Regulação da Via Glicolítica no Nível da Enzima

Princípios de Regulação das Vias Metabólicas

Dois tipos de reação:

1) Velocidade da reação controlada pela atividade
catalítica da enzima (“rate-limited”).
- reações irreversíveis (DG negativa – reações não estão
em equilíbrio químico).
- atividade catalítica da enzima regulada (alosterismo).

2) Velocidade da reação controlada pela concentração

do substrato (“substrate-limited”).
- reações reversíveis (DG perto de zero – reações em
equilíbrio químico).
- atividade catalítica da enzima limitada somente
pela concentração do substrato.
As Enzimas de Glicólise

1. Hexokinase
2. Phosphoglucose
Isomerase

3. Phosphofructokinase

5. Triose Phosphate
4. Fructose 1,6-bisphosphate Aldolase Isomerase

7. Phosphoglycerate
6. Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase Kinase

8. Phosphoglycerate
9. Enolase Mutase

10. Pyruvate Kinase

Enzimas Reguladas da Via Glicolítica.

Enzima Inibidor alosterico Ativador alosterico

Hexoquinase G6P

Fosfofructoquinase ATP, citrato, PEP ADP, AMP, cAMP,

(PFK-1) FBP, F2,6P, F6P,
NH4+, PO42-
Piruvato quinase ATP, acetyl-CoA, PEP, FBP
acidos graxos

Substrato Produto
Integração de sinais pela Fosfofructoquinase (PFK-1).

- A forma tetramerica

- O F6P (substrato, em amarelo) liga

ao sítio ativo da enzima.

- ATP (em vermelho) e ADP

(marcadas com estrelas) ligam em
sítios alostericos.

A enzima tem vários sítios

de ligação para compostos
diferentes.
Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) - monômero.
Dois sítios de ligação de ATP em cada monômero de PFK

SÍTIO
REGULATÓRIO

SÍTIO
ATIVO
Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) - dímero.

O sítio catalítico é O sítio regulatório de ATP

localizado na é localizado na interface
interface entre entre outros monômeros.
monômeros .
Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1): dímero/tetrâmero
Fosfoenolpiruvato

M4 2M2
(Tetrâmero) (Dois dímeros)

Quinlan e Reinhart, Biochemistry, 2006, 45 (38), pp 11333–11341

Tetrâmero - atividade pode Dímero - sem atividade

ser regulado.
Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) - tetrâmero.
Mudança na conformação do tetrâmero induzida pela ligação de
reguladores alostéricas.

Forma T Forma R
(Inativa) (Ativa)


Ligação de ATP no sítio regulatório Ligação de ADP no sítio regulatório

favorece a forma T, a forma inativa favorece a forma R, a forma ativa da
da enzima enzima
Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) – sítio catalítico.
Comparação das estruturas de PFK com ADP (rosa, ativa), e PGC (2-fosfoglicolato,
um análogo de PEP, inativa em azul claro).
Modulador positivo (ADP
PEP causa Glu161 (em azul) se em rosa) e negativo (PEP
orientar no sítio ativo (carga em azul ) ligam no mesmo
negativa desfavorece formação sítio regulatório.
complexo enzima/substrato com
FDP)

Substrato: F6P

ADP causa Arg162 (em verde) de ficar

próxima ao grupo PO4 do F6P (uma interação
com carga positiva que favorece a formação
complexo enzima/substrato)
Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) – ligantes múltiplos.
ATP (inibidor) e AMP (ativador) podem ligar no mesmo sítio
regulatório

Modulação da atividade de PFK devido a competição das duas

compostos para o mesmo sítio.
Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) por ATP e AMP
explica as alterações no fluxo na via glicolítica?.
Durante atividade intenso no musculo:
Fluxo na via glicolítica aumenta ~100 x
[ATP] diminui somente ~10%

D[ATP] INSUFICIENTE para explicar a aumenta no fluxo

ATP regenerada no músculo por creatina quinase (fosforilação

nível substrato) e a partir de ADP por adenilato kinase (miokinase)

2ADP  ATP + AMP

AMP gerada na reação – pode ativar PFK?

Mudanças de [AMP] podem explicar a regulação de
Fosfofructoquinase (PFK-1) e explica as alterações no
fluxo na via glicolítica?.
[ATP][AMP]
2ADP  ATP + AMP K= 2 = 0.44
[ADP]
No músculo esquelético em repouso - [ATP] ~ 8 mM
[ADP] ~ 0.6 mM
[AMP] = 0.44 x (6 x 10-4) x (6 x 10-4) = 2 x 10-5 M = 20 mM
(8 x 10-3)

No músculo esquelético ativa - [ATP] ~ 7.2 mM ( 10%, por 0.8 mM)

[ADP] ~ 0.6 + 0.8 mM = 1.4 mM

[AMP] = 0.44 x (1.4 x 10-3) x (1.4 x 10-3) = 1.2 x 10-4 M = 120 mM

(7.2 x 10-3)
6x aumenta na [AMP] é suficiente de aumentar atividade de PFK
em 10x, ainda longe do fator de 100x observada.
Reciclagem do substrato F-6-P explica a regulação do fluxo
na via glicolítica.

Fosfofructoquinase Fructose-1,6-bisfosfatase
(define vf com max=100) (define vr com max=10)

1) Atividade máxima de PFK-1 ~10x atividade máxima de FBPase ( vr = vf / 10)

2) Redução de [ATP] em 10%  aumenta [AMP] 5-6x   atividade de PFK-1 de 10 até 90% vf
  atividade FBPase de 90 até 10% vr

Baixa [AMP] (músculo inativo) : vf = (100 x 0.1), e vr = (10 x 0.9)

vf-vr = 10 – 9 = 1
alta [AMP] (músculo ativo) : vf = (100 x 0.9), e vr = (10 x 0.1)
vf-vr = 90 – 1 = 89
Aumento do fluxo em ~90 x
 Regulação de Piruvato quinase: tetrâmero

Forma T Forma R
(Inativa) (Ativa)


Ligação de ATP no sítio regulatório Ligação de ADP no sítio regulatório

favorece a forma T, a forma inativa favorece a forma R, a forma ativa da
da enzima enzima