Sembrar una muestra de orina en cajas Petri
 Observar las características morfológicas de las colonias bacterianas
3. MARCO TEORICO

Métodos de Esterilización

MEDIOS DE CULTIVO UTILIDAD


Agar Sangre Cultivo en general de muchos gérmenes
Agar MacConkey Aislamiento e identificación de entero
bacterias
Agar kliger Para realizar prueba de lactosa, glucosa,
gas y H2S.Utilizado para identificación de
bacilos y cocobacilos Gram negativos
(enterobacterias)

Agar simons citrato Prueba de citrato. Esta prueba es muy


utilizada para la investigación de bacilos
Gramnegativos

Agar Hektoen Aislamiento de entero bacterias patógenas


Medio King B Identificación en general de pseudomonas
Medio Cled Para el recuento e identificaciónde
gérmenes en las vías urinarias

Villaverde Granados.2003
4. METODOLOGIA

• Recomendaciones generales para la preparación de los medios de cultivo.


• Preparar los volúmenes de cada medio que se han de utilizar en el período recomendado
1 para su empleo.

• Utilizar agua destilada y material de vidrio libre de detergentes.


• Pesar la cantidad del medio que marca el fabricante (en la etiqueta)
• En el caso de medios deshidratados, el medio debe de guardarse en su frasco y en lugares
2 frescos.

• Emplear recipientes con el doble de capacidad al volumen que se va a preparar para evitar
la proyección en el momento de la ebullición.
3 • Añadir un pequeño volumen de agua para permitir la disolución completa y después
completar el volumen total

• . En general los medios se mezclan hasta disolución completa para aclararse, pero debe
evitarse que se derramen. Nunca deben calentarse a la flama directa del mechero para evitar
que se proyecten.
4 • Es conveniente evitar el sobrecalentamiento durante la esterilización por calor para evitar la
pérdida de materiales nutritivos y agua que puedan cambiar la consistencia del medio.

• Los medios de cultivo ya preparados y esterilizados deben mantenerse en refrigeración (4°


C) y protegidos de la luz. Antes de emplearlos verificar que no exista contaminación,
precipitación, cambio de color o de consistencia etc.
• Un medio contenido en un matraz no puede ser esterilizado una segunda ocasión
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4.1 PROCEDIMIENTO

Pesar cuidadosamente la cantidad que indica del envase para preparar la


cantidad que indique el profesor.
• Colocar el medio en un matraz con el doble del volumen y adicionarle el
agua necesaria.

• Calentar suavemente hasta disolución completa.


• Tapar el matraz con un tapón de algodón-gasa

• Esterilizar en autoclave a la temperatura y tiempo que indica la


etiqueta del envase (en este caso a 121° C, 15 psi durante 15 min).
• Enfriar hasta 45° C.

• En condiciones asépticas transferir de 15 a 20 mL de cada medio en cajas


de Petri estériles y dejar que solidifiquen a la temperatura ambiente.
Etiquetar en la base de la caja.
• Dejar una placa a 35º C durante 24 horas para prueba de esterilidad,
incubar en posición invertida.
CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO EN PLACA

• Tomar el asa de platino ó acero y quemarla al rojo vivo en la flama del


mechero para esterilizarla.
• Destapar el tubo que contenga el microorganismo, pasar la boca del tubo
por la flama del mechero.

• Enfriar el asa en el interior del tubo y tomar con ella el inóculo.


• Pasar la boca del tubo nuevamente por la flama del mechero y colocarle el
tapón

• Destapar la caja Petri con agar nutritivo o EMB y sembrar al


microorganismo por estría cruzada como se indica en el esquema.
• Quemar el asa cada vez que se realiza una estría.

• Una vez sembrado el microorganismo incubar la caja sembrada a 37° C,


durante 24 horas.
• Observar el crecimiento a las 24 horas y anotar las características del
crecimiento en el medio cultivo ya sea agar nutritivo o EMB

5. EQUIPOS Y MATERIALES:

EQUIPOS:

 autoclave
 balanza

MATERIALES: SUSTANCIAS
 Agar sangre
 Probeta de 500mL
 Agar MacMacConkey
 Erlenmeyer
 Agar Kligler
 Reverbero
 Agar Simons citrato
 Malla metálica
 Agar chocolate
 Vaso 500mL
 Vaso de 1000mL
 Hisopos
 Cajas Petri
 Mechero o lámpara de alcohol
6. RESULTADOS Y DISCUSIONES

6.1 CÁLCULOS

 Kliger- tubos

Numero de tubos 15
Volumen 100ml
Gramos de Agar Kigler 5,5g

55g 1000ml

X 100ml

𝟓𝟓 𝒈 × 𝟏𝟎𝟎𝒎𝒍
𝒙= = 𝟓, 𝟓𝒈
𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍

 MacConkey- cajas Petri

Numero de cajas Petri 20


Volumen 300ml
Gramos de Agar MacConkey 14.86g

49.53 1000ml

X 300ml

𝟒𝟗. 𝟓𝟑 𝒈 × 𝟑𝟎𝟎𝒎𝒍
𝒙= = 𝟏𝟒. 𝟖𝟔𝒈
𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒍
6.2 DISCUSIONES

Método de siembra

MEDIO DE CULTIVO OBSEVACIONES


1.Agar sangre Colonias puntiformes, unidas ,color poco verodosas siendo
alfa hemolisis
2 Agar Mac Conkey Colonias aisladas de color rosada

3.Agar Kligler Se apreció la formación de gases, parcialmente fermentado,


presentó color amarilloy fondo acidificado
En el gram de orina contaminada se presentó bacilos
gramnegativos
4.Agar chocolate Se observó colonias verdosas pastosas

5.Agar Simmons citrato Parcialmente fermentado con formación de gases ,color


verde azulado

De acuerdo a la Microbiología: bacteriología., medios de cultivo y pruebas bioquímicas,


micología general, parasitología general, de Villaverde dice que
En medio Agar sangre el crecimento de las colonias y su posible hemolisis es variable
según el tipo de germen crecido,
 En Agar Mac Conkey en cambio se dice que algunas colonias se presentan de
color rojas o rosadas características de a E.coli. Colonias rosadas y mucosas con
características de Enterobacter aerogenes. Colonias incoloras no fermentadoras
de lactosa son características de Salmonella, Shigella y Pseudomonas
 En Agar Kliger si fermenta sólo la glucosa, acidifica sólo el fondo virando el rojo fenol
a amarillo en esta zona. Si el agar se rompe o forma una cámara de aire en el fondo del
tubo indica la presencia de gas. Si aparece un precipitado de color negro, indica la
presencia de SH2
 En Simmons de citrato se observa un crecimiento de gérmenes produciendo un cambio
a color azul
7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

7.1 CONCLUSIONES

 Agar Kliger y Mac Conkey son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el cultivo e identificación
de enterobacterias ya sea bacilos o cocobacilos gramnegativos, esto se prepara en el
laboratorio siguiendo las indicaciones respectivas del docente y cumpliendo con las
normas de higiene que permitan y aseguren los resultados eficientes.
 Se realizó los procedimientos propuestos para el cultivo de bacterias patógenas de la
orina contaminada, con asa de platino esterilizándola previamente en la llama del
mechero y se toma la muestra y se siembra el microorganismo por estría cruzada, y por
consiguiente se observará el crecimiento y características morfológicas de cultivo a las
24 horas.
 Las diferentes colonias bacterianas presentaron diferentes características en su cultivo,
verdes pastosas como en el caso de A. chocolate, colonias aisladas y de color rosado en
A. Mac conkey, con formación de gases y fermentaciones de azucares y de color
parcialmente amarillo en A Kliger, colonias de color verde azuladas y fermentación de
azucares y formación de gases en A. Simmons citrato.

7.2 RECOMENDACIONES

 Es de gran importancia el uso de vestimenta de laboratorio para los procedimientos


llevados a cabo en el laboratorio para evitar situaciones muy peligrosas de
contaminación bacteriana
 No jugar con los materiales de laboratorio para la realización de esta práctica
especialmente con aquellos que son de fácil contaminación con microorganismos
presentes en el ambiente, como es el caso de las cajas Petri
 Seguir las normas propuestas y recomendaciones del docente en el laboratorio, para
obtener los resultados propuestos
8. BIBLIOGRAFIA
 Prescott, M. y otros. (2004). Microbiología. (5a. ed.). México: McGraw Hill
 De La Rosa Manuel (2011); Microbiología en ciencias de la salud. México
Editorial Elseiver
 Granados, R. &Villarde, M. (2003). Microbiología: bacteriología., medios de
cultivo y pruebas bioquímicas, micología general, parasitología general.
Madrid. Thomson.
 López, I y otros. (2000). Microbiología. Ecuador: docucentro ESPOCH.

9. CUESTIONARIO
METODOS DE ESTERIZACION

• Calor humedo: autoclave


Agentes • Calor seco: horno/estufa
físicos
• Radiaciones:UV y gama

• Liquidos: Peróxido de
hidrógeno, ácido peracetico
Agentes • Gaseosos: oxido de etileno,
qumicos formaldehído, gas de H2O2
• Plasma: plasma de H2O2,
plasma de ac. peracetico

Mecanicos • Filtración

Juan Manuel Baamonde, 01 julio 2013


Como podemos verificar la esterilización si se ha ejecutado correctamente

La norma europea EN-556 (1995) establece como requisito esencial, que para etiquetar
un producto sanitario como “ESTERIL” se debe cumplir lo siguiente:
La probabilidad teórica de que exista un microorganismo viable presente en el producto
deberá ser igual o menor que 1 entre 1.000.000. Esta expresión es lo que
internacionalmente se conoce como Nivel SAL ( Security Assurance Level ) de 10-6
Pero para garantizar la esterilidad de un producto,no sólo debemos utilizar un sistema
validado y controlado adecuadamente, sino que dicha garantía depende de más factores,
entre los que se encuentra la carga microbiana inicial, además del almacenaje posterior
del producto estéril.

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