Tema 6. Enzimas. Clasificación.

Principios de la catálisis
enzimática. Energía de activación. Velocidad de reacción y
equilibrio de reacción. Cinética enzimática: ecuación de
Michaelis-Menten. Ecuación de los dobles recíprocos.
Inhibición enzimática. Tipos de inhibición. Mecanismos de
regulación de la actividad enzimática. Isoenzimas

Dpto. Biología Molecular

Universidad de Cantabria
 ENZIMAS
• Catalizadores de las reacciones biológicas.
• La mayoría son proteínas
• Gran poder catalítico
• Alto grado de especificidad
• Actúan en soluciones acuosas en condiciones
suaves de temperatura y pH
• Su actividad puede regularse
( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
 IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS

• La medida de la actividad enzimática en fluidos

biológicos o tejidos es importante para el
diagnóstico de muchas enfermedades.
• Muchas fármacos son inhibidores de la actividad
enzimática
• Importancia en la industria de alimentación y
agricultura.
 ENZIMAS: RESEÑA HISTORICA
• Primera descripción (finales del siglo XVIII)
• 1850. Estudios de Pasteur
• 1897. Buchner
• 1926. Summer cristaliza la ureasa
• Segunda mitad del siglo XX: se purifican y
caracterizan millares de enzimas, lo que ha
permitido conocer su mecanismo de acción.
• Cofactor (iones metálicos o coenzima)
• Apoenzima
• Holoenzima: apoenzima + cofactor o g. prostético
• Nomenclatura:

SUSTRATO + TIPO DE REACCION + ASA

Un tercio de los enzimas requieren algún ión metálico para catalizar

( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)33
Muchas vitaminas son cofactores o precursores
de cofactores de enzimas

( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
Clasificación internacional de enzimas
1. Oxidoreductasas transferencia de electrones

2. Transferasas reacciones de transferencia de grupo (no agua)

3. Hidrolasas reacciones de hidrólisis (transferencia al agua)

4. Liasas Adición de grupos a dobles enlaces o formación

de dobles enlaces por eliminación de grupos

5. Isomerasas transferencia de grupos dentro de la misma molécula

para dar isómeros

6. Ligasas Formación de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por reacciones

de condensación acopladas a hidrólisis de ATP
Los enzimas aceleran las reacciones bajando la energía de activación

E + S = ES = E + P

( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
“Basic Medical Biochemistry” Marks,
Marks & Smith Lippincott. 1999
Los enzimas son estereoespecíficas porque forman varias
interacciones entre aminoácidos del centro activo y los
distintos grupos del sustrato

(“Bioquímica”, Mathews and van Holde

McGraw-Hill, 1998)
 El centro activo de los enzimas es complementario al estado
de transición de la reacción catalizada

Progreso de la reacción

( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
 Encaje
inducido

Cambio conformacional inducido por glucosa en la hexoquinasa

(Hexoquinasa = ATP:glucosa fosfotransferasa = 2.7.1.1 )

D-Glucosa
( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
 La Vmax se alcanza cuando todos los centros
Velocidad inicial
activos están ocupados con sustrato

1/2 Vmax

Vmax (S)
=Vo
Km + (S)

Km Concentración de sustrato [S]

("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham,
C.M. Saunders College Publishing. 1999.)
 Relación entre Vo y [E]

Vo

[E]
La velocidad inicial es función lineal de la concentración de
enzima siempre que la concentración de sustrato sea alta
 Ecuación de Michaelis-Menten

Vo =
V max (S)
Km + (S)

K1 K2
E+S ES P
K-1

K2 + K-1
Km =
K1
 La Vmax se alcanza cuando todos los centros
activos están ocupados con sustrato
Velocidad inicial

1/2 Vmax

Concentración de sustrato [S]

Km

("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham,

C.M. Saunders College Publishing. 1999.)
Calculo de Km y Vmax por la representación de Lineweaver-Burk
(“dobles recíprocas” de Michaelis-Menten)

("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham,

C.M. Saunders College Publishing. 1999.)
 Parámetros enzimáticos
1. Km (constante para cada enzima) = concentración de S a la que la Vo es 1/2
Vmax. Es una medida de la afinidad del enzima por S. Cuanto menor es Km, mayor
es la afinidad del enzima por S

2. Kcat (constante para cada enzima) = número de recambio = número de moléculas

de sustrato convertidas en producto por molécula de enzima y unidad de tiempo, en
condiciones de saturación de sustrato.

3. Vmax = velocidad máxima teórica = la velocidad cuando todos los centros activos
están ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la realidad)

4. Unidad de enzima = cantidad de enzima que transforma 1 µmol de sustrato por

min = una forma común de expresar la velocidad

5. Actividad específica = unidades por mg de proteína total de la preparación

enzimática. En el caso de enzimas en suero: unidades/L
( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
Inhibición competitiva
+ Inhibidor

Unión del Inhibidor al centro

activo, compitiendo con S
• Aumenta Km
• No cambia Vmax

Inhibidor
Sustrato competitivo

(Adaptado de: ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
Inhibición no competitiva
+ Inhibidor Unión del Inhibidor a un sitio
del enzima distinto del centro
activo: no compite con S
• No cambia Km
• Disminuye Vmax
Sustrato

Inhibidor Sustrato
no competitivo

(Adaptado de: ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
Inhibición acompetitiva

+ Inhibidor
Unión del Inhibidor a enzima-S,
estabilizando el complejo
enzima-S pero impidiendo la
formación de producto:
• Disminuye Km
• Disminuye Vmax

Inhibidor
Sustrato acompetitivo

(Adaptado de: ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
 Inhibidor
Sustrato competitivo

Inhibidor
Sustrato Sustrato acompetitivo
Inhibidor
no competitivo

("Biochemistry" 5th ed. Berg, Tymoczko

and Stryer. Freeman and Co. 2002)
Efecto del pH sobre actividad enzimática

(Garret and Grisham)

Inhibición irrevesible de una enzima de síntesis de la pared bacteriana

("Biochemistry" 5th ed. Berg, Tymoczko

and Stryer. Freeman and Co. 2002)
Fármacos antitumorales que actúan como análogos de la citidina

• Citarabina
• Azacitidina
• Gemcitabina
MECANISMOS DE REGULACIÓN ENZIMÁTICA

• Regulación de la cantidad de enzima sintetizada por las células

• Degradación por proteasas citosólicas o lisosomales

• Inhibición reversible por productos

• Interacción con proteínas moduladoras

• Activacion/inhibición alostérica

- El modulador alostérico se une a un sitio distinto del centro activo

- La unión del modulador es reversible e implica cambio conformacional
- Suelen ser enzimas multiméricas
- Tienen cinética sigmoidea

• Modificación covalente:
- fosforilación
- ADP-ribosilación
- metilación

• Activación proteolítica de pro-enzimas

 Efectos alostéricos de moduladores positivo y negativo
(al no ser cinética michaeliana no se puede usar el término Km, sino el K0,5)

+ Modulador alostérico
positivo: favorece la forma R

El sustrato es
modulador positivo

+ Modulador alostérico
negativo: favorece la forma T

( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
 Enzima homotrópico alostérico
(al no ser cinética michaeliana no se puede usar el término Km, sino el K0,5)

( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
 Activación/inactivación de enzimas por fosforilación.
Ejemplo: glucógeno fosforilasa

Fosfatasa Quinasa
que activa que inactiva
otra enzima otra enzima

( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)
Una enzima puede tener varios mecanismos de regulación

("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham,

C.M. Saunders College Publishing. 1999.)
Activación de proenzimas por proteolisis: enzimas digestivas

Auto-activación
de quimotripsina
( ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed.
Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)