Crecimiento bacteriano.

Modelos predictivos de ComBase

Puede acceder a más información sobre este curso, en la siguiente

dirección web:

http://fundacion.usal.es/alteracion

1. Introducción: Crecimiento bacteriano

2. Temperatura, pH y actividad de agua (a w)
3. . Combase. Registrarse/identificarse
4. Combase Predictor
5. ComBase Predictor Modelos de crecimiento ("Growth Model"): Descripción
6. ComBase Predictor Modelos de crecimiento ("Growth Model"): Efectuar una predicción
7. ComBase Predictor Modelos de crecimiento ("Growth Model"): Efectuar predicciones simultáneas
8. Supuesto práctico
9. Envío al servidor de los resultados del ejercicio

1. Introducción: Crecimiento bacteriano

Las medidas que pueden aplicarse para impedir o retrasar las alteraciones microbianas de los alimentos - y la presencia en los
mismos de microorganismos patógenos y de sus toxinas en niveles peligrosos para el consumidor - incluyen:

- La destrucción de los microorganismos que hay en el alimento

- El enlentecimiento o detención del crecimiento de los microorganismos

En cuanto al crecimiento microbiano debemos recordar que es sinónimo de multiplicación, y se refiere al incremento del número de células. El
crecimiento de la mayoría de los microorganismos procariotas ocurre por fisión binaria, es decir, a partir de una célula se forman dos.
Durante este ciclo de división celular todos los componentes estructurales de la célula se duplican.
El crecimiento microbiano se define por tanto como el incremento en el número de células microbianas de una población.

La velocidad de crecimiento es el incremento en el número de células o en la masa celular por unidad de tiempo. La velocidad específica de
crecimiento es característica para cada tipo de microorganismo y medio de cultivo (sustrato).

El tiempo de generación es el tiempo requerido para que, a partir de una célula, se formen dos células, es decir, es el tiempo que tarda una
población microbiana en duplicarse. Este tiempo varía considerablemente con los microorganismos y las condiciones ambientales como la
temperatura.

La multiplicación de los microorganismos en los alimentos sigue,

en gran parte, la dinámica del crecimiento microbiano en
estudios experimentales en cultivos discontinuos en
laboratorio.

La curva de crecimiento típica de un organismo unicelular en

laboratorio la podemos ver representada en esta gráfica. Las
curvas de crecimiento son distintas según el tipo de
microorganismo y según variemos las condiciones del cultivo
pero, a pesar de ello, todas ellas tienen en común una serie
de fases:

- Fase de lag o fase de latencia: es una fase de adaptación.

Se corresponde con la primera parte de la curva, y en ella el
número de ufc permanece prácticamente constante.

-Fase logarítmica o exponencial: es la fase en la cual los

microorganismos se multiplican con rapidez. Durante cada
intervalo de duplicación se producen tantas nuevas células
como se habían producido anteriormente de manera
acumulada.

La fase continúa mientras no existan factores limitantes del

crecimiento. En los cultivos discontinuos el factor que hace que
cese el crecimiento puede ser el agotamiento de nutrientes, la
acumulación de productos metabólicos tóxicos o una
combinación de ambos. Una vez que esto ocurre el cultivo pasa
a la
En esta curva se representa el log10 de "unidades
- Fase estacionaria en la cual no varía el número de
microorganismos. En los cultivos en laboratorio posteriormente formadoras de colonias" (UFC) por gramo o por mL de medio
de cultivo o de alimento, frente al tiempo de incubación, bajo
tiene lugar la
una serie dada de condiciones.
- Fase de muerte en la cual el número de microorganismos
comienza a disminuir.

2. Temperatura, pH y actividad de agua (aw)

En este ejercicio vamos a iniciarnos en el uso de un softw are de microbiología predictiva. Para ello, es conveniente que repasemos los
siguientes conceptos: a w (y concentración de NaCl) y pH del alimento y temperatura de almacenamiento.

- Temperatura La temperatura es uno de los parámetros ambientales más importantes que condicionan el crecimiento y la
de supervivencia de los microorganismos. Como sabemos, cada microorganismo tiene una temperatura mínima,
almacenamiento óptima y máxima de crecimiento. A la temperatura óptima se alcanza la mayor velocidad de crecimiento de un
microorganismo. Cuanto más distante de esa temperatura óptima sea la temperatura de almacenamiento
menor será la velocidad de crecimiento y por lo tanto más lentamente se multiplicará ese microorganismo.

El pH y la acidez es otro de los parámetros ambientales más importantes que condicionan el crecimiento y la
supervivencia de los microorganismos. Las diversas especies de bacterias presentan también un pH máximo,
un pH mínimo y un pH óptimo. Los limites de pH en los que pueden crecer los microorganismos varían mucho
según el tipo de microorganismo de que se trate: cuanto más alejado del pH óptimo de un determinado
- pH del
microorganismo sea el pH del medio más lento será el crecimiento de dicho microorganismo.
alimento
Muchos microorganismos crecen a velocidad óptima alrededor de 7, pero pueden crecer bien entre pH 5 y 8.
Hay sin embargo algunas excepciones: las bacterias acéticas, que tienen su óptimo entre pH 5,4 y 6,3 y las
bacterias lácticas, cuyo óptimo se encuentra entre pH 5,5 (o incluso inferior) y 6. En general, las levaduras y
los hongos son capaces de crecer a pHs mucho más bajos que las bacterias; los valores máximos de pH a los
que es posible el crecimiento, son similares sin embargo, en levaduras, hongos y bacterias.

Como hemos visto en la Unidad 1, la cantidad de agua disponible de un alimento no se mide en términos de
porcentaje de agua, sino mediante el parámetro a w. La a w de un alimento es la relación entre la presión de
vapor de agua en el alimento y la presión de vapor del agua pura:

- aw del a w = PV del agua en al alimento / PV del agua pura

alimento
El valor de este parámetro lógicamente oscila entre 0,0 y 1,0.

Este parámetro se utiliza como medida de la cantidad de agua disponible en un alimento para el crecimiento
microbiano. Es un factor intrínseco de cada alimento. La a w es un factor con una influencia muy importante
sobre el crecimiento microbiano. Varios métodos de conservación de alimentos se basan en modificar la a w del
alimento para inhibir o retrasar el crecimiento microbiano.

En estado natural, la mayoría de los alimentos, como carnes, pescados y productos vegetales, son ligeramente ácidos. La mayor parte
de las frutas son bastante ácidas y solo algunos alimentos, como la clara de huevo por ejemplo, son alcalinos. Para preservar los
alimentos, durante miles de años se ha venido aumentando su acidez, bien de manera natural, por fermentación, o artificial, por adición
de ácidos débiles, con lo que se consigue inhibir la proliferación microbiana. La acidez puede ser un factor básico en la preservación.
como en el caso de algunos alimentos fermentados tales como el yogur, la col fermentada o los pepinillos en vinagre, o tener un papel
auxiliar, cuyo efecto se combina con el de otros factores tales como conservadores químicos, el calor o la actividad de agua (aw).

3. Combase. Registrarse/identificarse

Combase

ComBase es un sitio w eb de uso libre: http://w w w .combase.cc/es/

Es un repositorio de datos online que describe la supervivencia y crecimiento de

microorganismos patógenos en distintas condiciones ambientales y un conjunto
de herramientas de softw are predictivo basado en éstos datos.

Una base de datos de respuestas microbianas en alimentos que

contiene más de 50.000 entradas.

Una colección de modelos predictivos basados en los datos de

ComBase para predecir crecimiento o inactivación de
microorganismos en alimentos.

Combase se divide en varias herramientas;

 1. El buscador ComBase ("ComBase Browser"); se compone de
miles de curvas microbianas de crecimiento y supervivencia, que
han sido cotejadas en institutos de investigación y de
publicaciones.

2. ComBase Predictor; son una colección de herramientas

basadas en los datos de ComBase para predecir el crecimiento o
inactivación de microorganismos.

3. Además, existen Combase Modelos Predictivos ("Combase

Predictive Models") y Recursos ("Resources").

Para acceder a estas herramientas hay que registrarse (si es la primera vez
que accede) o identificarse (si ya tiene un registro previo hecho).

Identificación

Hemos creado una cuenta en Combase que se puede utilizar sin

necesidad de registrarse (si no lo desean).

Para identificarse en esta cuenta común deben:

- introducir la siguiente dirección de correo electrónico:

alumnoalteracion@universitas.usal.es

- introducir la siguiente clave de acceso: alteración

- y hacer clic en el botón azul de 'LogIn'

Si lo desea puede registrase/identificase con sus propios datos. A continuación le mostramos como:
Registrarse
 Si es nuevo en ComBase debe registrarse.
Para ello, haga clic en el Botón Rojo "'Sign up" le aparecerá una
pantalla similar a la de la imagen de la derecha. Rellene los
cuadros de texto:

- introducir dirección de correo electrónico (Email)

- introducir palabra clave (Passw ord)

- confirmar palabra clave

- y haciendo clic en el botón azul de 'Sign up'

Identificarse
Para identificarse hay que estar previamente registrado.

Si ya se tiene una cuenta en ComBase, únicamente debe

Identificarse introduciendo:

- la dirección de correo electrónico (Email)

- la palabra clave elegida (Passw ord)

- y haciendo clic en el botón azul de 'LogIn'

4. Combase Predictor

Descripción de ComBase Predictor

Como hemos visto, dentro de la plataforma Combase existen varias herramientas: Buscador Combase, Combase Predictor, Combase
Modelos Predictivos y Recursos. En este ejercicio nos ejercitaremos en el uso de Combase Predictor y, en concreto, en el modelo de
crecimiento.

Una vez registrados e identificados se accede a la página principal de ComBase.

Obtendrá una imagen similar a la de la imagen.
En la columna que aparece a la derecha de la pantalla hay que seleccionar ComBase
Predictor.

ComBase Predictor es un conjunto de modelos de crecimiento y modelos de muerte

térmica para predecir la respuesta de varios microorganismos a distintos factores
ambientales. Existen distintos tipos de modelos:

1. Modelos de Crecimiento
2. Modelos de Inactivación térmica
3. Modelos de inactivación no térmica

Estos modelos y programas están disponibles gratuitamente en Internet. Se trata pues,

de una aplicación "on-line".

ComBase Predictor constituye una herramienta altamente eficaz para el diseño,

comparación y validación de modelos predictivos. Eficaz en Microbiología predictiva.

Antes de utilizar el ComBase Predictor hay que seleccionar el tipo de modelo.

Seleccionar el modelo "Growth"

5. ComBase Predictor Modelos de crecimiento ("Growth Model"): Descripción

ComBase Predictor Growth Model

Página principal de ComBase Predictor "Growth Model"
La página principal de ComBase Predictor Growth Model tiene un aspecto parecido a la imagen de la derecha y permite:

- Hacer predicciones tanto con una temperatura estática (a lo largo del tiempo) o o bajo condiciones de temperatura fluctuante
en el tiempo.
- Efectuar hasta cuatro predicciones simultáneas.

Observe como existen varias áreas diferenciadas:

1.Indica el modelo de predicción seleccionado.

 1.Indica el modelo de predicción seleccionado.

2. Temperatura estática o bajo condiciones de temperatura

fluctuante y a w o NaCl

3. Área para elegir el tipo de microorganismo.

4. Para introducir los parámetros de la simulación:

temperatura, pH, concentración de NaCl o a w (según lo
seleccionado en el área 2) y nivel inicial de microorganismos.

5. Resultados de la predicción expresados por las

constantes cinéticas de crecimiento: tasa máxima de
crecimiento y tiempo de duplicación.

6. Área de resultados obtenidos en forma gráfica o de forma

numérica (tabla).

7. Área para ampliar o reducir el tiempo de predicción.

Áreas para fijar condiciones de crecimiento de ComBase Predictor "Growth Model"

Observe que existe la posibilidad de elegir la
2. Área para fijar
modalidad de:
modalidad en:
- temperatura: estática o cambiante
- Tª estática o
dinámica - Actividad acuosa expresada como
NaCl o como Aw
- Actividad acuosa

Por debajo bajo existe una zona con:

3. Área para fijar: -un menú desplegable para la elección

del microorganismo
- Microorganismo

- Nivel inicial de microorganismos (Init. level)

4. Área para fijar: - Temperatura (ºC),

- Parámetros de - pH
crecimiento
- Concentración de NaCl (%) (o a w según lo
seleccionado en el área 2).

Áreas de resultados de ComBase Predictor "Growth Model"

Ejecutar la predicción; Al correr el modelo con los datos introducidos o seleccionados se generan los resultados de la predicción.
Los resultados se observan al presionar la tecla 'Enter' o 'hacer clic" en cualquier lugar de la página', después de cambiar un parámetro.
Existen varias áreas para recoger los resultados obtenidos con el modelo:

5. Área de
5. Área de
- Resultados de la predicción expresados por las
resultados de la
constantes cinéticas de crecimiento: tasa máxima
predicción
de crecimiento y tiempo de duplicación (en el
expresados por las
recuadro de color rosa en la imagen).
constantes cinéticas
de crecimiento.

6. Área de - Área de resultados obtenidos en forma gráfica o

resultados de forma numérica (en el recuadro de color verde
obtenidos en forma en la imagen). Para pasar de una a otra hay que
gráfica o de forma activar el enlace "Chart" o "Data points".
numérica.
- El área para ampliar o reducir el tiempo de
observación o extensión de los datos predichos. (En
7. Área para ampliar
el recuadro de color rojo en la imagen). hay que
o reducir el tiempo
introducir el número de horas en la casilla o hacer
de predicción.
clic en el "+" o en el "-" según el caso.

6. ComBase Predictor Modelos de crecimiento ("Growth Model"): Efectuar una predicción

Efectuar una predicción

Vamos a efectuar una predicción fijando las condiciones para la misma y ver el funcionamiento del programa y del modelo elegido.
Seleccionar la categoría de modelo

Seleccione categoría: modelos de crecimiento ("Growth Model")

Fijar la modalidad
En Temperatura: Dentro de temperatura seleccione la modalidad estática.
"Static"
La modalidad cambiante o fluctuante ("Dynamic") es para
introducir distintos rangos de temperatura a lo largo del tiempo.

En actividad acuosa:
En actividad acuosa seleccione o compruebe si esta
NaCl
seleccionado concentración de NaCl.

Seleccionar microorganismo

Seleccione el tipo de En el áreas para fijar el microorganismo seleccione, en el menú

microorganismo: desplegable: Brochothrix thermosphacta.
Brochothrix
Brochothrix thermosphacta es un microorganismo responsable
thermosphacta del deterioro de productos cárnicos y de pescado.

Seleccionar condiciones
La introducción de datos se puede efectuar introduciendo las cifras o desplazando el cursor

Respecto a los parámetros de "Initial level" y "Phys. state", mantener los que pone el programa por defecto.
NOTAS
Dado que el programa utiliza la notación numérica americana, los decimales deben escribirse con punto (.) en
lugar de coma (,).

En el área para establecer las condiciones en la casilla de "Init.

En Nivel Inicial: lev el" escriba la cifra de 3 o compruebe que existe esa cifra.

3 El nivel inicial es el número de microorganismo por gramo

expresados como logUFC/g. Por tanto, un 3 indica log UFC/g=3
lo que equivale a 1.000 UFC/g.

La casilla de "Phy s.state" déjela vacía o borre la cifra existente.

De esa manera el programa rellena automáticamente la cifra
En Estado Físico: más adecuada.

dejar vacío El 'Estado Físico' es una dimensión entre 0 y 1 relacionada con la

fase Lag o fase de latencia del microorganismo. Un 1 significa
 que el microorganismo se multiplicara inmediatamente sin fase
Lag.
En Temperatura:
En la casilla de "Temp (ºC)" escriba la cifra de 20 o compruebe
20 ºC que existe esa cifra.

En pH
En la casilla de "pH" escriba la cifra de 7 o compruebe que
7 existe esa cifra.

en NaCl:
En la casilla de "NaCl (%)" escriba la cifra de 0.6 o compruebe
0.6 que existe esa cifra.

Tiempo en horas:
En la casilla que aparece debajo de la gráfica (Time (h))
25 introducir 25 horas.

Ejecutar la predicción:

Al presionar la tecla 'Enter' o 'Return' después de cambiar un parámetro.

Al correr el modelo con los datos introducidos o seleccionados se generan los

resultados de la predicción:

Resultados de la predicción expresados por las constantes cinéticas de

crecimiento: tasa máxima de crecimiento (Log. conc/h) y tiempo de duplicación
(h) en área de color naranja o área 3)
Área de resultados obtenidos en forma gráfica o de forma numérica (área 4).
Para pasar de una a otra activar el enlace "Chart" o "Data points".

Ver resultados de la predicción

Ver resultados: Al correr el modelo en las condiciones establecidas y durante las

horas fijadas se efectúa la predicción siguiendo las fórmulas del
en gráfico modelo en forma gráfica expresando los log UFC/g durante el
tiempo de duración fijado (en este caso unas 25 horas).

Encima de la gráfica aparece dos enlaces para ver los resultados

Ver resultados: obtenidos en forma gráfica o de forma numérica. Para ver los
resultados en forma de tabla haga clic "Data points".
en tabla
Aparece una tabla con la concentración de microorganismos
expresados en Conc (Log10UFC/g) a intervalos regulares de tiempo.

Debajo de la zona donde se introducen las condiciones aparecen 2

parámetros que definen el crecimiento bacteriano para esas
Ver resultados: condiciones:

cinéticos Tasa o velocidad máxima de crecimiento ("Max.rate"), y

Tiempo de duplicación ("Dbl.tim e"), el tiempo en horas en
las que se duplica la población.

7. ComBase Predictor Modelos de crecimiento ("Growth Model"): Efectuar predicciones simultáneas

Efectuar predicciones simultáneas.

Utilizando esta característica, es posible comparar las respuestas de diferentes organismos a un único conjunto de condiciones ambientales
o las respuestas de del mismo microorganismo a condiciones ambientales variadas.

Se pueden variar las condiciones y ver la predicción para esas

condiciones. Para ello hay que hacer clic sobre "Add prediction" y el
programa nos muestra la nueva predicción, que se puede comparar con
 la que ya teníamos.

"Add prediction"

Haciendo clic sobre esta zona se añaden nuevas predicciones,

hasta un máximo de cuatro:

NOTA: Hay que tener en cuenta que el programa siempre vuelve

a los valores que tiene establecidos por defecto, por lo que cada
Para ver u ocultar el resultado de las distintas predicciones hay que
vez que se añade una nueva predicción hay que volver a
pasar de una a otra, para ello se hace clic sobre sobre los iconos que
introducir todo los parámetros.
aparecen a la izquierda de la zona coloreada.

Añadir una nueva predicción

Haga clic en: "Add prediction"

Recuerde que el programa siempre vuelve a los valores que tiene establecidos
por defecto, por lo que cada vez que se añade una nueva predicción hay que volver
a introducir todo los parámetros.

Seleccionar microorganismo

Seleccione el tipo de microorganismo: Brochothrix thermosphacta

En el menú desplegable para fijar el microorganismo, seleccione Brochothrix

thermosphacta.

Seleccionar condiciones

En el área para establecer las condiciones en la casilla de "Init.

lev el" escriba la cifra de 3 o compruebe que existe esa cifra.

La casilla de "Phy s.state" déjela como aparece por defecto.

En la casilla de "Temp (ºC)" escriba la cifra de 5.

En la casilla de "pH" escriba la cifra de 7 o compruebe que existe

esa cifra.

En la casilla de "NaCl (%)" escriba la cifra de 0.6 o compruebe

que existe esa cifra.

Mantenga las En la casilla que aparece debajo de la gráfica (Time (h)) introducir
mismas 25 horas.
condiciones que
condiciones que
el caso anterior
excepto la
temperatura:
cambiar 20 ºC
por 5 ºC

Ver resultados de la predicción

Ver resultados: Al correr el modelo en las condiciones establecidas y durante las

horas fijadas se efectúa la predicción siguiendo las fórmulas del
en gráfico
modelo en forma gráfica expresando los logUFC/g durante el
tiempo de duración fijado (en este caso unas 25 horas).

Al igual que en la predicción anterior, encima de la gráfica aparece

dos enlaces para ver los resultados obtenidos en forma gráfica o
Ver resultados:
de forma numérica. Para ver los resultados en forma de tabla
en tabla haga clic "Data points".

Aparece una tabla con la concentración de microorganismos

expresados en Conc (Log10UFC/g) a intervalos regulares de
tiempo.

Debajo de la zona donde se introducen las condiciones aparecen

2 parámetros que definen el crecimiento bacteriano para esas
Ver resultados:
condiciones:
cinéticos
Tasa o velocidad máxima de crecimiento ("Max.rate"), y
Tiempo de duplicación ("Dbl.tim e"), el tiempo en horas
en las que se duplica la población.

8. Supuesto práctico

Imagine que le encargan un estudio de predicción del crecimiento de Brochothrix therm osphacta bajo diferentes condiciones de
temperatura, pH y concentración de NaCl (o aw).

1º Acceda a Combase siguiendo las instrucciones del apartado 3. Registrarse/Identificarse

2º Para responder a las preguntas #1, #2 y #3, en el modelo de crecimiento ("Growth Model") introducca las condiciones que se
muestran en las imágenes de la izquierda de la/las preguntas correspondientes siguiendo las instrucciones del apartado 6.
Efectuar una predicción
3º Para responder a las preguntas #4 y #5, realize 4 predicciones simultáneas introducciendo las condiciones que se muestran
en la imágen de la izquierda de la/las preguntas siguiendo las instrucciones del apartado 7. Efectuar predicciones simultáneas.
4º Para contestar a la preguntas que se le plantean, haga clic en la casilla que antecede a la opción que considere más
adecuada para enviarlas al servidor.
 Siguiendo el ejemplo visto en el apartado 6 (en
el que las condiciones de crecimiento
seleccionadas corresponden a las de la imagen
de la izquierda).

Pregunta 1:
¿En cuánto tiempo se prevé que B.
thermosphacta alcance una concentración de 6
logUFC/g?:

a) 13 horas

b) 16,4 horas

c) 7 horas

Pregunta 2: Manteniendo las condiciones

anteriores, si únicamente disminuimos la
temperatura de 20 ºC a 5 ºC. Transcurridas 25
horas, el número de B. thermosphacta se
incrementará en:

a) 1 log UFC/g

b) <1 log UFC/g

c) No se aprecia incremento en
el número de UFC/g de B.
thermosphacta

El tiempo de duplicación es el tiempo que

requiere la población microbiana en
determinadas condiciones para multiplicarse por
Parámetros que definen el crecimiento de B. thermosphacta para las dos.
condiciones establecidas anteriormente:
Pregunta 3:
Resultados cinéticos para el caso 1: B. thermosphacta (a 20 ºC) En base a esto, ¿Cuánto tiempo se requiere en
cada uno de estos dos casos para duplicar el
número de microorganismos?:

a) Cada 0.3 y cada 0.1 horas

respectivamente, se duplica la
población.
Resultados cinéticos para el caso 2: B.thermosphacta (a 5 ºC)
b) Cada 0.9 y cada 5.1 horas
respectivamente, se duplica la
población.

c) Cada 0.9 y cada 5.1 días

respectivamente, se duplica la
población.
 Realizando 4 simulaciones simultáneas en las
que las condiciones de crecimiento
seleccionadas corresponden a las de la imagen
de la izquierda donde:

Predicción 1. Temp 20 ºC, pH 7 y NaCl 0.6

Predicción 2. Temp 5 ºC, pH 7 y NaCl 0.6
Predicción 3. Temp 20 ºC, pH 5.5 y NaCl 0.6
Predicción 4. Temp 20 ºC, pH 7 y NaCl 3.00

Pregunta 4: Transcurridas 12 horas;

¿Modificando qué factores con respecto de la
predicción 1 el incremento de UFC/g no supera 1
log ?:

a) Temperatura y a w

b) Temperatura y NaCl

c) Temperatura y pH

Pregunta 5: Si por encima de log 7 UFC/g el

alimento muéstrala alteración/deterioro; ¿Qué
estrategia/as elegiría para conservarlo en
buenas condiciones 24 horas?:

a) Disminuir la Tª a 15 ºC

b) Disminuir la Tª a 5 ºC o
disminuir el pH a 5.5

c) Aumentar la concentración de
NaCl al 3%

9. Envío al servidor de los resultados del ejercicio

En este apartado le pedimos que haga un comentario del ejercicio para darnos su opinión
sobre el mismo (nivel de dificultad que le ha parecido que presenta la realización y la
interpretación, así como el grado de utilidad).

NOTA IMPORTANTE: Las dudas que hayan surgido durante la realización del ejercicio no las
incluya en este apartado; diríjase a nosotros a través del correo electrónico:
tutoralteracion@universitas.usal.es

Introduzca sus datos en las casillas y posteriormente pulse sobre el botón 'ENVIAR'. Espere
unos segundos hasta que el servidor conteste con los aciertos y fallos.

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