1.3.

4 Faktor Kinerja

(i) Selektivitas. Ini adalah karakteristik terpenting dari sensor - kemampuan

untuk membedakan antara zat yang berbeda. Perilaku semacam itu pada dasarnya

fungsi dari komponen selektif, meskipun kadang operasi

transduser berkontribusi pada selektivitas.

(ii) Rentang kepekaan. Ini biasanya perlu sub-millimolar, tetapi secara khusus

kasus bisa turun ke femtomolar

(iii) Akurasi. Ini harus lebih baik daripada f5%.

(iv) Sifat solusi. Kondisi seperti pH, suhu dan kekuatan ionik

harus diperhatikan.

(v) Waktu respons. Ini biasanya lebih lama (30 detik atau lebih) dengan biosensor

dibandingkan dengan sensor kimia.

(vi) Waktu pemulihan. Ini adalah waktu yang berlalu sebelum sensor siap

analisis sampel berikutnya - tidak boleh lebih dari beberapa menit.

(vii) Umur kerja biasanya ditentukan oleh stabilitas selektif

bahan. Untuk bahan-bahan biologis ini bisa menjadi pendek seperti beberapa hari, meskipun

seringkali beberapa bulan atau lebih.

M) jangkauan.

Rincian lebih lanjut dari hal-hal di atas diberikan kemudian di Bab 4.

5.3.2 Tiga Generasi Biosensor

Kadang-kadang, tiga mode reaksi oksidasi yang terjadi di biosensor disebut sebagai generasi pertama,
kedua, dan ketiga, sebagai berikut:

0 Generasi pertama - sensor berbasis elektroda oksigen

0 Generasi kedua - sensor berbasis mediator

0 Generasi ketiga - elektroda enzim secara langsung digabungkan

Namun, ada beberapa bukti bahwa cara kerja elektrolit-garam benar-benar sama dengan mediator,
sehingga deskripsi generasi ketiga mungkin tidak benar-benar akurat.

5.3.3 Generasi Pertama - Elektroda Oksigen

Elektroda enzim glukosa asli menggunakan oksigen molekuler sebagai agen pengoksidasi, sebagai
berikut:

ALLAH glukosa + 02 4 asam glukonat + H202

Reaksi diikuti dengan mengukur penurunan konsentrasi oksigen menggunakan elektroda oksigen Clark.
Jenis elektroda ini pertama kali dikembangkan pada tahun 1953 dan menggunakan prinsip voltametrik
elektrokimia yang mengurangi oksigen, dengan arus sel yang berbanding lurus dengan konsentrasi
oksigen. Oksidase glukosa diimobilisasikan dalam gel poliakrilamid pada selaput permeabel gas yang
menutupi elektroda, di mana yang terakhir terdiri dari katoda platinum dan anoda perak. Gambar 5.7
menunjukkan sensor glukosa tipikal dari tipe ini. Sistem seperti itu, selain sangat penting praktis di
bidang medis, juga merupakan sistem model yang berguna di mana banyak rancangan biosensor lain
dapat didasarkan.

Beberapa biosensor lain telah dikembangkan yang menggunakan oksidase dan oksigen. Pilihan beberapa
ini diberikan pada Tabel 5.3.

Meskipun jenis perangkat ini bekerja cukup baik, operasi mereka menimbulkan sejumlah masalah.
Pertama, tingkat oksigen yang diperlukan untuk dikendalikan dan konstan - jika tidak respon elektroda
terhadap penurunan konsentrasi oksigen tidak akan sebanding dengan penurunan konsentrasi glukosa.

Gambar 5.7 Skema elektroda glukosa tipe Clark, yang menggunakan dua membran: a, Ag anode: b, Pt
cathode; c dan d, cincin karet; e, gel elektrolit; f, membran 'Teflon'; g, glukosa oksidase pada jaring nilon;
h, membran selofan. Dari Hall, E. A. H., Biosensor, Hak Cipta 1990. 0 John Wiley & Sons Ltd. Direproduksi
dengan izin.

Tabel 5.3 Beberapa contoh oksidasi yang digunakan dalam biosensor. Dari Hall, E. A. H., Biosensor, Hak
Cipta 1990. 0 John Wiley & Sons Ltd. Direproduksi dengan izin

Masalah lain adalah bahwa pada potensi pengurangan yang cukup tinggi diperlukan untuk mengurangi

oksigen (-0.7 V): 0 2 + e- + 0 2 -

bahan lain mungkin mengganggu.

Cara pertama untuk mengukur oksidasi produk hidrogen peroksida adalah:

H202 + 2H '+ 2e- + 0 2

Hal ini dicapai dengan menetapkan potensial elektroda hingga + 0,65 V. Ini masih cukup tinggi dalam arti
sebaliknya, dan sekarang masalahnya bisa menjadi gangguan dari asam askorbat, yang teroksidasi pada
potensial ini dan biasanya ada dalam sampel biologis.

Sejumlah upaya telah dilakukan untuk mengatur tingkat oksigen. Beberapa di antaranya didasarkan
pada fakta bahwa di hadapan enzim umum, katalase, hidrogen peroksida terdekomposisi menjadi air
dan oksigen, sebagai berikut:

katalase H202 H20 + 0 2

Namun, hanya setengah oksigen yang dibutuhkan dihasilkan dalam kasus ini, dan kemudian hanya jika
semua hidrogen peroksida didaur ulang - faktanya, hanya sekitar 50% yang dapat didaur ulang.
Pendekatan alternatif adalah mengoksidasi kembali air menjadi oksigen pada anoda:

H20 - 2e- + 2H '+ 0 2

Sekali lagi, potensi elektroda standar untuk ini sangat tinggi pada +1.23 V, dan penerapan potensi
seperti itu akan cenderung mengoksidasi interferant yang mungkin ada. Beberapa keberhasilan telah
diperoleh dengan stabil-oksigen elektroda di mana sirkuit generasi oksigen terpisah digunakan,
dikendalikan melalui

Gambar 5.8 Skema rangkaian pembangkitan yang digunakan untuk memperoleh konsentrasi oksigen
konstan dalam elektroda oksigen: 1, enzim yang diimobilisasikan; 2, platinum bersih; 3, 'Teflon'
membran elektroda oksigen; 4, tegangan referensi; 5, penguat diferensial; 6, kontroler PID yang
mengatur arus melalui rangkaian elektrolisis untuk mempertahankan tegangan diferensial (V) nol; 7,
sumber tegangan rangkaian elektrolisis; 8, koil platinum di sekitar elektroda; 9, mikrometer. Dicetak
ulang dari Biosensor: Dasar-dasar dan Aplikasi yang diedit oleh A. P. F. Turner, I. Karube dan G. S. Wilson
(1987), dengan izin dari Oxford University Press.

penguat umpan balik dari analisis elektroda oksigen. Sistem seperti ini ditunjukkan pada Gambar 5.8.

Penguat operasional membandingkan arus yang diukur karena adanya oksigen dengan potensi standar.
Ini kemudian diumpankan kembali untuk mengontrol potensi elektrolisis dari sirkuit penghasil oksigen.
Oksidase glukosa dicampur dengan katalase dan tertanam dalam elektroda platinum-kasa yang
berfungsi sebagai anoda dari rangkaian pembangkit.

5.3.4 Generasi Kedua - Mediator

Sebuah ide dikembangkan untuk menggantikan oksigen dengan agen pengoksidasi lainnya - agen
transfer elektron - yang reversibel, memiliki potensi oksidasi yang sesuai dan konsentrasi yang dapat
dikendalikan. Kation transisi-logam dan mereka kompleks umumnya digunakan untuk tujuan ini. Bahan
semacam itu biasanya disebut
Gambar 5.9 Struktur ferrocene. Dari Eggins, B. R., Biosensor: An dengan izin. Pendahuluan, Hak Cipta
1996. 0 John Wiley & Sons Limited. Direproduksi dengan izin

mediator. Banyak mediator didasarkan pada besi, baik sebagai ion atau kompleknya:

Fe (rrr) + e-d Fe (ir)

Ion besi (rn) bebas tidak membuat mediator yang baik karena mereka terkena hidrolisis dan
pengendapan seperti besi (m) hidroksida (Fe (OH) 3).

Sebuah kompleks umum, yang kadang-kadang digunakan, adalah hexacyanoferrate (nr), [Fe (CN) 6] "-,
sebelumnya dikenal sebagai ferricyanide. Namun, mediator yang paling sukses adalah kompleks
ferrocene (Fc), yang strukturnya terdiri dari sandwich. dari kation antara dua anion cyclopentadienyl
(Cp), seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5.9.

Reaksi berikut berlaku untuk berbagai sistem yang disebutkan di atas:

(5.2a) L

Fe3faq + e- - Fe2 +, q (Eo = +0,53 V)

jH2O jHzO

Fe (OH) 3 + 3H + Fe (OH), + 2H + (hidrolisis)

[Fe111 (CN) 6] 3- + e- + [Fe11 (CN) 6] 4- (Eo = +0,45 v) (5,2b)

[Fe1 "(Cp) 2] + + e- + F ~" (CP) ~ (Eo = +0,165 V; (5,2 ~)

ferrocene Ep (Ox) = +0.193 V;

E, (R) = +0.137 V)

Mengambil contoh glukosa, operasi mediator tipe ferrocene adalah sebagai berikut:

glukosa + GODox - gluconolactone + GODR + 2H '

GODR + 2Fc '- + GODox + 2Fc

2Fc - 2E - 2Fc +

Oksidasi glukosa yang sebenarnya dilakukan oleh komponen dinukleotida flavin-adenin (FAD) dari
oksidase glukosa, yang diubah menjadi FADH2. Yang terakhir ini dioksidasi kembali menjadi FAD oleh Fc
+ (mediator), diikuti oleh
Gambar 5.10 Mekanisme operasi dari biosensor yang dimediasi ferrocene untuk glukosa: Fc, ferrocene;
TUHAN, oksidase glukosa. Dari Eggins, B. R., Biosensor: Suatu Pengantar, Copy-

kanan 1996. 0 John Wiley & Sons Limited. Direproduksi dengan izin.

re-oksidasi Fc ke Fc + langsung pada elektroda, dengan arus yang mengalir melalui yang terakhir menjadi
ukuran amperometri dari konsentrasi glukosa. Ini diilustrasikan dalam skema reaksi siklik yang
ditunjukkan pada Gambar 5.10.

DQ 5.3

Faktor apa yang membuat mediator yang baik?

Menjawab

Sifat-sifat mediator yang baik adalah sebagai berikut.

(I) Ini harus bereaksi cepat dengan enzim.

(ii) Ini harus menunjukkan kinetika transfer-elektron yang reversibel (yaitu cepat).

(iii) Harus memiliki potensi over-regenerasi yang rendah.

(iv) Ini harus independen dari pH.

(v) Harus stabil baik dalam bentuk teroksidasi maupun tereduksi.

(vi) Seharusnya tidak bereaksi dengan oksigen.

(vii) Seharusnya tidak beracun.

Ferrocenes jit semua kriteria ini.

SAQ 5.7

Mengapa besi sulfat merupakan mediator yang buruk?

Seperti yang diamati sebelumnya, elektroda oksigen dioperasikan pada -0,6 V, di mana potensi itu juga
cenderung mengurangi asam askorbat, yang biasanya hadir dalam jumlah besar di sebagian besar enzim
atau persiapan sel.

Pendekatan lain adalah untuk mengontrol tingkat oksigen dengan tingkat di mana buffer mengandung
oksigen dipompa melalui sel.

Tabel 5.4 Potensial redoks dari beberapa reaksi penting (pada pH 7). Dari Eggins, B. R.,

Tabel 5.5 Potensi redoks dari beberapa ferrocenes yang tersubstitusi dan konstanta laju transfer
elektron yang sesuai ketika digunakan sebagai mediator dalam reaksi oksidasi yang melibatkan oksidase
glukosa. Dari Eggins, B. R., Biosensor:
Tabel 5.4 menyajikan potensi redoks dari beberapa reaksi penting (pada pH 7) - beberapa di antaranya
akan dibahas dalam bagian berikut.

Cincin dari kelompok siklopentadienil mungkin memiliki berbagai kelompok substituen yang menempel.
Kehadiran kelompok-kelompok ini mempengaruhi sifat-sifat ferrocene, terutama potensi redoks, dan
juga laju konstan untuk transfer elektron ke enzim. Beberapa contoh ditunjukkan pada Tabel 5.5.

Kelarutan juga terpengaruh, yang penting dalam merumuskan biosensor. Jadi, 1, 1'-dimethylferrocene
tidak larut dalam air dan memiliki E “dari + O. 1 V dan konstanta laju reaksi dengan oksidase glukosa 0,8
x dm3 mol- 's-I,

Tabel 5.6 Mediator 'Alam' dan 'buatan' dan potensi redoks mereka pada pH 7.

sedangkan asam monokarboksilat ferrocene cukup larut dalam air dan memiliki Eo +0,275 V dan
konstanta laju 2,0 x lo- 'dm3 mol-' s- '.

Banyak bahan mediator lain yang sesuai tersedia, dan dapat diklasifikasikan menjadi mediator elektron
'alami' dan 'buatan'. Jenis yang pertama termasuk molekul seperti sitokrom, ubikuinon, flavoprotein dan
fenidoksin, sedangkan mediator buatan mencakup banyak zat warna, seperti Metilena Biru,
phthalocyanines dan viologens. Tabel 5.6 menyajikan perbandingan potensi redoks dari pemilihan
mediator ini, dengan struktur dari beberapa dari mereka yang ditampilkan dalam Gambar 5.1 1.

5.3.4.1 Tingkat Konstanta

Secara umum, kita dapat menulis mekanisme laju sebagai berikut:

R + Ox + e-

ki

ER + OX - E ~~ + R

k2

Eox + glukosa - E, d + gluconolactone

di mana E adalah enzim. Jika kl - = lOk2 / [glukosa], maka k2 cepat dan kl adalah langkah penentu laju.

Kita dapat mempelajari pengaruh mediator dengan voltametri siklik, dan memperoleh perkiraan laju
konstan. Jika kita menentukan voltammogram siklik dari larutan yang mengandung asam
monokarbosilat ferrocene dalam buffer fosfat (pH 7), yang

Gambar 5.11 Beberapa contoh (a) mediator buatan alami dan (b) yang digunakan dalam reaksi oksidasi.

Gambar 5.12 Voltammogram siklik katalitik dari (A) asam monokarboksilat ferrocene dengan adanya
glukosa, dan (B) sistem yang sama, tetapi dengan penambahan oksidase glukosa.
Dicetak ulang dengan izin dari Cass, A. E. G., Davies, G., Francis, G. D., Hill, H. A. O., Aston, W. J., Higgins,
I. J., Plotkin, E. V., Scott, L. D. dan Turner, A. P. F., Anal. Chem.,

56, 6567-6571 (1984). Hak Cipta (1984) American Chemical Society.

juga mengandung glukosa, kami mendapatkan bentuk reversibel khas dari voltamogram siklik ferrocene,
seperti yang ditunjukkan oleh kurva A pada Gambar 5.12. Jika kita sekarang menambahkan glukosa
oksidase ke larutan ini, kita kemudian mendapatkan plot katalitik dengan puncak reduksi yang sangat
ditingkatkan dan tidak ada puncak oksidasi (kurva B) pada Gambar 5.12.

Konstanta laju sebanding dengan tinggi relatif plot katalitik, sehingga kita memiliki:

& / id = f [log (kl) / v]

dimana v adalah laju sapuan. Hubungan di atas ditunjukkan dalam grafik & / id versus (kf / u) ”*, di mana
a = nFv / RT, ik adalah arus katalitik (dengan GOD), id adalah arus terkontrol difusi, dan kf adalah
konstanta laju (Gambar 5.13).

5.3.4.2 Pembentukan Biosensor Menggunakan Mediator

Ada banyak cara di mana mediator dapat dimasukkan ke dalam biosensor. Dalam percobaan yang
dijelaskan di atas, semua komponen berada dalam solusi. Dalam biosensor, baik enzim dan ferrocene
harus diimobilisasi pada elektroda.

Gambar 5.13 Plot teoritis dari rasio arus puncak kinetik-difusi yang dikendalikan, ik / id, sebagai fungsi
dari parameter kinetik, (kflu) ’”. Dicetak ulang dari Biosensor:

Dasar-dasar dan Aplikasi diedit oleh A. P. F. Turner, I. Karube dan G. S. Wilson (1987), dengan izin dari
Oxford University Press.

Gambar 5.14 Skema elektroda pasta karbon, untuk digunakan dengan mediator untuk aplikasi
biosensor. Dari Eggins, B. R., Biosensor: Suatu Pengantar, Hak Cipta 1996. 0 John

Wiley & Sons Limited. Direproduksi dengan izin.

Pendekatan paling sederhana adalah mencampur mediator dengan pasta karbon (parafin cair yang
dicampur dengan serbuk grafit) dalam elektroda karbon-pasta, setelah itu enzim tersebut teradsorpsi di
permukaan dan ditahan di tempat dengan sebuah membran (seperti yang ditunjukkan pada

Gambar 5.14).

Pendekatan yang lebih canggih digunakan oleh Cass dan rekan kerja (1984). Dalam hal ini, foil grafit,
dengan bidang tepi yang terbuka, dilapisi dengan dimetilferrocene oleh penguapan dari larutan toluena.
Glukosa oksidase dalam buffer kemudian diimobilisasikan di permukaan melalui reaksi dengan l-
cyclohexyl-3- (2-morpholinoethyl) carbodiimide-p-methyltoluenesulfonate. Sensor kemudian ditutup
dengan membran 'Nuclepore'.

SAQ 5.8 Sebutkan tiga mediator 'alam' dan tiga 'buatan'.

5.3.5 Generasi Ketiga - Elektroda Enzim Langsung Dipasangkan

Mungkin aneh bahwa seorang mediator diperlukan untuk memasangkan enzim ke elektroda. Mengapa
tidak mungkin untuk mengurangi (mengoksidasi) enzim langsung pada elektroda? Masalahnya adalah
bahwa protein cenderung didenaturasi pada permukaan elektroda. Selain itu, reaksi transfer elektron
mungkin lambat dan tidak dapat diubah dan karenanya membutuhkan kelebihan yang terlalu tinggi.

Pendekatan yang mungkin adalah memodifikasi permukaan, mis. dengan 4,4'-bipyridyl pada elektroda
emas. Bipiridil itu sendiri bukan elektroaktif, dan juga bukan mediator. Ini membentuk ikatan hidrogen
lemah dengan residu lisin pada enzim, dengan ikatan yang bersifat sementara.

Solusi yang lebih baik dikembangkan oleh Albery dan Cranston (1987) dan Bartlett (1987), menggunakan
elektroda organik-melakukan-garam. Dalam sistem ini, tetrathiafulvalene (TTF) secara reversibel
teroksidasi, sementara tetracyanoquinodimethane (TCNQ) juga berkurang secara reversibel (lihat
Gambar 5.15). Sepasang molekul ini membentuk kompleks transfer muatan, dan telah ditemukan bahwa
ketika kompleks tersebut dimasukkan ke dalam elektroda, permukaan menjadi sangat reversibel dan
banyak enzim. Molekul penting lainnya untuk aplikasi seperti ini adalah N-methylphenothiazine (NMP),
yang kadang-kadang lebih disukai daripada TTF.
2.1 Stabilitas

Stabilitas adalah salah satu penanda yang paling penting untuk kegunaan praktis setelah kondisi
memuaskan telah ditetapkan dalam faktor lain. Stabilitas memberikan informasi tentang lamanya hidup
biosensor. Panjang umur berarti sejumlah besar analisis dapat dilakukan dengan bahan yang sama. Ini
memberikan keuntungan yang signifikan dalam hal tenaga kerja dan biaya.

Untuk penentuan stabilitas, solusi analit biosensor, konsentrasi analit, pH, suhu, komposisi buffer,
keberadaan pelarut organik dan dipertimbangkan. Jika beberapa biosensor telah digunakan dalam
kondisi laboratorium selama satu tahun atau lebih, kehidupan praktis mereka tidak diketahui secara
pasti. Ketahanan biosensor glukosa dimasukkan ke dalam proses industri atau jaringan biologis dapat
terbatas pada hari atau minggu (Theâvenot et al., 1999)

2.1.1 Stabilitas Enzim

Kehidupan biosensor tergantung pada kondisi persembunyian dan kerja mereka. Karena struktur hibrida
mereka, perlu untuk mengevaluasi sensor enzim baik dari segi sensor dan stabilitas enzim. Ketika kita
melihat aspek sensor enzim, itu diperlukan untuk mengevaluasi situasi baik dari segi sensor dan
stabilitas enzim karena struktur hibridanya.

Ketika stabilitas sensor enzim dalam hal materi biologi diperiksa, terlihat bahwa parameter seperti
tingkat kemurnian enzim, sumber dan metode imobilisasi adalah penting. Secara umum, kehidupan
biosensor lebih pendek dari metode kimia ketika metode imobilisasi fisik digunakan. Ketika tingkat
kemurnian enzim meningkat, stabilitas dapat dikurangi karena dihapus dari lingkungan alaminya
komponen. Namun, faktor kinerja lainnya dalam medium harus dipertimbangkan dalam persiapan
enzim pada kemurnian rendah. Metode imobilisasi yang digunakan dalam berbagai enzim dapat
menghasilkan hasil di luar efek yang diharapkan (Chaniotakis et al., 2004).

2.2 Sensitivitas

Jumlah analit terendah mendefinisikan sensitivitas untuk mendeteksi biosensor (Bhalla et al., 2016).
Dengan kata lain, sensitivitas adalah jawaban dari biosensor terhadap perubahan unit dalam konsentrasi
analit (Lee dan Mutharasan, 2005). Dalam beberapa aplikasi biosensor, biosensor diperlukan untuk
menentukan konsentrasi analit dalam jumlah yang sangat rendah (ng / mL, fg / mL). Misalnya, dalam
darah, konsentrasi antigen spesifik prostat (PSA) 4 nanogram / ml relevan dengan kanker prostat agar
dokter mengajukan tes biopsi. Untuk alasan ini, sensitivitas adalah properti penting di biosensor (Bhalla
et al., 2016).

Gambar 4. Batas grafik deteksi oleh IUPAC (Cil, 2014).

Dalam grafik kalibrasi, wilayah di mana hubungan antara konsentrasi substrat dan respon sensor adalah
linear. Wilayah ini disebut "wilayah linear". Grafik kalibrasi diplot antara logaritma konsentrasi produk
dan potensi enzim potensiometri
sensor. Grafik linier diperoleh antara konsentrasi produk dan arus untuk sensor enzim berbasis
amperometri.

Nilai konsentrasi terkecil yang dapat ditanggapi oleh biosensor disebut batas deteksi (LOD). Deteksi

Batas dihitung menggunakan rumus [3sb / m]. Dimana m adalah kemiringan linier kurva kalibrasi untuk
analit (nilai sensitivitas pengukuran). SB menunjukkan standar deviasi antara perubahan saat ini karena
penambahan berturut-turut dari konsentrasi analit yang sama ke media reaksi. Batas grafik deteksi oleh
IUPAC ditunjukkan pada Gambar 4.

Parameter yang mempengaruhi Respons biosensor akan mempengaruhi sensor kalibrasi. Respon
perubahan pH dan suhu biosensor. Karena itu, LOD akan berubah. Misalnya, ketika suhu mempengaruhi
respons sensor enzim negatif ketika kondisi optimal dihapus. Meningkatkan tingkat difusi dengan suhu
beberapa spesies kimia menyebabkan peningkatan respons sensor enzim. Dikatakan bahwa semakin
besar respon terhadap konsentrasi analit yang sama, semakin baik sensitivitasnya (Cil, 2014). Itu
sensitivitas dapat ditentukan oleh kemiringan kurva kalibrasi. Sensitivitas dan batas deteksi (LOD) tidak
seharusnya bingung. LOD menambah ruang dan suara ke akun. Ini tidak unik untuk biosensor. Oleh
karena itu, saran IUPAC harus digunakan (Theâvenot, et al., 1999).

2.5 Response-time

Salah satu alasan terpenting untuk penyebaran cepat biosensor adalah dapat menghasilkan hasil dalam
waktu singkat dengan

operasi praktis. Dalam analisis rutin di mana sejumlah besar sampel dilibatkan, hasilnya diperoleh
dengan sedikit

kemungkinan pra-perawatan adalah yang paling penting (Muhammet, 2008).

Waktu respons dimulai dengan biosensor memasuki sistem sampai hasil pengukuran diterima. Waktu
respons dari suatu biosensor dipengaruhi oleh peristiwa yang terjadi dalam 3 tahap utama. Ini; 1.
Seberapa cepat substrat berdifusi dari media pengujian ke permukaan membran, 2. Seberapa cepat
difusi substrat ke dalam membran dan seberapa cepat biokatalis bereaksi dengan pusat aktif,

3. Seberapa cepat produk berdifusi ke permukaan sensor yang diukur (Dinckaya, 1999).

Tingkat pencampuran larutan, konsentrasi substrat, konsentrasi enzim, pH optimum, suhu dan apakah
atau tidak ada membran yang digunakan pada sensor atau permukaan lapisan bioaktif adalah faktor
utama yang mempengaruhi ketiga peristiwa ini (Muhammet, 2008) .
Meningkatkan kecepatan mixing mempersingkat waktu respon, yang mengarah ke peningkatan
konsentrasi substrat. Waktu respons untuk biosensor umumnya berkisar dari beberapa detik hingga
beberapa menit. Nilai hingga 5 menit dapat diterima. Tetapi seperti 10 menit dianggap cukup lama.

Secara alami, suatu biosensor tidak membatasi jumlah analit dalam jumlah waktu paling sedikit hingga
waktu respons. Waktu itu

dibutuhkan untuk mengolah pengukuran baru, seperti polarisasi, keseimbangan, atau regenerasi, sering
membutuhkan waktu lebih lama daripada waktu respons (Eggins, 2002).

2.5.1 Response Time of Enzymes

Sebagai contoh, peningkatan jumlah enzim dan perkiraan pH ke nilai optimum lebih pendek

waktu merespon. Namun, karena peningkatan jumlah enzim akan menyebabkan lapisan bioaktif
menebal, itu dapat meningkatkan masalah difusi dan waktu respon

akan meningkat. Masalah ini dapat diatasi dengan penggunaan persiapan enzim yang tinggi dengan
aktivitas tertentu. (Dinckaya, 1999).

Suhu mempengaruhi difusi secara positif, yang mengarah ke pengurangan waktu respon. Namun,
perbedaannya enzim dari suhu optimumnya tidak boleh diganggu oleh fakta bahwa itu akan
menyebabkan penurunan aktivitas enzim. Ketebalan membran mempengaruhi hidrofobik (untuk
substrat hidrofilik) dalam negatif (Muhammet, 2008).

2,6 Seumur Hidup

Setiap biosensor memiliki seumur hidup. Bahkan elektroda pH paling kasar mengisi umur simpan setelah
penggunaan tertentu, yang dikurangi dari kecenderungan memburuk. Kami dapat mengevaluasi
kehidupan sensor dalam beberapa cara berbeda (Eggins, 2002). Siklus hidup, penyimpanan (rak) dan
operasi (penggunaan) kehidupan adalah diperiksa dalam dua kasus utama. Harapan hidup yang
disimpan dalam kondisi ideal dan masa pakai dalam operasi yang berkelanjutan kondisi secara alami
akan berbeda. Misalnya, sensor yang berada dalam kondisi operasi kontinyu berada dalam kontak
konstan dengan solusi analit. Dan pembacaan berurutan dilakukan setiap jam. Sensor dengan kondisi
hidup penyimpanan tergantung pada perawatan pengguna, sebagaimana ditentukan oleh pabrikan
(Muhammet, 2008)

2.6.1 Seumur Hidup Enzim

Dari sudut pandang kerja, bekerja pada suhu yang relatif rendah memperpanjang umur biosensor jika
menyediakan kondisi yang cukup untuk analisis. Dari sudut pandang penyimpanan, penyimpanan di
lingkungan yang tidak memungkinkan perekrutan mikroba di +4 0 C akan memberikan kontribusi ke arah
yang sama. Seiring dengan semua ini, dalam beberapa kasus, reaksi produk dapat menyebabkan
inaktivasi enzim, dan dalam sistem yang mengandung cofactors atau intermediet, kehilangan mereka
tidak harus dijauhkan dari mata yang akan menyebabkan penurunan aktivitas (Muhammet, 2008;
Theâvenot, et al., 1999).

2.7 Faktor Performa Lainnya

Salah satu faktor penting lainnya yang mempengaruhi kinerja biosensor adalah biaya. Biaya adalah
jumlah dari biaya menyiapkan biosensor dan biaya analisis yang dibuat (Muhammet, 2008). Portabilitas
biosensor merupakan faktor penting lainnya. Portabilitas menyediakan kemudahan penggunaan untuk
biosensor. Dengan demikian, biosensor dapat digunakan lebih luas (Dinckaya, 1999).

2.8 Pengaruh Enzim pada The

Faktor Kinerja Biosensor Enzim adalah biokatalis yang mengkatalisis atau mengatur reaksi kimia yang
terjadi di sel hidup. Enzim tidak dikonsumsi oleh reaksi. Namun, beberapa faktor pembatas ditemukan.
Konsentrasi enzim adalah sebanding dengan laju reaksi. Ini ditunjukkan dalam persamaan Michaelis-
Menten sebagai berikut: 𝑣 = 𝑙 [𝐾 𝑛 [𝑆] 𝐾 𝑛 + [𝑆]

Ini tidak membatasi jika jumlah enzim cukup. Tapi, ada begitu banyak enzim atau kualitas enzim yang
rendah, diperlukan jumlah material yang diperlukan untuk menyediakan aktivitas enzim yang cukup. Jika
jumlah material besar, itu mempengaruhi perpindahan massa ke transduser. Jika kita melihat contoh
urea yang diberikan pada Tabel 1, ketika jumlah urease enzim meningkat 3 imes, stabilitas meningkat
dari 3 minggu ke 4 bulan. Namun, jawabannya waktu telah meningkat tak terduga (Eggins, 2002).