Ingeniería Genética Molecular (3º de Biotecnología) Curso 2017-2018

TEMA 4. La técnica de la PCR en Ingeniería genética molecular.

Desde su introducción, en 1985, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) ha transformado

por completo los procedimientos de análisis y manipulación de los ácidos nucleicos, tanto en los
laboratorios de investigación básica como aplicada. La reacción en cadena de la polimerasa es un
método enzimático, basado en el mecanismo que utilizan las células para replicar su DNA, que
permite sintetizar numerosas copias de un fragmento concreto de DNA. Las ventajas principales de
esta técnica son su rapidez, sencillez y gran sensibilidad y especificidad.

Los elementos básicos de la PCR son: DNA molde, dos cebadores y una polimerasa termoestable.
Como cebadores se utilizan oligonucleótidos complementarios a los que serán los extremos del
producto y que, por tanto, dan la especificidad a la reacción. Las polimerasas que se emplean son
termoestables para evitar así añadir la enzima en cada ciclo de amplificación. Una de las enzimas
más utilizada es la polimerasa Taq, purificada de la bacteria Thermus aquaticus. Entre sus ventajas
cabe destacar que es muy procesiva, aunque carece de actividad correctora de errores (actividad
exonucleasa 3’→5’), introduciendo un nucleótido incorrecto, aproximadamente, cada 1.000
colocados (la polimerasa Taq sí posee actividad exonucleasa 5’ → 3’). Este inconveniente,
especialmente serio para algunas aplicaciones, se reduce utilizando polimerasas termoestables
obtenidas de otras bacterias (Pfu, Vent, etc.) que sí poseen actividad correctora de errores, aunque
en general son menos procesivas. Actualmente es de uso común una polimerasa aislada de Thermus
kodakaraensis, KOD, que tiene tanto mayor posesividad como mayor fidelidad.

Las aplicaciones de la PCR son numerosas: clonación de genes, secuenciación de DNA,

generación de mutaciones in vitro, detección de mutaciones, incluido el diagnóstico molecular
directo de enfermedades, análisis de cualquier polimorfismo molecular, utilizable, por ejemplo, en
el diagnóstico molecular indirecto de enfermedades, en la asignación de identidades (huella
genética) o en estudios evolutivos y análisis de genomas mediante amplificación aleatoria de
fragmentos de DNA polimórficos, análisis de expresión génica, incluyendo la técnica conocida
como RT-PCR cuantitativa y la RT-PCR in situ, identificación de organismos patógenos, etc.

BIBLIOGRAFÍA

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- STRACHAN, GOODSHIP y CHINNERY. Genetics and Genomics in Medicine- Garland Science (2015): 62-
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- STRACHAN y READ. Human Molecular Genetics, 4TH Edition. Garland Science (2010): Cap. 6 (PCR y
aspectos de temas anteriores), 241-243 (RT-PCR) y Cap. 18 (uso en diagnóstico clínico molecular y
Genética forense) (muchos detalles y aspectos no tratados por nosotros).
- WATSON, MYERS, CAUDY, y WITKOWSKI. Recombinant DNA: genes and genomes, a short course,
3rd Edition. Freeman and Company (2007): 94-104 (PCR y PCR cuantitativa, y algunas aplicaciones) y
Cap. 16 (uso en Genética forense).
- WINK. An Introduction to Molecular Biotechnology, Wiley-Blackwell (2011): cap. 13 (breve y bien).