intoduction

Sebuah bukti besar mendukung hipotesis bahwa mesolimbic dopamine (DA) memediasi efek
penguat stimulan sistem saraf pusat seperti kokain dan amfetamin (Wise, 1996; Kuhar et al., 1991;
Johanson dan Fischman, 1989). Meskipun tergoda untuk menganggap bahwa DA juga menengahi
efek subyektif tipe amphet-amine dari obat-obatan ini pada manusia, data yang dipublikasikan tidak
mendukung hypothe-sis ini. Data ini, seperti ditinjau secara rinci di tempat lain.

Villemagne et al., 1999), mencakup pengamatan bahwa antagonis reseptor DA tidak menghalangi
efek menindas kokain (Ohuoha et al., 1997; Malison et al., 1997; Price et al., 1997) atau amfetamin
Brauer dan de Wit, 1997, 1996). Data ini dan data lainnya yang ditinjau dalam publikasi baru-baru ini
(Villemagne et al., 1999) sug- .

amfetamin, 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA), dan (1) -methamphetamine ((1) -

METH) serta stimulan yang telah mendapat sedikit penelitian dengan metode neurokimia modern:
efedrin, phen-termine, dan aminorex. Dengan menggunakan data yang dipublikasikan, kami
kemudian mengkorelasikan potensi agen untuk melepaskan NE dengan dosis oral yang menghasilkan
efek subjektif amfetamin pada manusia.

Obat yang berinteraksi dengan membran integral pro-teins yang berfungsi sebagai transporter untuk
biogenic amines DA, NE, dan serotonin (5-HT) dapat dibagi menjadi dua kelompok. Penghambat
penyerapan mengikat transporter, namun tidak diangkut. Agen ini meningkatkan synaptic neu-
rotransmitter dengan mengganggu pengangkatan mereka dari ruang ekstraselular sinaptik.

Substrat, sebaliknya, diangkut oleh protein ini ke terminal saraf, di mana mereka mempromosikan
pelepasan neurotransmitter melalui mekanisme dua cabang. Substrat meningkatkan
neurotransmitter sitoplasma dengan mengganggu akumulasi neurotransmiter pada vesikula
penyimpanan dan mereka memproses lebih banyak proses pertukaran yang dimediasi oleh operator.

Seperti disebutkan di atas, banyak stimulan yang dikembangkan pada tahun 1950 dan 1960an belum
dipelajari dengan metode neurokimia modern dan dapat bertindak baik sebagai inhibitor atau
substrat umpan dari transporter amina biogenik. Oleh karena itu kami dicirikan

mM tyramine ([3H] DA) atau 100 mM tyramine ([3H] 5-HT).

[3H] Pengambilan NE dilanjutkan dengan modifikasi kecil dari prosedur di atas: sumber jaringan
adalah keseluruhan otak tikus dikurangi kaudatus dan serebelum, 5 nM RTI-229 digunakan untuk
memblokir pengambilan NEH ke saraf DAergic, inkubasi berlanjut. selama 10 menit pada 25 ° C,
konsentrasi [3H] NE adalah 5 nM, dan nonspeci®c.

juga ditambahkan ke larutan sukrosa untuk percobaan pelepasan 5HTHHHHH untuk memblokir
potensial reuptake 5H [5H] ke terminal saraf NE dan DA. Setelah 12 pukulan dengan ho-mogenizer
Potter-Elvehjem, homogenat disentrifugasi pada 1.000 g selama 10 menit pada suhu 0 ± 4 ° C dan
supernatan dipertahankan pada es (sinapsisosomal). Setiap otak tikus (kira-kira 1.200 mg)
menghasilkan persiapan jaringan yang cukup untuk 250 tabung uji untuk uji pelepas [3H] DA dan
[3H] 5-HT dan untuk 125 tabung uji untuk uji pelepas NE [3H].

Sediaan Synaptosomal diinkubasi untuk keadaan mapan dengan 5 nM [3H] DA (30 menit), 7 nM [3H]
NE (60 menit), atau 5 nM [3H] 5HT (60 menit) dalam penyangga serapan (tanpa BSA) plus 1 mM
reserpin dalam gelas polipropilena dengan pengadukan pada suhu 25 ° C. Nomifensine (100 nM) dan
GBR12935 (100 nM) ditambahkan ke buffer untuk percobaan pelepasan 5HT [3H]. RTI-229 (5 nM)
ditambahkan ke buffer untuk percobaan pelepasan NE [3H] untuk mencegah [3H] NE reuptake ke
saraf dopamin , istilah-istilah. Setelah inkubasi ke keadaan mapan, 850 ml synap-tosomes yang telah
dimuat dengan neurotransmiter [3H] ditambahkan ke tabung uji polistirena 12 3 75 mm yang
mengandung 150 ml obat uji dalam penyangga serapan. Setelah 5 menit ([3H] DA dan [3H] 5-HT)
atau 30 menit ([3H] NE), reaksi pelepasan dihentikan dengan pengenceran dengan buffer pencuci 4
ml (10 mM Tris-HCl pH 7,4 mengandung NaCl 0,9% pada 25 ° C) diikuti dengan penyemprotan vakum
yang cepat atas GF / B ® yang menggunakan Brandbrester Brandel. The ® latch dibilas dua kali.

tindakan agen ini menggunakan metode in vitro yang mendiskriminasi antara penghambat dan
substrat transporter.

Material dan metode

Efek dari agen uji pada [3H] DA dan [3H] 5-HT diambil menggunakan metode yang dipublikasikan
(Roth-man et al., 1993). Brie¯y, synaptosomes disiapkan dari tikus betina untuk reuptake DAH atau
dari keseluruhan otak tikus dikurangi serentak dan serebelum untuk pengambilan kembali 3-5H HT.

aringan segar dihomogenisasi dengan sukrosa 10% sukrosa dengan homogenizer Potter-Elvehjem.
Homog-enates disentrifugasi pada 1.000 g selama 10 menit pada suhu 4 ° C dan supernatan
dipertahankan di atas es. Tabung uji polistirena (12 3 75 mm) dilapisi dengan 50 ml buffer Krebs-
fosfat (® pH 5 7,4) yang terdiri dari 0,5 mM Na2SO4, 0,5 mM KH2PO4, NaCl 126 mM, 2,4 mM KCl,
0,83 mM CaCl2, 0,8 mM MgCl2, glukosa 11,1 mM pada pH. 7,4, dengan asam askorbat 1 mg / ml, 1
mg / ml bovine serum albumin (BSA), dan 50 mM pargyline ditambahkan (buffer serapan), 750 ml
[3H] DA (5 nM) atau [3H] 5-HT 2 nM) diencerkan dalam buffer serapan tanpa BSA, dan 100 ml agen
uji dalam penyangga serapan. Serapan Nonspeci®c dilakukan tanpa menggunakan 10 , Serapan
dilakukan dengan menggunakan 10 mM indatraline atau 10 mM tyramine.

Uji serapan dimulai dengan menambahkan 100 ml sediaan synaptosom ke tabung. Kurva
penghambatan dihasilkan oleh ligan inkubasi [3H] dengan zat uji (konsentrasi tabung 1 nM sampai
100 mM ®) yang diencerkan dalam buffer serapan. Eksperimen reuptake 5-HT [3H] dilakukan dengan
adanya 100 nM nomi-fensine dan 100 nM GBR12935 untuk mencegah penyerapan ke terminal saraf
noradrenerigic atau DA.

Inkubasi 15 atau 30 menit dilakukan pada suhu 25 ° C untuk [3H] DA dan [3H] 5-HT. Inkubasi diakhiri
dengan menambahkan 4 ml buffer cuci yang mengandung 10 mM Tris HCl (pH 7,4) pada NaCl 0,9%
pada suhu 25 ° C, diikuti dengan pelepasan cepat atas Whatman GF / B®lters dan dua siklus
pencucian tambahan. Tritium yang ditahan pada receiver telah dihitung dalam penghitung beta
(Taurus, Titertek, Huntsville, AL) pada efisiensi 40% setelah ekstraksi semalam ke koktail ICN
Cytoscint (ICN Biomedi-cals, Costa Mesa, CA).