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OBJETIVOS
Identificar la influencia de los cambios de pH sobre la actividad enzimática.
CONSIDERACIONES TEORICAS
Para cada enzima existe un óptimo del pH a que crean las condiciones más favorables para
el mantenimiento de la conformación funcionalmente activa de la molécula. Los grupos amino
y carboxilo de los restos de aminoácidos ionizados a una magnitud de pH determinada,
participan en el mantenimiento de la conformación de la molécula proteínica necesaria para
la formación de los centros catalíticos de enzima y favorecen también a su ligación con el
sustrato. A una magnitud de pH distinta se altera la ionización de los grupos
correspondientes, y como resultado se rompen los enlaces que aseguran la formación de los
centros catalíticos, y la enzima se inactiva. A los valores de pH muy altos o muy bajos las
enzimas se desnaturalizan.
MATERIALES Y REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
1. Preparar las soluciones amortiguadoras: pH 5, 6,8 y 8, se toma 50 ml de PBS, y se
ajusta el pH correspondiente con Ácido cítrico al 0,1 M para el buffer de pH inferior
a 7 y el de pH alcalino con Hidróxido de Sodio.
2. Enjuagar la boca con aproximadamente 20 ml de agua destilada.
3. Colocar 3 ml de esta solución en cada tubo de ensayo, y rotular: 4, 5 y 6.
4. En los tres tubos colocar 3ml de la solución amortiguadora:
PREGUNTAS FINALES
Estas preguntas deben responderlas antes de realizar la práctica
a) ¿Qué es el pH?
b) ¿Qué es una sustancia amortiguadora o buffer y la importancia que tiene en la
estabilización del pH?
c) ¿Cómo está formado el Buffer PBS?
d) ¿Qué es la actividad enzimática de las enzimas y qué factores influyen para
que no se produzca?
BIBLIOGRAFÍA
HILL,1989.
ESPAÑOL1993
PRÁCTICA DE LABORATORIO