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Vibrio sp.
Bacillus sp.
Pseudomonas sp.
Cytophagas sp.
Objetivos específicos:
Hipótesis
Los microorganismos nativos aislados de la composta y residuos agroindustriales en
descomposición tienen la capacidad de producir diversos tipos de enzimas celulolíticas con
potencial para degradar residuos dañinos al ambiente.
Metodología:
1. Colecta de muestra.
1.1 Toma de muestra de lixiviado de composta orgánica.
El muestreo del lixiviado de residuo vegetal se realizó a partir del compostaje
ubicado en la Universidad Politécnica del Estado de Morelos localizada en Blvd.
Paseo Cuauhnáhuac 566, Lomas del Texcal, 62574 Jiutepec, Mor.
2.2.1 Tomar del tubo “1” 1mL de lixiviado y verter en el tubo “2” que contiene
agua estéril y homogenizar el contenido del tubo.
2.2.2 Tomar del tubo “2” 1mL de lixiviado y verter en el tubo “3” que contiene agua
estéril y homogenizar el contenido del tubo.
.
2.2.3 Tomar del tubo “3” 1mL de lixiviado y verter en tubo “4” que contiene agua
estéril y homogenizar el contenido del tubo.
.
2.2.4 Tomar del tubo “3” 1mL de lixiviado y verter en tubo “4” que contiene agua
estéril y homogenizar el contenido del tubo.
2.2.5 Tomar del tubo “4” 1mL de lixiviado y verter en tubo “5” que contiene agua
estéril y homogenizar el contenido del tubo.
2.2.6 Sembrado de cajas de las distintas diluciones (1D, 2D, 3d, 4d) en condiciones
aerobias.
2.2.7 Sembrado de cultivo puro en condiciones de anaerobiosis.
NOTA: Incubar a 35-37 ºC durante 24-48 horas.
Figura 5. Obtención de microorganismos con actividad Figura 6. Obtención de microorganismos con actividad
celulolítica en medio CMC 1% en condiciones aerobias. celulolítica en medio CMC 1% en condiciones anaerobiosis.
Figura 7. Plaqueo del medio CMC 1% con rojo Figura 8. Incubación del medio CMC 1% con rojo Congo
a temperatura ambiente.
Congo.
Figura 11. Caracterización cualitativa de la activad Figura12. Figura Caracterización cualitativa de la activad
celulolítica (dilución E-4) a las 12 hrs de crecimiento. celulolítica (dilución E-5) a las 12 hrs de crecimiento.
ANALISIS DE LOS RESULTADOS
Fig.1. Crecimiento de bacterias con actividad Fig.2. Crecimiento de bacterias con actividad
celulolítica en agar rojo congo y CMC 1%. celulolítica en agar rojo congo y CMC 1%.
En las imágenes anteriores podemos observar los resultados más representativos de la identificación de microorganismos con
actividad celulolítica, obteniendo distintas formas de crecimiento, cada una representaba un crecimiento particular, en la Fig.1.
podemos observar como las bacterias que crecían en el medio lo hacían de forma lineal sobre el paso del asa bacteriológica, mientras
que en el segundo caso (Fig.2.), se puede notar la segregación de una mucosa perteneciente a la bacteria, la cual se esparció a lo largo
de la caja de cultivo. En la Fig.3. con la finalidad de obtener un control, se sembro un hongo con actividad previamente conocida
(pectinasa) y suponiendo que el hongo segregaría enzimas capaces de degradar la celulosa debido a su origen (cascara de pepino),
encontrándonos con la inhibición del crecimiento del mismo y convirtiéndose en un control negativo para crecimiento de este mismo
en medio CMC 1% y rojo congo. A sí mismo en la FIg.4. podemos observar las distintas tonalidades del medio rojo congo 48 horas
post-siembra de las cepas aisladas con anterioridad.
Conclusión
- Los microorganismos que crecieron en el medio CMC 1% con rojo congo poseen actividad
celulasa.
- El hongo que se utilizó como control de positivo para actividad pectinasa no posee actividad
celulasa o bien, su crecimiento se vio inhibido debido a que el medio CMC 1% con rojo congo
no contenía los requerimientos nutricionales secundarios para su desarrollo.
- Las bacterias que presentaron crecimiento en el medio CMC 1% con rojo congo, las cuales
son presentadas en la Fig.1. del apartado de análisis de resultados, podrían tener actividad
celulasa de tipo membranal, esto debido a que el cambio de coloración del medio solo se
notaba ligero alrededor de las colonias aisladas.
- Las bacterias que presentaron crecimiento en el medio CMC 1% con rojo congo, las cuales
son presentadas en la Fig.2. del apartado de análisis de resultados, tienen actividad
celulolítica, pero estas la presentan en forma de excreción de enzimas, las cuales se podrían
encontrar presentes en la mucosa que es excretada de la misma forma por la bacteria,
teniendo así una forma de degradar los polímeros de celulosa.
- La carboximetil celulosa o CMC debe de tener una tiempo de preparación previo de 24 horas
para poder ser utilizada de forma sencilla en el proceso de elaboración del medio CMC 1%,
además de que debe de estar expuesta a pH alcalino para disociar un poco las cadenas de
polímeros (Estamos bien pendejos).
REFERENCIAS
Ayala, S: Sànchez, D. 2001 Caracterización y evaluación de la actividad
celulolítica de microorganismos aislados a partir de composta. Microbiología
Industrial. Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá.
Ranby, B.G.; Rydholm, S.A. IX Cellulose and Cellulose Derivatives. En High
Polymers. Vol. X, Polymers Processes.
Schildknecht. C.E, Ed. Interscienced Publishers INC., New York. pp. 353- 1963.