DIVISIÓN DE

BIOTECNOLOGÍA
PERIODO: SEPTIEMBRE-
DICIEMBRE 2014
PARCIAL: PRIMERO
PROCESOS FERMENTATIVOS

PROYECTO
BIORREACTOR
“TANQUE AGITADO”
INTEGRANTES

HERNÁNDEZ ORTUÑO CRISTIAN

LIMAS GAONA EDSON ALDAIR

LÓPEZ FIGUEROA ERIKA ALEJANDRA

LÓPEZ PEREZ BLANCA ISABEL

MEJÍA RIVERO JUAN CARLOS

MONTOYA OLIVA DANIELA ALEJANDRA

PROFESOR

M. EN D. EDUARDO RODRÍGUEZ CUEVAS

GRUPO

“4QBT4”
BIORREACTOR

Un biorreactor es un sistema que mantiene activamente un ambiente

biológico, en este sistema, se lleva a cabo un proceso químico donde
se involucran organismos y sustancias activas.

FERMENTADOR

Un fermentador es un dispositivo que contiene un tanque agitado, el

cual tiene la tarea de realizar fermentaciones controladas.

Los fermentadores operan de modo semicontinuo, el cual mantiene el

crecimiento celular o microbial durante la fermentación, éstos pueden
ser de distintos tipos, como por ejemplo:

 Fermentador de tanque agitado

 Fermentador de ciclo
 Fermentador air-lift
 Fermentador de lecho fijo

Los sistemas con los que trabajan los biorreactores y los

fermentadores se pueden clasificar de dos distintas maneras:

 Aeróbicos
 Anaeróbicos

Características de los biorreactores y fermentadores

Los biorreactores comúnmente tienen las siguientes características:

 El diseño de los biorreactores es cilíndrico

 Los biorreactores varían de tamaños milimétricos hasta llegar a
los metros cúbicos
 La mayoría de los biorreactores son de acero inoxidable.
 Los biorreactores mantienen condiciones ambientales en un
mismo estado
 Mantienen las células de un cultivo uniformemente distribuidas
  Los biorreactores previenen la sedimentación y la floculación

¿Para Qué Sirve?

1.-Mantener las células uniformemente distribuidas en todo el volumen

del cultivo a fin de prevenir la sedimentación o la floculación.

2.-Mantener constante la temperatura.

3.-Minimizar los gradientes de concentración de nutrientes.

4.-Suministrar oxígeno a una velocidad tal, que satisfaga el consumo.

5.-El diseño debe ser tal que permita mantener el cultivo puro; una vez
que todo el sistema ha sido esterilizado y posteriormente sembrado
con el microorganismo deseado.

 Para satisfacer los cuatro primeros puntos es necesario que el

biorreactor esté provisto de un sistema de agitación, además
para el punto (4) se requiere de un sistema que inyecte aire en el
cultivo.

Usos y aplicaciones de los biorreactores y fermentadores

Los biorreactores generalmente son utilizados para el cultivo de las
células.
Los biorreactores ayudan a acelerar los cultivos celulares
Los biorreactores son útiles en ingenierías de tejidos.

Cualquiera que sea el tipo de microorganismo, el biorreactor debe

permitir un contacto entre las 2 fases bióticas y abióticas del sistema.
El buen desempeño está asociado a los fenómenos de transferencia
entre las células y el medio de cultivo.

Una característica muy importante del biorreactor es su capacidad

para transferir a la biomasa microbiana que contiene, la porción de
oxigeno que necesita. Este gas es poco soluble en agua lo que hace
difícil de lograr. Se realiza una mezcla de 3 fases: una fase acuosa
(medio de cultivo), una fase gaseosa (el gas de oxigenación, aire) y la
fase biótica constituida por biomasa microbiana.
 El crecimiento microbiano es globalmente exotérmico. El biorreactor
debe facilitar la transferencia de calor, del medio hacia las células en
primer lugar después al contrario, a medida que se produce el
crecimiento celular. La repartición homogénea de las células en el
medio evita también el fenómeno de sobrecalentamiento local
peligroso, dada la sensibilidad al calor de los procesos
microbiológicos.

AGITACION DE LOS BIORREACTORES

La agitación es la operación que crea o que acelera el contacto entre 2

o varias fases.

La agitación tiene por objeto mezclar varias fases que se adicionan:

˜ Una fase sólida, constituidas por las células microbianas.

˜ Una fase gaseosa, constituida por el gas de oxigenación.

˜ Una fase líquida constituida por los reactivos que se adicionan en el

curso de la fermentación: nutrimentos, soluciones para corregir el pH.

La agitación debe favorecer los intercambios térmicos entre el cultivo y

el dispositivo previsto para ello.

DIFERENTES TIPOS DE BIORREACTORES

Los biorreactores pueden ser más o menos elaborados en su

concepción según el tipo de cultivo al cual se destinan.

Generalmente los biorreactores se construyen de vidrio, los más

pequeños en acero inoxidable.

1) Biorreactores con agitación mecánica

2) Biorreactor con agitación neumática

3) Biorreactor con agitación por bombeo y recirculación: fermentador de

chorro.

1) BIORREACTORES CON AGITACIÓN MECÁNICA

Sin circulación interna.

En este tipo de biorreactor es conveniente para la producción de

antibióticos. Se trata de procesos, generalmente exotérmicos. Que
utilizan microorganismos filamentosos (bacterias, mohos)
relativamente frágiles y sensibles a la fuerza de cizalla y cuyas
necesidades de oxigeno no son muy grandes.
Para reducir el efecto de cizalla la velocidad de rotación del agitador es
del orden de 50-60 vueltas por minuto. Esto da una velocidad
periférica en el extremo de la paleta del orden de 5 m por segundo. En
estas condiciones, la cizalladura es reducida, pero al mismo tiempo se
asegura la transferencia del oxígeno que los microorganismos
necesitan.

Con circulación interna.

Chemapec propone un biorreactor con circulación interna dotado de un

dispositivo de agitación – aireación patentada: la turbina Effigas. Su
buena capacidad de transferencia de oxigeno permite su empleo en la
producción de biomasa. Para facilitar la eliminación de las calorías
producidas el tubo de circulación se ha diseñado con placas ajustadas
a canales térmicos uddeholm. Así se facilitan 2 acciones
complementarias una de la otra: se mejora la circulación de fluido en el
interior de la cuba y se aumenta el coeficiente de transferencia
térmica. En la base del tubo de circulación se encuentra la turbina
Effigas.
Se trata de un móvil de agitación diseñado como el rotor de una bomba
centrifuga. El líquido de fermentación y el gas de aereación se aspiran
por la parte central de la pieza. Es gas es aspirado a partir de un
conducto que lo lleva por la parte superior de la turbina en lo alto de la
cuba. La mezcla gas-líquido así formada es impulsada radialmente al
exterior del tubo de circulación.

2) BIORREACTOR CON AGITACIÓN NEUMÁTICA

La elevación del costo energético de la transferencia de oxigeno conduce
en ciertos casos al diseño de biorreactores desprovisto de dispositivos
de agitación mecánica. En estos casos la introducción de gas es lo
que provoca la agitación.
Sin circulación.
En el caso de procesos microbiológicos que no necesitan una
transferencia de oxigeno importante, se utilizan colonias en burbujas.
Se trata de cubas en las que la altura es muy superior al diámetro, de
modo de aumentar el tiempo de permanencia medio de las burbujas
de gas emitidas en la parte inferior por una corona provista de
agujeros. Las colonias en burbujas son convenientes para el cultivo de
ciertos microorganismos (bacterias filamentosas, mohos), pero
también a los cultivos de tejidos, especialmente sensibles a la acción
de cizalla.
Con circulación interna.
Los primeros biorreactores con circulación interna fueron desarrollados y
propuestos por Lefrancois y Mariller desde 1952.
Todos son diseñados para la fermentación continua. En las cubas de
tamaño pequeño, la suspensión celular se expande en la zona central
donde también tiene lugar la alimentación del medio de cultivo.
En las cubas de tamaño grande, el sentido de la circulación es inverso, la
expansión del fluido de fermentación y la alimentación se hace en la
zona periférica.
Con circulación externa.
En ciertos biorreactores la circulación del fluido de fermentación no está
organizada en el interior de un mismo recipiente, en 2 compartimientos
concéntricos, sino en 2 colonias separadas. Es el caso del
 fermentador de rizo externo. Este biorreactor tiene una altura del orden
de 30m. En la columna montante tiene lugar la principal fase de
oxigenación. El aire se introduce por un tubo perforado. En la parte
superior se comunica con una canalización horizontal que tiene una
abertura que permite la salida del gas que fluye. A la entrada del
compartimiento descendente se hace una reinyección de aire. Esto
provoca un aumento en la velocidad de circulación contra la base, en
la parte en la que está instalado el intercambiador de calor de manera
que se obtiene un buen coeficiente de intercambio térmico.

3) BIORREACTOR CON AGITACIÓN POR BOMBEO Y

RECIRCULACIÓN: FERMENTADOR DE CHORRO.

Es posible provocar la agitación en el seno de los líquidos con ayuda de

bombas. Este chorro líquido, utilizable en la agitación de reactores
anaerobios puede estar asociado a un dispositivo de introducción de
gas en el caso de los reactores aerobios. Este mecanismo, implica una
circulación del fluido de fermentación mediante una canalización
externa al reactor, sobre la cual se encuentra la bomba, está
adaptado, en ciertos casos a un fermentador de circulación interna.
Estos biorreactores están destinados a la producción de proteínas de
organismos unicelulares, sobre diferentes tipos de sustratos, lo que
implica por razones de rentabilidad instalaciones de gran capacidad.
Uno de los inconvenientes de los procedimientos microbiológicos es
que se desarrollan en medios acuosos diluidos. Esto implica el
tratamiento de grandes volúmenes y la evaporación o eliminación de
agua al término de la fermentación

TANQUE AGITADO.

El biorreactor de tanque agitado es de uso muy difundido. La agitación

se realiza mecánicamente mediante un eje provisto de turbinas
adicionado por un motor.

El aire se inyecta por la parte inferior del tanque y es distribuido por

una corona que posee pequeños orificios espaciados regularmente. El
“chorro” de aire que sale de cada orificio es “golpeado” por las paletas
de la turbina inferior generándose de este modo miles de pequeñas
burbujas de aire, desde las cuales difunden el O2 hacia el seno del
líquido. El sistema de agitación se completa con cuatro o seis
deflectores que tienen por finalidad cortar o romper el movimiento
circular que imprimen las turbinas al líquido, generándose de este
modo mayor turbulencia y mejor mezclado.

El tanque está rodeado por una camisa por la que circula el agua, lo
que permite controlar la temperatura. Para tanques mayores que 1000
o 2000 litros este sistema ya no es eficiente y es reemplazado por un
serpentín que circula adyacente a la pared interior del tanque.

El aire que ingresa al BIORREACTOR debe ser estéril, lo que se

consigue haciéndolo pasar por un filtro cuyo diámetro de poro es de
0.45 micrones, que impide el paso de microorganismos y esporos.

ELEMENTOS DEL BIORREACTOR

ELEMENTOS BÁSICOS

Cuerpo del biorreactor recipiente o contenedor que alberga al cultivo o

microorganismo. El contenedor es la frontera física entre el ambiente
externo contaminado y el ambiente interno controlado. Un tanque
contenedor se debe construir de acero inoxidable austenítico, por sus
características físicas y químicas superiores; usualmente se prefiere
los aceros de la serie 316.

SISTEMA DE AGITACIÓN

Tiene la función de generar la potencia necesaria para producir una

mezcla perfecta para el sistema de cultivo y producir un régimen de
agitación adecuado que maximice la difusión de gases en el líquido y
minimice la producción de esfuerzos cortantes y la presión
hidrodinámica local y global, para optimizar los fenómenos de
transferencia de momento, calor y masa.

Un sistema de agitación consta de las siguientes partes mecánicas:

MOTOR IMPULSOR

Motor de Inducción (A.C.): dado que un biorreactor debe operar de

una forma continua durante todo el proceso de cultivo; se requiere un
motor capaz de resistir largos periodos de operación continua y trabajo
duro; por eso, el motor debe ser de inducción de corriente alterna (a.c)
y debe ser acorazado, preferiblemente de acero inoxidable.

EJE TRANSMISOR DE POTENCIA

Es una barra cilíndrica de acero inoxidable 316L y por lo general se

diseña en diámetros estándar ¾’’ , ½’’, etcétera para mayor facilidad
de ajuste a los estándares de motores a.c. Su longitud depende de la
profundidad del contenedor (tanque).

PUERTO DE ENTRADA DEL BIORREACTOR

Se denomina puerto de la superficie física sobre el cual se instala un

dispositivo de entrada o salida al biorreactor, un anclaje o un aparato
mecánico o de medición; el puerto es el medio por el cual se ajusta o
se fija, tal dispositivo o artefacto a la pared o superficie del tanque o
del biorreactor.

SELLO MECÁNICO

Su función es triple: evitar la contaminación, mantener hermético el

sistema, servir de amortiguador de fricción. El sello mecánico también
debe permitir la esterilización in situ del biorreactor, mediante una
línea de vapor sobrecalentado.

TURBINAS

Es un impulsor de flujo axial el cual opera como una centrífuga que

distribuye el flujo de líquido a través de las hojas planas, a todo el
volumen de fluido.

El impulso axial ha demostrado ser la forma más eficiente de diseño

para reducir esfuerzos cortantes e hidrodinámicos y disminuir la
turbulencia y la potencia requerida para homogenizar el mezclado;
objetivo que se persigue en una mezcla perfecta. Por eso se
recomienda impulsores de flujo axial para cultivar células sensibles o
de membrana plasmática. Dentro de éstas, la turbina Rushton es el
impulsor de flujo axial más recomendado y más eficiente para generar
una mezcla perfecta de alto perfil hidrodinámico, bajo en esfuerzos
cortantes y altos en distribución.

SISTEMAS DE CONTROL

CONTROL DE VELOCIDAD DEL MOTOR

Los de inducción de corriente alterna (a.c.) tienen velocidades

nominales de rotación de 1800 rpm o 3600 rpm. Estas velocidades son
muy altas para los sistemas biológicos causando la destrucción de las
células y microorganismos en cultivo. La velocidad de rotación del
motor debe entonces reducirse a un máximo de 600 rpm (revoluciones
por minuto) para que no cause daño celular. Usualmente se acopla a
la salida de eje del rotor una caja de reducción de 1/3 o 1/6 para bajar
la velocidad de rotación a 600 rpm. Adicionalmente se coloca un
control de velocidad que puede ser analógico o digital al motor para un
control más fino y preciso de la velocidad de rotación.

CONTROL DE TEMPERATURA

Mantiene estable y dentro de un rango optimo requerido por el cultivo

para su máximo crecimiento, la temperatura interna del sistema.

Un sistema de control consta de:

Un sistema de intercambio térmico:

Intercambiador de calor: dispositivo de intercambio térmico que

absorbe el calor excedente. Se define por su área de transferencia de
calor; a mayor área de transferencia de calor, mayor capacidad de
absorber calor.

Un sistema de control:
Controlador de temperatura: sistema que ordena y regula la acción
del motor que controla las servoválvulas que regula el flujo de líquido
frio o caliente.

Un sistema de medición:

Sensor de temperatura: sonda (termocopla) que mide temperatura.

Un servo control:

Servo controlador de temperatura: controla la temperatura a la que

debe abrir o cerrar la válvula selenoide.

Un sistema regulador de paso de flujo:

Válvula selenoide: servo mecanismo actuador que regula el flujo

(paso) de líquido por la tubería o línea de paso (abre o cierra el flujo
del líquido).

Un sistema de conducción de fluido:

Tuberías de conducción de agua: el agua es fluido térmico por

excelencia para la transferencia de calor por conducción a través de
las paredes metálicas de la tubería. Estas deben ser de acero
inoxidable.

Las tuberías deben anclarse al cuerpo del biorreactor mediante un

puerto de entrada que es soporte hemético que la sujeta a la superficie
plana.

CONTROL DE pH (potencial de hidrógeno)

El sistema controla el pH del medio de cultivo; que es generada por los

productos de desecho y el metabolismo propio del cultivo celular o
microorganismos. Un sistema de control de acidez consta de:

Dos subsistemas mecánicos servo controlados

Sistema dispensador de Ácido: que consta de:

 Dispensador aséptico de ácido (HCI)

  Filtro microporo en línea

 Manguera flexible resistente al ácido

 Bomba peristáltica

Sistema Dispensados de Álcali: que consta de:

 Dispensador aséptico de álcali (NaOH);

 Filtro microporo en línea

 Manguera flexible resistente al álcali

 Bomba peristáltica

Las mangueras flexibles se deben conectar al sistema (biorreactor)

mediante un tubo de adicción de reactivo para cada una de ellas.

Un sistema de medición: formado por:

 Sensor de pH: sonda o probeta electroquímica que mide la

acidez y “dice” al controlador de pH, la situación del medio.

 pH Óptimo toda célula y microorganismo poseen u rango de

acidez (pH) dentro del cual, es posible su crecimiento con
normalidad; dentro de ese rango, existe un pH óptimo en el cual
el crecimiento máximo y muy bien definido.

SISTEMA DE DIFUCION DE OXIGENO DISUELTO

Debe optimizar al máximo la transferencia de oxígeno al medio líquido.

El sistema consta de dos partes mecánicas: boquilla y difusor de aire;
una parte de medición: sensor de oxígeno disuelto y una de control:
controlador de oxígeno disuelto.

Difusor de aire: los cultivos aeróbicos requieren que la corriente de

aire estéril se difunda en la forma de miles de pequeñas burbujas,
desde el difusor de aire, hacia el volumen del líquido; esta acción se
realiza mediante un plato o domo cilíndrico de acero inoxidable
finamente perforado. Alternativamente y si el sistema es pequeño o
mediano en escala, se puede utilizar un difusor de material cerámico
poroso el cual, tiene la ventaja de que, provee una cama más fina de
burbujas (de menor diámetro) y mayor área de transferencia (volumen
de burbujas).

Control y regulación del flujo de aire: las membranas que filtran el

aire tienen un punto de burbuja y un flujo máximo por encima del cual,
se rompen; por eso, se debe regular el flujo de aire y controlar la
presión en la línea de aire. La forma más económica de hacerlos es
manualmente, con un manómetro para presión. Existe también la
versión digital, más costosa, pero que, controla de forma automática el
flujo de aire y la presión, según se escoja.

Control y medición del oxígeno disuelto (OD): además de regular el

flujo y la presión del aire en la línea o tubería, se debe controlar el
valor y la concentración del oxígeno disuelto (OD) dentro del medio
liquido; variable que puede medirse en dos formas (parámetros):

a) Oxígeno disuelto (OD): es la concentración de oxígeno disuelto

requerido para la reducción química de un equivalente en iones
sulfito (de sodio) a la cantidad de materia orgánica presente en
el medio líquido que se debe oxidar.

b) Demanda bioquímica oxígeno (DBO): es la taza de oxidación

biológica o demanda bioquímica de oxígeno disuelto requerida
por el microorganismo o célula en cultivo para oxidar la materia
orgánica presente en el medio líquido.

Una probeta o electrodo OD es un sensor que mide la concentración

de oxígeno disuelto en el medio líquido. Similarmente, una probeta o
electrodo BOD mide la concentración de oxígeno disuelto en el medio
líquido en equilibrio con el gas. En ambos casos, el material de su
construcción debe ser acero inoxidable y su especificación es por la
longitud de inmersión (H) y diámetro (D) de la probeta.
PARA QUE NOS SIRVE EN LA INDUSTRIA

En la industria se utilizan frecuentemente los tanques agitados

provistos de más de un impelente para garantizar una mejor
distribución de la potencia introducida en el volumen del líquido. En el
caso de la industria biotecnológica, los tanques agitados estándares
con un solo impelente son criticados por la desigual distribución del
cizallamiento en su interior, lo cual es peligroso para algunos mi-
croorganismos. Si comparamos un tanque agitado con múltiples
impelentes con otro con un solo impelente en los cuales se disipa la
misma cantidad de energía, la velocidad de rotación del impelente
será inferior en el caso de un sistema con múltiples impelentes, dando
como resultado valores inferiores del cizallamiento máximo. De esta
forma, los sistemas con múltiples impelentes son preferidos en
aquellos sistemas de agitación donde la sensibilidad hacia el
cizallamiento sea un criterio importante para el diseño. Los tipos de
impelentes utilizados en el caso de los sistemas con múltiples
impelentes se han restringido, fundamentalmente al uso de las
turbinas Rushton, las turbinas de paletas inclinadas con flujo hacia
abajo o hacia arriba y varias combinaciones de estos impelentes

Bibliografía

Ertola.R; Yantorno. O. y Mignone. C. “Microbiología industrial”,

sistemas de cultivo y aspectos generales de biorreactores.