Práctica No.

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Cálculos
Determinación de Acetaminofén
En Tabletas Por HPLC D = Factor de dilución de la muestra

50𝑚𝐿 50𝑚𝐿
𝐷= ( ) = 92.59 𝑚𝐿/𝑚𝑔
27.55 𝑚𝑔 1𝑚𝐿

C= mg/mL de paracetamol en preparación de referencia

23.3𝑚𝑔 1𝑚𝐿 99.6

𝐶= ( )( ) = 0.010079 𝑚𝑔/𝑚𝐿
50 𝑚𝑙 50𝑚𝐿 100

Am = Área bajo la curva del pico obtenido en el

cromatograma con la preparación de la muestra.
Objetivos Aref = Área bajo la curva del pico obtenido en el
cromatograma con la preparación de la referencia.
 Llevar a cabo la identificación del principio
activo del paracetamol en una forma 𝐴𝑚
𝑚𝑔 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑜𝑙 = 𝐷𝐶( )
farmacéutica comercial sólida, mediante el 𝐴𝑟𝑒𝑓
tiempo de retención obtenido en HPLC.
Muestra 1
 Determinar la concentración del principio 𝑚𝐿 𝑚𝑔 1708381
𝑚𝑔 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑜𝑙 = (92.59 ) (0.01 )( )
activo presente en la forma farmacéutica 𝑚𝑔 𝑚𝐿 2167434
proporcionada, para lo cual se utilizarán las
áreas bajo la curva obtenidas con la 𝑚𝑔 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑜𝑙 = 𝟎. 𝟕𝟑𝟓𝟓 𝒎𝒈
sustancia de referencia y muestra.
Muestra 2
Resultados 𝑚𝐿 𝑚𝑔 1709183
𝑚𝑔 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑜𝑙 = (92.59 ) (0.01 )( )
Área 𝑚𝑔 𝑚𝐿 2167434
Replica Tr Bajo Media
Curva 𝑚𝑔 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑜𝑙 = 𝟎. 𝟕𝟑𝟓𝟗 𝒎𝒈
a) 3.087 2,166,029
Estándar b) 3.080 2,169,003 2,167,434
c) 3.080 2,167,270
Muestra a) 3.093 1,708,419 1,708,381 Análisis de Resultados
1 b) 3.073 1,708,344
Muestra a) 3.073 1,709,376 1,709,183 El acetaminofén,
2 b) 3.073 1,708,991
compuesto polar, con
Tabla 1. Área bajo la curva para el estándar y dos electrones libres en el
muestras que contienen paracetamol. átomo de nitrógeno y
oxígeno, contiene
diferentes especies que
acompañan a la muestra
como excipientes,
colorantes, conservantes,
los cuales pasarán en un
tiempo de retención diferente al del analito lo que
posteriormente favorecerá la exactitud de la
cuantificación, ya que quedan adheridos a la fase de
la columna. Particularmente se esperaría que el
analito pase primero que los excipientes, pues estos
poseen en su mayoría anillos y heteroátomos que le
disminuyen polaridad.

Podemos observar en el cromatograma una buena

Figura 1. Cromatograma para acetaminofén presente
en tabletas de paracetamol.
eficiencia, ya que el pico correspondiente a la
muestra de paracetamol, se encuentra delgado y
alto, esto debido se cuenta con una columna
adecuada, además de que la fase móvil es también
la idónea para llevar a cabo la separación de dicho
acetaminofén. Por otro lado podemos observar en
la tabla 1, que las áreas bajo la curva obtenida tanta
para las muestras 1 y 2, como para el estándar,
presentan ciertas diferencias considerables en sus
valores, debido a que como se mencionó
anteriormente, el acetaminofén presente en las
tabletas de paracetamol, vienen acompañadas de
otra sustancias tales como excipientes, colorantes,
saborizantes, los cuales pueden modificar la
cromatografía y por ende la separación del mismo
acetaminofén.
Conclusiones
 El método de HPLC tiene una alta
reproducibilidad en tiempos de retención y
área bajo la curva para la determinación de
la concentración de acetaminofén en
tabletas de paracetamol.
Cuestionario
1. Defina los siguientes términos:
Volumen de elusión: Es el volumen necesario para
eluir un compuesto de una columna. Bajo
condiciones normales de una mezcla conocida de
los solutos en una cierta técnica, el volumen de
elusión puede ser suficiente información para
identificar los solutos.
Volumen de columna: Es el volumen de eluyente que
se consume sin que se detecte ningún componente,
se define igual que el volumen de retención pero el
tiempo utilizado es el tiempo muerto.
Tiempo muerto (to o tm): Es el tiempo de retención
del componente inerte o gas portador.
Tiempo de retención (tr): Es el tiempo transcurrido
entre el instante en que se introduce la mezcla y el
instante en que se detecta la señal propia del
componente en su máxima intensidad.
Tiempo de retención relativo: Es la razón entre los
tiempos de retención corregidos del componente
considerado, i, y de otro, p, que se toma como patrón
de referencia.
Línea base: Es la porción del cromatograma que
registra la respuesta del detector cuando solo sale
de la columna el gas portador.
Resolución: Es el parámetro que expresa el grado de
separación que se puede obtener en un sistema
cromatográfico para dos componentes dados.
Relaciona la capacidad separadora de un sistema
cromatográfico para dos componentes.
Eficiencia: Para definir la eficacia se utiliza el
concepto de piso teórico, y se define éste como la
sección teórico-transversal en la cual se realiza el
equilibrio de partición durante el flujo de fase móvil.
Cuanto mayor sea el número de platos teórico (N)
mayor será la eficiencia de la columna. El número de
platos teóricos mide la capacidad de la columna para
separar los componentes, no la retención de los
mismos.
2. Proporcione ejemplos de otros 3 fármacos
que puedan determinarse por HPLC.
 Carbamacepina
 Etosuximida
 Fenobarbital
3. ¿Qué sensibilidad de detección puede
alcanzar este método?
La sensibilidad se define como la mínima
concentración o cantidad de soluto que debe pasar
por el detector para que la señal a que este da lugar
sea dos veces mayor que la del ruido del fondo. La
sensibilidad que puede alcanzar el método de HPLC
puede ser de hasta un 99.9%.
4. ¿Qué contaminante puede encontrarse
presente en Paracetamol (acetaminofén)
materia prima como producto de
degradación?
Además de paracetamol, los demás componentes
(excipientes) son celulosa polvo, celulosa
microcristalina, estearato magnésico, almidón de
maíz y dióxido de silicio, estos pueden ser
contaminantes en la muestra. Los excipientes son
los componentes del medicamento diferentes del
principio activo (sustancia responsable de la
actividad farmacológica). Éstos se utilizan para
conseguir la forma farmacéutica deseada (cápsulas,
comprimidos, soluciones, etc.) y facilitan la
preparación, conservación y administración de los
medicamentos. Es el único componente que puede
diferir cuando comparamos un medicamento
genérico y su equivalente de marca.
5. ¿Por qué se requieren disolventes de alta
pureza grado HPLC, en cromatografía de
líquidos de alta resolución?
Porque es un método muy sensible y para obtener
buenos cromatogramas y para que sea compatible
con el detector, el grado de pureza en el disolvente
es importante para que este no modifique su
sensibilidad ni contamine la muestra ya que si está
contaminada puede producir picos indeseables.

6. ¿Qué se entiende por un sistema Isocrático

y uno en gradiente?

Isocrático, el solvente conserva la misma

concentración durante todo el tiempo de corrida
(muestreo o análisis).

Gradiente, lo cual significa que la concentración del

solvente utilizado varía durante la corrida. Esto
depende del tipo de muestra, de columna y de la
necesidad del análisis de mejorar alguna separación
(depende del analista o investigador).

Bibliografía

 Douglas A. Skoog, “Principios de análisis

instrumental”. 6ta Edición. Editorial Cengage
Learning, México.
 Universidad Nacional Autónoma de México,
Facultad de Química, Química Analítica
Instrumental II “Técnicas Cromatográficas”,
Diciembre 2007, disponible en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/
M.Cromatogrficos_6700.pdf