1 I.

Título:
2 SEROPREVALENCIA DE LA LEUCOSIS VIRAL BOVINA (LVB) EN LA RAZA BROWN
3 SWISS EN LA CUENCA LECHERA DEL DISTRITO DE PAUCARCOLLA.
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5 II. Resumen del Proyecto de Tesis:
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7 El presente trabajo de investigación se realizará en el distrito de Paucarcolla, provincia de
8 Puno que está situado en la zona norte de la región de puno y en la parte sur del territorio
9 peruano. Con el objetivo de determinar la seroprevalencia de la Leucosis Viral Bovina
10 (LVB), considerando los siguientes factores: sexo (machos y hembras), edad (menores a
11 dos y mayores a 2 años), donde las hembras menores a dos años se consideran vacías y
12 las mayores a dos años preñadas, a su vez las hembras preñadas se subdividirán según
13 la modalidad de servicio, por monta natural e inseminación artificial. Se trabajará al azar
14 con 84 animales de donde se obtendrán 07 ml de sangre de la vena yugular de cada
15 animal, mantenidos bajo un sistema de crianza semi-intensivo. La prueba diagnóstica a
16 utilizar será la prueba de ELISA indirecta, para la detección de anticuerpos contra la LVB,
17 con un porcentaje de sensibilidad de 95%, donde serán analizados en el laboratorio de
18 salud animal del CIP Chuquibambilla de la F.M.V.Z, UNA-PUNO, serán tabulados la
19 seroprevalencia, los datos serán procesados mediante la prueba estadística de
20 Chicuadrado, concluyendo que, en dicho distrito, existe o no la prevalencia de la actividad
21 de la leucosis viral bovina.
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23 III. Palabras claves:
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25 Leucosis Viral Bovina, Seroprevalencia, prueba de ELISA.
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27 IV. Justificación del proyecto:
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30 La crianza del ganado bovino es uno de los pilares muy importantes de nuestra estructura
31 económica y social, ya que la industria pecuaria específicamente la crianza del bovino
32 genera una gran cantidad de subproductos, de alto valor dando origen a largas cadenas de
33 transformación. El ganado bovino produce alimentos ricos en proteína animal de alto valor
34 nutritivo para satisfacer las necesidades del consumo humano de todas las edades lo que
35 es fundamental para el desarrollo y bienestar de los pueblos por que la oferta y la demanda
36 de estos alimentos se distancian cada vez más. (Rojas, R. 2007).
37 La ganadería vacuna de leche que se ha desarrollado con mayor población en el altiplano
38 es la raza Brown Swiss que otras razas lecheras; razón por la cual es un reto asumido por
39 profesionales que con identificación, constancia y entrega buscan aportar recientes y
40 mejores experiencias acorde a la realidad de nuestro medio en la crianza de esta raza.
41 (Rojas R. Deza H. 2010).
42 La leucosis enzootica bovina (LEB) tiene un impacto significativo en la producción, desde
43 el punto de vista sanitario y económico, debido a la mortalidad causada directamente por
44 la patología tumoral, por la alteración directa del sistema inmune del ganado infectado (que
45 produce el aumento concomitante de otras enfermedades infecciosas) y por las
46 restricciones que son impuestas a la exportación de ganado en pie, semen y/o embriones
47 infectados. (Trainin, 2005).
48 La LVB es importante económicamente no sólo por la pérdida de mercado para exportación
49 que requiere ganado libre de LVB, sino también por los costos en que se incurre para el
50 diagnóstico, por la muerte prematura de algunos animales como resultado del linfosarcoma
51 y la pérdida de canales en mataderos. (Betancur C. Rodas J. 2008).
52 Algunos estudios realizados in vitro sugieren que se vería alterada la calidad de la leche,
53 debido a la acción del virus sobre las células epiteliales de la mama. (Motton y Buehring,
54 2003).

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 55 Por otro lado, se generan pérdidas indirectas, derivadas del efecto del virus en el sistema
56 inmune: debido a los cambios que se producen en las poblaciones linfocitarias disminuye
57 la capacidad del animal enfermo de resistir al desarrollo de otras enfermedades, o de
58 generar una inmunidad adecuada post inmunización. (Erskine et al, 2011.)
59 La actividad pecuaria es una de las principales actividades que realizan las familias rurales
60 de la región de puno, la crianza de vacunos es muy importante para la actividad
61 agropecuaria dela región, aprovechando la producción de leche en la región, se encuentra
62 en manos de pequeños, medianos y grandes productores. La mayoría de los productores
63 se dedican a la producción ganadera, basado en la raza Brown Swiss, producen leche bajo
64 limitadas condiciones de higiene, resultante de malas condiciones de ordeño y de manejo
65 del producto, después del ordeño. A esto se suman el riesgo de contaminación y otros
66 problemas sanitarios de ganado, que contribuyen a la falta de inocuidad de la leche cruda.
67 (ministerio de agricultura, 2006)
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69 V. Antecedentes del proyecto
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72 A NIVEL MUNDIAL, Por medio de pruebas serológicas se ha demostrado una amplia
73 diseminación de la infección por VLB en América del Norte. En 1980 en Canadá se observó
74 9,3% del ganado de leche y 40-45% de los rebaños de leche infectados, mientras que 0,5
75 % del ganado de carne y .11-14% de los rebaños de engorda estaban infectados con VLB.
76 El porcentaje de rebaños infectados en cada provincia canadiense varió de 0-60% y
77 alrededor del 90% de los rebaños infectados están en el centro de Canadá (Manitoba,
78 Ontario, Québec). (Samagh BS et Kellar JA, 1982)
79 La leucosis viral bovina está presente en la mayoría de los países del mundo, con altas
80 prevalencias en el norte de Europa, estados unidos y Canadá. Algunos países de Europa
81 han erradicado la enfermedad. Ampliamente distribuida en América latina y en la argentina
82 las mayores prevalencias corresponden a establos lecheros (Giraudo, 2010).
83 A NIVEL DE PERÚ, Muestras de sangre de 680 vacas lecheras de varios hatos a nivel
84 nacional fueron examinadas para detector linfocitosis persistente y su relación con
85 leucemia bovina para determinar la incidencia de esta enfermedad en nuestro país de
86 acuerdo a este método, la incidencia de leucemia bovina en nuestro país fue de 3,1 %
87 (Hung A, 1980).
88 Una encuesta serológica para determinar la prevalencia de la leucemia bovina en el Perú
89 fue realizada usando la inmunodifusión en agar gel. La prevalencia para Lima 28,3 %, para
90 lea 6,7 %, en Junín de 11,1 %, Cajamarca 39,1 %, Ayacucho y Arequipa 0 %, la mayoría
91 del ganado afectado tenía entre 3 y 7 años de edad. De los 16 machos examinados 2 fueron
92 reactores positivos y pertenecían a hatos de la selva (Hung A, 1987).
93 Altos niveles de prevalencia que han encontrado fueron reportados en Arequipa (27 %),
94 Huánuco (84 %) y San Martín (33 %), en tanto que, en Cajamarca y Lima los niveles de
95 infección, tuvo una amplia variación a nivel de los establos o hatos lecheros. De esta forma
96 en Cajamarca y Lima prevalencias promedio de 32 % y 30 % con rangos de 0 a 42 % y
97 1690 % respectivamente; sin embargo, en Cajamarca se encontró una mayor prevalencia
98 51 % (FAO/IAE, 1993).
99 La prevalencia de la leucosis viral bovina en la cuenca lechera de Arequipa fue de 9151 %;
100 de los 261 hatos estudiados aparentemente 14,6 % estaban infectados, y la prevalencia
101 por sectores fue la siguiente: Santa Rita (20,7 %), Zamácola (19,7 %), Vitor (14,3 %), El
102 Cural (13,8 %), La Joya (10,3 %), lslay (9,5%), Majes (7,1 %), y Chiguata (O %). (Flores A,
103 2000).
104 En el valle de Sama perteneciente a la provincia y departamento de Tacna durante el
105 periodo Setiembre – Noviembre del 2008. Los resultados evidenciaron una prevalencia de
106 22,8 % ± 6, 7 % (34/149) para el valle de Sama, con relación a la edad, los bovinos mayores
107 a 6 años de edad) tienen una mayor probabilidad de contraer la enfermedad con un 10,06
108 % ± 7,3 % y menos susceptibles los bovinos entre 4 a 5 años con 5,36% ± 7,4% de

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 109 prevalencia. Con relación al sexo, los bovinos hembras son las más susceptibles con un
110 22,81 % ± 6,8 % de seroprevalencia y 0,00% son bovinos machos. (Romero S. 2008).
111
112 En el año 2013 se determinó la seroprevalencia del virus de la leucemia bovina en un
113 establo lechero de una universidad pública de Lima, Perú, a través de la determinación
114 de anticuerpos circulantes contra el virus. El establo se encontraba infectado, tal y como
115 muchos otros establos lecheros de la zona. Se encontró una prevalencia de 92.7%
116 (51/55), donde el 100, 97 y 60% de los animales mayores de 5 años, de 2 a 5 años y
117 menores de 2 años fueron seropositivos, respectivamente. (Rocío Sandoval M., Alfredo
118 Delgado C., Luis Ruiz G., Olger Ramos C. 2015).
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120 5.1.- Historia de la Leucosis Enzootica Bovina (LEB).
121 Las primeras descripciones de la LEB datan de 1871 en Alemania, realizadas por
122 Leisering. Se cree que los primeros casos aparecieron en la zona de Memel (Lituania) y
123 luego se desplazaron hacia el oeste del continente. En los años posteriores a la Segunda
124 Guerra Mundial se incrementaron los casos de enfermedad con tumores en Alemania y
125 otros países del este de Europa, lo que originó la profundización de las investigaciones
126 en esta zona. A su vez, vacas infectadas fueron exportadas desde las costas del Mar
127 Báltico a EEUU y así llegó la enfermedad a América, expandiéndose por EEUU y Canadá,
128 principalmente en el ganado lechero. Los demás países de América probablemente la
129 han adquirido a través de importaciones para mejorar los rebaños de los mismos
130 (Johnson y Kaneene, 1992).
131 5.2.- Definición y sinonimias.
132 La Leucosis Enzoótica Bovina (LEB) también llamada linfosarcoma, linfoma maligno,
133 leucosis bovina enzootica; es un proceso neoplásico común en ganado bovino. Los
134 primeros casos clínicos fueron observados en Bendixen en 1908 en Dinamarca (HUNG,
135 1984).
136 La Leucosis Enzoótica Bovina es una enfermedad viral de distribución mundial, la
137 enfermedad afecta principalmente a la especie Bos taurus y es producida por el virus de
138 leucosis Enzootica bovina (LEB). Los animales infectados con LEB en su mayoría
139 permanecen clínicamente normales, una tercera parte inmortaliza a los linfocitos B, en
140 este caso se observa una linfocitosis persistente y de 1 a 10 % desarrolla proceso tumoral
141 (Jonhson y Kaneene, 1991).
142
143 La LEB tiene un periodo de incubación prolongado y curso crónico e inaparente, del 30 a
144 70 % de los animales infectados son portadores asintomáticos, con un proceso de
145 linfocitosis persistente; solamente el 0.5 al 5% cursan con manifestaciones clínicas de
146 linfosarcoma. Afecta a bovinos adultos, aunque la infección puede aparecer en animales
147 jóvenes; las hembras sometidas a factores estresantes están expuestas a perder formas
148 más severas de la enfermedad (Resoagli et al, 1998; Rosciani et al, 1997)
149
150 5.3.- Agente etiológico.
151 La Leucosis Enzoótica Bovina es una enfermedad infecciosa viral sistémica, maligna y
152 mortal que afecta al sistema retículo endotelial de los bovinos. La enfermedad es causado
153 por el virus de leucosis bovina (VLB), este es un retrovirus oncogénico que pertenece a
154 la familia de retroviridae, género oncovirus tipo C mamífero. (Blood y Radostits, 1992)
155 Es un retrovirus y como tal posse un reverso-transcriptasa responsable de la síntesis de
156 una copia de ADN a partir de ERN viral. El ADN así formando (provirus) puede
157 conservarse en el núcleo de ciertas células del hospedador y esta propiedad original es
158 la causa de las características particulares de las diferentes infecciones debidas a
159 retrovirus. (Burny A, et al, 2002, Toma B, et al, 1990)
160

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161 Por otro lado, los retrovirus se caracterizan, porque estos se integran al genoma de la célula
162 hospedadora en forma de provirus (JOHNSON y KANEENE, 1991).
163
164 Las infecciones por retrovirus son persistentes se prolongan durante toda la vida del
165 organismo hospedador y corresponden a la presencia de "información de origen viral
166 integrada en las células del mismo. Bajo la forma integrada del agente patógeno (retrovirus)
167 está al abrigo de las defensas inmunitarias de su hospedador. Los retrovirus se presentan

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168 en los organismos infectados bajo la forma proviral mucho más que abajo la forma de
169 viriones completos, circulantes en los líquidos del organismos. (Evermann J, 1992,
170 Heuvel van den M, 2003).
171
172 5.4.- Vías De Transmisión.
173 Transmisión vertical
174 Los principales mecanismos involucrados en la transmisión vertical son:
175 • Transmisión intrauterina
176 • Transmisión vía calostro y leche
177 • Transmisión por productos reproductivos (semen, óvulo, embriones) (Esteban E,
178 2005). El VLB está presente en el calostro y leche de vacas infectadas. Tanto la
179 fracción celular como las fracciones libres de células, aunque éstas últimas con menor
180 frecuencia, pueden ser infecciosas, tanto de leche como de calostro. (Castelli M y
181 Manzini V, 2001). Las infecciones intrauterinas ocurren entre el 2 y el 10 % según el
182 rodeo (dependiendo de la susceptibilidad, la línea genética, etc.). No dependen del
183 número de parición, ni del momento de infección de la madre, y ocurre en etapas de la
184 gestación en que el ternero es inmunocompetente (a partir del tercer mes de
185 gestación). Estas infecciones pueden ser detectadas por métodos serológicos o
186 virológicos al momento del nacimiento. (Castelli M y Manzini V, 2001).
187
188 Otras formas de transmisión se dan por la leche y calostro, sin embargo, son poco
189 frecuentes, debido a que los anticuerpos presentes neutralizan al virus (Yoshikawa y
190 col., 1996; Hood, 1993).
191 El semen, secreciones, fluidos uterinos, orina y heces eventualmente serían fuente del
192 virus para un animal susceptible (Islas y col., 1992; OlE, 1996).
193
194 5.5.- Patogenia.
195 La Leucosis Enzootica Bovina (LEB), se reconoce en cuatro formas diferentes: adulta o
196 enzootica y cutánea en adultos, y tímica y de terneros en bovinos más jóvenes. También
197 que tan sólo la forma adulta o enzootica se halla asociada con infección por virus de la
198 leucemia bovina. Estudios serológicos, virológicos y epidemiológicos no han
199 proporcionado prueba alguna de infección en bovinos por las formas cutáneas, tímica o
200 de ternero. Sin embargo, existen informe relativo al aislamiento de un agente similar
201 serológica y morfológicamente al virus de la leucemia bovina. (Mohanty y Dutta, 1993).
202
203 El perfil genético del genoma huésped predispone el desarrollo de los tumores. El factor
204 más importante en la progresión clínica de la enfermedad es el complejo mayor de
205 histocompatibilidad. Los tumores se producen a causa de la infiltración de linfocitos B
206 trasformados, que se acumulan en tejidos tales como hígado, corazón, ojos, piel,
207 pulmones y ganglios linfáticos (Gillet et al, 2007).
208
209 La infección puede ser inaparente o puede evolucionar a una linfocitosis permanente y,
210 finalmente, al desarrollo tumoral, caracterizado por el aumento de tamaño de los ganglios

5
211 linfáticos e infiltraciones leucémicas en diversos órganos y tejidos. Algunos tumores,
212 principalmente los de casos terminales, no contienen virus o antígenos víricos de la
213 leucosis. Sin embargo, el cocultivo de linfocitos con células susceptibles, con o sin
214 mitógenos, da lugar a la producción de virus infeccioso de la leucosis bovina. Entre la
215 gama de células susceptibles en cultivo se encuentran células humanas, caninas y de
216 murciélago. (Quinn P, et al, 2005)
217
218 Durante el primer mes post infección las células infectadas son detectables en sangre,
219 alrededor de las 2 semanas, alcanzan un pico en la tercera semana y luego decrecen
220 rápidamente, lo que sugiere que el virus está entrando a nuevas células huésped en otros
221 tejidos (Fulton, et al.,2006).
222 La forma adulta de linfosarcomas es más frecuente en bovinos y se observa casi siempre
223 en el grupo de cuatro a ocho años de edad. El periodo de incubación es de cuatro a cinco
224 años. En el curso de este padecimiento influyen factores genéticos, inmunológicos y de
225 otra índole, y se comprueba también a menudo linfocitosis persistente, con manifestación
226 clínica subsiguiente de aumento de volumen de los ganglios linfáticos. (Quinn P, et al,
227 2005).
228 5.6.- Sintomatología.
229 Los síntomas se aprecian mayoritariamente después de los 2 años de edad y el periodo
230 de mayor frecuencia es entre los 5 y 8 años. La mayor proporción de los síntomas son
231 inespecíficos y variables, puesto que van a responder a la ubicación de las formaciones
232 neoplásicas y según el grado de afectación de los órganos. Se ha descrito anemia,
233 emaciación e infertilidad. También se han reportado momificaciones por tumoraciones en
234 las paredes del útero y cuernos uterinos. El signo más frecuente que lleva a pensar en la
235 enfermedad es el agrandamiento bilateral y más o menos simétrico de los ganglios
236 explorables. Se ha informado de ganglios pre escapulares que llegan a pesar 1.8 kilos.
237 (E. Chamizo 2005).
238 Aunque las células tumorales se originan de los tejidos linfoides, estos pueden localizarse
239 virtualmente en todos los órganos. La manifestación de los signos clínicos depende del
240 órgano comprometido, de la tasa de crecimiento tumoral, y del grado de difusión del
241 proceso neoplásico. En los vacunos adultos las lesiones se observan con mayor
242 frecuencia que el abomaso, corazón, útero y nódulos linfáticos viscerales y periféricos, y
243 en los animales jóvenes a nivel de nódulos linfáticos viscerales, bazo e hígado (Jonson
244 y Kaneene, 1991).
245 Cerca del 5 % de vacunos afectados padecen una forma sobreaguda de la LB y mueren
246 sin presentar signos clínicos previos. Esta muerte podría relacionarse con el compromiso
247 de glándulas adrenales, úlcera de abomaso o el bazo seguido de hemorragia interna. La
248 mayor parte de los casos sigue un curso subagudo (hasta de 7 días) o crónico (meses)
249 iniciándose el deterioro del animal con pérdida de apetito, anemia y debilidad muscular
250 (Blood, et al., 1992).
251
252
253 Pueden observarse trastornos circulatorios, respiratorios, digestivos, reproductivos,
254 urinarios y neurológicos, cuando estos órganos específicos están comprometidos; sin

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255 embargo, los cuadros clínicos típicos de mayor a menor grado son: pérdida de peso,
256 emaciación, disminución de producción láctea, agrandamiento de nódulos linfáticos
257 externos, apetito depravado, linfoadenopatía interna, parálisis de miembros posteriores,
258 fiebre, respiración anormal, protusión de ojos, diarrea o constipación y lesiones cardiacas
259 (Jonson y Kaneene, 1991; Ollas, 1996).
260
261 La presencia de deformaciones o masas tumorales subcutáneas en varias partes del
262 cuerpo, también es indicativo de la enfermedad, la presencia de células tumorales en las
263 extensiones de sangre (leucemia) es también bastante específica (Gatti, 2007).
264
265 En los que presentan el tumor maligno, la enfermedad tiene un curso crónico, y puede llevar
266 a la muerte desde el inicio de la misma. Cursa con disminución del apetito, emaciación,
267 infertilidad, lasitud, enflaquecimiento, desnutrición, fatiga, disminución de la producción
268 láctea, anemia, aumento del tamaño de los ganglios linfáticos externos, visibles en las
269 regiones del flanco e intercostales principalmente (Díaz, 2007).
270
271 5.7.- Lesiones.
272 Mientras que en la preleucosis no se advierten particularidades morfológicas, la fase
273 tumoral provoca lesiones características de determinados órganos o de todo el aparato
274 linfático. Los infiltrados leucocitos difusos o nodulares provocan una destrucción más o
275 menos marcada de la estructura orgánica y en muchos casos el aumento de volumen de
276 los órganos linfáticos (Schulz, y otros, 1991).
277
278 Resulta constante la localización de los tumores en los ganglios linfáticos, describiéndose
279 la extensión de afección de estos órganos en: Generalizada: afecta 76 a 100%,
280 Diseminada: afecta 26 a 75%, Localizada: afecta 1 a 25%. Los ganglios linfáticos afectados
281 son los iliacos, seguidos por los intratorácicos y mesentéricos y los superficiales (pre
282 escapular, pre crurales, y de la región cervical. Se muestran aumentados de tamaño en
283 forma difusa (Pestana, 1995).
284
285 Existen reportes de la ocurrencia de masas tumorales en tejido subcutáneo de la región
286 abdominal como así también adherencias en pleura. El útero se afecta también con relativa
287 alta frecuencia, con infiltración y engrosamiento de sus paredes, pero las estructuras fetales
288 rara vez se ven afectadas (Gatti, 2007). El musculo esquelético puede estar afectado de
289 igual forma (Pestana, 1995)
290
291 El abomaso puede presentar infiltración de sus paredes con un engrosamiento de las
292 mismas y hasta se pueden ver ulceras (Gatti, 2007).
293
294 En el intestino pueden observarse lesiones semejantes a las del abomaso (Pestana,
295 1995). En los riñones se ven lesiones infiltrativas con hemorragias visibles, nódulos y
296 atrofia del parénquima renal (Gatti, 2007).
297 5.8.- Diagnostico.

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298 El diagnóstico de la infección con el VLB en las vacas se realiza utilizando técnicas
299 serológicas como una prueba de Inmunodifusión o precipitación en gel de agar (IDGA),
300 es una prueba de Inmunodifusión doble conocida como prueba de OUCHTERLONY
301 interviene en la identificación de Anticuerpos e identificación de Antígeno,
302 Inmunotransferencia, Elisa, o el radioinmumoensayo (RAI) (Pestana, 1995).
303
304 Los anticuerpos contra el virus, y de utilidad diagnóstica son dirigidos contra la p24 y gp51
305 del virus y pueden ser detectados por la prueba de Radioinmunoensayo (RIA). Esta
306 prueba usa las proteínas p24 y gp51 como antígeno y emplea como marcador del
307 anticuerpo o antígeno un radioisótopo radioactivo. Esta prueba tiene una alta sensibilidad
308 sin embargo el costo del equipo y el riesgo de trabajar con radioisótopos son una limitante
309 para su aplicación (Fenner, 1993; Jonson y col., 1991).
310
311 La detección de anticuerpos en la leche por medio de ELISA puede ser de utilidad clínica
312 en la vigilancia de hatos previamente certificados como negativos. Anteriormente se hacía
313 el diagnóstico de acuerdo al número de linfocitos encontrados en análisis sanguíneos
314 (prueba de Bendixen o de Göetze), sin embargo, la linfocitosis persistente solo se observa
315 en el 30% de los animales infectados, por lo que ahora no se considera de utilidad. De
316 cualquier manera, si se hace el análisis sanguíneo en tres ocasiones con diferencia de
317 un mes y las tres veces se detecta una elevación del conteo linfocitario mayor a tres veces
318 la desviación estándar por encima de la media, se considera que el bovino es positivo a
319 LVB. (Kohara J, et al 2006; Quinn P, 2005).
320
321 AGIO es un método simple que se usa para detectar anticuerpos precipitantes, como
322 antígeno se emplea la gp 51 que se difunde radialmente hacia los antisueros, y cuando
323 estos encuentran el punto de equivalencia precipitan formando una línea visible. Esta
324 prueba posee 93 % y 75 % de especificidad y sensibilidad, respectivamente para detectar
325 anticuerpos en suero de animales individuales (Tizard, 1995; Manchego y col., 1996) La
326 prueba de ELISA se usa para la detección de anticuerpos lg G1 e lg M en suero y/o leche
327 (Jonson y col., 1991).
328 El principio de esta prueba es la detección del complejo antígeno- anticuerpo mediante el
329 uso de un antisuero (anticuerpo monoclonal) conjugado con un marcador como la enzima
330 peroxidasa, la misma que es detectada por el desarrollo de color al ponerse en contacto
331 con el substrato. La densidad óptica del color es medido en el espectrofotómetro y está
332 en relación directa a la cantidad del complejo antígeno-anticuerpo durante el ensayo
333 (Nielsen y col., 1996; OlE, 1996; Tizard, 1995).
334 5.8.1.- Diagnóstico Diferencial.
335 Éste depende de los órganos afectados por los linfosarcomas, por ejemplo, el
336 linfosarcoma

8
337 abomasal puede confundirse con una úlcera o enfermedad de John, si afecta las raíces
338 nerviosas de la médula espinal debe diferenciarse con rabia, espondilosis y otras
339 enfermedades con signos nerviosos. (Barrientos P, et al, 2008).
340
341 5.9.- Tratamiento.
342 No existe ningún tratamiento para esta enfermedad (Díaz, 2007).
343 El ganado afectado puede vivir durante un corto tiempo mediante cuidados en la lactancia
344 o mediante tratamiento quirúrgico con el fin de eliminar la presión producida por el
345 espacio que ocupa las lesiones. En las vacas preñadas cuyos fetos son viables, estos
346 pueden ser extraídos mediante operación cesárea (Kahrs, 1994).
347
348 5.10.- Control Y Erradicación.
349 La metodología a seguir para el control y la erradicación depende de: la edad de los
350 animales afectados, el porcentaje de animales infectados en el rodeo, la infraestructura del
351 establecimiento y las prácticas de manejo (Castelli, y otros, 1999).
352
353 También depende en principio de la prevalencia de la infección en el rebaño, del valor de
354 los animales del rebaño, y de si existen indemnizaciones oficiales para las vacas
355 seropositivas sacrificadas (Radostits, y otros, 2002).
356
357 Hay que muestrear a todo el ganado de reciente adquisición y cuarentenarlo hasta tener el
358 resultado. Se recomienda deshacerse de todos los seropositivos, pero de no ser posible,
359 se deben mantener separados de los negativos, evitando cualquier contacto entre ellos.
360 (Van R, et al, 2000; Chamizo, 2005)
361 Se han aplicado con éxito las estrategias de análisis y eliminación tanto en los programas
362 de erradicación nacionales como en los desarrollados al nivel de las explotaciones
363 individuales. Se recomienda realizar el análisis serológico a intervalos de seis meses. En
364 países en los que la prevalencia de la infección por el BLV es demasiado elevada para
365 poder eliminar todos los animales seropositivos de las granjas, se deberían adoptar
366 prácticas de manejo dirigidas a reducir la diseminación de la infección. (Quinn, et al, 2005).
367
368 VI. Hipótesis del trabajo.
369
370 Ha = la seroprevalencia de la Leucosis Viral Bovina difiere entre sexo, edad, estado
371 reproductivo y método reproductivo en bovinos de raza Brown Swiss en el distrito de
372 paucarcolla.
373
374
375 VII. Objetivo general
376
377 • Determinar la Seroprevalencia de Leucosis viral bovina en vacunos de la raza Brown
378 Swiss el distrito de paucarcolla.
379
380 VIII. Objetivos específicos
381
382 • Determinar la Seroprevalencia de la Leucosis Viral Bovina Según Edad (menores a 2
383 años=41, y mayores 2 años= 43
384 • Determinar Seroprevalencia de la Leucosis Viral Bovina Según Sexo (machos=20 y
385 hembras=64)
386 • Determinar Seroprevalencia de la Leucosis Viral Bovina Según Estado Reproductivo
387 (preñadas por inseminación artificial=31, monta directa=21 y no preñadas (vacías) =12
388

9
389
390 IX. Metodología de investigación.
391

10
391 9.1.- Determinación del Tamaño de Muestra.
392 En caso de no conocer la población exacta se determinará mediante el método de 393
muestreo al azar estratificado, con un nivel de confianza de 95 % y un error de precisión
394 de 5 %, cuya fórmula empleada la siguiente (Miranda, 1987).
395
𝑧2(𝑝)(𝑞)
396 n= 𝑑2 n= = 84 animales

397
398 n = Número de animales (muestra)
399 Z2 = Valor de Z al 95 % de confiabilidad
400 p = Proporción de la población objeto de estudio, prevalecía
401 q = Complemento = 1 - p
402 d2 = Grado de precisión del muestreo al 90%
403
404 9.2.- Toma de Muestra de Suero Sanguíneo.
405 Se tomaron aproximadamente 7.0 mL de sangre de la vena yugular, en tubos al vacío sin
406 anticoagulante (vacutainer) a 84 vacunos Brown swiss, los tubos serán colocados
en 407 posición inclinada a 37 °C durante veinte minutos por lo que será necesario
centrifugar, 408 posteriormente los sueros sanguíneos se aislaran en viales y se
mantendrán en 409 congelación a -20°C, hasta el momento del trabajo en el laboratorio
de salud animal del 410 CIP chuquibambilla de la F.M.V.Z,UNA-PUNO.
411 9.3.- De los Animales.
412 Los animales para el presente estudio serán de la raza Brown Swiss donde se 413
seleccionarán para la toma de muestras en forma aleatoria simple, los cuales fueron 414
agrupados por sexo (hembras y machos), edad (menores y mayores de 2 años machos)
y 415 estado reproductivo hembras menores a dos años vacías y mayores a dos años
preñadas 416 (por monta natural e inseminación artificial) teniendo en cuenta el nivel de
producción que 417 sea ≥ a 6 kg de leche/día/vaca.
418
Sexo Macho Hembra

Menor Mayores Menor (<) Mayores (>) a dos años

Edad (<) a dos (>) a dos a dos (preñadas)
años años años Inseminadas Monta directa
(vacías) (IA) (MD)
N° de animales
10 10 31 21 12

Sub total 20 64

Total 84

419
420 9.4.- Método de Diagnóstico.
421 La pruebade kid de IDEXX Leukosis Serum X2, es un inmunoensayo enzimático para la
422 detección de anticuerpos frente al virus de la leucemia bovina (BLV) en suero y plasma
423 individuales.
424 Descripción y principios.

11
425 Las placas de micro titulación se suministran tapizadas con antígeno inactivado. Las 426
diluciones de las muestras que van a ser procesadas se incuban en los pocillos.
Cualquier 427 anticuerpo especifico frente a BLV de se une al antígeno que tapiza los
pocillos y forma un 428 complejo antígeno-anticuerpo en la superficie del pocillo. El
material que no ha quedado 429 unido se elimina de los pocillos mediante lavado. A
continuación, se añade un conjugado 430 formado por una IgG anti-rumiante marcada
con la enzima peroxidasa, susceptible de

12
431 unirse a los anticuerpos de bovino que formaron el complejo con el antígeno de BLV. El 432

13
conjugado no unido se elimina mediante lavado, y se añade un substrato TMB a los 433 pocillos. El
grado de color desarrollado (densidad óptica medida a 450nm) es directamente 434 proporcional a la
cantidad de anticuerpo específico frente a BLV presente en la muestra. 435 El resultado se obtiene
comparando la densidad óptica de las muestras con la densidad 436 óptica del control positivo.
437 Procesamiento de la prueba de ELISA.
438 1. Obtener la placa (o placas) tapizada(s) con antígeno y anotar la posición de la
muestra. 439 Si no se utiliza toda la placa, separar únicamente los pocillos necesarios
para analizar las 440 muestras. Guardar el resto de pocillos, junto con el desecante, en
la bolsa de plástico de 441 cierre hermético reutilizable y volver a almacenar a 2-8°C.
442 2. Dispersar 90 μl de Diluyente de muestra en cada pocillo.
443 3. Dispersar 10 μl de control positivo (CP) NO DILUIDO en pocillos duplicados.
444 4. Dispersar 10 μl de control negativo (CN) NO DILUIDO en pocillos duplicados.
445 5. Dispersar 10 μl de muestra NO DILUIDA en los pocillos apropiados.
446 6. Mezclar el contenido de los pocillos golpeados levemente la placa o usar un agitador
de
447 placas.
448 7. Cubrir la placa e incubar 60 minutos (+-5min) a +37°C (+-3°C) o 14-18 horas a 18-
26°C. 449 Para ambas opciones las placas deben de estar selladas herméticamente o
deben cubrirse 450 e incubarse en una cámara húmeda usando cubiertas de placa
para evitar evaporación.
451 8. Eliminar el contenido liquido de cada pocillo y lavar cada pocillo con aproximadamente 452
300 μl de solución de lavado 3 veces. Evitar que las placas se sequen entre los lavados y 453 antes
de añadir el reactivo siguiente. Después de lavado final, eliminar el fluido de lavado 454 residual de
cada placa golpeándola sobre material absorbente.
455 9. Dispersar 100 μl conjugado en cada pocillo.
456 10. cubrir la placa e incubar durante 60 min. (+-5min.) a +37°C (+-3°C). Las placas
deben 457 de estar selladas herméticamente o incubarse en una cámara húmeda
usando cubiertas 458 de placa para evitar evaporación.
459 11. Repetir el paso 8.
460 12. Dispersar 100 μl de sustrato TMB n.°12 en cada pocillo.
461 13. Incubar a 18-26°C durante 15 minutos (+-1min).
462 14. Dispersar 100 μl de solución frenado n.°3 en cada pocillo.
463 15. Leer los resultados a una longitud de onda de 450 nm.
464
465 Estimación de la prevalencia
466 Para poder estimar la prevalencia serológica del VHB-1 se realizara mediante la
siguiente 467 fórmula (Thrusfield, 1990).
468 469
470
471 Número de muestras positivas
472 P = ------------------------------------------------- X (100)
473 Total de muestras
474
475 9.6.- Método estadístico.
476 Los datos cuantitativos discretos de las variables en estudio (frecuencia de Leucosis
Viral 477 Bovina) serán procesados mediante la utilización de la prueba estadística de
Chi cuadrada 478 para contrastar la diferencia ó semejanza por efecto de los factores
como edad, sexo y 479 estado productivo de los animales; para lo cual se utilizará la
siguiente formula (Thursfield,
480 1990).
𝟐

14
481 𝑿𝟐𝒄 = ∑ (𝑶𝒊𝑬−𝒋𝑬𝒋)

482
483 Donde:
484 𝑋𝑐2 = Valor de Ji – cuadrado calculado.
485 𝑂𝑖 = Valores observados de Leucosis Viral Bovina (LVB). 486 𝐸𝑗 = Valores esperados
de leucosis viral Bovina (LVB).

15
486 = Sumatoria.
487
488 X. Referencias.
489

1. Chamizo Pestana, E.G. (2005). Leucosis bovina enzootica – revisión. Revista

electrónica veterinaria 7: 1 – 25.
2. Choudhury B, Finnegan C, Frossard J-P, Venables C, Steinbach F. (2013). Colostrum
replacer and bovine leukemia virus seropositivity in calves. Emerg Costa R, de Oliveira
A, Salardane I, Ferreira P, Côgo R, Molinari D. 2013.
3. Baruta, D. A, y otros. (2011). Cátedra Enfermedades Infecciosas. Facultad de ciencias
Veterinarias, Universidad nacional de la Pampa 2011.
4. Betancur, C., y J. Rodas. (2008). Seroprevalencia del virus de la leucosis viral en
animales con trastornos reproductivos de montería. Rev. MVZ Córdoba. 13(1): 11971204.
5. Blood DC, Radostis OM, Gay CC, Blood DG, Hinchcliff, KW (1992) Medicina
veterinaria. Tratado de las enfermedades del ganado bovino, ovino, porcino, caprino
yequino. 7tma edición, editorial lnteramericana Me Graw-Hill, México, 1587 pp.
6. Blood, D O (1992) Medicina Veterinaria. Volumen 11 7 ma Edición Pág. 87-95
7. Chamizo EG et Brito R (2000): Leucosis bovina enzootica como causa de ineficiencia
reproductiva en el ganado lechero. ARA (2), 85 pp.
8. Daniel, W. (1996). Bioestadística: base para el análisis de las ciencias de la salud. 3ra
ed. Ed. Limusa. Mexico. p. 198-209
9. Díaz Pinto, André (1999): Prevalencia del virus de la leucosis viral Bovina en el centro
poblado menor de Obenteni Gran Pajonal- Región Ucayali, 56 pp.
10.Erskine, R.J., Bartlett, P.C., Sabo, K.M., & Sordillo, L.M. (2011). Bovine Leukemia
Virus infection in dairy cattle:Effect on Serological Response to Immunization against J5
Escherichia coli Bacterin. Veterinary Medicine International vol. 2011
11.FAO, (Organización de las naciones unidas para la agricultura y la alimentación)
red de cooperación técnica ONU, (2006). Manual de técnicas de diagnóstico
virológico.
12.FAOIIAEA. (1993). Leukosis ELISA kit. lndirect enzyme immuno assay for detection of
bovine antibody to bovine leucosis virus. Version-BLV 1.01. Programe. Animal
production and health section of the Join FAOIIAEA. Division of Nuclear Techniques in
Food and Agriculture. Viena, Austria.
13.Ferrer JF (1980): Bovine lymphosarcoma. Ad Vet Sci Comp Med, 69 pp.
14.Flores Albino Alicia (2000): Seroprevalencia del virus de la leucosis Vira Bovina en la
cuenca lechera de Arequipa
15.Flores, A. y H. Rivera (2000). Seroprevalencia del virus de leucosis bovina en la cuenca
lechera de arequipa. Revista de investigaciones veterinarias del Perú., vol. 11 num. 2
UNMSM
16.Giraudo, J., E. Bergamo, M. Schneider, G. Magnano, A. Macias, E. Sticotii y M. 17.
Macio. (2010). FA y V, UNRC. LEUCOSIS ENZOOTICA BOVINA. Argentina
18.Hung A, (1987): Bovine Leukemia infectión in Perú. IVITA: 30 años de ciencia y
tecnología pecuaria peruana, Martegraf E. l. R. L. Lima, 436 pp.
19.Hung, A (1981): Diagnóstico serológico de infección a virus de la leucemia bovina VLB.
IVJT A: 30 años de ciencia y tecnología pecuaria peruana, Martegraf E.I.R.L. Lima. 436
pp.
20.IDEXX Leukosis Serum X2 Ab Test (2010). https://www.idexx.com
21.Johnson R., and J.B. Kaneene. (1992). Bovine leukaemia virus and enzootic bovine
leukosis. Vet Bull 62, 287-312
22.MINAGRI, (2015) Ministerio de Agricultura. OIA
23.MINAGRI, (2017) Producción Agrícola Ganadera I Trimestre. OIA
24.Motton, D.D., & Buehring G.C. (2003). Bovine leukemia virus alters growth properties
and casein synthesis in mammary epithelial cells. J Dairy Sci. 86(9):2826-38

16
490 25.Peizer, K.D. (1997). Economics of bovine leukemia virus infection. Veterinary clinios of
491 North America: food animal practice 13 (1): 129-141
492 26.Trainin Z. and J. Brenner (2005). The direct and indirect economic impacts of bovine
493 leukemia virus infection on dairy cattle. Israel J Vet Med 60: 94 – 105
494 27.Valencia Arce, Gustavo Menélik (2008); Determinación de la Prevalencia de abortos
495 causada por leucosis viral bovina (LVB) en vacas Holsteins Friesian (Sos taurus), en el
496 periodo de abril- setiembre con la prueba de Elisa en establos de la sección "A" de la
497 28. Rojas, R.Y Deza, C. H. (2010) “Juzgando el Brown swiss”
498 29. Sandoval, R., A. Delgado, L. Ruiz y O. Ramos. (2015). Determinación de la
499 seroprevalencia del virus de la leucemia bovina en un establo lechero de lima, Perú.
500 30.Schawartz, 1; Bensadid, A; Polack, B; Perrin, B; Berthelemy, M, and Levy, D.
501 (1994). In vivo leukocyte tropism.
502 31. Thursfield M., (1990). Epidemiologia veterinaria editorial Acribia, S.A. Zaragoza-
503 España. P. 223-230
504
505 XI. Uso de los resultados y contribuciones del proyecto.
506
507 Los resultados del estudio serán útiles para el diagnóstico patologías o alteraciones frete
508 al virus de la leucosis Bovina (BLV)que afectan negativamente a la producción y
509 reproducción de estos animales. mediante la determinación de estas constantes se
510 proporcionará al fisiólogo, clínico y patólogo, datos que le permitirán hacer comparaciones
511 y diagnósticos, en los diferentes procesos que afecten a esta especie animal y en el
512 ambiente académico en la formación de estudiantes, considerando en muestras
513 individuales de suero o plasma. Sanguínea serán herramientas importantes en el
514 diagnóstico de enfermedades clínicas y subclínicas, y su diferenciación.
515
516 XII. Impactos esperados.
517
518 I. Impactos en Ciencia y Tecnología
519
520 Los bovinos producen leche, carne y piel que son transformados en otros
521 subproductos. así también, la ciencia y la tecnología tienen una relación directa e
522 indirecta con el proceso productivo de estos, debido al empleo de diversos equipos
523 tecnológicos empleados en todo el eslabón productivo, así como los alimentos que
524 se consumen, los productos que se compran, los medicamentos que se utilizan por
525 tanto la investigación que se propone, finalmente tiende a incrementar la producción
526 y productividad en la crianza de vacunos con la aplicación de los resultados
527 (conocimiento) logrados en el altiplano.
528
529 II. Impactos económicos
530
531 El impacto económico de esta enfermedad radica en la restricción que genera la
532 infección para la exportación de bovinos y la comercialización de semen y
533 embriones, las pérdidas por aumento de los reemplazos, pérdidas de ingresos por
534 decomisos de carcasas a causa de los linfomas, disminución de la eficiencia
535 reproductiva y disminución de la producción de leche.
536
537 III. Impactos sociales
538
539 La crianza de bovinos ha elevado el número de familias involucradas en la cadena
540 productiva, así como: generación de empleo, alivio de la pobreza, nutrición humana
541 y seguridad alimentaria, además el consumo de proteínas de origen animal
542 garantiza la seguridad alimentaria de las poblaciones.

17
543
544 IV. Impactos ambientales
545
546 En la ejecución del proyecto si existiese animales positivos se evitará la
547 permanencia productiva, reproductiva de estos así eludir la contaminación de
548 campos de pastoreo, ríos, etc. y extirpar la descendencia de animales infectados a
549 fin de evitar la diseminación de dicha enfermedad.
550
551 XIII. Recursos necesarios.
552

18
13.1. Materiales para la obtención de muestras.
13.1.1. Población y muestra.
13.1.1.2. Muestra.
Cada muestra está constituida por 84 vacunos de la del distrito de Paucarcolla, provincia
de puno del departamento de puno.

13.2. Materiales para la toma de muestras sanguíneas

• Alcohol yodado al 3%
• Tubos vacutainer de 10mL
• Agujas Hipodérmicas 21G. X 2 pulgadas.
• Frascos colectores de suero sanguíneo (viales criogénicos) x 2mL
• Lapiceros de tinta indeleble.
• Pipetas automáticas o manuales.
• Guantes de exploración.
• Algodón
13.3. Materiales para él envió de muestras
• Cajas térmicas (tecnopor).
• Geles.
• Plástico y papel.
13.4. Otros Materiales
• Sogas
• Cámara fotográfica.
• Medios audiovisuales.
• Jabón carbólico.
• Mocheta.
• Formatos.
13.5. Materiales para la prueba de ELISA.
• Algodón
• Puntas de pipetas desechables.
• Probetas graduadas para la solución de lavado.
• incubadora
• Lavador de placas, manual semiautomática o automática.
• Vortex o equivalente.
• Bandejas para depósito de reactivos.
• Agua destilada.
• cubiertas de placas (tapa, papel de aluminio o adhesivo).
• Cámara húmeda.
• Lector de placas de 90 pocillos (equipo con filtro de 450nm).
• micropipetas de precisión y micropipetas multidispensadores.
• Papel toalla
13.5.1. Reactivos.
• 1 Placa tapizado con antígeno BVL.
• 2 Control negativo (Negativo control ELISA (bovine) x 1Ml) • 3 Control positivo
(positivo control ELISA (bovine) x 1Ml
• 4 Conjugado.
• 5 Diluyente de la muestra.
• A Substrato TMB n.°12.
• B Solución de frenado n.°3

19
 • C Solución de lavado concentrada (10X).
13.5.2. Equipos
• Estufa incubadora a 37ºC
• Balanza analítica
• Refrigeradora convencional • Congeladora a -20ºC
• Potenciómetro.
• Cronómetro de tiempo.
• Lector de ELISA
• Vortex
• Micro pipeta canal simple 20 a 200 μl
• Micropipeta canal simple 100 a 1000 μl
• Micro pipetas multicanal 20-200UlMateriales y equipos
553
554 XIV. Localización del proyecto.
555
556 El presente estudio se realizará en el distrito de Paucarcolla, de la provincia de puno, región
557 Puno, se realiza un recorrido de aproximadamente de 12.3 Km al norte de Puno. El Distrito
558 de Paucarcolla se encuentra ubicado en las coordenadas geográficas situadas entre
559 15°44´46´´S y 70°03´31´´O, según el INEI, Paucarcolla tiene una superficie total de 170,4
560 km². Este distrito se encuentra situado al norte de la provincia de puno, en la zona norte
561 del departamento de puno y en la parte sur del territorio peruano. Su capital Paucarcolla
562 se halla a una altura de 3.845 msnm. (SENAMHI 2012).
563
564 XV. Cronograma de actividades.
565
ACTIVIDAD

A S O N D E

Elaboración del proyecto de X

investigación
Presentación X

Revisión X

Aprobación del proyecto X

Preparación del material X

Toma de muestras X

Procesamiento de datos X

Análisis de datos X

Elaboración de borrador de tesis X

Revisión de borrador de tesis X
Sustentación X X
566
567 XVI. Presupuesto
568
Descripción Unidad de Costo Unitario Cantidad Costo total (S/.)
medida (S/.)
20
 Material de
campo

Cajas térmicas Unidad 15.00 02 30.00

Agujas ciento 0.30 100 30.00

Hipodérmicas
Tubos vacutainer Ciento 1.00 100 100.00

569
Viales Ciento 0.50 100 50.00

Algodón Paquetes 15.00 1 15.00

Alcohol yodado Frascos 15.00 1 15.00

Libreta de campo unidades 5.00 1 5.00

Material de
laboratorio

Tips ciento 0.50 100 50.00

Papel toalla unidad 5.00 1 5.00

Material de
escritorio
unidad 0.50 2 1.00
Bolígrafos

Reactivos

KITS ELISA Unidad 1 1.600

Pasajes y 200.00
viáticos

cámara digital unidad 350.00 1 350.00

Laptop unidad 2.200.00 1 1800.00

TOTAL 4250.0

570
571 XVII. Financiamiento.

572 El financiamiento de este presente proyecto de investigación será de la siguiente manera:

573 • 80% tesista.
574 • 20 % CIP CHUQUIBAMBILLA

21
575

22