Resumen
través de sitios de unión independientes
La identificación de genes improtados en
animales se ha limitado a mamíferos euterios, lo
que sugiere un papel significativo para el
desarrollo fetal intrauterino en la evolución de la
impronta. Divulgamos aquí que M6P / IGF2R no
está impreso en monotremas y no receptor que
se une a IGF2. Por el contrario, M6P / IGF2R está
impreso en un marsupial didelphidos, la
zarigüeya, pero carece notablemente de la isla
CpG metilada diferencialmente en el intrón 2
postulado para participar en la impresión
controlar.
Introducción
La impresión genómica es una forma epigenética
de regulación génica que da como resultado una
expresión dependiente del origen del progenitor.
Se hereda de forma estable durante la división
celular somática, pero se revierte cuando se
transmite a través de individuos del sexo
opuesto. La impronta difiere de los principios de
herencia mendelianos clásicos porque a pesar de
la distribución equitativa del contenido genético
autosómico parental a la progenie, los dos alelos
se expresan diferencialmente. Por lo tanto, la
impronta es un fenómeno en el que la expresión
de un alelo genético en una generación
determinada depende de si residió en un hombre
o una mujer en la generación anterior.
Los primeros dos genes endógenos que se
identificaron para ser imitados fueron IGF2
(DeChiara y col., 1991) y M6P / IGF2R (Barlow et
al., 1991). Homocigotos ratones IGF2 nulo se
encontró que eran unos 40% más pequeños que
los ratones de tipo salvaje en el momento del
nacimiento, en consonancia con la función
promotora del crecimiento de IGF2.
Curiosamente, el fenotipo de enanismo también
se observó en ratones heterocigotos, pero solo
cuando el alelo nul se hereda del padre. Esto
demostró que IGF2 está impreso y expresado
desde el alelo paterno. Por el contrario, M6P /
IGF2R murino se expresa exclusivamente a partir
del alelo materno y es responsable de un
fenotipo letal heredado por la madre que se
mapea en el locus Tme (efecto materno asociado
a T) en el cromosoma 17 de ratón (Barlow et al.,
1991; Wang et al., 1994). M6P / IGF2R codifica un
receptor en mamíferos vivíparos que se une tanto
a las fosfomannosil glucoproteínas como a IGF2 a
(Kornfeld, 1992; Dahms et al., 1993a; Yandell et
al., 1999b), mientras que los receptores de pollo
y Xenopus carecen de la capacidad para unir IGF2
(Clairmont y Czech, 1989; Zhou et al., 1995). La
evidencia hasta la fecha sugiere que M6P / IGF2R
no media la proliferación celular inducida por
IGF2 (Korner et al., 1995); esta función se realiza
principalmente por el receptor del factor de
crecimiento insulínico tipo I (IGF1R) y la isoforma
A del receptor de insulina (Kornfeld, 1992; Frasca
et al., 1999; Jirtle, 1999). Las funciones
principales de M6P / IGF2R son el tráfico
intracelular de enzimas lisosómicas y la
internalización de IGF2 y otros ligandos
extracelulares de impresión. Divulgamos aquí que
M6P / IGF2R no está a los lisosomas para la
degradación (Kornfeld, 1992; Jirtle, 1999). La
deficiencia de M6P / IGF2R durante el desarrollo
de mamíferos está asociada con anomalías
cardíacas, paladar hendido, sobrecrecimiento
fetal y letalidad perinatal (Lau et al., 1994; Wang
et al., 1994; Melnick et al., 1998).
Interesantemente, la eliminación de la expresión
de IGF2 rescata el fenotipo nulo letal de M6P /
IGF2R en ratones transgénicos (Filson et al.,
1993). Por lo tanto, la biodisponibilidad de IGF2
necesita ser estrechamente regulada durante la
embriogénesis murina, y esta función depende de
M6P / IGF2R. A number of theories have been
proposed to explain the evolutionary pressure
that resulted in the formation of functionally
haploid imprinted genes (Bartolomei and
Tilghman, 1997; Hurst, 1997). The most actively
debated model for imprint evolution arose from
the finding that murine M6P/IGF2R and IGF2 are
paternally and mater- nally silenced, respectively
Esta impresión recíproca llevó a Haig y Graham
(1991) a proponer que la impronta genómica era
el resultado de un "tira y afloja" genético parental
para controlar el crecimiento dependiente de la
madre de la descendencia. De acuerdo con este
modelo de conflicto genético, la duración y el
alcance del crecimiento intrauterino y la atención
posnatal son las principales fuerzas impulsoras
para la evolución de la impronta. Los mamíferos
Monotreme, como el ornitorrinco, ponen sus
huevos mientras que los marsupiales didelfidos,
como la zarigüeya, dan a luz a una descendencia
altricial. Sin embargo, ambos grupos de
mamíferos tienen placenta de coriovitelina,
tienen períodos comparables de gestación
intrauterina, carecen de una etapa de desarrollo
fetal y proporcionan varios meses de atención
postnatal (Griffiths, 1999; Harder y Jackson,
1999). Además, el modelo de Marsupionta de la
evolución de los mamíferos respaldado por
análisis de ADN mitocondrial agrupa monotremas
y marsupiales en una estrecha relación Los
mamíferos Monotremos, como el ornitorrinco,
ponen sus huevos mientras que los marsupiales
didelfidos, como la zarigüeya, dan a luz a una
descendencia altricial. Sin embargo, ambos
grupos de mamíferos tienen placenta de
coriovitelina, tienen períodos comparables de
gestación intrauterina, carecen de una etapa de
desarrollo fetal y proporcionan varios meses de
atención postnatal (Griffiths, 1999; Harder y
Jackson, 1999). Además, el modelo de
Marsupionta de la evolución de los mamíferos
respaldado por análisis de ADN mitocondrial
agrupa monotremas y marsupiales en una
estrecha relación et al., 1997; Kullander et al.,
1997). Esta relación filogenética inferida junto
con inversiones maternas comparables en los
jóvenes tanto para monotremas como para
marsupiales didelofídicos sugiere que los
miembros de estos dos grupos de mamíferos
tienen perfiles de genes impresos similares.
Probamos este postulado al determinar si M6P /
IGF2R está impreso en monotremas y didelficos
marsupiales, como lo es en los miembros del
grupo euteriano de mamíferos (Barlow et al.,
1991; Mills et al., 1998). La unión dependiente de
especies de IGF2 por M6P / IGF2R multifuncional
también proporciona una oportunidad única para
determinar la relación entre la función del
receptor y su imitación. Nuestros hallazgos
demuestran que M6P / IGF2R no está impreso en
el ornitorrinco y el equidna, mientras que está
impreso en la zarigüeya. Dado que la zarigüeya
carece de una etapa de desarrollo fetal, la
placentación invasiva y el crecimiento fetal
intrauterino no son necesarios para que
evolucione la impresión genómica. M6P / IGF2R
tanto en los monotremas como en los
marsupiales didelfidos también carece de la isla
CpG con metilación diferencial en el intrón 2
previamente postulado para participar
mecánicamente en el control de impresión en
ratones Esto demuestra la existencia de
mecanismos alternativos de establecimiento y
mantenimiento de la impresión M6P / IGF2R.
Nuestros resultados también indican que los
monotremas y los marsupiales no están tan
estrechamente relacionados como lo predice el
modelo de Marsupionta; en cambio, apoyan la
hipótesis Theria de la evolución de los mamíferos
(Gregory, 1947, Janke et al., 1997, Kullander et
al., 1997, Penny y Hasegawa, 1997, Penny et al.,
1999).
Resultados y discusión
Hay tres grupos filogenéticos de mamíferos vivos:
Prototheria (monotremas), Metatheria
(marsupiales) y Eutheria (mamíferos
placentarios). La impresión genómica se ha
descrito en euterios, pero se desconoce si existe
en monotremas y marsupiales. Se sabe que la
progenie de cruces de laboratorio híbridos entre
especies alberga alteraciones globales en la
expresión génica impresa y en las marcas
epigenéticas (O'Neill y col., 1998; Vrana et al.,
1998). Por lo tanto, decidimos estudiar la
evolución de la impronta determinando si M6P /
IGF2R está impreso en poblaciones nativas de
ornitorrinco (Ornithorhynchus anatinus), equidna
(Tachyglossus aculeatus) y los mamíferos no
placentarios estadounidenses. Zarigüeya
(Didelphis virginiana).
El ornitorrinco y el equidna son mamíferos no
placentarios que se asemejan a híbridos
surrealistas entre mamíferos eutherianos y
reptiles y aves (Hughes y Hall, 1998). Su pelaje
característico, el amamantamiento de crías con
leche y la termorregulación colocan estos
monotremas dentro del reino de los mamíferos.
Sin embargo, las hembras ponen huevos, la
división embrionaria es meroblástica y la
espermatogénesis masculina es parecida a un
pájaro. A diferencia de otras ponedoras de
huevos en monotremas. Vertebrados, el embrión
monotremo se desarrolla inicialmente en el útero
(Griffiths, 1999). El huevo se estira y crece
durante un período de 3 a 4 semanas a medida
que acumula nutrientes de las secreciones
endometriales de la madre. Por lo tanto, en otros
animales ovíparos, la yema de huevo en
monotremas contribuye poco al desarrollo
general (Hill, 1941). Los jóvenes de Monotreme
son criados por sus madres durante varios meses
después de la eclosión. La zarigüeya americana es
un marsupial caracterizado por una gestación en
el útero de 13 días. Este es el período de
gestación más corto para cualquier marsupial y es
incluso más corto que las gestaciones de 23 y 28
días del equidna y el ornitorrinco,
respectivamente (Manger et al., 1998; Griffiths,
1999; Harder y Jackson, 1999). A diferencia de los
mamíferos placentarios verdaderos, la placenta
de la zarigüeya es coriovitellina y no invade el
epitelio uterino secretor (Krause y Cutts, 1985;
Roberts y Breed, 1994). Por lo tanto, el desarrollo
marsupial monotrema y didelfido se caracteriza
por la nutrición in útero derivada de las
secreciones uterinas maternas seguidas de una
extensa atención postnatal en ausencia de un
padre. La inversión maternal postzigótica general
en la progenie del ornitorrinco, equidna,
zarigüeya es, por lo tanto, comparable, incluso
cuando los monotremas ponen huevos. Esto
sugiere que la impresión de M6P / IGF2R y la
unión de IGF2 serían idénticas en estos
mamíferos no placentarios.