Facultad de Educación

Licenciatura en Ciencias Naturales: Física, Química y Biología

Bioquímica

Informe de Laboratorio N° 6

Cinética Molecular de los Aminoácidos

Paula Andrea Cabrera Charry 20141124977

Rubén Darío Giraldo Manchola 20141126269

Mirella Perdomo Cencena 20141126454

Profesor

MEE. Luis Javier Narváez Zamora

Neiva, Huila, Colombia Abril, 2017

 Contenido

Resumen ............................................................................................................................ 3

Marco teórico ..................................................................................................................... 4

Objetivos............................................................................................................................ 6

Materiales y reactivos ........................................................................................................ 7

Procedimiento .................................................................................................................... 8

Resultados y discusiones .................................................................................................. 9

Conclusiones.................................................................................................................... 14

Bibliografía ...................................................................................................................... 15
 Resumen

El siguiente informe tuvo como objetivo determinar la velocidad de reacción del

aminoácido L Alanina con la Ninhidrina mediante el espectrofotómetro, al igual que

hallar la cantidad de las moléculas del aminoácido que se quedaron sin reaccionar, para

esto se empleó un blanco (analito) y una solución de 3 mL de Alanina con una gota de

ninhidrina, y siendo programado el equipo para 10 referencias las cuales fueron de 5

segundos cada una, lo primero que fue determinado fue la 𝜆𝑚𝑎𝑥 dando como valor 249.2

nm. La solución al reaccionar mostró una coloración azulosa muy tenue dando a conocer

que la Alanina es un aminoácido primario, finalmente se determinó que la velocidad de

la reacción de la solución fue de 2,16*10-7 moles/s, en donde participaron 1,08*10-5

moles y no reaccionaron 1,39*10-4 moles durante los 50 segundos, llegando a estipular

mediante el número de Avogadro que para cada segundo reaccionaron 1,30*1017

moléculas.
 Marco Teórico

Las interacciones entre los compuestos o especies químicos cuando se encuentran

en reacción son estudios que de los cuales se apropian los químicos, en donde asocian

así algunas leyes termodinámicas que permitan distinguir la energía que se libera o se

necesita para el rompimiento de un enlace, el cual se encuentra formando una asociación

entre las moléculas, acompañado de este proceso se encuentra incorporada la entropía

siendo muy importante para entender que el movimiento de las moléculas de un lado a

otro formando o destruyendo enlaces representa una cantidad de energía y que esta

nunca va a ser la misma al comienzo de una reacción que al final de esta. Partiendo de

allí, se le atribuyen ciertas características a estos procesos químicos dependiendo de si

liberan o absorben energía, de acuerdo a (Avery, 2002) " Si la reacción libera energía es

de carácter exotérmico y si esta absorbe es endotérmica". La velocidad con la que las

moléculas se desplaza en su labor de formar enlaces con el fin de encontrar una

estabilidad, determina si la especie química es volátil o versátil por ello cuanto menos

sea el tiempo de reacción esta puede pasar con una gran rapidez de un estado a otro,

situación la cual le da importancia a la molécula por ostentar un mecanismo de reacción

optimo. En ocasiones la velocidad de reacción de algunas moléculas no son muy

favorables en ambientes normales por lo cual se le debe asociar una serie de factores

termodinámicos y químicos como presión, temperatura y un catalizador que le

proporcione una aceleración a la reacción; esto solo se efectúa en algunos procesos

industriales en donde la única función es la de obtener un compuesto de interés.

 Para el caso de las proteínas que son biomoléculas que se encuentran conformadas

por la agrupación de aminoácidos caracterizados por la presencia de un grupo amino. En

nuestro medio existen al menos 200 aminoácidos de los cuales 20 de ellos son de

carácter proteicos razón por la cual son importantes para el funcionamiento biológico de

nuestro organismo, por ello lograr identificar la presencia de los aminoácidos es

significativo; dentro las reacciones para lograr este proceso se encuentra el de la

ninhidrina en donde es esta un agente oxidante fuerte que provoca la desanimación del

grupo amino que acompaña la estructura molecular del aminoácido, un proceso que está

compuesto por dos pasos, en el primer paso se elimina el hidrogeno que acompaña al

carbono alfa dando paso a un iminoácido que luego se hidroliza en medio acuoso a α-

cetoacido y amoniaco, este amoniaco no se acumula si no que sufre una serie de

transformaciones las cuales van acompañadas de la hidrindantina y la ninhidrina en

exceso formando un complejo de condensación que finalmente da un color purpura-azul

que según (Avery, 2002) " se debe al enolato azul que absorbe luz con una longitud de

onda máxima de 570 nm".

 Objetivos

 Determinar la velocidad de reacción del aminoácido L Alanina

con la Ninhidrina mediante el espectrofotómetro.

 Hallar la cantidad de moléculas del aminoácido que no

reaccionaron.
 Materiales y Reactivos

 Espectrofotómetro

 Agua destilada

 Micropipeta

 Vaso precipitado

 Balón aforado de 10ml

 Muestra de Alanina 0.05M

 Ninhidrina

 Celdas de plástico
 Procedimiento

Al estar ya preparado el aminoácido, es decir, la Alanina al 0,05 M, se procedió a

calibrar el equipo, o sea, el espectrofotómetro, mientras tanto con la ayuda de las celdas

de plástico y de la micropipeta se preparó la solución de Alanina de 3 mL a la que se le

añadió una gota de Ninhidrina, y en otra celda se depositó el blanco, que en este caso fue

agua destilada, posteriormente se introdujo el blanco, es decir, el analito, al

espectrofotómetro para ser determinada la longitud de onda en su máxima absorbancia, y

de igual manera se programó el equipo para las 10 referencias que iban a ser registradas,

al terminar el proceso de calibración del equipo y programación se procedió a introducir

la celda con la solución al espectrofotómetro para finalmente hacer la medición de la

velocidad de la reacción en periodos de cinco segundos por 10 veces.

 Resultados y Discusiones

Los resultados que se mostraran a continuación fueron los obtenidos en la práctica.

Lo primero que se determinó fue la 𝜆𝑚𝑎𝑥 ésta dio un valor de 249.2 nm, se tomó

este valor para las siguientes pruebas:

Figura 1. Absorbancia Vs Concentración molar.

Según (Allinger , Cava, Jongh, Johnson, Lebel, & Stevens, 1984)“la ninhidrina es

un reactivo que produce un color azul con los 𝛼 – aminoácidos primarios” por tanto se

puede decir que la Alanina pertenece a este grupo.

Tabla 1. Absorbancia por intervalo de tiempo.

Absorbancia Tiempo
-0,082 5
6,000 10
-0,073 15
-0,079 20
-0.075 25
-0.087 30
 Absorbancia Tiempo
-0,042 35
-0,200 40
-0,333 45
0,1592 50

Atendiendo a la absorbancia registrada por el intervalo de tiempo se halla la

constante de extinción molar tomando dos puntos de la curva de calibración y de esta

manera encontrar la pendiente de la grafica que sería la misma constante de extinción

molar, cuyo valor fue de 12.5

𝑦2 − 𝑦1
𝑦=
𝑥2 − 𝑥1

0,5 − 0
𝑦= = 12,5
0,04 − 0

Posteriormente se procedió a encontrar la concentración que adquiría la muestra en

los diferentes intervalos de tiempo, datos plasmados en la tabla 2.

Tabla 2. Absorbancia, concentración y número de moles por concentración.

Absorbancia Concentración # de Moles por

concentración
-0,082 0,00656 0,00001968
6,000 0,48 0,00144
-0,073 0,00584 0,00001752
-0,079 0,00632 0,00001896
-0.075 0,006 0,000018
-0.087 0,00696 0,00002088
-0,042 0,00336 0,00001008
-0,200 0,016 0,000048
-0,333 0,02664 0,00007992
0,1592 0,012736 0,000038
 Se encontró que para los primeros 5 segundos, la muestra arrojó una absorbancia

de -0.082 que representado como concentración molar expresa un valor de 0.00656 M y

la cual para un volumen de 3 mL ya que esta fue la alícuota de muestra que poseía una

cantidad de 0.00001968 moles del aminoácido; de igual forma como se encontró la

cantidad de moles para la concentración que arrojó la muestra en un intervalo de 5

segundos, se halló la cantidad de moles para las diferentes concentraciones arrojadas por

la muestras en los respectivos intervalos de tiempo (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50)

segundos.

Tabla 3. Numero de moles contrastado con el número que reaccionaron.

# de Moles por # de Moles que

concentración reaccionaron
0,00001968 0,00013032
0,00144 -0,00129
0,00001752 0,00013248
0,00001896 0,00013104
0,000018 0,000132
0,00002088 0,00012912
0,00001008 0,00013992
0,000048 0,000102
0,00007992 0,00007008
0,000038 0,000111792

Ya encontrada la cantidad de moles que habían por concentración de la muestra en

cada intervalo de tiempo se pasó a buscar la cantidad de moles que reaccionaron con

relación a la cantidad de moles que habían en primera instancia, esta cantidad se halló

acorde a la concentración que se encontraba el aminoácido (L-Alanina) que era de 0.05

M, esto representaba una cantidad de 0.00015 moles para una alícuota de 3 mL la cual se
resta con la cantidad de moles que habían en las diferentes concentraciones arrojadas en

los intervalos de 5 segundos, ya que estas corresponden a las moles del analito que no

reaccionaron, motivo por el cual se oponen al paso de la luz y dan una absorbancia

determinada; para el primer caso se tomo 0.00015 moles que habían, en primer lugar a

estos se le resto 0.00001968 moles que son las que no reaccionaron, esta operación dio

0.00013032 moles la cual corresponde a la cantidad que reacciona, del mismo modo se

efectuó para todas las otras concentraciones. No obstante en el segundo intervalo de

tiempo la reacción arrojó una cantidad de moles en exceso, razón por la cual el

espectrofotómetro muestra una absorbancia de 6.0 mucho mayor comparada con las otras,

esta situación se puede explicar tal vez por la presencia de ninhidrina reducida que no se

tomo como blanco dentro del análisis del espectrofotómetro.

Para encontrar la velocidad con la que reaccionaron las moléculas vamos a hacer

uso de la ecuación de la recta donde los valores del eje x corresponderán al tiempo de

reacción y las del eje y al número de moles que reaccionaron

0,00013248 − 0,00013032
𝑦=
15 − 5

𝑦 = 0,000000216

2,16𝑥10−7 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑠

La velocidad de reacción promedia aproximadamente corresponde a

2,16𝑥10−7 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑠 ahora si multiplicamos ese valor por los 50 segundos que

corresponde al tiempo consumido en este proceso nos da un valor de 1.08x10-5 moles.

Para encontrar la cantidad de moléculas que reaccionan por unidad de tiempo

multiplicamos el valor anteriormente dado por el número de Avogadro

2,16𝑥10−7 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 6,023𝑥1023 𝑚𝑜𝑙é𝑐𝑢𝑙𝑎𝑠

𝑥 = 1.30𝑥1017
𝑠 𝑚𝑜𝑙 𝑠

A continuación en la figura 2 se observa la relación de la absorbancia con el

transcurso de tiempo

4
Absorbancia

0
0 10 20 30 40 50 60
-1

-2
Tiempor(s)

Figura 2. Absorbancia Vs tiempo.

 Conclusiones

Se logró cumplir con los objetivos de la práctica ya que se determinó la velocidad

con que se llevó a cabo la reacción entre el aminoácido L-Alanina con la ninhidrina este

valor fue de 2,16*10-7 moles/s, con él se determinó el total de moles que participaron en

los 50 segundos que duro el registro de la reacción este fue de 1.08*10-5 moles de igual

forma se calculó las moles que no hicieron parte de la reacción dando un valor de

1.39x10-4 moles, no obstante el tiempo necesario para reaccionar la totalidad de las

moles iniciales del aminoácido se encuentra en el cociente entre este y la velocidad de

reacción, dando un lapso de tiempo de 11 minutos con 57 segundos, ya que la duración

del proceso en el laboratorio fue aproximadamente de 12 minutos esto indicaría que las

moles reaccionaron en su totalidad sin embargo se debe poner en duda si había la

cantidad apropiada de ninhidrina para reaccionar con todo el analito correspondiente de

lo contrario se puede decir que algunas moles de este no reaccionaron, por otra parte se

logró determinar el tiempo de reacción de las moléculas empleando el número de

Avogadro, este fue 1.30*1017 moléculas que reaccionaron en cada segundo.

La absorbancia además de poder hallar con ella concentraciones de muestras

desconocidas se emplea para determinar velocidad de reacción, la cantidad reactivo

transformado y la que queda sin reaccionar por lo que el espectrofotómetro es un

excelente instrumento analítico.

 Bibliografía

Allinger , N., Cava, M., Jongh, D., Johnson, C., Lebel, N., & Stevens, C. (1984).
Quimica Organica (Segunda ed.). Esoaña: Reverte S.A.

Avery, H. E. (2002). Cinetica quimica basica y mecanismos de reaccion. (F. A. Ordax,

& S. A. Arrizabalga, Trads.) Barcelona: Reverté S.A.

Walton, H. F., & Reyes, J. (2005). Analisis químico e instrumental moderno. (E.
Casassas Simó, & J. Duñach Archs, Trads.) Barcelona: Reverté S.A.