La Metilación del ADN regular la expresión genética

La metilación es una de las muchas modificaciones epigenéticas del

ADN; los patrones de metilaciones del ADN al nacer influyen sobre el
riesgo de una serie de enfermedades relacionadas con la edad.
Algunos nucleótidos, principalmente la citadina en la posición 5 del anillo
pirimidínico, pueden sufrir una metilación enzimática sin que afecte el
apareamiento de Watson y Crick. Los residuos de citidina metilada casi siempre se
encuentran asociadas con una guanosina, como el dinucleótido00’ CpG, y, en el
ADN de doble hebra, la citidina complementaria también esta metilada, dando
lugar a una secuencia palindromica.
5’CpG 3’
3’GpC 5’
La presencia de citidina metilada puede examinarse por la susceptibilidad a las
enzimas de restricción que cortan el ADN por lugares que contienen grupos CpG
solo si la citidina no esta metilada, en comparación con otra enzima de restricción
que cortan esté o no metilado el grupo CpG. Además, puede utilizarse una técnica
de secuenciación por bifulfito que se basa en a la reactividad diferencial de la
metilcitidina para, de esa forma, cartografiar con mayor precisión los lugares con
metilación. Muchos genes del ser humano (50%) contienen las denominadas islas
CpG en las regiones dde sus promotores. En general, esas CPI no están
metiladas, excepto en algunas situaciones patológicas y el cáncer. Hoy es
evidente que la metilación generalmente se asocia con regiones de ADN que
son menos activas transcribiendo ARN. Para iniciar la transcripción puede
necesitarse la desmetilación de un promotor, y también puede requerirse la
desmetilación de una secuencia de codificación del gen para la transcripción sea
eficiente. La regulación del estado de metilación de ciertos promotores genéticos
en el musculo tras el ejercicio.

Conceptos avanzados
Regulación epigenética de la expresión genética
La metilación es uno de los aspectos del estudio de la epigenética, un campo
amplio en el que, se abordan modificaciones hereditarias del ADN y de las
proteínas que, aunque no alteren la secuencia del ADN, tienen un impacto
significativo en la expresión genética. Los mecanismos de control epigenicos
comprenden la metilación del ADN y la acetilación, metilación o fosforilación de
histonas. La nutrigenómica valora el papel de los factores nutricionales precoz
durante un periodo breve puede ocasionar una impronta nutricional mediante
mecanismos epigenicos, que podrían cebar la maquinaria de la expresión genética
para el desarrollo de la enfermedad de los años siguientes. Así pues, el riesgo de
enfermedades relacionadas con la edad, como el síndrome metabólico, la
obesidad, la aterosclerosis, diabetes, la artritis y el cáncer, puede verse afectado
por la dieta y por los factores del estilo de vida durante la juventud. El impacto de
los factores epigenicos puede modificar nuestro abordaje asistencial, recalcando la
importancia de la medicina de la medicina preventiva y la intervención precoz para
controlar las enfermedades relacionadas con la edad, ya que el punto de partida
para la susceptibilidad de una enfermedad puede situarse muchos años antes de
que aparezcan los síntomas. La hipermetilacion de los genes supresores de
tumorales se observa a menudo en canceres humanos se están investigando
fármacos que inhiben la actividad de la metiltransferasa del ADN, en un intento de
reactividad esos genes reprimidos como el tratamiento de las leucemias. Los
genes que regulan negativamente el crecimiento regular suelen estar reprimidos
mediante desacetilación de las histonas, creando una forma mas compacta (no
transmisible) de cromatina. Los inhibidores de las histonas desacetilasa
(HDAC) se están estudiando como tratamiento de algunos tipos de cáncer de
crecimiento rápido, como los linfomas.

Corte y empalme alternativo del ARNm

El corte y empalme alternativo da lugar a numerosas variantes de una
proteína a partir de un único pre-ARNm
En el capitulo 33 presentan se presenta el concepto del corte y empalme del
transcrita inicial del pre-ARNm se puede empalmar de forma alternativas, y el
porcentaje de transcritos por corte y empalme alternativo es de al menos 50%,
aunque según algunas estimaciones puede llegar hasta un 80%. Este proceso
puede aportar la suficiente diversidad para explicar la singularidad individual, a
pesar de las similitudes en la dotación genética de las especies. Así mediante el
corte y empalme alternativo se puede eliminar uno o varios exones en algunas
ocasiones y no en otras. Como la mayoría de genes tiene varios exones en
algunas ocasiones y en otras no en otras. Como la mayoría de los genes tiene
varios exones (con una media entorno a siete) algunos pre-ARNm pueden dar
lugar finalmente a numerosas versiones diferentes de ARNm y, por tanto la
proteína fianl. Estos productos proteicos pueden diferir solo en algunos
aminoácidos o pueden tener diferencias importantes, a menudo con funciones
biológicas diferentes. Por ejemplo, la posibilidad de eliminar un exón puede afectar
la localización de la proteína en la célula, a si se secreta o no o a si hay isoformas
en el musculo esquelético y cardiaco. El corte y empalme alternativo en
determinadas etapas del desarrollo o en ciertas condiciones. EL cerebro humano
hay una familia de proteínas de adhesión a la superficie celular, las neurexinas.
Que median en la red compleja de interacciones entre aproximadamente 10 12
neuronas. Las neurexinas se encuentran entre los genes humanos de mayor
tamaño y a partir de solo tres genes se generan cientos de isoformas, quizá miles,
mediante la existencia de distintos promotores y del proceso de corte empalme
alternativo. De esta forma es posible una gran variedad de comunicaciones
intercelulares necesarias para el desarrollo de las sofisticadas redes neurales.
Probablemente, las neurexinas tengan un grupo igualmente complejo de isoformas
de ligandos, lo que proporciona una enorme flexibilidad para las interacciones
celulares reversibles durante el desarrollo del sistema nervioso central.

CONCEPTOS CLINICOS
CORTE DE EMPALME ALTERNATIVO Y EXPRESION DE UN GEN
ESPECIFICO DE TEJIDO: UNA CHICA CON TUMEFACCION
CERVICAL
Una chica de 17 años noto una tumefaccion en el lado izquierdo del cuello. Por lo
demas, se encontraba bien, pero su madre y su tio materno se habian sometido en
el pasado a una exturpacion de tumores suprarrenales. Se extrajo sangre y se
envio al laboratorio para determinal la calcitonina, cuyas concentraciones
resultaron ser superiores a las normales. La anatomia patologica de la masa
tiroidea extirpada confirmo el diagnostico de carcinoma medular del tiroides. Esta
familia tiene una mutacion genica que da lugar a una patologia conocida como
neoplasia endocrina multiple de tipo 2ª (MEN 2ª, MULTIPLE ENDOCRINE
NEOPLASIA 2ª) La MEN 2ª es un sindrome canceroso autosomico dominante con
alta penetracia causado por una mutacion de la linea germical en el protooncogen
RET. Alrededor del 5-10% de los canceres se deben a mutaciones de las lineas
geminales, pero se necesitan otras mutaciones somaticas para que el cancer se
desarolle.

Comentario. LA expresion del fen de la canlcitononina es un ejemplo de los

diferentes mecanismos que pueden regular la expresion genica y dar lugar a
productos genicos especificos del tejido que poseen actividades muy diferentes. El
gen de la calcitononina consta de cinco exones y utiliza dos lugares de
señalizacion de poliadenilacion alternativos. En la glandula tiroides, las celulas
medulares C producen calcitonina al utilizar un lugar de señalizacion de
poliadenilacion asociado con el exon 4 para transcribir un pre-ARNm que incluye
los exones 1-4. Los intrones asociados se cortan y se desempalman y el ARNm se
traduce para dar lugar a la calcitonica; la calcitonina elevada es diagnostica de
esta dolecia., Sim embargo, en el tejido neural, se utiliza una segunda
señalizacion de poliadenilacion proxima al exón 5. Esto da lugar a un pre-ARNm
formado por cinco exones y sus intrones intercalados. A continuacion, este pre-
ARNm mayor se corta y se empalma, dejando un ARNm que inclute los exones 1-
3 y 5, que luego se traduce en un potente vasodilatador, el peptido relacionado
con el gen de la calcitonina (CGRP, calcitonin gene-related peptide)

Edicion postrancripsional del ARN

El editosoma modifica la secuencia de nucleotidos interna de los
ARNm maduros
La edicion de Arn conlleva una alteracion mediada por enzimas del ARNm antes
de la traduccion. Este proceso, realizado por editosomas (cap.33), puede consistir
en la insercion, delecion o conversion de nucleotidos en la molecula de ARN. Al
igual que el corte y empalme alternativo, la sustiticuon de un nucleotido por otro
puede dar lugar a diferencias especificas de tejido en los transcritos.Por ejemplo,
el gen APOB de la apoliproteina de baja densidad, codifica un transcrito de ARNm
de 14.1 kb en el higado y un producto proteico de 4.536 aminoacidos, la apoB100
(cap. 18). Sim embargo, en el intestino delgado, el ARNm se traduce en un
producto proteico denominado apoB48, que tiene 2,152 aminoacidos de longitud (-
48% de 4.536), cuyos aminoacidos son identicos a los primeros 2.152 de la
apoB100. La diferencia en el tamaño de la proteina se produce porque, en el
intestino delgado, el nucleotido 6666 –se edita- por desaminacion de un unico
resoduo de citidina, convirtiendolo en un residuo de uridina. El cambio resultante,
desde una glutamina a un codón de terminacion, provoca la terminacion prematura
con la produccion de apoB48 en el intestino.

Ademas de esta citidina desaminasa, hay otras enzimas que modufucan otros
ARNm antes de la traduccion, como las desaminasas de adenosina que actuan
sobre el ARN (ADAR, adenosine deaminases acting on RNA). La ADAR1 cataliza
la desminacion de la adenosina a residuos de inosina en ARN de doble cadena
(ARNdc), un proceso crucial para el desarrollo de las celular pruripotenciales
hematopoyeticas, y las mutaciones en esta enzima en los ratones provocan la
muerte precoz del embrion, La ADAR2 modifica el ARNm del receptor de
glutamato, lo que da lugar al cambio de un solo aminoacido necesario para la
funcion del receptor; el deficit de esta enzima conduce a la aparicion de
convulsiones y muerte neonatal en los ratones.

Interferencia por ARN

La interferencia por ARN (ARNi), que se comenta brevemente en el capitulo 33, es
otra forma de controlar la expresion génica. La ARNi funciona mediante ARN muy
pequeños y no codificante de 20.30 nucleotidos de longitud, conocidos como
micro-ARN (miARN). Participacion en la atenuacion o represion de la traduccion
uniendose a la UTR 3’ de un ARNm y reclutando factores que inhiben la sistesis
de proteinasm o en la destruccuon del ARN m con lo que cambia la expresion
génica de una forma que favoreceria la proliferacion. La ARNi es muy prometedora
para el tratamiendo de enfermades humanas en las que la inhibicion de la
expresion de un producto génico o la destruccion del ARN prodrian tener efectos
terapeuticos, como en las infecciones viricos o el cancer.

CONCEPTOS CLINICOS
LAS CONCENTRACIONES DE HIERRO REGULAN LA
TRADUCCION DE UNA PROTEINA TRASPORTADORE DE HIERRO:
VARON CON DISNEA Y CANSANCIO
Un varon caucasico de 57 años acudio a su medico de cabecera por disnea y
cancancio. Habia notado que la piel se le habia oscurecido. La evaluacion clinica
indico insuficiencia cardiaca con afectacion de la funcion del ventriculo izquierdo
por una miocardiopatio dilatada, concentracion serica baja de tetosterona y
aumento de la concentracion de glucosa en ayunas. La concentracion serica de
ferritina era muy elevada, >300 g/l, y se sospecho un diagnostico de
hemocramatosis hereditaria. Se trato con flebotomia regular hasta que la ferritina
serica llego a < 20 g/l (intervalo normal, 30-200 g/l) momento en el que se
aumento el intervalo serica de ferritina > 50 g/l.

Comentario. En situaciones de exceso de hierro, como en la hemocratosis,

aumenta la sintesis de ferritina, una proteina de union y almacenamiento de hierro.
Por el contrario, en casos de deficiencia de hierro, existe un aumento de la sinteis
del receptor de transferrina, que interviene en la captacion de hierro. En ambos
casos, las moleculas de ARN no cambian, y tampoco hay modificaciones en la
sintesis de los ARNm correspondientes. Sin embargo, el ARNm del receptor de
transferrina y el ARNm de la ferrinita contienen una secuencia especifica conocida
como elemento de respuesta al hierro (IRE, iron-response element). Una proteina
especifica de union al IRE puede unirse al ARNm. EN caso de deficiencia de
hierro, la proteina de union al IRE se une al ARNm de la ferritina, impidiendo la
traduccion de la ferritina, y tambien se une al ARNm del receptor de tranferrina,
altas. En casos de exceso de hierro sucede lo contrario; aumenta la traduccion del
ARNm de ferritina, mientras que el ARNm del receptor de tranferrina se degrada,
las concentraciones sericas de ferritina son altas y las del receptor de transferrina,
bajas (fig, 35.8), alrededor del 10% de la poblacion de Estados Unidos es
portadora del gen de la hemocromatosis hereditaria, pero solo los homocigotos
presental la engermedad, (V, tambien la descripcion del metabolismo del hierro y
de la hemocromatosis en el cao. 22.)

Ejemplos de tipos de restriccion de genes bialelicos en el ser humano

Impronta genomica: En los genes autosomicos, la impronta puede ser especifica

del tejido (expresion monoalelica en algunos tejidos, bialelica en otros). Algunos
ejemplos son el factor de crecimiento similar a la insulina-2 (insulin growth factor2)
y el gen de susceptibilidad al tumor Wilms (WT1)

Exclusion atletica: Elaboracion del producto de un solo alelo especificacmente en

un tejido; por ejemplo, sintesis de una unica cadena de inmunologlubina ligera o
pesada en un linfocito B solo desde un alelo.

Inactivacion del cromosoma X: Algunos genes del cromosoma X, en mujeres. Los

varones solo presentan un alelo de cada gen ligado al X, pero las mujeres tienen
dos, y uno esta inactivado al cancelarse practicamente el cromosoma X completo.

En algunos genes, aunque existen dos alelos en una celula en particular, solo es
uno de ellos es activo. Por tanto, el gen se comporta como su fuera monoalelico,
aunque en realidad es bialelico.

CONCEPTOS AVANZADOS
INACTIVACION DEL CROMOSOMA X
Los varoes tienen un cromosoma X, mientros que las mujeres tienen dos. Por
tanto, los genes del cromosoma X son bialelicos en mujeres y monoalelicos en
varones. Sim embargo, en las mujeres uno de los cromosomas X de cada celula
esta inactivado en una etapa precoz la embriogenesis. El X inactivado puede
proceder del padre o de la madre. Para una celula determinada, el gen que se
inactiva depende del azar, pero los descendientes de esa celula tendran
inactivado el mismo X. EL cromosoma X inactivo especifico X-Xi) que codifica un
ARN que tiene importante cometido en la inactivacion del cromosoma X. Ademas,
tiene lugar una metilacion de las islas, CpG en la mayoria de los genes del
cromosoma inactivado, lo que reprime su transcripcion. EL cromosoma X
inactivado se reactiva durante la ovogenesis en la mujer.
Activación preferencial del alelo de un gen
Los genes humanos tienen dos alelos, pero en ocasiones se
expresa solamente un alelo del gen
EL complemento normal de los cromosomas humanos consta de 22 pares de
cromosomas autosómicos y 2 cromosomas sexuales. EN cada uno de los pares
de autosomas, los genes están presentes en ambos cromosomas son bialelicos.
En circunstancias normales, los dos genes se expresan sin preferencia por uno de
los alelos del gen, es decir, pueden expresarse las copias materna y paterna del
gen, salvo que exista una mutación de un alelo que impida que esto ocurra.

En cuanto a los cromosomas sexuales, la situación es ligeramente distinta. Los

cromosomas sexuales son 2 tipos, X e Y; el X es bastante mayor que el Y: Las
mujeres tienen dos cromosomas X, mientras que los varones tienen un
cromosoma X y un cromosoma Y. Una región del cromosoma Y es idéntica a una
región del cromosoma X, pero el cromosoma X también contiene genes que no
tienen un homologo equiparable en el cromosoma Y, y algunos genes del
cromosoma Y son específicos, como es el caso de SRY, un gen que determina el
sexo. Se dice que estos genes son monoalelicos; no dan opción sobre que alelo
del gen se expresa.

Aparte de los casos de los cromosomas sexuales, no aparece que exista motivo
alguno por el cual los dos alelos de un gen no pueden expresarse. Sin embargo,
en el ser humano se han identificado genes bialelicos, pero de los que solo se
expresa con preferencia un alelo, materno o paterno, aunque ambos sean
perfectamente normales o idénticos. En consecuencia, solo se obtiene el 50% del
producto del gen, pero es funcionalmente activo. Se han identificado 3
mecanismos diferentes que pueden limitar la expresión de genes bialelicos en el
ser humano.

Los cortes y empalmes alternativos general múltiples ARNm

maduros a partir de un único transcrito de pre-ARNm
La mayoría de los ARNm eucariotas está formados por varios intrones y exones.
SI el corte fuera homogéneo, se produciría un único ARNm maduro a partir de un
determinado pre-ARNm, pero numerosos genes eucariotas sufren un proceso
denominado crote y empalme alternativo, en el que diferentes regiones del ARNm
son eliminadas del pre-ARNm, dando lugar a varios ARNm maduros con
secuencias diferentes. Cuando esos ARNm diferentes se trafucen, se sintetizan
varias isoformas proteicas. En el ser humano, casi el 60% de los pre-ARNm dan
lugar a varios ARNm maduros después de procesos de corte y empalme
alternativo. Aproximadamente el 80% de estos ARNm fruto de cortes y empalmes
alternativos dan lugar a alteraciones de las proteínas codificadas (algunos
episodios de corte tienen lugar en las regiones no traducidas 5’ y 3’). El corte y
empalme alternativo puede dar lugar a la inserción o delación de aminoácidos en
la secuencia proteica, a cambios en los marcos de lectura o incluso a la
introducción de nuevos codones de terminación. El corte y empalme alternativo
también puede añadir o eliminar secuencias de ARNm que pueden alterar
elementos reguladores que afecten a la traducción, a la estabilidad del ARNm o a
la localización subcelular. En vertebrados, los intrones de muchos genes de
proteínas ribosómicas albergan las secuencias de los ARN nucleolares pequeños
de los ARNr y ARNt. No obstante, muchos intrones no albergan esas secuencias y
su función sigue siendo desconocida.
Los ARNi ejerce una amplia gama de efectos sobre la expresión genética
Otro proceso importante en la inmunidad celular congenitica soporte en
direccionamiento especifico de determinadas secuencias de ARN para su rápido
degradación. un proceso que se conoce como ribointerferencia o interferencia
por ARN (ARNi) (v. cap. 35). También llamada a veces silenciamiento genético
postranscripcional (SGPG). Aunque se cree que este proceso ha evolucionado
como un mecanismo de defensa contra las formas de doble cadena de los virus
ARN. También funciona como un mecanismo endógeno de regulación genética
durante el desarrollo de muchos eucariotas. El SGPT comienza cuando el ARN de
doble cadena es reconocido dentro de la célula por la enzima Dicer. Dicer es una
endonucleasa con actividad frente al ARNdc. Produce cortos fragmentos de ARN
DOBLE DE 21-25 nucleótidos, que se denomina ARN pequeño de diferencia
(ARNsi) o micro-ARN (miARN). Mientras que los ARNsi se originan normalmente a
partir de ARNde producidos por los virus, los miARN se transcriben a partir de
intrones de genes que no codifican proteínas. y todos muestran una regulación y
una expresión precisa. Esta secuencia de miARN forma una estructura en
horquillas que son reconocidas por Dicer para liberar múltiples miARN pequeños.
Los miARN y los ARNsi interaccionan con un complejo multiproteico denominado
complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC). Este complejo está
compuesto por varios componentes, como la enzima argonauta. Esta enzima se
une a pequeños fragmentos de ARNdc, los desenrolla y mantiene una de las
cadenas (la cadena guía) para actuar como cofactor de direccionamiento del ARN;
la otra cadena se degrada. Utilizando al miARN (o ANsi) incorporado, el complejo
RISC puede identificar secuencias complementarias con su ARN, apareándose
con ellas y degradando los ARN complementarios (ARNsi), o reclutara proteínas
adicionales para reprimir la traducción de los ARN complementarios a través de
múltiples mecanismos (miARN)
En los seres humanos pueden funcional hasta 1.000 mi ARN. Algunos se dirigen
contra varios genes, mientras que algunos genes son dianas de varios miARN.
Pobablemente, los miARN estén implicados de alguna manera en la regulación de
la mayoria de las vías metabólicas. Los miARN regulan procesos metabólicos
centralesm como la figerenciacion de adipocitos y la secreción de insulina,
implicados en el desarrollo de la obesidad y la diabetes. Recientemente, el mi
ARN conocido como miR-21 se ha caracterizado como señal apoptosicas
normales en las células. Cuando miR-21 se expresa de forma aberrante, como
sucede en numerosos canceres, inhibe el apoptosis y favorece la proliferación
celular.