“Determinación de marcadores para alcaloides presentes en la planta Uncaria

Tomentosa“

Dr. Eduardo Arguedas, Christian Tenorio Angulo, Darién Matarrita Córdoba

Facultad de Farmacia, Universidad de Iberoamérica.

San José, Costa Rica.

RESUMEN

La presente investigación consistió en someter a análisis la muestra de uncaría tomentosa

conocida popularmente en el mercado como ‘’uña de gato’’, en la cual se logra la extracción por
medio de un método ácido-base desarrollado en el laboratorio de UNIBE.

Posteriormente se realiza una separación de los alcaloides presentes en la planta por medio de
una columna de separación y las muestras obtenidas se someten a análisis y pruebas de
laboratorio como cromatografía de masas e IR.

ABSTRACT

The present investigation consisted in submitting to the analysis of the sample of a uncaria
tomentosa popularly known in the market as "uña de gato", in which the extraction was achieved by
means of an acid-base method developed in the UNIBE laboratory.

Subsequently, a separation of the alkaloids is carried out in the plant by means of a separation
column and the samples are closed and subjected to analysis and laboratory tests such as mass
and IR chromatography.

1
 1. INTRODUCCIÓN Por lo anterior nació la inquietud de llevar a
cabo el presente estudio el cual consistió en la
separación de los diferentes alcaloides
La flora y fauna en nuestro país es un de las presentes en la planta.
más ricas de todo el mundo, en ella se
encuentran una gran variedad de especies
animales y vegetales que difícilmente se 2. MATERIALES Y METODOS.
pueden ver en una sola región del mundo, por
esta razón es importante el estudio de las Reactivos
diferentes plantas que se encuentran en
nuestros suelos ya que muchas de ellas  Cloroformo
presentan muchas propiedades  Reactivo de Dragendorff
farmacológicas.  Metanol
 Agua
Tanto los países desarrollados como los que
se encuentran en Vía de desarrollo han Materiales
aumentado la utilización de plantas
medicinales o productos derivados de estas sí  Probetas (10, 25, 100mL)
ven las causas son diferentes. Muchos de los  Embudo separador (500mL)
países en vía de desarrollo han tomado  Balanza granataria.
durante mucho tiempo las plantas medicinales  Espátulas.
como tratamientos para diferentes patologías  Rota vapor.
por necesidad, debido a la escasez de
fármacos en estas regiones.
 Vidrio reloj.
 Beaker (50, 250, 450, 1000mL).
Tanto en unos como en otros se ha  Cromatoplacas. Con gel de sílice.
presentado el uso abusivo lo que ha traído  Balón (250ml) de fondo plano con
consigo un aumento en el interés científico y boca esmerilada.
en la comprobación científica de las  Papel de filtro.
propiedades atribuidas a las plantas  Erlenmeyer (50,100 ml).
medicinales.
 Agitador
 Capilares
En nuestro país las plantas medicinales han
sido utilizadas desde tiempos remotos como  Rociador de vidrio para reactivos
nuevos agentes terapéuticos y sus usos han  Lámparas de luz UV.
sido transmitidos de generación en  Tiras reactivas para pH.
generación, bien en forma oral o escrita hasta  Gotero.
nuestros días y es esto lo que se conoce como
la práctica terapéutica tradicional, el empleo
de extractos o principios activos de las plantas Reactivos
la cual ha sido importante en el cuidado de la
salud de la población en el primer nivel de  HCl
atención.  Cloroformo
 Acetato de Etilo
Una de las plantas más utilizadas a nivel  Agua destilada
nacional es la uncaria tomentosa llamada ‘‘uña  Silica gel
de gato’’ en Costa Rica a la cual se le  Etanol
atribuyen según estudios químicos biológicos  Amoniaco
y farmacológicos efectos inmunoestimulantes  Reactivo de draggendorf
antiinflamatorios e inhibidores del crecimiento
de las células cancerígenas entre otros.

2
Procedimiento
Extracción de los alcaloides presentes en
la muestra tomada de la planta de uncaria
tomentosa:
1. Se tomó la corteza de uña de gato
(proveniente de un laboratorio
farmacéutico).
2. Se añadió 15 g de corteza de uña
de gato natural previamente
triturada en un beaker de 1L.
3. Se agregó 200 ml de agua destilada
y se dejó calentar por 10 minutos
con agitación constante.
4. Se agregó HCL 3M a la mezcla
hasta lograr un pH 2 y se añadió
200 ml de etanol.
5. Dejar calentar la mezcla por 45
minutos más, mientras se añade
amoniaco concentrado hasta pH 8,
con agitación constante.
6. Se agregó 200 ml de cloroformo a la
mezcla caliente y agitándose.
7. Dejar enfriar filtrar y reposar.
8. Se utilizó un embudo separador
para obtener las dos fases
formadas.
9. La fase orgánica fue introducida en
un balón para rota vaporizarlo.
10. El concentrado obtenido
almacenado en un vial.
11. Se realizó una cromatografía de
capa fina utilizando una pequeña
cantidad de la muestra concentrada
(fase orgánica) obtenida utilizando
como fase móvil
cloroformo/metanol. 5:5. Se dejó
secar para luego aplicar el
revelador.
12. Se roció con el reactivo de
Dragendorff (agente revelador)
3
Separación por columna del extracto de
uña de gato
1. Al igual que con todos los
procedimientos anteriores se prepara
el instrumento y se lava
adecuadamente.
2. Se monta la columna y se
reara con algodón en la base, se
adhiere 150 gramos de silica gel en
polvo y se golea la columna
suavemente ara evitar que la silica se
divide en fase.
3. Introducir 50 ml de una
mezcla 5:5 de cloroformo/metanol
(previamente preparado), en la
columna para que bañe la silica en
polvo.
4. Se prepara el extracto con
cloroformo (previamente secado)y se
agrega 25 ml de la mezcla de
solventes (se agita).
5. Hay que dejar cerrar la
columna con la mezcla de solvente y
antes que comience a secarse la silica
se le adiciona el extracto.
6. Se permite fluir la columna
y se descarta la primera muestra que
corresponde a los solventes que se
agregaron al inicio.
7. Hay que continuar
agregando solvente ara que la fase
estacionaria no se seque.
8. Extraer hasta que la
fue
muestra pase totalmente por la
columna, donde ha sido recolectado en
diferentes tubos de ensayo con la
misma cantidad de gotas de muestra
cada uno.
3. RESULTADOS.
Cromatografía de placa
Se realizaron varias cromatografías de placas,
donde se puede ver en principio la presencia
de los alcaloides identificados por dragendorff.
 Cromatografía de capa fina (TLC). 754.3 , no sin antes también decir que en
1113.6 una banda correspondiente al
sistema forano también presente en los
alcaloides.

2018-I-887-2/ CHCl3

120,0

115 2018-I-887-2/ CHCl3

110

105

100

95
754,3
90
2940,3

85 3297,7 1470,0

80 1113,6
%T

Se puede observar la presencia de varios 75

1618,8 1188,1

metabolitos secundarios que a la hora de 70

2018-I-887-2/ CHCl3
65
1238,5

aplicarles el dragendorff sobre la placa 60

podemos asegurar la presencia de alcaloides. 55

50 1705,6

45

40,0
3800,0 3600 3200 2800 2400 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 700,0
cm-1

Unión del segundo grupo de alcaloides.

Este grupo nos permite observar la presencia

de los NH en 3382.7 , vemos la presencia
del grupo amidas cíclico en 1708.6 y
posiblemente
2018-I-887-2/ CHCl3el éster correspondiente en los
1735 , además se puede observar en
818 el sistema aromático y en 1040
el sistema furanosa.

105,0

Espectroscopia infrarroja 104

2018-I-887-3/ CHCl3
Unión del primer grupo de alcaloides.
103

102

101

100

A la hora de realizar la espectroscopia 99

98

infrarroja podemos observar una banda ancha 97

96 2358,3

en los 3297.7 que corresponde a las %T

95

94
818,2

1040,6

interacciones NH, una banda pequeña en los 93

92

2940 que representa a los grupos 91

90
1708,6 1250,0

89
alquenos, una banda en los 1705.6 que 88
3382,7
87

corresponde a las amidas cíclicas, en 1618 86

85,0

bandas correspondientes a los 3800,0 3600 3200 2800 2400 2000 1800
cm-1
1600 1400 1200 1000 800 700,0

vibraciones de NH, y el sistema aromático en

4
Cromatografía de masas
Con el interés de verificar la presencia de los
metabolitos secundarios se realiza la
cromatografía de gases asociada a masas, al
realizar la cromatografía de gases
relacionadas con las fracciones separadas nos
damos cuenta que en la muestra uno tenemos
fracciones importantes a los 12.716 minutos,
20. 811 minutos, 24.407 minutos y a los 27.
401, datos que se procesaran posterior mente.
Con un tiempo de retención de 20.811 minutos
y un aria porcentual 22.20 y un m/z que
corresponde a 207.10, tenemos moléculas
relacionadas con las estructuras de los
alcaloides existentes, como las famosas
Uncarina F, Mitrafilina, Isomitrofilia,
Isopteropodina y Pleropodina.

En la cromatografía de gases que corresponde

a la segunda fracción vemos un pico
importante que es prácticamente el 100 % en
19.596 minutos y un aria porcentual del 100%
y tenemos como pico m/z 385, en 405 con m/z
Pasamos analizar la espectroscopia de masas 405 que corresponde a la molécula de
del producto que corresponde a la fracción clorhidrato de la molécula correspondiente.
Número 1.
Con un tiempo de retención de 12.757
minutos, un área porcentual de 7.71 y un m/z
de 227.10 fracciones que corresponden al
rompimiento de los ciclos de los alcaloides
presenten en la Uncaria Tomentosa.

5
 solución concentrada con los
alcaloides presentes en la planta.
En el cromatograma de gases que  Se determinó la presencia de
corresponde a la tercera fracción y se alcaloides de Uncaria tomentosa,
mediante corridos cromatografía y
pueden observar picos importantes en revelado con el reactivo de
19.499 minutos. Posteriormente al leer la dragendorff, del producto macrobiótica
cromatografía de masas asociada a gases que se conoce en nuestro país como
podemos ver a 19. 466 minutos un aria “uña de gato” y de la corteza de la
planta.
porcentual 14.64 y un m/z 382 lo cual
 Los resultados obtenidos en la
corresponde a sistemas semi hidrolizados cromatografía de capa fina,
de la amida cíclica presente en la uña de concuerdan con los obtenidos en la
gato. cromatografía de columna,
específicamente en los grupos dos y
tres recolectados en tubos de ensayo.
 Se estandarizo otros métodos
analíticos IR, UV, Gases, entre otros.
 El método de análisis por
cromatografía de columna,
espectroscopia de masa y
espectroscopia infrarroja permite
detectar la estructura y separación de
alcaloides en la Uncaria tomentosa que
en trabajos previos no se habían
logrado.

5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Mann J. Secondary Metabolism.

4. Conclusiones
 Se logró generar patrones en los
cuales se pueda determinar los
alcaloides presentes en la untaría
tomentosa, los cuales se tomarán
como marcadores de análisis.
 Se recopilo información de varias
fuentes, las cuales brindaron
información importante, referente a la
planta en estudio "untaría tomentosa".
 La extracción de untaría tomentosa
(uña de gato) por medio del método
acido-base, permitió obtener una
Second Edition. Oxford Science
publications 1987. p 191-192
2. Alonso, J. Tratado de fitofármacos y
nutraceuticos. Primera reimpresión
editorial.Rosario(Argentina): Corpus;
2007
3. Castillo Garcia E. Martinez Solis I.
Manual de fitoterapia. Editorial EL
SEVIER MASSON; Barcelona, España.
2007
4. Laboratorios Alpha Natura SAC.
HERBAL DIETARY & NUTRITIONAL
SUPPLEMENTS (natura uña de gato)
5. Fessender, Ralhp , Joan. Quimica
organica. Segunda edición. Grupo
editorial iberoamericana. Mexico,DF.
1983
6. Bernard, M. Plantas Medicinales para
Enfermedades reumáticas. Editorial
complutense. Madrid, España 2005.

6
6. Recomendaciones

 Incentivar la investigación y
análisis químico de la Uncaria
tomentosa.
 Estudiar plantas de diferente
edad y de distintas regiones del
país.
 Realizar columnas con más
altura.
 Utilizar columnas con mayor
capacidad para asi poder
obtener una separación mas
optima de los alcaloides.
 Realizarle resonancia
magnética nuclear de los
productos obtenidos.
 Realizarle HPLC masas.