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Nucleasas

Definición: hidroliza los enlaces fosfodiester y se clasifican en:


DNasa: degrada ADN de cadena sencilla o cadena doble
RNasa: degrada ARN de cadena sencilla o cadena doble
Exonucleasa: quitan nucleótidos en los extremos de los polinucleótidos
Endonucleasa: corta dentro de los polinucleótidos

Enzima funcion ssADN dsADN ssARN dsARN


Exonucleasa I 3’----5’ + - - -
Exonucleasa V 3’----5’ y 5’----3’ + + - -
Mung bean endonucleasa + - + -
Nucleasa S1 endonucleasa + - + -
Nucleasa S7 endonucleasa + + + +
Ribonucleasa A endonucleasa - - + +
Ribonucleasa H endonucleasa - - hibridos ADN-ARN
Ribonucleasa one endonucleasa - - + -
Endonucleasas de restricción

Definición:
palíndrome (Ana, arenera, somos, sometemos) o
(GAATTC es palíndrome de CTTAAG)
Isoesquizomero
Neoesquizomero
Nomenclatura:
a) primeras 3 letras
b) cuarta letra
c) No. romano
Mapeo de ER en un Plásmido
1.60

1.40

1.20

1.00
mm log kb

Log 10 Kb
16 1.36 0.80
log kb
22 0.97
26 0.81 0.60 Lineal (log kb)
31 0.63
50 0.36 0.40
54 0.34
0.20
R: 0.88
0.00
0 10 20 30 40 50 60

BamH1 log Kp EcoRI log Kp HindIII log Kp mm


29 0.88 21.00 1.01 28 0.84
35 0.7 32 0.78
ADN Polimerasas
Transcriptasa reversa

Origen: enzima natural o recombinante (gen pol) de virus de leucemia murina


o virus de inmunodeficiencia humana o

Aplicaciones: 1- cDNA
2- Sondas de ARN
3- Secuenciación de ARN
Deoxinucleotidil terminal transferasa
Origen: timo de ternero

Descripcion: enzima que polimeriza ribonucleotidos con eficiencia limitada.


El aceptor es el 3’-OH del extremo protuberante o romo del
ADN ds

Application:
1- marcaje en extremo 3’ terminal
Fosfatasa alcalina

Origen: camaron, bovino, bacteria etc.


Descripcion: es una metaloenzima

Aplicación:
1- desfosforilar el AN para prevenir la auto ligación
2- desfosforilar el AN para marcar con polinucleótido quinasa
T4 polinucleotido quinasa
Origen: bacteriófago T4 infecta a E. coli, recombinante

Descripción: Añade fosfato en el extremo 5’ y desfosforila el extremo 3’


en ADN de ss y ds y ARN ss y ds

Aplicaciones:
1- marcaje de AN para secuenciar, mapeo y footprinting
2- añadir fosfatos oligonucleotidos
3- quitar fosfatos en el extremo 3’
ADN ligasa es una enzima que forma enlaces covalentes entre el
extremo 5' de una cadena polinucleotídica y el extremo 3' de otra
cadena polinucleotídica. También se denomina enzima de unión de
polinucleótidos (Mathews & Van Holder (1990) Biochemistry)
Actividad del ADN polimerasa
Acción de las polimerasas

Actividad
exonucleasa

Actividad 5´ 3´
exonucleasa

3´ 5´

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