ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUAS POTABLES Y

CRUDAS MEDIANTE BIOINDICADORES DE CONTAMINACIÓN

FECAL

Castillejo D1, Ochoa A2

1. Estudiante de Biotecnología. Facultad de Ciencias de la Salud, Institución

Universitaria Colegio Mayor de Antioquia. Carrera 78 # 65 – 46, Medellín –
Colombia. davidcasti182@gmail.com
2. Estudiante de Biotecnología. Facultad de Ciencias de la Salud, Institución
Universitaria Colegio Mayor de Antioquia. Carrera 78 # 65 – 46, Medellín –
Colombia. amochoa@est.colmayor.edu.co

Resumen.
Según la a Organización Mundial de la Salud (OMS), el agua potable es definida como
“agua que no ocasiona ningún riesgo significativo para la salud”, sin embargo en el
abastecimiento del agua, pueden surgir factores que predisponen el ingreso y la
multiplicación de microorganismos, que son responsables de hasta un 90% de las
intoxicaciones y transmisión de enfermedades. En este proyecto se evaluó la calidad del
agua de tanques de almacenamiento de dos unidades residenciales, resultando con una
nula presencia de materia fecal de origen humano y animal para ambos puntos y una alta
ineficiencia para el proceso de cloración en el punto B, dado que el microorganismo
Pseudomona aeruginosa presentó una elevada cantidad.

Palabras clave: Microorganismos indicadores, medios selectivos, medios diferenciales,

membrana de nitrocelulosa.

1. INTRODUCCIÓN Las aguas superficiales por lo general están expuestas

a una alta variedad de factores que alteran su calidad,
ya que pueden ser vehículo de contaminantes y
Según la Organización Mundial de la Salud (OMS),
microorganismos patógenos de origen
el agua potable es definida como “agua que no
gastrointestinal. Además, en el proceso de
ocasiona ningún riesgo significativo para la salud,
abastecimiento del agua, pueden surgir factores que
además es adecuada para el consumo humano y para
predisponen el ingreso y la multiplicación de
todo uso doméstico habitual, incluida la higiene
microorganismos, como las conexiones cruzadas,
personal”(Organización Mundial de la Salud (OMS),
rotura de tuberías, cámaras de bombeo, surtidores,
2006).
reservorios de distribución, construcciones
defectuosas de pozos e irregular mantenimiento de
estas instalaciones. El principal riesgo de
contaminación en la red de acueducto es la
infestación de materia fecal por infiltraciones y por
presencia de sedimentos en el fondo de las tuberías
(Robert Pullés, 2013).
La contaminación microbiológica en aguas es
responsable de hasta un 90% de las intoxicaciones y
transmisión de enfermedades. Los principales
microorganismos patógenos transmitidos por agua
son las bacterias Escherichia coli, Salmonella spp.,
Shigella spp., Vibrio cholerae, Yersinia
enterocolitica, Campylobacter jejuni, Clostridium
perfringens, Enterococos fecales; virus como
enterovirus, rotavirus, adenovirus; protozoos como
Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum,
Entamoeba histolytica y helmintos como Ascaris
lumbricoidescara (Organización de las naciones
unidas para la agricultura y la alimentación
organización mundial de la salud, 2004). Sin
embargo, frente a la obligación de hacer una
evaluación sencilla, rápida, económica y fiable de la
presencia de patógenos, el control de calidad del agua
se realiza mediante la búsqueda de indicadores de
contaminación aprobados por estándares nacionales e
internacionales; estos microorganismos deben
cumplir diferentes requerimientos, como ser un
constituyente normal de la microbiota intestinal, estar
presente exclusivamente en las heces de animales
homeotérmicos, estar presentes cuando los
microorganismos patógenos intestinales lo están,
presentarse en un contenido elevado, fáciles de aislar
e identificar, además de tener tiempos de
supervivencia iguales o mayores al de las bacterias
patógenas(Miguel, García, José, & Pérez, 2001). Por
lo cual el objetivo de esta investigación es evaluar la
microbiota del agua por medio de la técnica de
filtración por membrana, empleando sustratos
definidos para determinar en aguas potables bacterias
coliformes (totales y fecales), aerobios mesófilos, P.
aeruginosa, E. fecales y C. perfringens.
2. METODOLOGÍA
Material microbiológico.
La microbiota evaluada en la presente investigación,
procede de los tanques de almacenamiento del
edificio Versalles (punto A) y el bloque 20 de la
unidad residencial Brisas de Robledo (punto B),
ubicados en la ciudad de Medellín.
Técnica de siembra.
Se empleó la técnica de filtración por membrana, para
la determinación de mesófilos, coliformes totales y
fecales (E. coli), Enterococos fecales, Clostridium
perfringens y Pseudomonas aeruginosa. Se pasaron
40 ml y 30 ml de las muestras respectivamente a
través de un filtro de membrana de nitrocelulosa con
diámetro de poro era de 0.45 micras y 47 mm de
diámetro donde quedaron retenidas las bacterias. El
manejo de los filtros se realizó por medio de pinza
estériles, con una bomba de vacío estéril. Los
periodos de incubación fueron de 35°C por 24 horas,
utilizando los medios de cultivo agar cetrimide, agar
enterococcosel, agar plate Count (PCA), agar
chromocult y caldo m-coliblue.
3. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE
RESULTADOS
Agar PCA.
Medio de cultivo utilizado para el recuento de
bacterias aerobias en aguas, aguas residuales y
alimentos. Compuesto de triptona, extracto de
levadura, glucosa y agar-agar, componentes básicos
para darse el desarrollo de cualquier microorganismo
de tipo bacteriano (Soria Melguizo, 2009).
En la presente investigación, este medio de cultivo, se
utilizó para identificar la presencia de
microorganismos mesófilos; Se encontraron para el
punto A 1 UFC/ml (Imagen 1A) y para el punto B
(Imagen 1B) >200 UFC/ ml, lo cual indica para este
último punto una multiplicación de microorganismos
patógenos de origen humano y animal, debido
principalmente a que en su mayoría las bacterias
patógenas contaminantes de aguas son mesófilos,
dado su crecimiento a una temperatura constante
entre 22°C y 37°C (Silva, Ramírez, Alfieri, Rivas, &
Sánchez, 2004).
 cloración del punto B, ya que se encontró la
presencia de P. aeruginosa de forma incontable/ml
(Imagen 2).

Imagen 2. Medio de cultivo cetrimide, selectivo y

Imagen 1. Crecimiento de mesófilos; (A) Análisis de
diferencial para Pseudomona aeruginosa, para el
agua del edificio Versalles, (B) Análisis de agua del
análisis de agua del punto B.
bloque 20 de la urbanización Brisas de Robledo.

Agar Enterococcosel.
Agar Cetrimide.
Medio selectivo para S. faecalis (grupo D), se
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial para P.
compone de digerido pancreático de caseína, digerido
aeruginosa, ya que permite la formación del
péptico de tejido animal, extracto de levadura, bilis de
pigmento piocianina, pioverdina y piomelanina por el
buey, cloruro sódico, esculina, citrato férrico de
metabolismo del cloruro de magnesio y el sulfato de
amonio, azida sódica, citrato sódico y agar como
potasio. Por otro lado, la cetrimida actúa como un
gelificante. Streptococcus del grupo D (incluidos los
detergente (selectivo) para inhibir el crecimiento de
Enterococcus) transforman la esculina en
otros microorganismos (Becton Dickinson GmbH,
esculetina y glucosa, posteriormente la esculetina
2013).
reacciona con la sal férrica del citrato férrico para
Se ha reportado que P. aeruginosa es un patógeno
formar un complejo marrón o negro, el medio cuenta
oportunista presente en el medio ambiente, ya que es
con bilis de buey para inhibir las bacterias Gram
un microorganismo causante de múltiples
positivas diferentes a Enterococcus y la azida sódica
enfermedades, siendo las más frecuentes las
para inhibir los microorganismos Gram negativos
infecciones urinarias; además de reportarse su
(Becton Dickinson GmbH, 2013b).
capacidad de supervivencia en aguas tratadas con
S. faecalis son bacterias que se encuentran en el
cloro. Este método de defensa a ambientes adversos,
ambiente y suelos, como consecuencia de la
se da por la formación de una capa densa polisacárida
contaminación por heces de animales y aguas
que establece una barrera física y química con el agua
residuales humanas no tratadas; por lo cual la OMS
clorada; debido principalmente a la capacidad de
ha establecido que esta bacteria en aguas potables con
utilizar diferentes compuestos orgánicos como
indicadores, de la eficiencia del tratamiento,
fuentes de carbono y energía, lo que permite que esta
reparación de sistemas de distribución y control de
bacteria sea un indicador de la eficiencia de la
nuevas cañerías maestras. Lo que indica que tanto el
cloración en aguas (Pajares, 2017). Por lo cual, para
punto A como el punto B, al presentar 0 UFC/ml
esta investigación se evidencia una deficiencia en la
(Imagen 3), que los sistemas de distribución no están
contaminados con materia fecal de origen humano y
animal, siendo sustentado de igual manera en los
medio m-coliblue y chromocult.
Imagen 3. Medio de cultivo enterococcosel selectivo y
diferencial para Streptococcus faecalis. (A) Punto de
muestreo A, (B) punto de muestreo B.
Caldo M-coliblue.
El Caldo m-ColiBlue24 constituye una de las mejores
alternativas para detectar simultáneamente colonias
de coliformes totales y coliformes fecales (E. coli).
Este caldo, contiene indicadores de alta sensibilidad
enzimática, que permite hacer la diferencia de
coliformes totales y fecales, por medio de colores,
colonias rojas son coliformes totales y colonias
azules-moradas son coliformes fecales, además
elimina los pasos de confirmación que se necesitan al
utilizar los medios tradicionales, ya que después de
24 horas, se puede identificar al menos el 95% de
todas las E. coli. Este medio nutritivo incrementa al
máximo la tasa de crecimiento de las bacterias
coliformes y ofrece una recuperación óptima de los
organismos bajo estrés. El medio no contiene
desoxicolato o sales biliares, los cuales se ha
comprobado que inhiben el desarrollo de los
coliformes bajo estrés, además de contener
inhibidores específicos para reducir eficazmente el
crecimiento de las bacterias no coliformes. (Ramos
Endara, 2011).
Los resultados de esta técnica se pueden observar en
la imagen 4, donde se evidencia que en el punto A se
encontraron 0 UFC/ml para coliformes totales y
fecales (E. coli). Lo que indica que el agua del
edificio Versalles respecto a coliformes es un agua de
buena calidad y apta para el consumo humano.
Imagen 4. Medio de cultivo m-Coliblue diferencial de
coliformes totales y fecales empleado para el análisis
del punto A.
Agar Chromocult.
Es un medio de cultivo cromógeno diferencial para el
análisis microbiano de muestras de agua, se
caracteriza por permitir la detección y diferenciación
en un plazo de 24 horas de bacterias coliformes
totales y fecales de agua potable. La diferenciación se
basa en la escisión de los sustratos X-glucurónido por
la ß-D-glucuronidasa y Salmon-GAL por la ß-D-
galactosidasa, una combinación enzimática que es
característica de E. coli. En presencia de E. coli se
escinden los dos sustratos, lo que da lugar a colonias
que adquieren un color entre azul oscuro y violeta en
oposición al rojo de otras colonias de bacterias
coliformes totales.
Los resultados de esta técnica se pueden observar en
la imagen 5, donde se evidencia que en el punto B se
encontraron 1 UFC/ml para E. coli, por su color
morado, y 0 UFC/ml para coliformes totales. Lo que
indica que el agua del bloque 20 de la unidad
residencial Brisas de Robledo requiere de más
tratamientos para hacer esta agua potable.

Imagen 5. Medio de cultivo chromocult diferencial
para coliformes totales y fecales utilizado para el
estudio de las aguas del punto B.
4. CONCLUSIONES
Los tanques de abastecimiento de agua de la unidad
residencial “Edificio Versalles” presentan una alta
calidad, con respecto al agua, ya que la microbiota
presente no afecta la salud humana y no son
indicadores de presencia de microorganismos
patógenos. Por otro lado, la unidad residencial
“Brisas de Robledo” presenta un déficit en los
procesos de cloración y el abastecimiento del agua,
por la presencia de microorganismos patógenos,
como P. aeruginosa y coliformes totales.
Las técnicas de filtrado en membrana son de gran
utilidad para la determinación de microorganismos
presentes en afluentes, aguas crudas, residuales o
tratadas; sin embargo la incubación del papel filtrante
se debe realizar eligiendo el medio de cultivo más útil
para el microorganismo que se espera identificar
como mesófilos, Enterococos, coliformes, entre otros.
La correcta aplicación de estas técnicas es gran
importancia para el control microbiológico de los
diferentes tipos de agua contemplados en las
resoluciones de Colombia.
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