UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO – PUNO

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Escuela Profesional de Medicina Veterinaria y Zootecnia

TRABAJO DE ENCARGADO.
Curso:
- PATOLOGIA CLINICA.
Tema:
- MONOGRAFIA DE LA ¨TECNICA DE ELISA¨
Presentado por:
- Lara Ramos, Ingrid Cyntia.
Docente:
- Dr. Victor Meliton Sanabria Huisa.

C.U – 2018
INTRODUCCION

Ensayo por inmunoabsorcion ligado a enzimas, también conocido como ELISA,

es tal vez el método de diagnóstico más reconocido vía inmunoanalisis,
llamado ¨laboratorio húmedo¨, que es usado por la mayoría de empresas
bioquímicas en la actualidad, también es muy utilizado en la medicina
veterinaria para el diagnostico enfermedades de la sangre como por ejemplo :
la brucelosis que es de mucha importancia ya que causa abortos en el caso de
ganado vacuno y causa grandes pérdidas económicas a los productores.
ELISA utiliza el método de inmunoanalisis para ver si los organismos o virus
que provocan enfermedades están presentes en una muestra liquida; por eso
se llama laboratorio húmedo. ELISA podrá determinar la presencia del ¨analita¨
en la muestra. ELISA es vital para determinar la presencia de una enfermedad
y busca formas para curarla o eliminarla.

CONCEPTO:

ELISA son las siglas por las que se conoce al ensayo por inmunoabsorción
ligado a enzimas (en inglés enzyme-linked immunosorbent assay). Se trata de
una técnica de laboratorio que fue diseñada por científicos suecos y
holandeses en 1971, que permite detectar pequeñas partículas
llamadas antígenos, que habitualmente son fragmentos de proteínas. La
identificación es específica, es decir, consigue que pequeños segmentos de
proteínas destaquen y no puedan ser confundidas con otras.

Para poder identificar los antígenos se utilizan moléculas con dos componentes
acoplados: un anticuerpo (que se une al antígeno de forma específica) y
una enzima (que se activa y señala la unión al antígeno). Antes del
descubrimiento del ELISA se utilizaban moléculas radioactivas en vez de
enzimas, lo que suponía un riesgo añadido innecesario en el laboratorio y un
mayor coste.

Gracias a esta técnica se han podido realizar estudios científicos en campos

como la biología, la bioquímica y la medicina. En el hospital se utiliza
principalmente para identificar gérmenes agresores que se encuentran en
la sangre, orina, esputos, etcétera. La técnica pronto se generalizó con el
empleo de equipos simples y muy baratos que se utilizan todavía hoy en
muchos centros diagnósticos de todo el mundo.

Los diferentes tipos de ELISA son:

  ELISA directo: es la forma más básica de realizar la técnica. Consiste
en recoger una muestra a estudiar y ponerla en un pocillo (un recipiente
pequeño) en frente de una muestra igual pero contaminada con el
germen a estudiar, y otra muestra en la que se sabe que no hay germen.
Se aplica el anticuerpo con la enzima en los tres pozos y se compara la
muestra a estudio con las otras dos.
 ELISA indirecto: se realiza de forma similar al ELISA directo, pero en
este caso se añade primero un anticuerpo sin enzima y después uno con
enzima. De esa forma, la señal que emite el enzima es mucho más
potente y la prueba es más sensible.
 ELISA sándwich: en este caso en los pocillos primero se añade un
anticuerpo y después la muestra, para que los antígenos queden ya
retenidos en el fondo del pozo. Después se añade el anticuerpo con la
enzima. Es la forma más eficaz de realizar la prueba.
 ELISPOT: se trata de un tipo de ELISA que permite conocer de forma
cuantitativa el antígeno, incluso identifica el número concreto de células
donde se encuentra.
El ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay o ensayo por inmunoabsorción
ligado a enzimas) es una técnica de laboratorio que identifica pequeñas
partículas –antígenos–, y gérmenes que causan enfermedades.
Una de las situaciones para hacerse la prueba del ELISA es la detección de
VIH
¿QUE ES LA TECNICA DE ELISA?
Se recomienda realizar un ELISA en todas las situaciones en las que se
quieran detectar antígenos cuya existencia pueda ser determinante para un
diagnóstico o para establecer conclusiones en un estudio científico. Algunas de
las situaciones más frecuentes donde se usa el ELISA son:
 Diagnóstico de VIH: es la primera prueba que se realiza para descartar
una infección por VIH. Se trata de una prueba muy sensible, así que
prácticamente detecta todos los casos. Sin embargo, puede dar falsos
positivos, por lo que se suele repetir de nuevo un ELISA y se confirma
con un Western-Blot.
 Detección de anticuerpos contra microorganismos: a veces el antígeno a
estudiar puede ser otro anticuerpo. Esta situación se da, por ejemplo, en
la identificación de anticuerpos contra el bacilo de la tuberculosis, entre
otros.
 Diagnóstico de hepatitis B: Al igual que con el VIH, el virus de la hepatitis
B puede ser reconocido fácilmente mediante un ELISA en sangre.
 Detección de gérmenes en heces: ciertos virus pueden detectarse en
las heces cuando provocan diarreas; los más frecuentes son
los rotavirus. A veces no se detecta al propio germen, sino que se
pueden identificar toxinas que produce el mismo, como sucede con el E.
coli
 Detección de antígenos en orina: es una prueba muy útil y sencilla para
identificar gérmenes causantes de neumonías. En las infecciones
respiratorias las bacterias pasan a la sangre y de ahí a la orina, por lo
que se pueden identificar antígenos fácilmente con un ELISA, que
orienta el tratamiento antibiótico directamente.
Si te van a realizar un estudio mediante la técnica de ELISA estas son las
cuestiones que debes tener en cuenta:

Duración: la recogida de la muestra suele durar muy poco tiempo, lo mismo

que tarda en realizarse una analítica sanguínea. Suele tardar segundos o
minutos. Los resultados tardan bastante más, habitualmente varios días. En
situaciones de urgencia se puede realizar un ELISA y obtener los resultados en
una hora aproximadamente.

Ingreso: nunca requiere ingreso. La recogida de la muestra se realizar en el

momento. También se puede dar el caso de que te realicen la prueba durante
un ingreso para identificar la causa de tu enfermedad, pero en este caso el
motivo del ingreso será tu estado de salud.

¿Es necesario ir acompañado?: no, tan sólo se recibe un pinchazo cuando la

muestra que se tiene que tomar sea sangre, y no suele ser muy doloroso.
Puedes acudir solo a la clínica, caminando o conduciendo, y volver del mismo
modo.

Medicamentos: no es necesario tomar ningún medicamento previo. Hay que

decirle al médico todos los medicamentos que se estén tomando en ese
momento. Algunos medicamentes pueden dar falsos negativos de la prueba,
por ejemplo si tomas antibióticos y quieren detectar el germen que produce la
infección.

Comida: puedes comer con normalidad, no hace falta ir en ayunas. Pero si la

muestra es sanguínea es frecuente que aprovechen el pinchazo de la analítica
para medirte otros parámetros en sangre (azúcar, colesterol, etcétera), así que
lo mejor es que te informes o directamente te mantengas en ayunas si la
analítica es temprano.

Ropa: puedes vestir con ropa de calle normal.

Documentos: es recomendable llevar tu tarjeta sanitaria, aunque la mayor

parte de las veces es suficiente que lleves el volante con el que el médico te
mandó la prueba.

Embarazo y lactancia: se puede realizar esta prueba con normalidad en

cualquiera de las dos situaciones. De hecho, es una prueba que suele
realizarse en los controles periódicos de embarazo establecidos.

Contraindicaciones: no existen contraindicaciones. Tan solo hay que valorar si

realmente merece la pena realizar la prueba y si los resultados servirían de
algo.
El análisis por ELISA lo pedirá el médico cuando sea necesario y sea la mejor
arma diagnóstica para estudiar tu enfermedad. Para hacerla, te tomarán
primero la muestra sobre la que se realizará el ELISA.

Según el lugar de recogida de la muestra se recomienda adoptar unas u otras

medidas. Por ejemplo, si es uretral no debes orinar las dos horas previas; si es
un esputo es mejor recogerlo a primera hora de la mañana, y si se trata de una
muestra de sangre es mejor que coincida con un pico de fiebre. Pero esos
detalles te los hará saber el médico antes de realizarte la prueba, así que no
debes preocuparte.

Una vez que te hayan recogido la muestra a estudiar puedes realizar una vida
normal. Mientras esperas los resultados no debes estar nervioso y debes
mantener tu rutina. Para que sepas cómo se hace un ELISA resumimos los
pasos a continuación:

Se deposita la muestra recogida en bandejas con pequeños pozos. Al lado

habrá pozos para muestras que se sepan que están contaminadas y libres de
antígenos conocidos.

Una vez depositada la muestra se añaden los anticuerpos que detectan los
antígenos si los hay. En el otro extremo de los anticuerpos hay enzimas
acopladas.

Si es un ELISA indirecto se pueden añadir otros anticuerpos que detecten los

anticuerpos previos; así se amplía la señal.

Se realiza un lavado de los pocillos; así se eliminan los anticuerpos que no

estén unidos a antígenos.

Se añade un sustrato, es decir, una sustancia química que reacciona con las
enzimas de los anticuerpos que queden. Al reaccionar se forman metabolitos.

Por último, se mide la cantidad de metabolito que hay mediante diferentes

técnicas, como la espectrofotometría.

Complicaciones del ELISA

Las complicaciones de la ELISA son prácticamente inexistentes. Es una prueba

segura que no entraña riesgos para las personas que se someten a ella. El
único riesgo es aceptar resultados falsos como positivos o negativos, y tomar
medidas equivocadas al respecto.
Los resultados del ELISA pueden tardar varios días desde que se toma la
muestra para estudiarla. Para recogerlos hay que acudir a otra cita, ya que la
documentación por sí sola no puede ser interpretada por el paciente. En la
consulta el médico podrá realizar la interpretación más adecuada del resultado.
Si estás ingresado te los comunicarán durante tu estancia en el hospital, o
después si te han dado el alta médica antes. En caso de ser una consulta de
urgencias te podrán dar los resultados en menos de una hora.

El ELISA se expresa en valores cualitativos, es decir, o es positivo o es

negativo. Sólo el ELISPOT puede aportar resultados cuantitativos, pero no hay
unos límites estándar para todos los estudios. Cuando el ELISA es positivo
quiere decir que se han detectado antígenos en la muestra recogida, y por
tanto hay gérmenes presentes. Cuando es negativa, no se han podido detectar
antígenos y se considera que la muestra no está contaminada.

Aunque es una prueba muy eficaz puede proporcionar falsos positivos o falsos
negativos. En las situaciones en las que el ELISA sea determinante y cambie
radicalmente la actitud del médico, es habitual realizar la prueba dos veces
seguidas, o realizar otra para asegurar el resultado. Es el caso de la prueba del
VIH: su diagnóstico es determinante para una persona, y por eso se realizan
dos ELISA seguidos y otra técnica más que permite confirmar el diagnóstico
con mucha más fiabilidad.

CONCLUSION
BIBLIOGRAFIA