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“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”

INFORME DE LABORATORIO INDIVIDUAL


(Concentración de sustrato)
PRACTICA N°4

 NOMBRE :
Olaya Espinoza, MARCOS.
 FACULTAD :
Ingeniería de Minas.
 ESCUELA :
Ingeniería Química.
 TEMA :
Efecto de la concentración del
sustrato: cálculo de Km.
 CURSO :
Bioquímica.
 PROFESOR :
Henry Robles Cueva.
INTRODUCCIÓN
En bioquímica, se llaman enzimas a las sustancias de naturaleza proteica que
catalizan reacciones químicas, siempre que sea termodinámicamente posible (si
bien no pueden hacer que el proceso sea más termodinámicamente favorable).
En estas reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas
sustratos, las cuales se convierten en diferentes moléculas, los productos. Casi
todos los procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran en tasas
significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina
reacciones enzimáticas.
Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y
su velocidad crece sólo con algunas reacciones de entre otras posibilidades, el
conjunto (set) de enzimas sintetizadas en una célula determina el metabolismo
que ocurre en cada célula. A su vez, esta síntesis depende de la regulación de
la expresión génica.
Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía
de activación (ΔG‡) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente
la tasa de reacción. Las enzimas no alteran el balance energético de las
reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la
reacción, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una
reacción que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en
general, alcanza el equilibrio mucho más deprisa que la correspondiente
reacción no catalizada.
Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por
las reacciones que ellas catalizan, ni alteran su equilibrio químico. Sin embargo,
las enzimas difieren de otros catalizadores por ser más específicas. Las enzimas
catalizan alrededor de 4.000 reacciones bioquímicas distintas. No todos los
catalizadores bioquímicos son proteínas, pues algunas moléculas de ARN son
capaces de catalizar reacciones (como el fragmento 16S de los ribosomas en el
que reside la actividad (peptidil transferasa).
La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras moléculas. Los
inhibidores enzimáticos son moléculas que disminuyen o impiden la actividad de
las enzimas, mientras que los activadores son moléculas que incrementan la
actividad. Asimismo, gran cantidad de enzimas requieren de cofactores para su
actividad. Muchas drogas o fármacos son moléculas inhibidoras. Igualmente, la
actividad es afectada por la temperatura, el pH, la concentración dela propia
enzima y del sustrato y otros factores físico-químicos.
METODOLOGÍA
OBJETIVO:

 Estudiar la influencia de la concentración del sustrato, sobre la velocidad


de una Rx.

PROCEDIMIENTO:

I II III IV
Reactivo Trabajo 1ml 1ml 1ml 1ml
Glucosa 10ul 20ul 30ul 40ul
Mezclar
Incubar a 37°C 10’ 10’ 10’ 10’

 Vertimos 1ml de reactivo trabajo (glucosa oxidasa) a 4 tubos de ensayo


utilizando la perita de goma con pipeta. (fig. Nº 1)
 Agregamos 10ul, 20ul, 30ul, 40ul, de glucosa (fig. Nº2) a cada tubo de
ensayo, respectivamente, utilizando la micropipeta.
 Luego procedemos a llevar cada tubo a una temperatura de 37°C
incubándolos por 10 minutos.
 Por último, llevamos a cada tubo a un espectrofotómetro (fig. Nª3), para
obtener la absorbancia, de esta manera obtendremos la concentración de
la glucosa. Utilizando la siguiente formula:

[G]=F x Abs.
RESULTADOS
 ABSORBANCIAS OBTENIDAS:

CUANDO SE LE AGREGO: ABS. OBTENIDA


[ABS1] 10ul 0.29
[ABS2] 20ul 0.50
[ABS3] 30ul 0.59
[ABS4] 40ul 0.56

 CÁLCULO DE LAS CONCENTRACIONES:

[G]=F x Abs.

DONDE:

F=200mg/dL

CONCENTRACIONES OBTENIDAS:

[G1]=200 x 0.29= 58mg/dL

[G2]=200 x 0.50= 100mg/dL

[G3]=200 x 0.59= 118mg/dL

[G4]=200 x 0.56= 112mg/dL


CONCLUSIONES
 Tubo de ensayo a Temperatura ambiente (25ºC) contiendo 1ml de
reactivo trabajo, al vertirle, 10ul de glucosa tomò un color ligeramente
rojizo.
 Tubo de ensayo a Temperatura ambiente (37ºC) contiendo 1ml de
reactivo trabajo, al vertirle, 10ul de glucosa tomò un color rojizo.

 Tubo de ensayo a Temperatura ambiente (70ºC) contiendo 1ml de


reactivo trabajo, al vertirle, 10ul de glucosa tomò un color incoloro.
ANEXOS
Fig. Nº1

Fig. Nº2
ESPECTROFOTÓMETRO (Fig. Nº3)
REFERENCIAS
BIBLIOGRÀFICAS

https://es.scribd.com/document/268664305/Efecto-Sobre-La-Glucosa-
Oxidasa

http://hablemosclaro.org/ingrepedia/glucosa-oxidasa/

GRÁFICO Abs vs [G]

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