Biomarcadores conductuales de la esquizofrenia en ratas con alto consumo
de alcohol: Un posible endofenotipo de trastornos neuropsiquiátricos
compulsivos Introducción La esquizofrenia es un trastorno neuropsiquiátrico altamente debilitante que afecta al 1% de la población mundial. Los síntomas psicóticos afectan casi todos los aspectos de la actividad mental, incluida la percepción, la atención, la memoria y la emoción. Uno de los síntomas principales que se observa en la esquizofrenia es involucrarse en pensamientos y conductas repetitivas, lo que fomenta una comorbilidad con otros trastornos neuropsiquiátricos que se caracterizan por comportamientos compulsivos, como el trastorno obsesivo compulsivo (TOC) o el autismo. Además, los pacientes esquizofrénicos también se caracterizan por signos de comportamiento, como la atenuación o la ausencia de inhibición latente (LI), que es un mecanismo neuronal que permite que los estímulos irrelevantes sean ignorados, y la inflexibilidad del comportamiento, que se define como la falta de capacidad para ajustarse y responder a los cambios en el entorno. Actualmente, la medicación antipsicótica ha demostrado una eficacia reducida para el tratamiento de los síntomas de disfunción neurocognitiva y social. Un mecanismo neurobiológico subyacente propuesto incluye anormalidades de mielina en el cuerpo calloso, que se hipotetiza que es un biomarcador central del trastorno. Además, los pacientes con TOC también han mostrado anormalidades de mielina, en términos de volumen de sustancia blanca y microestructura, localizados principalmente dentro del circuito fronto-estriado-tálamo-cortical. Por lo tanto, la relación entre la compulsividad y las anomalías de la sustancia blanca parece ser un importante marcador conductual y biológico de la vulnerabilidad a los trastornos del espectro compulsivo.
El modelo animal de polidipsia inducida programada (SIP), que se define como el
comportamiento excesivo de consumo en animales privados de alimentos que no es el resultado de necesidades fisiológicas sino más bien una respuesta al programa de refuerzo intermitente, ha demostrado ser una herramienta útil para explorar la neurobiología de la compulsividad en diferentes trastornos neuropsiquiátricos. Estos incluyen esquizofrenia, TOC y abuso de alcohol. De hecho, la polidipsia psicógena (PP), que se define como el exceso de consumo no fisiológico, está presente en el 6%20% de los pacientes psiquiátricos con esquizofrenia y otros trastornos del espectro compulsivo. SIP es un modelo que es sensible a las diferencias individuales, donde las ratas se pueden seleccionar de acuerdo con su patrón de consumo compulsivo. Estudios previos que se realizaron en nuestro laboratorio han mostrado Los estudios previos que se realizaron en nuestro laboratorio han mostrado diferencias relevantes entre las ratas de alto consumo (HD) y bajo consumo (LD) que se seleccionaron de acuerdo con la adquisición de SIP. Por ejemplo, la respuesta conductual a un desafío con drogas dopaminérgicas, como la D-anfetamina y la cocaína, difiere en la disponibilidad de receptores de dopamina D1 y D2 en áreas mesolímbicas del cerebro; falta de control inhibitorio en la tarea del tiempo de reacción en serie de 5 opciones (5-CSRTT); causó un aumento de la actividad de serotonina y noradrenalina en la amígdala en análisis cerebrales post mortem; y una reducción del consumo compulsivo por el agonista de la serotonina 5-HT2A / C DOI en ratas HD. Las ratas HD seleccionadas por SIP han mostrado alteraciones conductuales y neuroquímicas que son características de los déficits de control inhibitorio; sin embargo, el conocimiento de la posible coincidencia con otros biomarcadores conductuales de la esquizofrenia sigue siendo desconocido En el presente estudio, investigamos si las ratas compulsivas, HD seleccionadas por SIP, mostraron posibles diferencias, en comparación con las ratas LD, en los marcadores conductuales y biológicos de la esquizofrenia. Las ratas HD mostraron: un efecto reducido en un paradigma LI, considerado como un modelo conductual de la esquizofrenia; una inflexibilidad conductual aumentada en una tarea de aprendizaje de inversión espacial, en comparación con las ratas LD. Finalmente, de acuerdo con las anormalidades de mielina cerebral encontradas en pacientes con esquizofrenia y TOC, evaluamos la tinción de proteína básica de mielina (MBP) en el cuerpo calloso, cuerpo estriado y amígdala baso lateral. Nuestros resultados mostraron una reducción de la tinción de MBP en HD en comparación con las ratas LD. Métodos Asignaturas: Sesenta y un ratas Wistar machos (Harlan Ibérica), que pesaban aproximadamente 275-300 g al inicio de los experimentos, se alojaron 3 por jaula (50 × 15 × 25 cm) a 22 °C y en un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas (apagado a las 08:00 AM), con comida y agua disponibles a voluntad. Después de 10 días de habituación, las ratas se redujeron gradualmente al 85% de su peso corporal de alimentación libre mediante alimentación controlada y se mantuvieron en este nivel de privación durante todo el experimento. La comida estuvo disponible por la alimentación diaria de laboratorio chow aproximadamente 30 minutos después de cada sesión experimental. Todas las pruebas se realizaron entre las 09:00 AM y las 02:00 PM. Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con el RD1201 / 2005 español sobre la protección de animales de experimentación y las Directivas del Consejo de la Comunidad Europea (86/609 / EEC). Procedimientos experimentales Programar polidipsia inducida. Se analizaron dos cohortes de ratas (cohorte 1: N = 32 ratas y cohorte 2: N = 29 ratas) en 13 cámaras SIP operantes (32 × 25 × 34 cm) (MED Associates). Después de 20 sesiones diarias de SIP, los animales se separaron en 2 poblaciones específicas, HD y LD, según si sus tasas de consumo eran superiores o inferiores a la mediana del grupo, respectivamente. Se registraron las siguientes medidas para cada rata: (a) total cantidad de agua (mililitros) eliminada de la botella, (b) lame total en la botella y (c) total de entradas en la revista de alimentos (métodos suplementarios). El orden de detección y prueba fue el siguiente: para la primera cohorte, se probaron SIP y LI; para la segunda cohorte, se probaron SIP y la tarea de Aprendizaje de Reversión. Inhibición Latente: Después de la separación de las ratas HD (n = 16) y LD (n = 16) por el procedimiento SIP en la primera cohorte, la atención selectiva fue probada por un paradigma LI. Los animales fueron entrenados anteriormente en la palanca de prensa. Luego, un grupo fue preexpuesto a un tono, y finalmente, todos los animales fueron probados en la supresión condicionada de la palanca de presión. La variable medida fue la relación de supresión (métodos suplementarios).
Aprendizaje de Reversión: Después del procedimiento SIP, la segunda cohorte
de ratas HD (n = 14) y LD (n = 15) se sometió a pruebas de inflexibilidad conductual mediante la tarea de aprendizaje de reversión espacial. Se requirió que los animales aprendieran la ubicación espacial inicial de una palanca reforzada y para presionar la palanca correcta cuando la posición se invirtió. El procedimiento de la tarea se basó en Boulougouris et al y en estudios previos. Las variables medidas fueron: el número de ensayos para alcanzar el criterio, el número de respuestas incorrectas, los errores de perseverancia, los errores de aprendizaje, la latencia para recoger el sedimento de alimentos, la latencia para responder a las palancas y las omisiones (métodos complementarios). MBP Inmunohistoquímica: Después de la terminación de los experimentos de comportamiento, se usaron 8 ratas no preexpuestas de los grupos HD (n = 4) y LD (n = 4) de la primera cohorte (LI) para estudiar la mielinización de acuerdo con el método de Fuentes et al. Se seleccionaron diferentes regiones cerebrales según el atlas de cerebro de rata de Paxinos y Watson (métodos suplementarios). Los resultados de la medida de cada animal se expresan como la densidad promedio de ambos hemisferios cerebrales. Análisis Estadístico: Los datos se analizaron usando ANOVA o la prueba t de Student cuando fue apropiado (métodos suplementarios). Los datos en todas las figuras se muestran como la media ± error estándar de la media (SEM). La significancia estadística se estableció en P <.05. Resultados HD y LD seleccionados por SIP: La media de ingesta de agua, lamidas y entradas de revistas de ratas HD y LD en SIP se muestran en la figura 1 y en la tabla suplementaria S1. En las 2 cohortes, las ratas HD aumentaron la ingesta de agua (interacción sesión SIP × efectos de grupo: grupo 1 F19, 570 = 18.16, P <.0001, grupo 2 F19.513 = 9.29, P <.0001) y lamidas (sesión SIP de interacción) × efecto de grupo: cohorte 1 F19, 570 = 6.83, P <.0001; cohorte 2 F19.513 = 14.03, P <.0001) en sesiones SIP en comparación con el grupo LD (figuras 1A y 1B). El análisis post hoc indicó un aumento significativo en la ingesta de agua en SIP de HD en comparación con las ratas LD comenzando en la sesión 3 en la cohorte 1 (P <.01) y en la sesión 5 en la cohorte 2 (P <.0001). Además, en comparación con la primera sesión, los animales HD aumentaron significativamente su consumo de agua durante la sesión 3 para la cohorte 1 (P <.05) y durante la sesión 4 en la cohorte 2 (P <.01), alcanzando niveles estables de ingesta de agua en la sesión 11 en la cohorte 1 y en la sesión 10 en la cohorte 2. Además, los animales LD no mostraron un aumento significativo en el consumo de agua durante las sesiones SIP. En el número de lamidas totales, las ratas HD mostraron un aumento significativo en comparación con las ratas LD que comenzaron durante la sesión 2 en la cohorte 1 (P <.01) y durante la sesión 1 en la cohorte 2 (P <.01). No hubo diferencias significativas entre las ratas HD y LD en las entradas de la revista medidas en SIP (tabla suplementaria S1). Inhibición latente: Sesiones de entrenamiento. Las maneras de presionar la palanca para las ratas HD y LD en los programas VI30 y VI60 se muestran en la figura suplementaria S1. En el cronograma de la VI60, las ratas HD revelaron un aumento significativo en el prensado de la palanca en comparación con las ratas LD (t (30) = -2.92 P <.05). No se observaron diferencias en VI30 entre ratas HD y LD (t (30) = -1.15, P = .25). Condicionamiento: La media de las relaciones de supresión de las ratas HD y LD en el paradigma LI se muestran en la figura 2. En el grupo LD (figura 2A), la preexposición afectó a la fase de acondicionamiento, como lo muestra una respuesta de relación de supresión exposición × sesión: F3,42 = 2.88, P <.05; efecto de preexposición: F1, 14 = 18.12, P <.001, efecto de sesión: F3,42 = 6.63, P <.001). El análisis post hoc indicó que las ratas PRE tuvieron una respuesta incrementada en comparación con las ratas no-PRE de la sesión 1 a 3 (p <0,001), mientras que mostraron una tendencia hacia mantener aún diferencias significativas en la sesión 4 (p = 0,056). En el grupo HD (figura 2B), la preexposición afectó a la fase de acondicionamiento, como lo muestra una respuesta de relación de supresión incrementada (interacción antes de la exposición × sesión: F3,42 = 4.72, P <.001; efecto de sesión: F3,42 = 19.56, P <.0001; sin efecto de preexposición: F1, 14 = 1.86, P = .19). Sin embargo, el análisis post hoc reveló que había un efecto reducido de preexposición en ratas HD que mostraron diferencias en la respuesta de la relación de supresión de las ratas PRE en comparación con las ratas no-PRE solo en las sesiones 1 y 2 (P <.05, P < .01), pero no en las sesiones 3 y 4 (P = .73, P = .90), durante la fase de acondicionamiento. La figura 2C muestra el rendimiento diferente por la media de la relación de supresión para la sesión 3 y 4 bajo la preexposición (t (14) = 2.28, P <.05) frente a la condición sin preexposición (P> . 05) en las ratas HD y LD. Aprendizaje de Reversión Ensayos a criterio: La media del número de ensayos para alcanzar el criterio de la tarea de Aprendizaje de Reversión se muestra en las figuras 3A y 3B. Durante la fase de retención, las ratas HD tuvieron un aumento en el número de ensayos para completar el criterio en comparación con las ratas LD (grupo de interacción × retención: F3,81 = 5,31, P <.05; efecto de grupo: F1, 27 = 5,45, P < .05; efecto de fase de retención: F3,81 = 9.63, P <.0001). El análisis post hoc reveló que no había diferencias en la retención de discriminación espacial entre las ratas HD y LD, sin embargo, las ratas HD tuvieron un aumento significativo en el número de ensayos para alcanzar el criterio de retención de inversión 1 en comparación con el grupo LD ( P <.0001). Estas diferencias no permanecieron durante la retención de las reversiones 2 y 3 (figura 3A). Durante la reversión, las ratas HD necesitaron un mayor número de ensayos para alcanzar el criterio en comparación con las ratas LD (grupo de interacción × reversión: F3,81 = 3.81, P <.01; efecto de grupo: F3,81 = 30.65, P <.0001 ) El análisis post hoc reveló que las ratas HD necesitaron significativamente más ensayos para alcanzar el criterio durante la reversión 1 (P <.01) y también durante la reversión 2, con una tendencia hacia una diferencia significativa (P = .09) en comparación con LD ratas (figura 3B). Respuestas Incorrectas a Criterio de Selección: La media de las respuestas incorrectas al criterio sobre la tarea de Aprendizaje de Reversión se muestra en las figuras 3C y 3D. En la fase de retención, las ratas HD tuvieron un aumento en las respuestas incorrectas (grupo de interacción × retención: F3,81 = 2.96, P <.05, efecto de retención: F3,81 = 4.55, P <.01). El análisis post hoc de la fase de retención no reveló diferencias significativas en la retención de discriminación espacial entre las ratas HD y LD, sin embargo, indicó que las ratas HD dieron significativamente más respuestas incorrectas durante la retención de la reversión 1 que las ratas LD (P <.01) (figura 3C). Durante la fase de inversión, las ratas HD necesitaron un mayor número de respuestas incorrectas para alcanzar el criterio (grupo de interacción × inversión: F3,81 = 2.91, P <.05; efecto de sesión: F3,81 = 56.85, P <.0001; no efecto de grupo F1,27 = 2.91, P = .14). El análisis post hoc reveló que las ratas HD dieron respuestas significativamente más incorrectas durante la reversión 1 (P <.01) y también durante la reversión 2, con una tendencia hacia una diferencia significativa (P = .06) en comparación con las ratas LD (figura 3D). Errores Perseverativos y de Aprendizaje: La media de los errores perseverantes y de aprendizaje en la tarea de aprendizaje de reversión se muestran en las figuras 4A y 4B. Durante las reversiones, las ratas HD mostraron un número significativamente mayor de errores perseverativos en comparación con las ratas LD (grupo de interacción × efecto de sesión: F3,78 = 2.55, P <.01, efecto de sesión: F3,78 = 55.26, P <.001; sin efecto de grupo F1,26 = 1.82, P = .18). Los análisis post hoc revelaron que las ratas HD tuvieron un número significativamente mayor de errores de perseveración durante la reversión 1 (P <.01) en comparación con las ratas LD (figura 4A). Por el contrario, durante la reversión, no se observaron diferencias significativas en la medida de errores de aprendizaje (figura 4B). Omisiones y Latencias para Responder: No se encontraron diferencias significativas entre las ratas HD y LD en cualquiera de las omisiones (tabla S2 suplementaria) o en la latencia a la respuesta (tabla S3 suplementaria) en cualquier etapa del experimento. Mielinización en Ratas HD y LD: Los análisis de MBP revelaron diferencias significativas en las densidades ópticas de las fibras mielinizadas entre las ratas HD y LD (Figura 5). Las ratas HD mostraron una mielinización reducida dentro del cuerpo calloso (t (35) = -3.73, P <.001), cuerpo estriado (t (15) = -2.51, P <.05) y amígdala basolateral (t (62) = -3.44, P <.001) en comparación con ratas LD. Discusión En el presente estudio, demostramos que un modelo animal de compulsividad, ratas HD seleccionadas por SIP, mostró la existencia de otros comportamientos y marcadores biológicos que estaban relacionados con la esquizofrenia y el TOC. Las ratas HD, que se caracterizaron por un comportamiento de beber compulsivo en SIP, mostraron menos efecto LI, como lo indica un efecto reducido de la preexposición a estímulos en una tarea de respuesta emocional condicionada; y una mayor inflexibilidad del comportamiento en una tarea de aprendizaje de reversión espacial en comparación con las ratas LD. Además, las ratas HD mostraron menos mielinización en el centro del cuerpo calloso, el cuerpo estriado y la amígdala basolateral en comparación con las ratas LD. Inhibición latente: Durante el entrenamiento previo a la fase previa a la exposición, encontramos que las ratas con HD de alta resolución seleccionadas por SIP mostraron una presión de palanca significativamente mayor que las ratas LD bajo el cronograma del VI60. Estudios previos han postulado la idea de que el entrenamiento en intervalos puede inducir respuestas de formación de hábito. El presionar con palanca es una respuesta que se usa en diferentes modelos animales de compulsividad, como el procedimiento de omisión de recompensa y el modelo de atenuación de señal posterior al entrenamiento (PTSA). Nuestros resultados en el cronograma del VI60 son coherentes con los estudios antes citados, porque las ratas HD continúan presionando sin ganar pellets adicionales. Los estudios futuros basados en la formación del hábito estímulo-respuesta deberían explorar si las ratas HD podrían ser una posible población sensible. Las ratas HD tuvieron un efecto LI reducido en comparación con las ratas LD. En ratas HD, el grupo preexpuesto solo mostró diferencias durante la sesión 1 y 2 en comparación con el grupo preexpuesto, mientras que en el grupo LD, el efecto LI se mantuvo hasta la sesión 4. Se ha utilizado la interrupción del efecto LI a través de diferentes procedimientos. Como un modelo de esquizofrenia. Los estudios de lesiones en ratas han demostrado la implicación de diferentes estructuras cerebrales en este fenómeno: la corteza del núcleo accumbens, la amígdala basolateral, la corteza entorrinal y el hipocampo ventral. Además, la manipulación farmacológica de los receptores de NMDA, que es como un modelo animal de esquizofrenia, también indujo la interrupción de LI. Asimismo, experimentos recientes han demostrado que la administración de un antagonista del receptor NMDA, MK-801, en ratas aumenta el consumo de agua en SIP.21 La idea de que un rasgo compulsivo también podría acompañarse con una LI anormal también se ha observado en estudios humanos con resultados contradictorios. Dos estudios encontraron LI mejorada en pacientes con TOC, mientras que otros estudios mostraron déficits en LI dependiendo del subtipo de TOC. Aprendizaje de reversión: Las ratas HD compulsivas que fueron seleccionadas por SIP, mostraron inflexibilidad de comportamiento, como se refleja por su rendimiento significativamente peor en todas las medidas de la tarea de aprendizaje de reversión espacial, en comparación con las ratas LD. Por lo tanto, durante la reversión 1, las ratas HD necesitaron más ensayos para alcanzar el criterio y tuvieron respuestas más incorrectas y perseveradoras que las ratas LD. En términos de inflexibilidad conductual, la falla en los ensayos a criterio, aunque perseverante en su naturaleza, revela que las ratas HD pueden tener un déficit en la fase inicial de aprendizaje de reversión, por lo tanto, en la detección de los cambios de contingencia. Este déficit también fue acompañado por una falta de la respuesta inhibitoria revelada por el aumento de las respuestas perseverativas incorrectas. Por el contrario, no hubo diferencias en el número de errores de aprendizaje o la adquisición y retención de la discriminación espacial entre las ratas HD y LD, lo que respalda la noción de que las diferencias no se debieron a un déficit en la adquisición o retención de estímulos previos. Contingencias Además, el hallazgo de que las diferencias significativas solo se encuentran durante la reversión 1 está de acuerdo con la literatura previa; y podría explicarse por la gran cantidad de ensayos al criterio realizado en esta inversión, que podría beneficiar el rendimiento en las siguientes reversiones. La relación entre los comportamientos compulsivos, por lo tanto, la inflexibilidad del comportamiento y el comportamiento repetitivo de beber en SIP, podría establecerse mediante la comparación de varios estudios. En primer lugar, los estudios de lesiones en animales han demostrado previamente la implicación de la corteza orbitofrontal (OFC) en el aprendizaje de reversión alterada. Además, en pacientes con TOC y sus parientes clínicamente no afectados, hay una activación anormalmente reducida de la OFC durante el aprendizaje de reversión. De acuerdo con estos resultados, los recientes estudios de activación de proteína c-fos también han implicado la actividad anormal de la OFC y áreas prefrontales en el consumo compulsivo de SIP23 (Merchan et al, no publicado). En segundo lugar, también se ha demostrado que la administración sistémica de los receptores D2 / D3 agonista quinpirol, que afecta el aprendizaje de la reversión, aumenta la ingesta de agua no reguladora en ratas mediante contrafraseo, un modelo propuesto de polidipsia psicótica. En tercer lugar, se ha demostrado que la deficiencia de serotonina para aumentar la inflexibilidad del comportamiento. Además, una dieta baja en triptófano ha demostrado que aumenta el consumo compulsivo en ratas con HD en SIP (Merchan et al., Sin publicar). Finalmente, en un estudio reciente, Barlow et al encontraron que las ratas altamente perseveradoras en un aprendizaje de reversión en serie de la discriminación espacial mostraron reducciones en la unión al receptor de serotonina 5-HT2A en los niveles de OFC y triptófano hidroxilasa en el núcleo del rafe dorsal, sugiriendo que el tono serotoninérgico puede ser un endofenotipo que predispone a los animales a la inflexibilidad del comportamiento y a otras formas de comportamiento compulsivo. De forma similar, las ratas HD compulsivas en SIP también han mostrado una reducción del receptor de serotonina 5-HT2A y alteraciones en el tono de 5-HT en comparación con las ratas LD. Mielinización en ratas obligatorias HD: Las ratas HD, seleccionadas por SIP, mostraron menos mielinización en el cuerpo calloso, el cuerpo estriado y la amígdala basolateral en comparación con los animales LD. En estudios experimentales, el tratamiento crónico con el antagonista del receptor NMDA MK-801 en ratones ha mostrado desmielinización del cuerpo calloso con comportamientos similares a la esquizofrenia, que incluyen actividad hiperlocomotora y ansiedad. Este modelo farmacológico de esquizofrenia también ha demostrado aumentar el consumo compulsivo en ratas con SIP. Además, los modelos animales de esquizofrenia, basados en la activación inmune materna, también han mostrado una reducción en las fibras mielinizadas en la amígdala BLA, así como también déficits de inhibición prepulso (PPI) de larga duración, hiperactividad locomotora y déficits en la memoria de trabajo. Se ha observado reducción de la mielinización en el cuerpo calloso y reducción de la densidad de oligodendrocitos en la amígdala basolateral en pacientes esquizofrénicos. Una posible explicación, para la menor mielinización observada en las ratas HD, podría estar relacionada con la neuroadaptación inducida por el estado hiponatrémico observado en PP humano. Sin embargo, esto podría descartarse porque: primero, los hallazgos de mielinización reducida en pacientes esquizofrénicos citados anteriormente no informaron PP; y las segundas ratas en HD no mostraron síntomas asociados con hiponatremia, como desorientación, ataxia o convulsiones después de SIP; además, los niveles regulatorios de consumo en ratas HD no son diferentes de las ratas LD en el hogar. En contraste, la ingestión compulsiva de agua por SIP en ratas ha demostrado inducir la neuroadaptación por el aumento en la densidad de la columna vertebral en las neuronas del cuerpo estriado dorsolateral, apuntando hacia una modificación neuronal en la formación de hábito de las estructuras cerebrales después de SIP. Se necesita más investigación para aclarar la relación entre la polidipsia, la esquizofrenia y la reducción de la mielina cerebral, donde la polidipsia podría estar actuando como un síntoma o tal vez como un factor de vulnerabilidad en los episodios psicóticos. En conclusión, las ratas HD que se seleccionaron mediante SIP mostraron un efecto LI reducido, inflexibilidad de comportamiento y reducción de la mielinización cerebral, que son marcadores conductuales y biológicos bien conocidos de la esquizofrenia. Nuestros datos confirman hallazgos previos que proponen que el SIP es un modelo animal de conductas compulsivas asociadas con la esquizofrenia y amplía el conocimiento del posible fenotipo compulsivo de las ratas HD que se seleccionan mediante SIP. Los estudios futuros sobre el fenotipo compulsivo de las ratas HD que se seleccionan mediante SIP pueden contribuir a dilucidar las posibles explicaciones de la comorbilidad de diferentes conductas compulsivas y déficits similares a la esquizofrenia en el mismo individuo. Esto mejorará nuestra comprensión de los mecanismos de vulnerabilidad en los trastornos del espectro compulsivo.